聯(lián)合治療的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及在具有癌癥的個體中產(chǎn)生對P2X7受體的體液應答，還涉及使所述個體中癌癥的發(fā)展最小化。
【專利說明】聯(lián)合治療
【技術領域】[0001]本發(fā)明涉及治療或改善與非功能性P2X7受體表達相關之疾病(包括癌癥)的方法。
【背景技術】
[0002]嘌呤能(P2X)受體是ATP門控陽離子選擇性通道。每一個受體由三個蛋白質(zhì)亞基或單體組成。迄今為止，已經(jīng)鑒定了 7種編碼P2X單體的獨立基因MX1' P2X2、P2X3、P2X4、P2X5、P2X6、P2X7。
[0003]人們對？2&受體特別感興趣，這是因為這些受體的表達被認為局限于具有經(jīng)歷程序性細胞死亡潛力的細胞，例如胸腺細胞、樹突細胞、淋巴細胞、巨噬細胞和單核細胞。在正常穩(wěn)態(tài)中，例如在紅細胞上和另一些細胞類型如皮膚中，P2X7受體有通常較低水平的一些表達。
[0004]令人感興趣的是，在被認為不能程序性細胞死亡的細胞(例如贅生前細胞(pre-neoplastic)和贅生性細胞)上發(fā)現(xiàn)了 P2X7受體,所述P2X7受體包含在Pro210處(根據(jù)SEQ ID NO: I)具有順式異構化的單體，并且其在受影響的一個或更多個位點具有受損的ATP結合功能。受體的這種同工型被稱為“非功能性”受體，并且描述了不能將運行的非選擇性韓通道擴展成凋亡孔(apoptotic pore)的受體形式。
[0005]從使用包含Pro210的肽進行免疫接種所產(chǎn)生的抗體與非功能性P2X7受體在相鄰單體之間形成的一個或更多個改變的ATP結合位點結合。但是，它們無法與能夠在這三個可利用位點中任一位點處與APT結合的P2X7受體結合。因此，這些抗體可用于選擇性檢測許多類型的癌瘤和造血癌癥，并用于治療這些病癥中的一些。
[0006]W002/057306A1和W003/020762A1討論了區(qū)分功能性P2X7受體和非功能性P2X7受體的單克隆抗體形式的探針，功能性P2X7受體定義為能夠形成非選擇性Ca/Na通道并且這些通道通過擴展結合ATP還能夠形成凋亡孔的那些受體，非功能性P2X7受體定義為能夠形成非選擇性通道但是不能夠將開放的通道擴展為凋亡孔的那些受體。
[0007]W02009/033233討論了暴露在非功能性受體上但是不暴露在功能性受體上的表位以及與其結合的抗體。
[0008]依然需要由非功能性P2X7受體表達造成的疾病或與非功能性P2X7受體表達相關的疾病(例如，癌癥)的替代或改進的治療方法。
[0009]在本說明書中引用的任何現(xiàn)有技術不是也不應當被認為是承認或以任何方式暗示該現(xiàn)有技術形成了澳大利亞或任何其他司法管轄區(qū)中公知常識的一部分，或可以將該現(xiàn)有技術合理地預期為被本領域技術人員確定、理解和視為相關的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010]在某些實施方案中，提供了使已接受了用于治療癌癥的非自身抗原結合位點的個體中的癌癥發(fā)展最小化的方法，所述方法包括以下步驟:[0011]-提供已經(jīng)接受了用于治療癌癥的非自身抗原結合位點的個體；
[0012]-在所述個體中形成對P2X7受體的免疫應答；
[0013]從而使所述個體中癌癥發(fā)展最小化。
[0014]在上述方法的一種形式中，在個體中形成免疫應答時，個體在循環(huán)中可以不具有可檢測的非自身抗原結合位點。
[0015]另外，在個體中形成免疫應答時，個體可以不具有可檢測的癌癥，例如，由于向個體施用了抗原結合位點，當在個體中形成(特別是對非功能性？2&受體或癌癥相關？2&受體)免疫應答時，癌癥的尺寸、質(zhì)量或其他物理參數(shù)可以已大幅減少。
[0016]可以通過免疫原形成免疫應答。可以P2X7受體或能夠在個體中誘導對P2X7受體之免疫應答的P2X7受體片段形式提供免疫原。
[0017]免疫原可以包含能夠在主要組織相容性復合物II類分子上呈遞和/或能夠與T細胞或B細胞受體或B細胞 膜結合免疫球蛋白相互作用的至少一種序列。
[0018]根據(jù)本發(fā)明，所述個體是人，在這種情況下，以人P2X7受體或能夠誘導對P2X7受體之免疫應答的其片段形式提供免疫原。
[0019]通常，在個體中形成的免疫應答對于非功能性P2X7受體是特異性的，在這種情況下，在個體中形成與非功能性P2X7受體(即，具有一個或更多個不能與ATP結合的位點)反應但是不與功能性P2X7受體(即，ATP結合受體)反應的抗體或細胞組分。
[0020]在一個優(yōu)選形式中，在初次施用中向個體提供免疫原，從而形成包括產(chǎn)生IgM的應答。
[0021 ] 在另一個優(yōu)選形式中，在初次施用隨后的進一步施用中，施用已經(jīng)在初次施用中向個體提供從而形成包括產(chǎn)生IgM之應答的免疫原，由此形成包括產(chǎn)生IgG的應答。在該實施方案中，通常當個體循環(huán)中IgM的水平基本不可檢測時發(fā)生免疫原的進一步施用。
[0022]所述免疫應答可以是體液應答和/或細胞應答。
[0023]體液應答可包括B細胞轉化為分泌抗體的漿細胞、Th2激活和細胞因子產(chǎn)生、形成生發(fā)中心和同種型(isotype)轉換、B細胞的親和力成熟和/或記憶細胞產(chǎn)生。
[0024]細胞應答可包括激活抗原特異性細胞毒性T淋巴細胞、激活巨噬細胞和自然殺傷細胞和/或刺激細胞分泌細胞因子。
[0025]個體中形成的體液應答和/或細胞應答可治療或改善個體中的癌癥，或使個體中
癌癥的發(fā)展最小化。
[0026]在上述實施方案中，個體所接受的抗原結合位點可以和任何與癌癥相關的生物標志物有反應性。實例包括:針對P2X7(特別是非功能性P2X7)、針對VEGF(特別是VEGF A、C或D)、Her-2、CD20或其他的抗原結合位點。通常，個體所接受的抗原結合位點與P2X7受體(特別是非功能性P2X7受體)有反應性。
[0027]在另一個實施方案中，提供了 P2X7受體或其片段在制造用于在個體中治療癌癥或抑制癌癥之發(fā)展的藥物中的用途，所述個體已接受了用于治療癌癥的抗P2X7受體抗原結合位點。
[0028]在另一個實施方案中，提供了用于在人中治療癌癥或抑制癌癥之發(fā)展的組合物，所述組合物包含？2\受體或其片段。優(yōu)選地，所述組合物還包含載體、賦形劑或稀釋劑。優(yōu)選地，所述組合物還包含佐劑。[0029]在另一個實施方案中，提供了用于在人中治療癌癥或抑制癌癥發(fā)展中使用的組合物，所述組合物包含P2X7受體或其片段。優(yōu)選地，所述組合物還包含生理學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。優(yōu)選地，所述組合物還包含佐劑。
[0030]在另一個實施方案中，提供了用于本發(fā)明方法時使用的組合物。
[0031]在一個優(yōu)選形式中，所述組合物能夠在向個體初次施用免疫原之后形成初次免疫應答(包括IgM產(chǎn)生)，在初次施用后再施用免疫原之后形成次級免疫應答(包括IgG產(chǎn)生)。
[0032]在另一些實施方案中，提供了用于在人中治療癌癥或抑制癌癥之發(fā)展的試劑盒或組合物，所述試劑盒包含:
[0033]-免疫原，其能夠在向人施用時導致形成對人P2X7受體的免疫應答；
[0034]-抗原結合位點，所述抗原結合位點結合癌癥相關的生物標志物；和
[0035]-用于上述方法的書面說明書。
[0036]在一個優(yōu)選形式中，在試劑盒中所提供的抗原結合位點與P2X7受體、優(yōu)選是非功能性P2X7受體有反應性。
[0037]不希望受到任何理論或作用模式的約束，認為本發(fā)明提供了替代性的和/或改善的治療方案，這是因為在完成抗原結合位點的施用并且非自身抗P2X7抗原結合位點的循環(huán)水平變得不可檢測之后，由免疫接種引起的內(nèi)源免疫組分(如抗體和抗原特異性細胞)對細胞表面P2X7受體具有較長時間和較大程度的暴露。
[0038]另外，認為當在個體中提供高濃度的非自身抗體或外源抗體時，引起P2X7受體聚集(crowding)，這使得與提供抗癌免疫應答的關鍵P2X7表位結合的特異性抗體之水平最小化，從而限制了免疫治療的功效。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，使用根據(jù)本文描述的本發(fā)明免疫原對個體進行免疫接種引起的抗體應答提供了不導致受體聚集的抗體的量、滴度或濃度，從而改善了免疫治療的功效，特別在當個體中的癌癥可能基本不可檢測時。
[0039]在一個實施方案中，提供了在已接受用于治療癌癥的抗癌癥抗原抗體的個體中形成針對與癌癥相關P2X7受體的體液免疫應答的方法，所述方法包括以下步驟:
[0040]-在個體中形成對與癌癥相關的P2X7受體或其片段形式之免疫原的免疫應答；
[0041]其中，當所述個體中為治療癌癥所施用抗癌癥抗原抗體的水平或濃度基本不可檢測時，在所述個體中形成免疫應答；和/或
[0042]根據(jù)免疫接種方案(schedule)形成針對癌癥相關之P2X7受體的體液免疫應答，從而使得在個體中形成的癌癥相關之P2X7受體的抗體的量為約0.1至25mg/kg個體。
[0043]在另一個實施方案中，提供了用于在已接受了用于治療癌癥的抗癌癥抗原抗體的個體中形成針對與癌癥相關之P2X7受體的體液免疫應答中使用的組合物，所述組合物包含與癌癥相關之P2X7受體或其片段形式的免疫原。優(yōu)選地，當個體中為治療癌癥所施用的抗癌癥抗原抗體之水平或濃度基本不可檢測時，在個體中形成免疫應答，和/或根據(jù)免疫接種方案形成針對與癌癥相關之P2X7受體的體液免疫應答，從而使得在個體中形成的與癌癥相關之P2X7受體的抗體的量為約0.1至25mg/kg個體。
[0044]通過參照附圖和實例方式給出的以下描述，本發(fā)明的另外的方面和前文中描述之方面的另外的實施方案將變得顯而易見。
[0045]附圖簡述[0046]圖1
[0047]在佐劑存在下，用與KLH載體偶聯(lián)的肽GHNYTTRNILPGLNITC免疫接種具有中度腫瘤負荷的患者。將載有肽和血清的ELISA板連續(xù)稀釋以檢測針對所述肽之抗體的存在。免疫前血清(藍色)、第4周時臨強化前獲得的血清(紅色)和第13周時的血清(強化后9周，綠色)。在初次免疫接種后4周采集的強化前血清中未檢測到抗體。這被認為是因為存在與免疫接種引起之抗體結合的腫瘤塊(mass)。隨著腫瘤負荷的降低，第13周樣品表現(xiàn)出低水平的循環(huán)抗nfP2X7抗體應答。在第5至12周中進行的中間測量表明在血清中存在很少的循環(huán)抗體。
[0048]圖2
[0049]在佐劑存在下，用與KLH載體偶聯(lián)的肽GHNYTTRNILPGLNITC對具有非常小的殘余腫瘤負荷的患者進行免疫接種。將載有所述肽和血清的ELISA板連續(xù)稀釋以檢測針對所述肽之抗體的存在。免疫前血清(藍色)、第4周時臨強化前獲得的血清(紅色)和第5周時的血清(強化后I周，綠色)。由于患者具有非常少的或無殘余的能使循環(huán)抗體減少的腫瘤負荷，在第5周時檢測的水平已經(jīng)比具有中等腫瘤塊的患者中的高得多。
[0050]實施方案詳述
[0051 ] 現(xiàn)在詳細地參照本發(fā)明的某些實施方案。盡管將結合實施方案來描述本發(fā)明，但是將理解的是，意圖不是將本發(fā)明局限于這些實施方案。相反地，本發(fā)明旨在涵蓋所有的替代方式、修改方式和等同方式，其可包含在由權利要求限定的本發(fā)明的范圍內(nèi)。
[0052]本領域技術人員將承認許多方法和材料與本發(fā)明所描述的那些類似或等同，這些方法和材料可用在本發(fā)明的實踐中。本發(fā)明不以任何方式局限于所描述的方法和材料。
[0053]將理解的是，在本說明書中公開和限定的本發(fā)明延伸至在文本或附圖中提到的或顯現(xiàn)的兩個或更多個個體特征的所有替代組合。所有這些不同組合構成了本發(fā)明的多個替代方面。
[0054]除了上下文需要之外，本文使用的術語“包括(comprise) ”和該術語的變化如“包含(comprising) ”、“含有(comprises) ”和“含有的(comprised) ”并不旨在排除另外的添加劑、組分、整數(shù)或步驟。
[0055]本文提及的所有專利和出版物都以其整體通過引用并入本文。
[0056]為了解釋本說明書，將一般地應用以下定義，并且每當合適時，以單數(shù)形式使用的術語也包括復數(shù)，反之亦然。在給出的任何定義與通過引用并入本文的任何文獻抵觸時，以下文給出的定義為準。
[0057]“嘌呤能受體”通常是指使用嘌呤(例如，ATP)作為配體的受體。
[0058]“P2X7受體”通常是指由三個蛋白質(zhì)亞基或單體形成并且至少一個單體具有基本如SEQ ID No:1所示氨基酸序列的嘌呤能受體。就P2X7受體由三個單體形成來說，其是“三聚體”?！癙2X7受體”可以是下文描述的功能性或非功能性受體?！癙2X7受體”涵蓋P2X7受體天然存在的變體，例如，其中P2X7單體是剪接變體、等位基因變體以及包含形成P2X7受體之單體的天然存在的截短的或分泌形式(例如，由胞外域序列組成的形式或其截短形式)、天然存在的變體形式(例如，替代的剪接形式)和天然存在的等位基因變體的同工型。在本發(fā)明的某些實施方案中，本文公開的天然序列？2乂7單體多肽是包含SEQ ID No:1中示出的全長氨基酸序列的成熟或全長天然序列多肽。在某些實施方案中，P2X7受體可具有經(jīng)修飾的氨基酸序列，例如SEQ ID No:1中所示序列中的多個氨基酸可以被替換、缺失或可以插入殘基。
[0059]“功能性？2&受體”通常是指具有用于結合ATP的結合位點或裂口(cleft)的P2X7受體形式。當與ATP結合時，受體形成非選擇性鈉/鈣通道，所述通道轉變成允許鈣離子進入胞漿的孔樣結構，其結果之一可以是程序性細胞死亡。在正常穩(wěn)態(tài)中，功能性？2&受體的表達一般限于進行程序性細胞死亡的細胞，例如胸腺細胞、樹突細胞、淋巴細胞、巨噬細胞和單核細胞。在紅細胞和另一些細胞類型上也可以有功能性P2X7受體的一些表達。
[0060]“非功能性P2X7受體”通常是指具有以下構型的P2X7受體形式，受體由于該構型無法形成凋亡孔，但是通過保持位于相鄰單體之間的單個功能性ATP結合位點，其依然能夠作為非選擇性通道運行。一個實例是其中一個或更多個單體在Pro210(根據(jù)SEQ ID No:1)具有順式異構化。異構化可由導致單體錯折疊的任何分子事件(包括例如單體一級序列的突變或異常的翻譯后加工)引起。異構化的一個結果是受體在三聚體上的一個或兩個ATP結合位點不能與ATP結合，因此不能擴展通道的開放。在這種情況下，受體不能形成孔，這限制了鈣離子可進入胞漿的程度。非功能性P2X7受體在多種上皮癌和造血癌中表達。
[0061]“與癌癥相關的卩2&受體”通常是在癌細胞(包括癌前期細胞、贅生性細胞、惡性腫瘤細胞、良性細胞或轉移性細胞)中發(fā)現(xiàn)但是未在非癌細胞或正常細胞中發(fā)現(xiàn)的P2X7受體。
[0062]“E200表位”通常是指暴露于非功能性P2X7受體上的一種表位。在人中，序列為GHNYTTRNILPGLNITC(SEQ ID NO:2)。
[0063]“E300表位”通 常是指暴露于非功能性P2X7受體上的一種表位。在人中，序列為KYYKENNVEKRTLIKVF(SEQ ID NO:3)。
[0064]“復合表位”通常是指由并列的E200表位和E300表位或這些表位的一些部分形成的一種表位。
[0065]“抗體”或“免疫球蛋白”或“Ig”是在脊椎動物的血液或其他體液中發(fā)現(xiàn)的Y球蛋白，其在免疫系統(tǒng)中的作用是與抗原結合從而識別和/或中和外來物。
[0066]抗體通常是由兩條相同的輕(L)鏈和兩條相同的重(H)鏈組成的異四聚體糖蛋白。每一條L鏈通過一個共價二硫鍵與H鏈連接。根據(jù)H鏈的同種型，兩條H鏈通過一個或更多個二硫鍵彼此連接。每一條H鏈和L鏈還具有規(guī)律地間隔開的鏈內(nèi)二硫鍵。
[0067]H鏈和L鏈限定了特定的Ig結構域。更具體地，每一條H鏈在N端具有可變結構(Vh)，對于每一條α和Y鏈，接著是三個恒定結構域(Ch)，對于μ和ε同種型，接著是四個Ch結構域。每一條L鏈在N端具有可變結構域(\)，接著是在其另一端的恒定結構域(Cl)。Vl與Vh對齊，Cl與重鏈的第一恒定域(ChI)對齊。
[0068]可以將抗體分為不同的類或同種型。有五類免疫球蛋白:IgA、IgD、IgE、IgG和IgM,其分別具有被稱為α、δ、ε、y和μ的重鏈。基于Ch序列和功能中相對細微的差異，Y和α類型被進一步分成亞類，例如人表達以下亞類:IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2?；谄浜愣ńY構域的氨基酸序列，來自任何脊椎動物物種的L鏈都可分為被稱為K和λ的兩個明顯不同類型種的一種。
[0069]恒定結構域包含F(xiàn)e部分,所述Fe部分包含通過二硫鍵結合在一起的兩個H鏈的羧基端部分?？贵w的效應子功能(如ADCC)由Fe區(qū)中的序列決定，該區(qū)也是被在某些細胞類型中發(fā)現(xiàn)的Fe受體(FcR)所識別的部分。
[0070]Vh和\的配對一起形成了包含抗體的重鏈或輕鏈的氨基端結構域的“可變區(qū)”或“可變結構域”。重鏈的可變結構域可稱為“VH”。輕鏈的可變結構域可稱為“'”。V結構域包含“抗原結合位點”，其影響抗原結合并限定特定抗體對于其特定抗原的特異性。V區(qū)跨越約110個氨基酸殘基并且由極度易變的稱為“高變區(qū)”(通常大約3個)的各自具有9-12個氨基酸長的較短區(qū)域所隔開的15-30個氨基酸的被稱為框架區(qū)(FR)(通常大約4個)的相對不變的區(qū)段(relatively invariant stretch)組成。FR主要采取β-片層構型,高變區(qū)形成環(huán)連接，并且在一些情況下，形成β -片層結構的一部分。
[0071]“高變區(qū)”是指在序列上具有高度變化性和/或形成結構上限定的環(huán)的抗體可變結構域的區(qū)域。通常，抗體包含6個高變區(qū)，3個在Vh中(Η1、Η2、Η3)，3個在'中(L1、L2、L3)。
[0072]“框架區(qū)”或“FR”殘基是除了本文限定的高變區(qū)殘基以外的那些可變結構域殘基。
[0073]“抗原結合位點”通常是指至少包含高變區(qū)和框架區(qū)的分子，高變區(qū)和框架區(qū)是賦予V結構域抗原結合功能所必需的。在本文所述方法中，抗原結合位點可以是抗體或抗體片段(例如 dAb、Fab、Fd、Fv、F(ab' )2 或 scFv)的形式。
[0074]“完整”或“全”抗體是包含抗原結合位點連同Q以及至少重鏈恒定結構域Ch1、Ch2和Ch3的抗體。恒定結構域可以是天然序列恒定結構域(例如，人天然序列恒定結構域)或其氨基酸序列變體。
[0075]“包含可變結構域的全抗體片段”包括Fab、Fab'、F(ab' )2和？￥片段，雙抗體、線性抗體、單鏈抗體分子以及由抗體片段形成的多特異性抗體。
[0076]“Fab片段”由整個L鏈以及H鏈的可變區(qū)結構域(Vh)和一個重鏈的第一恒定域(ChI)組成。對于抗原結合，每一條Fab片段是單價的，即，其具有單個抗原結合位點。
[0077]“Fab,片段”與Fab片段的區(qū)別在于在ChI結構域的羧基端具有額外的幾個殘基，包括一個或更多個來自抗體鉸鏈區(qū)的半胱氨酸。FaY -SH在本文中指示其中恒定結構域的半胱氨酸殘基具有游離巰基的Fab'。
[0078]“F(ab' )2片段”大致相當于二硫鍵連接的兩個Fab片段，其具有二價抗原結合活性并且依然能夠與抗原交聯(lián)。
[0079]“Fv”是包含完整的抗原識別和結合位點的最小抗體片段。該片段由一個重鏈和一個輕鏈可變區(qū)結構域緊密的、非共價締合的二聚體組成。
[0080]在單鏈Fv(scFv)物類(species)中，一個重鏈和一個輕鏈可變結構域可通過柔性肽接頭共價連接，從而使得輕鏈和重鏈可以與雙鏈Fv物類中類似的締合成“二聚體”結構。從這些雙結構域的折疊產(chǎn)生6個高變環(huán)(H鏈和L鏈各自有3個環(huán))，其貢獻了用于抗原結合的氨基酸殘基并賦予抗體抗原結合特異性。
[0081]“單鏈Fv”也簡寫為“sFv”或“scFv”，是包含連接Vh抗體結構域和\抗體結構域以形成單個多肽鏈的抗體片段。優(yōu)選地，scFv多肽還包含在Vh結構域和'結構域之間的多肽接頭，其能夠使scFv形成用于抗原結合的所期望的結構。
[0082]“單一可變結構域”是Fv的一半(僅包含三個抗原特異的OTR)，其具有識別并結合抗原的能力，盡管親和力低于完整結合位點。 [0083]“雙抗體(diabodies) ”是指具有兩個抗原結合位點的抗體片段，該片段包含在同一多肽鏈(Vh-')中與輕鏈可變結構域(VJ相連的重鏈可變結構域(Vh)。通過構建在Vh結構域和\結構域之間具有短接頭(約5至10個殘基)的sFv片段(見前文)制備該小抗體片段，以實現(xiàn)V結構域鏈間而不是鏈內(nèi)成對，產(chǎn)生二價片段，即，具有兩個抗原結合位點的片段。
[0084]雙抗體可以是二價的或雙特異性的。雙特異性雙抗體是兩個“混合(crossover) ” sFv片段的異二聚體,其中,兩個抗體的Vh結構域和\結構域存在于不同多肽鏈上。三抗體(Tribodies)和四抗體(tetrabodies)也是本領域中周知的。
[0085]“分離的抗體”是已經(jīng)鑒別并與其之前存在環(huán)境中的組分相分離和/或回收的抗體。污染物組分是可能干擾抗體的治療應用的物質(zhì)，并且可包括酶、激素以及其他蛋白質(zhì)或非蛋白質(zhì)溶質(zhì)。
[0086]“人抗體”是指具有與人產(chǎn)生 的抗體之序列相對應的氨基酸序列的抗體?？梢允褂枚喾N本領域中已知的技術產(chǎn)生人抗體，包括噬茵體展示文庫?？梢酝ㄟ^向轉基因動物施用抗原來制備人抗體，所述轉基因動物已經(jīng)被改造成在對抗原攻擊的響應中產(chǎn)生這樣的抗體，但是其內(nèi)源基因座已經(jīng)喪失能力。
[0087]非人(例如，嚙齒類動物)抗體的“人源化”形式是包含最低限度的衍生自非人抗體序列的嵌合抗體。在大多數(shù)情況下，人源化抗體是人免疫球蛋白(接受者抗體)，其中，來自接受者的高變區(qū)的殘基被具有期望的抗體特異性、親和力和能力的來自非人物種(提供者抗體)(例如小鼠、大鼠、兔或非人靈長類動物)的高變區(qū)的殘基取代。在某些情況下，人免疫球蛋白的框架區(qū)(FR)殘基被相應的非人殘基取代。此外，人源化抗體可包括未在受體抗體或供體抗體中發(fā)現(xiàn)的殘基。進行這些修飾以進一步改進抗體性能。通常，人源化抗體包含至少一個、典型地兩個可變結構域中的基本上全部,其中高變環(huán)中的全部或基本上全部對應于非人免疫球蛋白的那些，并且FR的全部或基本上全部是人免疫球蛋白序列中的那些。人源化抗體任選地還包含免疫球蛋白恒定區(qū)(Fe)的至少一部分，通常是人免疫球蛋白。
[0088]“單克隆抗體”是指從基本均一之抗體的群體獲得的抗體，即構成群體的各個抗體是相同的，除了可以少量存在的可能的自然突變以外。單克隆抗體是高度特異的，其針對抗原上的單個抗原位點或決定簇。除了其特異性外，單克隆抗體的有利之處還在于可以不受其他抗體污染地合成單克隆抗體。可以通過雜交瘤法制備單克隆抗體。也可以使用技術從噬茵體抗體文庫分離“單克隆抗體”。
[0089]術語“抗P2X7受體抗體”或“結合P2X7受體的抗體”是指能夠以足夠的親和力結合P2X7受體的抗體，從而使抗體可用作靶向P2X7受體(典型地非功能性P2X7受體)的診斷和/或治療劑。優(yōu)選地，如通過放射免疫測定(RIA)、酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA) ^Biacore或流式細胞術測量的，P2X7受體抗體結合無關蛋白質(zhì)的程度低于抗體結合P2X7受體的約10%。在某些實施方案中，結合到P2X7受體的抗體具有的解離常數(shù)(Kd)為< I OM、< IOOnM,< IOnM, < InM或< 0.1nM?？狗枪δ苄訮2X7受體抗體通常具有這些血清學特性中的一些或全部特性并且結合非功能性P2X7受體而不結合功能性P2X7受體。
[0090]“親和力成熟的”抗體是其一個或更多個高變區(qū)中具有一個或更多個改變的抗體，不具有這些改變的親本抗體相比這種改變與導致了所述抗體對抗原的親和力改進。優(yōu)選的親和力成熟的抗體對于靶抗原具有納摩爾甚至皮摩爾的親和力。通過本領域中已知的方法生產(chǎn)親和力成熟的抗體。
[0091]“阻斷”抗體或“拮抗劑”抗體是抑制或降低與其結合之抗原的生物活性的抗體。優(yōu)選的封閉抗體或拮抗劑抗體基本或完全抑制抗原的生物活性。
[0092]本文中使用的“激動劑抗體”是模擬目標多肽的至少一種功能活性的抗體。
[0093]“結合親和力”通常是指分子(例如，抗體)的單個結合位點與其結合伙伴(例如，抗原)之間的非共價相互作用的總計強度。除非另外指明，本文中使用的“結合親和力”是指固有結合親和力，其反映了結合對的成員(例如，抗體和抗原)之間1:1的相互作用。一般通過解離常數(shù)(Kd)表示分子X對于其伙伴Y的親和力?？梢酝ㄟ^本領域中的常見方法測量親和力，這些方法包括本文中描述的那些。低親和力抗體一般與抗原緩慢結合并傾向于快速解離，而高親和力抗體一般與抗原結合較快并傾向于保持結合較長時間。多種測量結合親和力的方法在本領域中是已知的，其任意一個都可用于本發(fā)明的目的。
[0094]“表位”通常是指抗原與抗體的抗原結合位點結合的部分。表位可以是“線性”的，在這個意義上，形成抗原結合位點的抗體CDR之高變環(huán)與一級蛋白質(zhì)結構中的氨基酸序列結合。在某些實施方案中，表位是“構象表位”，即，其中CDR的高變環(huán)與三級或四級蛋白質(zhì)結構中出現(xiàn)的殘基結合。
[0095]“治療”通常是指治療性治療和預防性(prophylactic或preventative)措施二者。
[0096]需要治療的對象包括已經(jīng)具有良性腫瘤、癌前腫瘤或非轉移性腫瘤的對象以及待預防癌癥之發(fā)生或復發(fā)的對象。
[0097]治療的目的或結果可以是減少癌細胞的數(shù)目、減小原發(fā)性腫瘤的尺寸、抑制(即，在一定程度上減緩，優(yōu)選地停止)癌細胞向周圍器官中浸潤、抑制(即，在一定程度上減緩，優(yōu)選地停止)腫瘤轉移、在一定程度上抑制腫瘤生長、和/或在一定程度上減輕一種或更多種與疾病相關的癥狀。
[0098]可以通過評估生存持續(xù)時間、疾病發(fā)展的時間、響應率(response rate,RR)、響應持續(xù)時間和/或生活質(zhì)量來測量治療功效。
[0099]在一個實施方案中，所述方法特別可用于延遲疾病發(fā)展。
[0100]在一個實施方案中，所述方法特別可用于延長人的生存，包括總生存以及無進展生存。
[0101]在一個實施方案中，所述方法特別可用于提供對治療的完全響應，響應于治療，癌癥的所有跡象已經(jīng)消失。這并不一定意味著癌癥已經(jīng)治愈。
[0102]在一個實施方案中，所述方法特別可用于提供對治療的部分響應，響應該治療，身體內(nèi)的一個或更多個腫瘤或病灶的尺寸減小，或癌癥的程度降低。
[0103]“癌前(Pre-cancerous) ”或“贅生前(pre-neoplasia) ”通常是指在癌癥之前或發(fā)展成癌癥的病癥或生長?！鞍┣捌凇鄙L可具有以異常的細胞周期調(diào)控、增殖或分化為特征的細胞，其可通過細胞周期標志物確定。
[0104]在一個實施方案中，癌癥是癌前或贅生前。
[0105]在一個實施方案中，癌癥是繼發(fā)性癌或轉移性癌。繼發(fā)性癌可以位于任何器官或組織中，特別是具有相對更高血流動力學壓力的那些器官或組織，例如肺、肝、腎、胰腺、腸和腦。[0106]癌癥的另一些實例包括母細胞瘤(包括神經(jīng)管母細胞瘤(medul1blastoma)和視網(wǎng)膜母細胞瘤(retinoblastoma))、肉瘤(包括脂肪肉瘤和滑膜細胞肉瘤)、神經(jīng)內(nèi)分泌瘤(包括類癌瘤、胃泌素瘤和胰島細胞癌)、間皮瘤、神經(jīng)鞘瘤(包括聽神經(jīng)瘤)、腦膜瘤、腺癌、黑色素瘤、白血病或淋巴惡性腫瘤、肺癌(包括小細胞肺癌(SGLG)、非小細胞肺癌(NSGLG)、肺腺癌和肺鱗癌)、腹膜癌、肝細胞癌、胃癌(gastric cancer或stomach cancer)(包括胃腸癌)、胰腺癌、成膠質(zhì)細胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌(liver cancer)、膀胱癌、肝癌(hepatoma)、乳腺癌(包括轉移性乳癌)、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮內(nèi)膜癌或子宮癌、唾液腺癌、腎癌或腎臟癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、肛門癌、陰莖癌、睪丸癌、食管癌、膽道腫瘤和頭頸部癌。
[0107](與癌癥)“相關的病癥或癥狀”可以是由癌癥導致，在癌癥之前或在癌癥進行中出現(xiàn)的任何病理狀況。例如，當癌癥是皮膚癌時，所述病癥或相關癥狀可以是微生物感染。當癌癥是繼發(fā)性腫瘤時，病癥或癥狀可以涉及具有腫瘤轉移的相關器官的器官功能異常。在一個實施方案中，本文所述治療方法是減小或治療個體中與個體中癌癥相關的病癥或癥狀。
[0108]“非自身”分子，例如“非自身”抗原結合位點或“非自身”抗體通常是指在待提供(例如用于治療的)該分子的機體外部或外源產(chǎn)生的分子。作為例子，合成分子或重組分子是“非自身”的。另外，在一個個體中產(chǎn)生為了治療而施用至其另一個體的分子是“非自身”的。可以根據(jù)本發(fā)明使用“非自身”抗原結合位點和抗體用于免疫力的過繼轉移，例如在抗體輸注中發(fā)生的。相反，由待用該分子治療的個體內(nèi)部產(chǎn)生的分子通常是“自身”分子或“內(nèi)源”分子?！白陨怼狈肿拥囊粋€實例是來自免疫原的適應性免疫應答產(chǎn)生或引起的抗原結合位點或抗體 。
[0109]個體中“循環(huán)中非自身抗原結合位點的水平”通常是指體液(優(yōu)選外周血)中抗原結合位點的濃度。
[0110]“循環(huán)中非自身抗原結合位點基本不可檢測的水平”通常是指外源性抗原結合位點(即，通過過繼轉移施用的那些)的濃度是施用抗原結合位點時循環(huán)中抗原結合位點濃度至少減半，優(yōu)選為所述濃度的25%、或10%、或5%、或1%，或個體中小于0.001mg/kg。該詞組也可指為了癌癥免疫治療的目的而給予的抗原結合位點完全不能被檢測的情況。
[0111]癌癥“基本不可檢測”通常是指以下情況:治療已經(jīng)耗盡了癌癥的尺寸、體積或其他物理量，以致當使用相關標準檢測技術(如體內(nèi)成像)檢測時，因為治療，癌癥已經(jīng)不能清楚地檢測到。該詞組也指癌癥完全不能被檢測的情況。
[0112]“形成免疫應答”通常是指通過適應性免疫系統(tǒng)引起或誘導抗原特異性免疫。如在本領域中一般性理解的，抗原特異性免疫的誘導不同于免疫力的過繼轉移，通過施用外源或非自身抗體的標準癌癥治療是后者的一個實例。
[0113]選用于治療的個體
[0114]通常，選用于根據(jù)上述方法治療的個體是已經(jīng)接受或繼續(xù)接受用于治療癌癥的抗體免疫治療的個體?？贵w免疫治療通常是指向需要治療的個體施用外源(或者稱為“非自身”)抗體，如在抗體的過繼轉移中的情況一樣。例如，個體可以已經(jīng)接受了任意一種已被審批用于腫瘤相關適應癥的治療性抗體。實例是阿瓦斯汀(Avastin)、赫賽汀、利妥昔單抗。通常，個體已經(jīng)接受或將繼續(xù)接受抗P2X7受體抗體。[0115]在一個實施方案中，個體已經(jīng)接受了免疫治療，導致在進行免疫接種時，腫瘤塊不可檢測并且不可以再具有可檢測的循環(huán)外源抗體。
[0116]另外，選用于根據(jù)上述方法治療的所個體在治療時可具有或不具有可檢測的癌癥。當個體不具有可檢測的癌癥時，更容易檢測原發(fā)性或繼發(fā)性體液免疫，這是因為由于癌癥以基本不可檢測的量存在，所以具有非常少的可利用的非功能性P2X7受體以從體液中去除IgM或IgG。這一點在圖1和2中已證明。
[0117]根據(jù)上述方法的治療的目的是，通過在個體中誘導或形成對非功能性P2X7受體的免疫應答，至少使 癌癥的發(fā)展最小化。因此，用于治療的所選個體必須能夠產(chǎn)生足以滿足該目的的免疫應答。通常，期望的免疫應答包括，當個體受到癌癥攻擊(如癌癥復發(fā))時，產(chǎn)生循環(huán)IgM和IgG中一種或兩種的能力。在一個實施方案中，當個體不具有可檢測的癌癥時，檢測或評估對非功能性P2X7受體的免疫應答的存在。在這些情況下，認為腫瘤形式的抗P2X7受體抗體吸收物質(zhì)(antibody-absorbing mass)的缺乏使具有較高的抗P2X7受體抗體系統(tǒng)性滴度的可能性增加。
[0118]可以通過多種本領域中周知的用于檢測免疫缺陷的方法選擇或篩選能夠產(chǎn)生本文描述的免疫應答的個體。通常，用于治療的所選個體是具有至少一種在正常參數(shù)內(nèi)的白細胞組分計數(shù)的個體。例如，納入個體通常是這樣的個體，其白細胞計數(shù)為4.0至11.0X109/L，或淋巴細胞計數(shù)為1.0至4.4父109/!。中性粒細胞計數(shù)可以為1.9至
7.8X109/L,單核細胞計數(shù)為0.2至1.0X107L,嗜酸性粒細胞少于約5.0X 109/L，嗜堿性粒細胞少于約0.2X109/L.[0119]將理解的是，在某些實施方案中，這些血細胞組分中任意一種組分的細胞計數(shù)可落在這些指定范圍外，特別是在個體具有血液癌癥的形式(例如CML、CLL等)的情況下。
[0120]通常，一種重要的因素是淋巴細胞計數(shù)和/或單核細胞計數(shù)。更詳細地，當這兩種計數(shù)中的一種或兩種顯著低于給這些組分所指定的范圍時，個體更可能不響應免疫原的施用。
[0121]在另一個實施方案中，用于治療的個體的選擇可包括篩選個體是否是非功能性P2X7受體表達之純合子的篩選步驟。更詳細地，可以理解小部分白種人群在非癌細胞如某些胸腺細胞、樹突細胞、淋巴細胞、巨噬細胞、單核細胞和紅細胞上具有非功能性P2X7受體的表達。另一些個體可以是該表達的雜合子。在一個實施方案中，篩選為非功能性？2&受體表達之純合子的個體并從治療中排除，在這種情況下，納入治療的個體在非癌細胞上不表達非功能性P2X7受體，或具有雜合子表達。
[0122]當個體繼續(xù)接受抗體免疫治療時，在一個實施方案中，允許繼續(xù)進行抗體免疫治療直到期望的臨床終點。典型地期望的臨床終點是癌癥降低至基本不可檢測的水平。在免疫治療期間或完成時，然后評估個體形成或產(chǎn)生對P2X7受體的免疫應答的能力。當評估表明個體很可能受益于P2X7免疫原的免疫接種時，隨后向個體施用免疫原。
[0123]在本發(fā)明的一個優(yōu)選形式中，在個體中形成免疫應答時，個體循環(huán)中由抗體免疫治療引起的非自身或外源抗原結合位點的水平基本不可檢測。重要地，當非自身抗原結合位點與非功能性P2X7受體或癌癥相關的P2X7受體結合時，本發(fā)明人的關鍵發(fā)現(xiàn)是，特別是當癌細胞具有非常低拷貝數(shù)或另外基本不可檢測時，在較高循環(huán)濃度的抗原結合位點下，抗體治療的效力降低。這被認為是相對于在標準抗體免疫治療中出現(xiàn)的高濃度抗原結合位點，癌細胞上P2X7受體的低拷貝數(shù)的結果。具體地，在本文的實施例中，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)隨著抗原結合位點的循環(huán)水平增加和癌細胞數(shù)量的減少，抗原結合位點導致P2X7受體聚集的可能性更大，所述抗原結合位點阻斷所述抗原與所述受體的特異性結合。該阻斷使下述可能性增大:預期的抗原結合位點導致的抗原特異性結合的細胞毒性、細胞凋亡或其他作用將會是不可能的?？梢酝ㄟ^能夠檢測體液中抗體的任何標準血清學技術確定循環(huán)中的外源性抗原結合位點的水平，一個優(yōu)選的實例是使用抗體進行ELISA以捕獲抗原結合位點。
[0124]除此之外，盡管不希望受到理論的約束，本發(fā)明人認為在輸注的抗體存在時，免疫接種的施用增加了輸注的抗體可能與免疫原結合的風險，導致免疫復合物形成并被清除，從而避免了抗原呈遞和抗原特異性免疫的誘導。因此，在某些實施方案中，特別有用的是在誘導對免疫原的抗原特異性免疫應答之前等待直到非自身或外源性抗原結合位點已經(jīng)被從循環(huán)中清除。
[0125]在輸注的抗體不能與免疫原(即，由于抗體對于免疫原不是特異的，例如當抗體結合至與免疫原無關的生物標志物時)結合的實施方案中，可以在有可檢測到已輸注抗體時或在抗體輸注發(fā)生之前，用免疫原進行免疫接種。
[0126]抗原結合位點和施用
[0127]待治療的個體根據(jù)本文所述方法可以是已經(jīng)接受或將要接受任意一種以腫瘤為適應癥的治療性抗體的個體。優(yōu)選地，個體已經(jīng)接受或繼續(xù)接受抗P2X7受體抗體。
[0128]通常，所述抗原結合位點區(qū)分功能性P2X7受體和非功能性P2X7受體，從而結合非功能性受體而不結合功能性P2X7受體的位點。這些抗原結合位點的實例是結合至E200表位、E300表位或復合表位的那些，例如見PCT/AU2002/000061、PCT/AU2002/001204、PCT/AU2007/001540, PCT/AU2007/00154U PCT/AU2008/001364、PCT/AU2008/001365、PCT/AU2009/000869和PCT/AU2010/001070，這些專利全部通過引用并入本文。
[0129]不考慮特異性(即，P2X7受體特異的或其他的)，所述抗原結合位點可以采取全抗體形式或全抗體之片段(如Fab、Fab'、F(ab' )2和Fv、單鏈Fv或單鏈可變結構域)形式。
[0130]所述抗原結合位點可以是同基因的、異基因的或異種的。
[0131]通常，所述抗原結合位點是非自身的或外源性的，意味著其在根據(jù)本發(fā)明治療的個體以外發(fā)現(xiàn)或分離。
[0132]所述抗原結合位點可以是親和力成熟的。
[0133]所述抗原結合位點可以具有多種特異性或多價。
[0134]可以改造抗原結合位點以適合于通過選定方法施用。
[0135]所述抗體可以是任意同種型的全抗體。所述抗體可以是從單克隆或多克隆抗血清中獲得的抗體。所述抗體可通過雜交瘤或通過重組表達產(chǎn)生，或可自血清獲得，例如從哺乳動物，特別是人或小鼠中可得的。所述抗體還可以自鳥類獲得。
[0136]所述抗體可以是嵌合的，即包括人可變結構域和非人恒定結構域的抗體。或者，所述抗體可以是人源化的，即，通過將非人CDR嫁接在人抗體框架區(qū)上形成的抗體。另外，所述抗體可以是全人的。
[0137]所述抗體可以針對效應子功能進行修飾，從而增強例如抗體在治療癌癥中的有效性。
[0138]當所述抗體是抗體片段時，所述抗體片段選自dAtKFatKFcKFv'Ffeb' )2、scFv和CDR。
[0139]以下詳細描述了施用劑量、給藥頻率和途徑等。
[0140]制備抗體和向有此需要的對象施用抗體的方法是周知的，或容易由本領域技術人員確定的。施用途徑可以是例如:經(jīng)口、胃腸外(例如，靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、直腸或陰道)、通過吸入或表面施用。施用的一種形式可以是用于注射、特別是用于靜脈內(nèi)或動脈內(nèi)注射或滴注的溶液，包含緩沖劑(例如，乙酸鹽、磷酸鹽或檸檬酸鹽緩沖劑)、表面活性劑(例如，聚山梨醇)、任選的穩(wěn)定劑(例如，人白蛋白)。在另一些方法中，可以將抗體直接遞送到疾病部位，從而增加疾病細胞或組織對抗體的暴露。
[0141]用于胃腸外施用的制劑包括無菌水性(水性載體包括水、醇/水溶液、乳劑或混懸劑，包含鹽和緩沖介質(zhì))或非水性(非水性溶劑是丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄欖油、可注射有機酯如油酸乙酯)溶液、混懸劑或乳劑。藥學上可接受的載體包括0.01至0.1M(優(yōu)選
0.05M)的磷酸鹽緩沖液或0.9%鹽水。其他常見胃腸外載體包括磷酸鈉溶液、林格式葡萄糖(Ringer' s dextrose)、葡萄糖和氯化鈉、乳酸林格氏液(actated Ringer' s)或不揮發(fā)性油。靜脈內(nèi)載體包括流體和營養(yǎng)補充劑、電解質(zhì)補充劑，例如基于林格式葡萄糖的那些等。還可以存在防腐劑和其他添加劑，例如抗茵劑、抗氧化劑、螯合劑和惰性氣體等。
[0142]更特別地，適于可注射使用的藥物組合物包括無菌水溶液(當可溶于水時)或分散體和用于臨時制備無菌可注射溶液或分散體的無菌粉劑，在這種情況下，組合物必須是無菌的并且應當是容易注射程度的流體存在。其在制造和儲存條件下必須穩(wěn)定，并且優(yōu)選地不被微生物(如細菌和真菌)污染地儲存。載體可以是溶劑或分散介質(zhì)，含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘 油、丙二醇和液態(tài)聚乙二醇等)及其合適的混合物。例如，通過使用涂層如卵磷脂、通過在分散體的情況下維持所期望的的粒徑、以及通過使用表面活性劑，可以維持適當?shù)牧鲃有浴Ｓ糜谠诒疚墓_的治療方法中使用的合適制劑描述在Remington' sPharmaceutical Sciences, Mack Publishing C0.，第 16 版,(1980)中。
[0143]通過多種抗細菌劑和抗真菌劑，例如對羥基苯甲酸酯類、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸、硫柳汞等，可以實現(xiàn)抑制微生物的作用。在許多情況下，優(yōu)選地在組合物中包含等滲劑，例如糖，多元醇如甘露醇、山梨醇，或氯化鈉。通過在組合物中包含延長吸收的試劑(如單硬脂酸鋁和明膠)可延長可注射組合物的吸收。
[0144]無論如何，可通過向根據(jù)需要包含有一種本文所列舉成分或本文所列舉成分的組合的合適溶劑中引入所需量的活性化合物(例如，抗原結合位點)，然后過濾滅菌來制備無菌可注射溶液。通常，通過將活性化合物并入無菌載體中來制備分散體，所述無菌載體包含基本分散介質(zhì)和所需的來自上文列舉的那些其他成分。在用于制備無菌可注射溶液之無菌粉末的情況下，優(yōu)選的制備方法是真空干燥、冷凍干燥和噴霧干燥，從其無菌過濾溶液產(chǎn)生活性成分和任意另外的期望成分的粉末。根據(jù)本領域中已知的方法，將用于注射的制劑進行處理，填入容器如安瓿、包、瓶、注射器或藥水瓶中，并在無菌條件下滅菌。另外，可以將制劑以試劑盒的形式包裝和銷售。這樣的制品優(yōu)選地具有標簽或包裝說明書，指示相關組合物可用于治療患有或易感于疾病的對象。
[0145]用于治療本文所述疾病的本發(fā)明之組合物的有效劑量根據(jù)許多不同因素而變化，這些不同因素包括施用方式、祀部位(target site)、患者的生理狀態(tài)、患者是人還是動物、施用的其他藥物、以及治療是治療性的還是預防性的。可使用本領域技術人員已知的常規(guī)方法確定治療劑量，以優(yōu)化安全性和效力。
[0146]對于使用抗體治療的某些疾病，劑量可以基于宿主體重例如約0.0001至IOOmg/kg宿主體重，更通常地0.01至5mg/kg宿主體重(例如，0.02mg/kg、0.25mg/kg、0.5mg/kg、0.75mg/kg、lmg/kg、2mg/kg等)。例如，劑量可以是lmg/kg體重或10mg/kg體重或在I至10mg/kg的范圍內(nèi)，優(yōu)選至少lmg/kg。上述范圍中的中間劑量也旨在包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。可以每日一次、隔日一次、每周一次或根據(jù)通過經(jīng)驗分析確定的任何其他方案施用這樣的劑量。一種示例性的治療需要在長時期(例如至少6個月)以多劑量施用。另外的示例性治療方案需要每兩周施用一次或每月施用一次或每3至6個月施用一次。示例性劑量方案包括在連續(xù)日中I至10mg/kg或15mg/kg,隔日30mg/kg,或每周60mg/kg。在一些方法中，同時施用具有不同結合特異性的兩種或更多種抗原結合位點，在這種情況下每一種抗原結合位點的劑量落在指定的范圍內(nèi)。
[0147]可以在多種場合下施用用于結合細胞上表達的非功能性P2X7受體的抗體。單次用藥之間的間隔可以是按周、按月或按年。間隔也可以不規(guī)則如通過測量患者中靶多肽或靶分子的血液水平指示。在一些方法中，調(diào)節(jié)劑量以取得lug/mL至lOOOug/mL的血漿多肽濃度，在一些方法中，取得25ug/mL至300ug/mL的血漿多肽濃度?；蛘?，可作為持續(xù)釋放劑型施用抗體，在這種情況下，需要較低頻率施用。劑量和頻率根據(jù)患者中抗體的半壽期而改變。也可以通過融合穩(wěn)定的多肽或結構例如白蛋白或PEG來延長抗體的半壽期。一般而言，人源化抗體表現(xiàn)出最長的半壽期，接著是嵌合抗體和非人抗體。在一個實施方案中，可以以非綴合形式施用抗體。在另一個實施方案中，可以以綴合物形式多次施用抗體。在某些治療性應用中，有時候需要相對短的間隔下的相對高的劑量(例如，每次施用高達400mg/kg抗P2X7結合分子，例如抗體)，直到疾病的發(fā)展被降低或終止，并且優(yōu)選地直到患者表現(xiàn)出疾病之癥狀部分地或完全地改善。當抗體與放射性同位素或細胞毒性藥物綴合時，量可以降低數(shù)個log (即，降低2至31og)。
[0148]可以通過胃腸外、表面、靜脈內(nèi)、經(jīng)口、皮下、動脈內(nèi)、顱內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)或肌內(nèi)方
式施用治療劑以預防性和/或治療性治療，在一些方法中，可以將藥劑直接注射到積累了非功能性P2X7受體細胞的特定組織中，例如，優(yōu)選顱內(nèi)注射、肌內(nèi)注射或靜脈輸注以施用抗體。
[0149]任選地，可以將抗體與在需要治療(例如，預防性或治療性)之疾病或病癥的治療中有效的其他藥劑組合施用。實例是在腫瘤的化療或放療中常用的藥劑。作為補充或替代，可以在用于切除或去除腫瘤或組織的手術干預之前、期間或之后施用抗體或藥劑。
[0150]免疫原和形成免疫應答
[0151]本文描述的本發(fā)明方法需要在待治療的個體中形成對P2X7受體(特別是非功能性P2X7受體)的免疫應答。通常，用于該目的之免疫原是引起對非功能性P2X7受體的免疫應答而不引起對功能性P2X7受體的免疫應答的免疫原。
[0152]免疫原可包含含有P2X7受體之序列的肽或由所述肽組成。肽可以包含至少一個能夠在主要組織相容性復合物II類分子上呈現(xiàn)或能夠與B細胞受體或B細胞膜結合免疫球蛋白相互作用的序列。通常，肽包含人P2X7受體或其片段的序列。
[0153]一系列的肽免疫原是已知的，并且在 PCT/AU2002/000061、PCT/AU2002/000061、PCT/AU2008/001364和PCT/AU2009/000869中公開，這些專利的內(nèi)容以其整體通過引用并入本文。
[0154]以下描述了在這些說明書內(nèi)的示例性肽免疫原，其包含用于對非功能性？2&受體產(chǎn)生免疫應答的肽。
[0155]
【權利要求】
1.一種在已經(jīng)接受了用于治療癌癥的非自身抗原結合位點的個體中使癌癥發(fā)展最小化的方法，所述方法包括以下步驟: -提供已經(jīng)接受了用于治療癌癥的非自身抗原結合位點的個體； -在所述個體中形成針對P2X7受體的免疫應答； 從而使所述個體中癌癥的發(fā)展最小化。
2.前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述個體在循環(huán)中不具有可檢測的非自身抗原結合位點。
3.權利要求1或2所述的方法，其中所述個體不具有可檢測的癌癥。
4.前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述個體已經(jīng)產(chǎn)生了對所述非自身抗原結合位點的免疫應答。
5.前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述個體已經(jīng)接受了用于治療癌癥的非自身抗原結合位點，所述非自身抗原結合位點與非功能性？2&受體結合，但是不與功能性P2X7受體結合。
6.前述權利要求中任一項所述的方法，其中通過在所述個體中提供以P2X7受體或能夠在所述個體中誘導對P2X7受體之免疫應答的P2X7受體片段形式的免疫原形成免疫應答。
7.權利要求6所述的方法，其中所述個體接受的用于治療癌癥的所述非自身抗原結合位點不與P2X7受體或P2X7受體的片段結合。
8.權利要求6所述的方法，其中在初次施用中向所述個體提供所述免疫原，從而在所述個體中形成包括產(chǎn)生IgM的應答。
9.權利要求6所述的方法，其中在初次施用中向所述個體提供所述免疫原，從而形成包括產(chǎn)生IgM的應答，并且在隨后時間，在所述初次施用的進一步施用中提供所述免疫原，從而形成包括產(chǎn)生IgG的應答。
10.一種用于在已經(jīng)接受了用于治療癌癥的抗癌癥抗原抗體的個體中形成針對與癌癥相關的P2X7受體的體液免疫應答的方法，其包括以下步驟: -在所述個體中形成針對作為癌癥相關的P2X7受體或其片段形式的免疫原的免疫應答; 其中，當所述個體中為治療癌癥所施用的抗癌癥抗原抗體為基本不可檢測的水平或濃度時，在所述個體中形成免疫應答；和/或 根據(jù)免疫接種方案形成針對癌癥相關的P2X7受體的體液免疫應答，從而使得在所述個體中形成的針對癌癥相關的P2X7受體之抗體的量為約0.1至25mg/kg個體。
【文檔編號】A61P35/00GK103702683SQ201280033124
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2012年7月2日 優(yōu)先權日:2011年7月1日
【發(fā)明者】朱利安·亞歷山大·巴登, 安格斯·基得利-拜爾德 申請人:生物權威國際有限公司