胎盤萃取物及胎盤萃取物的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種胎盤萃取物及安全有效地制備胎盤萃取物的方法，本發(fā)明胎盤萃取物制備方法包括選自下列步驟所組成的群中的一個以上步驟：使用界面活性劑及溶劑將病毒滅活的步驟；照射紫外線將病毒滅活的步驟；以及使用納米過濾器將病毒清除的步驟；本發(fā)明還提供如此得到的胎盤萃取物的哺乳類更年期障礙癥狀預(yù)防或治療用途。
【專利說明】胎盤萃取物及胎盤萃取物的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種胎盤萃取物及安全有效地制備胎盤萃取物的方法，更具體地說，本發(fā)明胎盤萃取物的制備方法包括選自下列步驟所組成的群中的ー個以上步驟:使用界面活性劑及溶劑將病毒滅活的步驟；照射紫外線將病毒滅活的步驟；以及使用納米過濾器將病毒清除的步驟所組成的群中的ー個以上步驟；本發(fā)明還涉及如此得到的胎盤萃取物的哺乳類更年期障礙癥狀預(yù)防或治療用途。
【背景技術(shù)】
[0002]胎盤(placenta)是懷孕的哺乳類動物的子宮上長出來的器官。胎盤在分娩時從子宮排出，將胎盤排出來則稱為后分娩。胎盤被認為含有必需氨基酸、褪黑激素、RNA及DNA之類的核酸成分，作為抗氧化酶的SOD (super oxide dismutase)、透明質(zhì)酸(hyaluronicacid)、抗氧化劑、細胞因子以及各種生長因子(growth factor)。
[0003]現(xiàn)有的胎盤萃取物制備方法包括:利用鹽酸之類的強酸或強堿把胎盤水解后獲取其產(chǎn)物的方法、利用酶把胎盤水解的方法。但，該現(xiàn)有方法的水解條件以及長時間進行高溫處理的過程中會讓胎盤所含有的各種生理活性物質(zhì)變性或破壞。
[0004]另ー方面，不利用酸、堿或酶水解與高溫處理方法而采取溫和(mild)方法萃取胎盤時雖然可以在各種生理活性物質(zhì)不變性、不破壞的情形下萃取，但由于隨著胎盤而來的潛在病毒可能會引起問題而必須進行將其滅活或清除的エ序，然而，目前為止除了熱處理以外并沒有任何滅活或清除病毒的胎盤萃取物制備方法。
[0005]解決的技術(shù)課題
[0006]本發(fā)明的基本目的是提供ー種胎盤萃取物的制備方法，其包括選自下列步驟所組成的群中的ー個以上步驟:使 用界面活性剤及溶劑將病毒滅活的步驟；照射紫外線將病毒滅活的步驟；以及使用納米過濾器將病毒清除的步驟。
[0007]本發(fā)明的另ー個目的是提供ー種安全有效的胎盤萃取物的制備方法，其包括下列步驟:(i)在水介質(zhì)里粉碎胎盤組織后獲取胎盤溶液的步驟；(ii)把上述胎盤溶液分離成液相部分與固相部分的步驟；(iii)在上述步驟(ii)所獲取的液相部分添加界面活性剤及溶劑而將病毒滅活的步驟；(iv)從上述步驟(iii)所獲取的混合溶液中清除上述界面活性劑及上述溶劑的步驟；(V)針對上述步驟(iv)所獲取的溶液照射紫外線將病毒滅活的步驟 '及(vi)使用納米過濾器及除菌過濾器對上述步驟(V)中照射了紫外線的溶液進行過濾而清除病毒與細菌的步驟。
[0008]本發(fā)明的再ー個目的是提供ー種上述方法制備的胎盤萃取物，還提供一種包括由上述方法制備的胎盤萃取物及藥學(xué)上允許的載體的哺乳類更年期障礙癥狀預(yù)防或治療用藥物組合物。
[0009]解決課題的技術(shù)方案
[0010]本發(fā)明的基本目的可以由下列胎盤萃取物制備方法實現(xiàn)，該方法包括下列步驟所所組成的群中的ー個以上步驟:使用界面活性剤及溶劑將病毒滅活的步驟；照射紫外線將病毒滅活的步驟；以及使用納米過濾器將病毒清除的步驟。
[0011]上述方法不使用現(xiàn)有技術(shù)的熱處理工序也能將胎盤所含病毒加以滅活或清除。本發(fā)明方法中的上述胎盤組織可以來自人、豬、馬或羊之類的哺乳動物。
[0012] 較佳地，本發(fā)明方法所使用的上述界面活性剤與溶劑能溶解細胞膜卻不會鈍化諸如蛋白質(zhì)等結(jié)合于細胞膜的成分的活性。而且，上述界面活性剤不能讓蛋白質(zhì)變性。上述界面活性劑可以使用非離子系及兩性界面活性剤。
[0013]更具體地說，上述界面活性劑是Triton-XlOO(聚乙二醇p-(l，I, 3，3_四甲基丁基)-苯基醚)、Triton-X114(聚乙二醇p-(l，1，3，3-四甲基丁基)-苯基醚)、Tween20 (PEG (20)山梨醇酐單月桂酸酷)、Tween80 (PEG (20)山梨醇酐單油酸)、NonidetP-40(聚乙二醇辛基苯基醚)、Brij-35(聚氧乙烯(23)十二醇)、Bri j_58 (聚氧乙烯(20)鯨臘基)、CHAPS (3-[ (3-膽酰胺丙基)二甲氨基]-1-丙磺酸內(nèi)鹽)或CHAPSO (3-[ (3-膽酰胺丙基)二甲氨基]-2_羥基-1-丙磺酸內(nèi)鹽)或它們的組合。較佳地，以上述液相部分的體積為基準添加0.lvol%到2vol%左右的上述界面活性剤。而且上述溶劑以TNBP(tr1-n-butylphosphate)較佳。例如，上述界面活性劑為Triton-XlOO、上述溶劑為TNBP，并且其含量各為 0.3% (v/v)及 l%(v/v)。
[0014]在本發(fā)明的方法中，上述照射紫外線是用來滅活可能存在于胎盤萃取物中的病毒。憑借紫外線照射將人來源病毒及模型病毒HIV、HAV、BHV、BVDV、PPV滅活而得以進ー步減少生物物質(zhì)污染。較佳地，上述紫外線的能量為1，000J/m2到3，000J/m2。
[0015]在本發(fā)明的方法中，使用上述納米過濾器的納米過濾エ序可針對具有污染可能性的病毒及模型病毒HIV、HAV、BHV、BVDV、PPV的清除及滅活エ序進行效率性驗證。上述納米過濾器的過濾精度以15nm到30nm較佳。
[0016]本發(fā)明的另ー個目的可以由前述本發(fā)明胎盤萃取物制備方法的一較佳實施形態(tài)實現(xiàn)，其包括下列步驟:(i)在水介質(zhì)里粉碎胎盤組織后獲取胎盤溶液的步驟；(ii)把上述胎盤溶液分離成液相部分與固相部分的步驟；(iii)在上述步驟(ii)所獲取的液相部分添加界面活性剤及溶劑而將病毒滅活的步驟；(iv)從上述步驟(iii)所獲取的混合溶液中清除上述界面活性剤及上述溶劑的步驟；(V)針對上述步驟(iv)所獲取的溶液照射紫外線將病毒滅活的步驟；及(vi)使用納米過濾器及除菌過濾器對上述步驟(V)中照射了紫外線的溶液進行過濾而清除病毒與細菌的步驟。
[0017]在本發(fā)明方法中，上述胎盤組織可以來自人、豬、馬或羊之類的哺乳動物。而且，本發(fā)明中的水介質(zhì)表示水或以水為溶媒的介質(zhì)。上述水介質(zhì)以水或PBS (磷酸緩沖液)較佳。
[0018]上述粉碎可以使用攪拌機(blender)或均化器實現(xiàn)。上述粉碎把胎盤組織制成小粒子的同時還能對胎盤組織中的細胞進行物理溶解。上述粉碎可以把胎盤組織制成諸如3mm以下的尺寸。該粉碎把胎盤組織制成小粒子而得以增加諸如蛋白質(zhì)等胎盤組織中的有用成分被溶解到介質(zhì)中的表面積。上述粉碎的溶液可以是均相溶液(homogenoussolution)。上述粉碎在2°C到8°C下實行較佳。
[0019]而且，也可以把上述胎盤組織細切后在水介質(zhì)里粉碎。胎盤組織的細切可以使用切碎機(mincer)或細切機(chopper)實行。該細切可以在2°C到8°C下實行。
[0020]較佳地，使用憑借清洗而清除了血液的上述胎盤組織。從胎盤組織清除血液時可以使用紅細胞裂解液(RBC lysis buffer)等實現(xiàn)。上述紅細胞裂解液(RBC lysis buffer)可以是含有NH4Cl、KHCO3及EDTA的水溶液，例如可以是1，OOOml水中含有8.3g的NH4C1、
1.0g 的 KHCO3 及 5%EDTA1.8ml 的水溶液。
[0021]在本發(fā)明的方法中，可以在上述(i)步驟后選擇性地實行清除上述液相部分所含固體的預(yù)過濾步驟。上述預(yù)過濾可以通過離心分離實現(xiàn)。
[0022]上述液相部分是溶解了溶解性成分的水介質(zhì)的部分，上述固相部分是液相部分以外的部分。上述固相部分可以包括細胞碎片(cell debris)與細胞器官等。上述離心分離可以在諸如10，OOOrpm到15，OOOrpm下實行。上述液相部分可以是從離心分離的試料的顆粒(pellet)中分離出來的。選擇分離后獲取的液相部分而排除固相部分。上述預(yù)過濾步驟可以使用0.4 y m到0.6 y m大小的過濾器實行。可以憑借該預(yù)過濾清除上述液相部分可能含有的雜質(zhì)。
[0023]較佳地，本發(fā)明方法所使用的上述界面活性剤與溶劑能溶解細胞膜卻不會鈍化諸如蛋白質(zhì)之類結(jié)合于細胞膜的成分的活性。而且，上述界面活性剤不能讓蛋白質(zhì)變性。上述界面活性劑可以使用非離子系及兩性界面活性剤。[0024]更具體地說，上述界面活性劑是Triton-XlOO(聚乙二醇p-(l，I, 3，3_四甲基丁基)-苯基醚)、Triton-X114(聚乙二醇p-(l，1，3，3-四甲基丁基)-苯基醚)、Tween20 (PEG (20)山梨醇酐單月桂酸酷)、Tween80 (PEG (20)山梨醇酐單油酸)、Nonidet卩-40(聚乙二醇辛基苯基醚)、81^_-35(聚氧乙烯(23)十二醇)、Brij-58(聚氧乙烯(20)鯨蠟基)、CHAPS (3-[(3-膽酰胺丙基)二甲氨基]-1-丙磺酸內(nèi)鹽)或CHAPSO (3-[(3-膽酰胺丙基)二甲氨基]-2_羥基-1-丙磺酸內(nèi)鹽)或它們的組合。以上述液相部分的體積為基準添加0.lvol%到2vol%左右上述界面活性剤。而且上述溶劑以TNBP(tr1-n-butylphosphate)較佳。例如，上述界面活性劑為Triton-XlOO、上述溶劑為TNBP，并且其含量各為 0.3% (v/v)及 l%(v/v)。
[0025]在本發(fā)明方法的步驟(iv)中，可以為了清除上述液相部分所含界面活性剤與溶劑而使用結(jié)合于特定成分的樹脂予以清除，還能獲取清除紅細胞(RBC)并提高了純度的萃取液。較佳地，上述步驟(iv)可以使用SDR樹脂(solvent/detergent removal resin)實行。
[0026]在本發(fā)明方法的步驟(V)中，照射紫外線可以將上述步驟(iv)所獲溶液中可能含有的病毒滅活。憑借紫外線照射將人來源病毒及模型病毒HIV、HAV、BHV、BVDV、PPV滅活而得以進ー步減少生物物質(zhì)污染。較佳地，上述紫外線的能量以1，OOOJ/m2到3，OOOJ/m2較佳。
[0027]在本發(fā)明方法的(Vi)步驟中，為了針對具有污染可能性的病毒及模型病毒HIV、HAV、BHV、BVDV、PPV的清除及滅活エ序進行效率性驗證而實行納米過濾(nano-filtration)エ序?？梢詰{借超細過濾器(納米過濾器)從潛在的病毒感染中確保胎盤萃取物的安全性。而且，可以憑借超細過濾器清除所精制的胎盤萃取物中可能含有的菌。上述納米過濾器的過濾精度以15nm到30nm較佳。上述除菌過濾器的過濾精度則以0.2 y m到0.3iim大小較佳。
[0028]本發(fā)明的再ー個目的可以憑借提供由上述方法制備的胎盤萃取物，包含由上述方法制備的胎盤萃取物及藥學(xué)上允許的載體的哺乳類更年期障礙癥狀預(yù)防或治療用藥物組合物而實現(xiàn)。上述胎盤萃取物的最終蛋白質(zhì)濃度以2pg/ml到20pg/ml較佳。[0029]上述“藥學(xué)上允許的載體”可以選自稀釋劑、拋光劑、結(jié)合劑、崩解劑、甜味劑、穩(wěn)定劑及防腐劑所組成的群。上述藥物組合物還可以包括添加剤。上述添加劑可以包括香料、維生素及抗氧化劑。上述載體只要是藥劑學(xué)上允許的即可，例如，稀釋劑可以是乳糖、玉米淀粉、大豆油、微晶纖維素或甘露醇，拋光劑可以是硬脂酸鎂或滑石(talc)，結(jié)合劑可以是聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基纖維素。而且，崩解劑可以是羧甲基纖維素鈣、羧甲基淀粉鈉、潑拉克林鉀(polacrillin potassium)或交聚維酮(crospovidone),甜味劑可以是白糖、果糖、山梨醇或阿斯巴甜(Aspartame)，穩(wěn)定劑可以是羧甲基纖維素鈉、(6-環(huán)糊精、白蠟或黃原膠，防腐劑可以是羥甲基苯甲酸、羥丙基苯甲酸或山梨酸鉀。
[0030]上述藥物組合物可以制成本【技術(shù)領(lǐng)域】所公知的一般藥劑學(xué)上的劑型，上述藥物組合物可以制成ロ服劑、針劑、坐劑、透皮制劑及透皮制劑的劑型后給藥。
[0031]例如，上述劑型可以是液劑、懸浮劑、散劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑，或提取液之類的ロ服用劑型。
[0032]為了獲得更年期障礙的改善、預(yù)防或治療效果，上述藥物組合物可以作為有效成分而以成人為準的姆日總給藥量為上述萃取物0.lg/kg到100g/kg、0.lg/kg到50g/kg或
0.lg/kg到30g/kg地給藥。上述給藥量可以根據(jù)需要治療或預(yù)防的更年期障礙的改善類型、疾病的進行程度、給藥路徑、性別、年齡、體重等因素適當?shù)卦鰷p。上述更年期障礙的改善可以是針對更年期前的障礙的改善。上述哺乳動物可以是人。
[0033]有益效果
[0034]本發(fā)明胎盤萃取物制備方法可以安全有效地制備包含胎盤組織中的生理活性成分的胎盤萃取物。可以不鈍化胎盤組織中的天然活性成分地萃取，還能完全排除潛在的病
毒污染。
[0035]本發(fā)明胎盤萃取物可以包含胎盤組織中的天然生理活性成分。
[0036]本發(fā)明的藥物組合物可以預(yù)防或治療哺乳動物的更年期癥狀。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0037] 圖1是本發(fā)明的實施例3中給藥本發(fā)明胎盤萃取物時裸鼠的子宮及陰道的重量變化。
[0038]圖2是本發(fā)明的實施例3中給藥本發(fā)明胎盤萃取物時裸鼠的總膽固醇及IP的變化。
[0039]圖3是本發(fā)明的實施例3中給藥本發(fā)明胎盤萃取物時裸鼠的子宮及皮膚的厚度變化。
[0040]圖4是本發(fā)明的實施例3中給藥本發(fā)明胎盤萃取物時裸鼠的陰道表皮的變化?！揪唧w實施方式】
[0041]下面結(jié)合下列實施例具體說明本發(fā)明。但，下列實施例只是以本發(fā)明的具體實施形態(tài)進行說明而已，不能因此將本發(fā)明的權(quán)利范圍限定于該說明中所記載的內(nèi)容或予以限制性地闡釋。
[0042]實施例1.從人胎盤組織制備胎盤萃取物
[0043]在2°C到8°C下把冷凍的人胎盤組織予以解凍。利用50L的注射用水清洗解凍后的胎盤組織5kg。憑借該清洗把暴露于胎盤組織外部的血液清除了一部分。并且從胎盤組織清除了臍帶與羊膜。接著，使用混合器細切胎盤組織。細切結(jié)果，得到了直徑為3_以下的粒子所構(gòu)成的胎盤組織。
[0044]在2°C到8°C下于其體積相當于上述經(jīng)過細切的胎盤組織體積的3倍的PBS緩沖液(水 IL 中 4g NaCU0.1g KCl、0.575g Na2HPO4 及 0.1gKH2PO4)中利用均質(zhì)器(IKA 公司)把經(jīng)過細切及清洗的胎盤組織加以粉碎后得到粉碎的胎盤組織溶液。如此得到的溶液實質(zhì)上是均相溶液。
[0045]接著，使用離心分離器(Hanil科學(xué)產(chǎn)業(yè))在12，000rpm、4°C下對上述粉碎的溶液進行離心分離20分鐘。離心分離后，回收上清液并且在2°C到8°C下保管，清除顆粒。
[0046]使用0.45 ii m過濾器(Sartorius公司)對上述上清液約12L進行預(yù)過濾而得到精制液。在預(yù)過濾后的蛋白質(zhì)混合水讓濃度成為lvol%Triton X-100及0.3vol%TNBP地添加各界面活性剤與溶剤，然后在2°C到8°C下靜置30分鐘。之后，為了清除界面活性剤與溶劑而使用SDR樹脂(Solvent-Detergent Removal Resin)實行S/D清除エ序,還實行了清除RBC并提高純度的エ序。
[0047]使用UVivatech公司的UVC設(shè)備以3000J/m2的能量讓紫外線(UV-C irradiation)通過如此得到的混合水，對于通過的溶液，為了針對具有污染可能性的病毒的清除及滅活エ序進行效率性驗證而利用納米過濾器(Pali公司)進行過濾而精制。
[0048]在上述過濾エ序后，使用0.22 Pm過濾器(Millipore公司)以清除菌為目的進行精制而得到最終胎盤萃取物。
[0049]實施例2.動物實驗結(jié)果
[0050](I)胎盤萃取物的`效能分析
[0051]本實施例摘除(Ovariectomy;0VX)母裸鼠(Mouse/CanN.Cg-Foxnl nu/Crl jOri)的卵巢誘發(fā)更年期后，反復(fù)地將胎盤來源試驗物質(zhì)予以皮下給藥，為了評估試驗物質(zhì)的更年期改善效果而實行了內(nèi)臟重量測量、血清生化分析及組織病理分析。
[0052](2)給藥胎盤萃取物
[0053]考慮到Mouse/CanN.Cg-FoxnInu/CrI jOri裸鼠免疫性降低的特性,把飼育環(huán)境制成無菌狀態(tài)并經(jīng)過檢疫及純化后個別地測量體重，選出純化期間中體重増加及一般癥狀沒有異常的健康動物后實行了組分離。各組的構(gòu)成如下列表1所示。
[0054]表1
[0055]
【權(quán)利要求】
1.ー種胎盤萃取物的制備方法，其特征在干， 其包括選自下列步驟所組成的群中的ー個以上步驟:使用界面活性剤及溶劑將病毒滅活的步驟；照射紫外線將病毒滅活的步驟；以及使用納米過濾器將病毒清除的步驟。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胎盤萃取物的制備方法，其特征在干， 上述界面活性劑選自Triton-XlOO (聚乙二醇P-(1，1,3, 3-四甲基丁基)-苯基醚)、Triton-Xl 14 (聚乙二醇 p-(1，1，3，3-四甲基丁基)-苯基醚)、Tween20 (PEG (20)山梨醇酐單月桂酸酷)、Tween80 (PEG(20)山梨醇酐單油酸)、Nonidet P-40 (聚乙二醇辛基苯基醚)、Brij-35(聚氧乙烯(23)十二醇)、Bri j_58 (聚氧乙烯(20)鯨蠟基)、CHAPS (3-[ (3-膽酰胺丙基)二甲氨基]-1-丙磺酸內(nèi)鹽)及CHAPSO (3-[(3-膽酰胺丙基)二甲氨基]-2-羥基-1-丙磺酸內(nèi)鹽)所組成的群中的至少ー個。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胎盤萃取物的制備方法，其特征在干， 上述溶劑為 TNBP(tr1-N-butyl phosphate)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胎盤萃取物的制備方法，其特征在干， 上述紫外線的能量為1，000J/m2到3，000J/m2。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胎盤萃取物的制備方法，其特征在干， 上述納米過濾器的過濾精度為15nm到30nm大小。
6.ー種胎盤萃取物的制備方法，其特征在于，包括下列步驟: (i)在水介質(zhì)里粉碎胎盤`組織后獲取胎盤溶液的步驟；(ii)把上述胎盤溶液分離成液相部分與固相部分的步驟；(iii)在上述步驟(ii)所獲取的液相部分添加界面活性剤及溶劑而將病毒滅活的步驟；(iv)從上述步驟(iii)所獲取的混合溶液中清除上述界面活性剤及上述溶劑的步驟；(V)針對上述步驟(iv)所獲取的溶液照射紫外線將病毒滅活的步驟；及(vi)使用納米過濾器及除菌過濾器對上述步驟(V)中照射了紫外線的溶液進行過濾而清除病毒與細菌的步驟。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的胎盤萃取物的制備方法，其特征在干， 上述界面活性劑選自Triton-XlOO (聚乙二醇P-(1，1,3, 3-四甲基丁基)-苯基醚)、Triton-Xl 14 (聚乙二醇 p-(1，1，3，3-四甲基丁基)-苯基醚)、Tween20 (PEG (20)山梨醇酐單月桂酸酷)、Tween80 (PEG(20)山梨醇酐單油酸)、Nonidet P-40 (聚乙二醇辛基苯基醚)、Brij-35(聚氧乙烯(23)十二醇)、Bri j_58 (聚氧乙烯(20)鯨蠟基)、CHAPS (3-[ (3-膽酰胺丙基)二甲氨基]-1-丙磺酸內(nèi)鹽)及CHAPSO (3-[(3-膽酰胺丙基)二甲氨基]-2-羥基-1-丙磺酸內(nèi)鹽)所組成的群中的至少ー個。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的胎盤萃取物的制備方法，其特征在干， 上述溶劑為 TNBP(tr1-N-butyl phosphate)。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的胎盤萃取物的制備方法，其特征在干， 上述步驟(iv)使用 SDR 樹月旨(solvent/detergent removal resin)實現(xiàn)。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的胎盤萃取物的制備方法，其特征在干， 上述紫外線的能量為1，000J/m2到3，000J/m2。
11.根據(jù)權(quán)利要求6所述的胎盤萃取物的制備方法，其特征在干， 上述納米過濾器的過濾精度為15nm到30nm大小。
12.根據(jù)權(quán)利要求6所述的胎盤萃取物的制備方法，其特征在干，上述除菌過濾器的過濾精度為0.2 i! m到0.3 i! m大小。
13.ー種胎盤萃取物，其特征在干， 利用權(quán)利要求1到權(quán)利要求12之任何一項所述的胎盤萃取物的制備方法制成。
14.ー種哺乳類更年期障礙癥狀的預(yù)防或治療用藥物組合物，其特征在干， 包含利用權(quán)利要求1到權(quán)利要求12之任何一項所述的胎盤萃取物的制備方法制成的胎盤萃取物及藥學(xué)上允許的載體。
15.根據(jù) 權(quán)利要求14所述的哺乳類更年期障礙癥狀的預(yù)防或治療用藥物組合物，其特征在干， 包含2pg/ml到20pg/ml的上述胎盤萃取物。
【文檔編號】A61K35/50GK103533944SQ201280010127
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2012年2月28日 優(yōu)先權(quán)日:2011年2月28日
【發(fā)明者】韓圭范, 俞龍善, 林美亨 申請人:查拜和迪奧思特有限責(zé)任公司