腦內(nèi)血清素增加劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供通過口服攝取發(fā)揮增加腦內(nèi)血清素作用的組合物。該組合物是含有表兒茶素的腦內(nèi)血清素增加劑，所述表兒茶素如下所述獲得：對山茶葉進行蒸煮、干燥從而獲得干燥的山茶葉，將用蒸餾水或乙醇提取得到的干燥的山茶葉而得的提取物加載于離子交換樹脂柱，對20％乙醇洗脫液進行濃縮干燥。
【專利說明】腦內(nèi)血清素增加劑
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及造成腦內(nèi)血清素增加的制劑以及含有所述制劑的飲食品。
【背景技術(shù)】
[0002]血清素(5-羥色胺；5-HT)是一種具有生理活性的胺，屬于吲哚胺類。在人體中約存在10mg，其中2%存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，已知是一種重要的神經(jīng)遞質(zhì)。中縫核(日文:縫線核)等從腦干向大腦、脊髓廣泛映射的中樞血清素激活途徑(日文:中樞★ 口卜二 >作動性経路)，介由其眾多的受體亞型，與情緒和心情、睡眠和清醒、食欲、運動、體溫以及認知的調(diào)節(jié)相關(guān)(非專利文獻1、2)。
[0003]腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)血清素是與精神穩(wěn)定相關(guān)的物質(zhì)，5-HT的增加具有減輕精神壓力的效果。與精神壓力特別有關(guān)系的有5-HT、Y-氨基丁酸(GABA)、多巴胺(DA)以及去甲腎上腺素(NA)(非專利文獻3)，如果5-HT不足，會造成情緒不穩(wěn)定、入睡和睡醒變差等精神不穩(wěn)定狀態(tài)。一般認為隨著醒來5-HT會增加，5-HT增加的話則能使腦激活，導致輕松狀態(tài)，引發(fā)精神上的積極性，使心情平靜(非專利文獻4)。
[0004]例如抑郁癥發(fā)病時腦內(nèi)與情緒和睡眠相關(guān)中樞的單胺神經(jīng)細胞發(fā)生NA和5-HT的缺乏，其結(jié)果是化學上的傳遞不足，被認為會導致生理和心理兩方面的抑郁癥狀(非專利文獻5)。特別認為5-HT是與抑郁相關(guān)的主要因素(非專利文獻6)，已知自殺者的腦中5-HT濃度下降(非專利文獻7)。由此認為如果能增加5-HT，能提高早晨、日間的輕松感，平靜情緒，緩和精神壓力，被認為與抑郁的改善相關(guān)。
[0005] 至今為止報告的有血清素釋放促進作用、血清素再吸收阻斷作用等增加腦內(nèi)血清素作用的原材料有羽衣甘藍、蜂膠或其提取物(專利文獻11 )、N-甲氧基苯甲酰-Y -氨基丁酸或?qū)籽趸郊姿?專利文獻12)、甘氨酸(非專利文獻9)、貫葉連翹(日文:七 > 卜
一 > X 7 —卜)(非專利文獻10)等，作為藥物也有選擇性血清素再攝取抑制劑(SSRI)JS有時會伴有食欲不振、體重增加或減少、性欲異常等副作用，作為血清素增加原材料的選擇之一，要求原材料具有穩(wěn)定性和安全性。
[0006]表兒茶素即3,3’，4’，5，7-五羥基黃燒是兒茶素類黃酮之一,在樹皮和樹干中廣泛存在，在兒茶鉤藤(黑兒茶；日文:力' > H 7)、檳榔子等中含量特別高。而且，結(jié)構(gòu)上2位和3位的碳為不對稱碳，因此同一化學結(jié)構(gòu)可有4種結(jié)構(gòu)。這些結(jié)構(gòu)可區(qū)分為(-)_兒茶素、(+)-兒茶素、(-)_表兒茶素、(+)_表兒茶素。此處所指表兒茶素為(-)_表兒茶素，已知具有多種生理作用。例如，至今為止公開的有:胰臟β細胞保護劑(專利文獻I)、認知功能改善用方法及組合物(專利文獻2)、透明質(zhì)酸酶活性阻斷劑(專利文獻3)、抗氧化劑及其制造方法以及含有該抗氧化劑的飲食品(專利文獻4)、美白用皮膚外用劑(專利文獻5)、雙歧菌繁殖促進劑(專利文獻6)、可用于血管類健康改善的熱處理過的可可制品(專利文獻7)、脂連蛋白分泌促進組合物及含有該組合物的飲食品(專利文獻8)、除臭劑組合物(專利文獻9)、類胰蛋白酶活性阻斷劑及其應(yīng)用(專利文獻10)等。
[0007]對于腦或5-ΗΤ，在用微透析法進行的腦灌注試驗中可知，兒茶素類對大鼠腦的海馬體有增加釋放5-HT作用，特別是表兒茶素與表兒茶素沒食子酸酯和(+)_兒茶素等其他的兒茶素類相比，有約100倍以上的增加作用。另外，兒茶素經(jīng)口服投藥也觀察到了 5-HT的釋放(非專利文獻8)。另外在對突觸體進行分離培養(yǎng)的試驗體系中，有報告認為表兒茶素對有助于血清素調(diào)節(jié)的血清素的攝取有阻斷效果(非專利文獻11)。但是，這些研究未對表兒茶素口服攝取的情況進行評價，另外，由于表兒茶素通過腸道吸收會與硫酸結(jié)合或與葡萄糖醛酸結(jié)合，不以表兒茶素的狀態(tài)遷移到腦內(nèi)，非專利文獻11的結(jié)果沒有對作用到血清素的是否為結(jié)合體作出判斷。
[0008]另外，作為含有表兒茶素的原材料，有綠茶葉、可可豆、葡萄籽、蘋果皮、大豆、蠶豆、山茶葉等。
[0009]現(xiàn)有技術(shù)文獻
[0010]專利文獻
[0011]專利文獻1:日本特開2008-7452號公報
[0012]專利文獻2:日本特表2009-539991號公報
[0013]專利文獻3:日本特開平06-9391號公報
[0014]專利文獻4:日本特開2007-254508號公報
[0015]專利文獻5:日本特開平10-120546號公報
[0016]專利文獻6 :日本特開2006-298821號公報
[0017]專利文獻7:日本特表2009-501161號公報
[0018]專利文獻8:日本特開2006-131512號公報
[0019]專利文獻9:日本特開平09-38183號公報
[0020]專利文獻10:日本特開2007-186457號公報
[0021]專利文獻11:日本特開2003-300892號公報
[0022]專利文獻12:日本特開2002-154956號公報
[0023]非專利文獻
[0024]非專利文獻I: Annua I s New York Academy of Science, 600, 9-35, 1990
[0025]非專利文獻2:Pharmacology Biochemistry and Behavior, 54, 129-141，1996
[0026]非專利文獻3:《新"Μ才寸4工> 7 '> 1J —文' 7卜探求一分子> ^ ^ T見^ i 一》，科學同人，京都，81-91，1994
[0027]非專利文獻4:《七口卜二 >欠乏脳一今 > 石脳.篇乃脳全鍛λ直t—》，日本放送出版協(xié)會，東京，49-56，2003
[0028]非專利文獻5:《)^病O科學i健康一一般醫(yī)O tz ^ <D 一》，朝倉書店，東京，15-20，1987
[0029]非專利文獻6: Journal of Pharmacy and Pharmacology, 57, 651-656, 2005
[0030]非專利文獻7:The British Journal of Psychiatry, 113(505), 1407-1411, 1967
[0031]非專利文獻8:日本營養(yǎng)糧食學會要點集，2D_13p，2008
[0032]非專利文獻9:Psychiatry and Clinical Neurosciences, 65, 142-149, 2011
[0033]非專利文獻10:British Journal of Pharmacology, 142, 414-418，2004
[0034]非專利文獻11:Phytomedicine, 14，396-402，2007
【發(fā)明內(nèi)容】

[0035]發(fā)明所要解決的技術(shù)問題
[0036]提供通過口服攝取發(fā)揮增加腦內(nèi)血清素作用的組合物。
[0037]解決技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案
[0038]如上所述，現(xiàn)有技術(shù)中，完全未對口服攝取表兒茶素后的情況進行研討。于是，本發(fā)明詳細研討了口服攝取表兒茶素的情況腦內(nèi)血清素是否增加。其結(jié)果是，確認通過僅在大鼠的胃內(nèi)投入表兒茶素進行單一口服攝取，其腦內(nèi)血清素增加。另外，發(fā)現(xiàn)了作為表兒茶素的原材料的山茶葉，并確認了將其提取物中的表兒茶素濃縮后的組合物能夠增加腦內(nèi)血清素。總之，本發(fā)明的解決方法是通過口服攝取含表兒茶素物質(zhì)、特別是山茶葉提取物能發(fā)揮增加腦內(nèi)血清素的作用。
[0039]即，本發(fā)明的目的是增加腦內(nèi)血清素的量，研究的結(jié)果是發(fā)現(xiàn)通過僅通過胃內(nèi)給予表兒茶素進行單一口服攝取，其腦內(nèi)血清素增加。另外，確立了從山茶葉獲得不含其他兒茶素而只含高含量表兒茶素的組合物的制備方法，發(fā)現(xiàn)其對腦內(nèi)血清素的增加作用。
[0040]發(fā)明的效果
[0041 ] 確立了能通過口服攝取表兒茶素有效增加腦內(nèi)血清素，并且從山茶葉獲得不含其他兒茶素而只含高含量表兒茶素的組合物的制備方法。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0042]圖1是表示由給予表兒茶素所得到的5-HT釋放量的圖。
[0043]圖2是表示由給予兒茶素混合物所得到的5-HT釋放量的圖。`【具體實施方式】
[0044]本發(fā)明涉及含有表」L茶素的腦內(nèi)血清素增加劑。
[0045]另外，本發(fā)明涉及以從山茶葉中提取表兒茶素為特征的含有高表兒茶素組分的腦內(nèi)血清素增加劑。
[0046]并且，本發(fā)明涉及由山茶葉獲得表兒茶素的制備方法，該方法的特征是:蒸煮山茶葉、干燥處理獲得干燥的山茶葉、使獲得的干燥山茶葉的蒸餾水或乙醇提取物加載于離子交換樹脂柱、通過對20%乙醇洗脫液進行濃縮干燥獲得表兒茶素富集的組分。
[0047]還有，本發(fā)明涉及含有含表兒茶素的腦內(nèi)血清素增加劑的食品。
[0048]本發(fā)明涉及口服攝取后能發(fā)揮使腦內(nèi)血清素水平上升效果的組合物。血清素是與心情和清醒相關(guān)的腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)，一般認為可以使心情輕松，提聞注意力。因此，可提聞血清素水平的組合物可給予調(diào)整心情、提高注意力的效果，可期待作為點心和健康食品的功能性原材料使用。
[0049]還有，本發(fā)明提供上述含有含表兒茶素的腦內(nèi)血清素增加劑的飲食品。飲食品包括生鮮食品、肉、魚等動物性食品，谷物、蔬菜等植物性食品，乳制品、面包、即食食品等加工食品，點心類等嗜好食品，甜味劑、調(diào)味劑等烹飪調(diào)味用材料，保健食品，特殊用途食品，水、清涼飲料水、酒精飲料、茶等飲料，食品加工材料，食品添加劑等。
[0050]實施例
[0051][實施例1][0052]表兒茶素的腦內(nèi)血清素釋放促進效果試驗
[0053](試驗動物)
[0054]本試驗使用Wistar系雄性大鼠(270~310g，8~10周齡)。大鼠在約24°C室溫和45~50%濕度的環(huán)境下，明暗循環(huán)12小時飼養(yǎng)。另外飼養(yǎng)中飼料和水均自由攝取。
[0055](試劑類)
[0056]本試驗使用的試劑是:(-)-表兒茶素[EC (和光(Wako)，大阪)，純度98%以上]及兒茶素混合物[Mix (和光，大阪)，兒茶素類占85%以上；含有(-)_表沒食子兒茶素沒食子酸酯(以下稱EGCG)約36.2%、(-)_表沒食子兒茶素(以下稱EGC)約23.2%、(-)-表兒茶素沒食子酸酯(以下稱ECG)約10.6%、EC約7.4%、(+)-兒茶素(以下稱CA)約2.4%、(-)-沒食子兒茶素約5.7 %、(-)-沒食子兒茶素沒食子酸酯約1.6%等]，分別配制為Img/kg、10mg/kg、50mg/kg、100mg/kg,各試劑在 0.5ml 或 Iml 的生理鹽水(0.9% NaCl)中溶解，將各溶液用灌胃器(日文:経口'/>7)直接向大鼠胃內(nèi)給藥。另外，作為對照組使用等量的生理鹽水。此處各給藥組每組使用大鼠4~5只。
[0057](試驗方法)
[0058]將大鼠用戊巴比妥鈉麻醉，以Paxinos和Watson腦地圖為參考埋入導向套管。確認導向套管完全固定后，插入虛擬套管(日文:夕' S—力二-一 P)。在大鼠恢復后，用戊巴比妥鈉麻醉，在導向套管中插入透析用探針，灌流(灌流速度I μ I/分鐘)透析液(標準林格氏液)。每20分鐘通過高速液相色譜儀測定透析液中5-ΗΤ量。60分鐘后，在大鼠胃中投入EC或兒茶素混合物，繼續(xù)測定直至觀察到5-ΗΤ的最大釋放量。數(shù)據(jù)一律以平均值(mean)土標準差(SD)表示，統(tǒng)計處理使用統(tǒng)計分析軟件SPSS17.0J，使用Mann-Whitney檢驗(非成對和非參數(shù))及單因素方差分析，危險率不滿5%則判斷為有顯著差異。
[0059](結(jié)果)
[0060]上述腦內(nèi)5-HT釋放促進效果試驗所得的結(jié)果如圖1和2所示。
[0061]由圖1可以判明，給予EC的時候，5-HT的釋放量為:給予lmg/kg時110± 16%、給予 1011^/1^時133±10%、給予 5011^/1^時513±535%、給予 100mg/kg 時 987±643%，5-HT的釋放量隨EC的濃度增加(圖1)。給予lmg/kg、10mg/kgEC時5-HT的釋放量沒有大的差異。另外，給予最大濃度100mg/kg EC的時候,5-HT的釋放量與給予lmg/kg、10mg/kg EC相比時有顯著增加。
[0062]另一方面，如圖2所示，給予兒茶素混合物(Mix)的時候，5-HT的釋放量為:給予lmg/kg 時 113土 12%、給予 10mg/kg 時 135 + 17%、給予 50mg/kg 時 148±39%、給予 IOOmg/kg時227±112%，5-HT的釋放量有隨兒茶素混合物的濃度增加的傾向。
[0063]比較給予lmg/kg和10mg/kg兒茶素混合物時5_HT的釋放量,顯示了相同程度的增加，并且發(fā)現(xiàn)EC和兒茶素混合物均給予10mg/kg的水平時從腦部海馬體釋放的5-HT的釋放量的濃度沒有大幅度的增加。
[0064]進一步，比較給予lmg/kg EC和100mg/kg EC時，5-HT的釋放量有約9倍的差異。與此相對，給予lmg/kg兒茶素混合物和100mg/kg兒茶素混合物時,兒茶素濃度差為100倍但5-HT的釋放量的差約為2倍。
[0065]并且,結(jié)果顯示給予EC50mg/kg和100mg/kg時,5-HT的釋放量的增加與給予兒茶素混合物50mg/kg和100mg/kg時相比約高4~5倍。[0066]根據(jù)上述，確認了口服攝取中與給予兒茶素混合物相比，給予表兒茶素能使腦內(nèi)血清素有顯著的增加。
[0067][實施例2]
[0068]由山茶葉制備表兒茶素富集的組合物一I
[0069]將山茶(Camellia japonica)的葉5.477kg在沸水浴中進行5分鐘蒸煮處理后熱風干燥，得到干燥的山茶葉1.89kg。在干燥山茶葉中加入18.9L蒸餾水，在室溫下靜置提取4小時。過濾除去不溶物，將濾液加載于裝填了 Diaion HP-20 (三菱化學株式會社制)3L的柱，依次用6L蒸餾水、6L10%乙醇、6L20%乙醇洗脫。將20%乙醇洗脫液減壓濃縮，進行冷凍干燥，得到23.52g表兒茶素富集的組分(表兒茶素含有率24.7%)0
[0070][實施例3]
[0071]由山茶葉制備表兒茶素富集的組合物一2
[0072]將山茶葉151.64g在沸水浴中進行5分鐘蒸煮處理后熱風干燥，得到干燥的山茶葉58.48g。在干燥山茶葉中加入1.175L蒸餾水，室溫下靜置提取過夜。過濾除去不溶物后，對濾液進行冷凍干燥，得到山茶葉水提取物12.1Sgo山茶葉水提取物的表兒茶素含有率為3.12%。將IOg得到的山茶葉水提取物溶解于IL蒸餾水中，加載于裝填了 Diaion HP-20(三菱化學株式會社制)250mL的柱，依次用IL蒸餾水、ILlO %乙醇、1L20%乙醇洗脫。將20 %乙醇洗脫液減壓濃縮，進行冷凍干燥，得到0.932g表兒茶素富集的組分(表兒茶素含有率 32.94%)。
[0073][實施例4]
[0074]由山茶葉制備表兒茶素富集的組合物一3`[0075]將山茶葉90.12g在沸水浴`中進行5分鐘蒸煮處理后熱風干燥，得到干燥的山茶葉34.50g。在干燥山茶葉中加入690mL70%乙醇，在室溫下靜置提取過夜。過濾除去不溶物后，對濾液進行減壓濃縮，冷凍干燥，得到山茶葉70%乙醇提取物6.58g。山茶葉70%乙醇提取物中表兒茶素含有率為6.75%。將Ig得到的山茶葉70%乙醇提取物溶解于IL蒸餾水中，加載于裝填了 Diaion HP-20 (三菱化學株式會社制)250mL的柱，依次用IL蒸餾水、1L10%乙醇、1L20%乙醇洗脫。將20%乙醇洗脫液減壓濃縮，進行冷凍干燥，得到0.12g表兒茶素富集的組分(表兒茶素含有率44.09% )。
[0076][實施例5]
[0077]表兒茶素富集組分的腦內(nèi)5-HT釋放促進效果試驗
[0078]以實施例2中得到的表兒茶素富集組分作為試樣，使用與實施例1相同的方法驗證對腦內(nèi)5-HT水平的影響效果，確認表兒茶素富集組分通過口服給藥能夠增加腦內(nèi)5-HT水平。
[0079][實施例6]
[0080]用常規(guī)方法制造含有本發(fā)明的表兒茶素富集組分的腦內(nèi)血清素增加劑的巧克力、含片、口香糖、糖果、軟糖、飲料。以下所示為它們的配方。并且，本發(fā)明的范圍不受這些限制。
[0081]巧克力的配方
可可塊(日語:力力才7只)20.0重量％
砂糖12..0
全脂奶粉20.0
可可脂17.0
表兒茶素0.4
卵磷脂0.5
香料_0.I




100.0
巧克力的配方
可可塊20.0重量％
砂糖41.4
全脂奶粉2?.0
可可脂17.0
實施例2的表兒茶素富集組分1.0
卵磷脂0.5
香料_0.1
[0082]
【權(quán)利要求】
1.含有表兒茶素的腦內(nèi)血清素增加劑。
2.如權(quán)利要求1所述的腦內(nèi)血清素增加劑，其特征在于，上述表兒茶素是由山茶葉提取的表兒茶素富集的組分。
3.由山茶葉制備表兒茶素富集的組分的方法，其特征在于，蒸煮并干燥山茶葉從而獲得干燥的山茶葉，將用蒸餾水或乙醇提取得到的干燥的山茶葉而得的提取物加載于離子交換樹脂柱，通過對20%乙醇洗脫液進行濃縮干燥獲得表兒茶素富集的組分。
4.含有腦內(nèi)血清素增加劑的食品，所述腦內(nèi)血清素增加劑含有表兒茶素。
【文檔編號】A61P25/00GK103717217SQ201280036642
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2012年7月24日 優(yōu)先權(quán)日:2011年7月27日
【發(fā)明者】青峰正裕, 大和孝子, 西山敦子, 菅野范, 磯村遼, 吉田圭司郎, 志村進 申請人:羅蒂株式會社