一種治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭的中藥組合物及其制備方法和用途
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭的中藥組合物及其制備方法。該中藥組合物是由下述重量份配比的原料藥制成：大黃6-40、黃芪10-95和丹參5-65，按照一定的提取純化工藝，制備成注射劑、凍干粉針或其他口服制劑。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，該中藥組合物可顯著改善慢性腎小球腎炎大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)，降低血清IL-6、IL-8和TNF-α水平；顯著降低高血壓腎病大鼠血肌酐和尿素氮等指標(biāo)；顯著減少慢性腎功能衰竭大鼠血清尿素氮、血肌酐含量，增加血清白蛋白含量；還可改善慢性腎功能衰竭大鼠血液流變學(xué)各指標(biāo)水平，病理結(jié)果表明本發(fā)明可以改善和抑制慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭對(duì)腎臟的損傷。
【專利說(shuō)明】一種治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭的中藥組合物及其制備方法和用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種中藥組合物，尤其涉及一種治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭的藥物及其制備方法。具體地說(shuō)屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]慢性腎臟病(Chronic Kidney Disease, CKD)臨床上包括慢性腎小球腎炎、腎病綜合征、膜性腎病、糖尿病腎病、高血壓腎病以及各種繼發(fā)性腎病等,具有發(fā)病率高、患發(fā)心血管病患病率高、病死率高的特點(diǎn)，另外社會(huì)對(duì)慢性腎臟病的知曉率不高，防治率低，患發(fā)心血管病的知曉率低，目前已經(jīng)成為全球公開(kāi)健康問(wèn)題。主要從兩個(gè)方面診斷是否患有CKD:(1)腎臟損傷(表現(xiàn)出腎臟結(jié)構(gòu)和功能異常)≥ 3個(gè)月，可以有或無(wú)腎小球?yàn)V過(guò)率(GRF)下降；(2)腎小球?yàn)V過(guò)率(GFR) < 60ml/min/l.73m2，時(shí)間≥3個(gè)月，有或無(wú)損傷依據(jù)。
[0003] 慢性腎臟病發(fā)展到中后期，就有可能發(fā)展成為慢性腎功能衰竭，甚至尿毒癥，從而嚴(yán)重危害患者的健康。
[0004] 國(guó)內(nèi)外早有關(guān)于大黃應(yīng)用于治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭的報(bào)道，其主要含有蒽醌和鞣酸類等多種成分，治療作用主要表現(xiàn)在:(1)明顯改善氮質(zhì)血癥。大量實(shí)驗(yàn)證明大黃可降低慢性腎功能衰竭患者血清肌酐和尿素氮；(2)活血化瘀作用，能改善腎臟病人血液的高凝、高黏狀態(tài)；(3)抑制系膜細(xì)胞及腎小管上皮細(xì)胞增生；(4)減輕腎臟受損后的代償性肥大，抑制殘余腎的高代謝狀態(tài)；(5)對(duì)自由基的清除作用，以及對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化起到平衡的作用。
[0005]中藥黃芪含有黃芪多糖、黃酮類、黃芪皂苷、大豆皂苷等多種成分，具有顯著的免疫調(diào)節(jié)活性和抗氧化作用，可有效提高腎小球?yàn)V過(guò)率，減輕腎臟病理?yè)p傷，保護(hù)和改善殘余腎單位。
[0006]現(xiàn)代研究證明丹參可調(diào)節(jié)腎組織一氧化氮合成酶活性，促進(jìn)再灌注后腎功能的恢復(fù)；對(duì)過(guò)量產(chǎn)生的一氧化氮又具有抑制作用，保護(hù)腎功能免受損害；丹參還可改善腎功能和腎間質(zhì)纖維化。
[0007]現(xiàn)有技術(shù)雖然公開(kāi)了大黃、黃芪配伍使用治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭，但它們的制備工藝多存在工序復(fù)雜，成本高，有效成分提取率偏低等問(wèn)題。經(jīng)過(guò)本發(fā)明組方與大黃、黃芪配伍組藥效學(xué)比較證實(shí)，本發(fā)明組方治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭的效果明顯優(yōu)于大黃、黃芪配伍組。因此，本發(fā)明較現(xiàn)有技術(shù)制備工藝更加得當(dāng)，不僅大大減少了能源消耗和節(jié)省了提取時(shí)間，而且應(yīng)用本發(fā)明工藝制成的中藥制劑有較高的藥物穩(wěn)定性、生物利用度和好的治療效果。另外迄今為止，本發(fā)明人尚未見(jiàn)到任何報(bào)道記載本發(fā)明所述藥物的具體原料配比關(guān)系，也未見(jiàn)有人公開(kāi)本發(fā)明所述的原料配比按照本發(fā)明制備工藝制成中藥制劑用于治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭。所以本發(fā)明是發(fā)明人創(chuàng)造性研制成功的一種治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭的中藥制劑。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明人公開(kāi)了一種治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭的中藥組方制劑，該藥物由大黃、黃芪和丹參制成，全方起到通腑降濁，健脾，活血化瘀的功效，可有效治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭。
[0009]本發(fā)明是由發(fā)明人經(jīng)過(guò)多年的實(shí)驗(yàn)研究總結(jié)確定的，是符合中醫(yī)理論新的治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭的藥物。
[0010]中醫(yī)理論認(rèn)為大黃苦寒，性重濁，主沉降，力猛善行，為瀉火攻積的要藥，又具有降逆泄?jié)?，祛瘀排毒的功能，故可用于治療慢性腎臟病及慢性腎功能衰竭，但因藥力較猛，故需減量，配以大量甘溫益氣之黃芪緩和其藥性，大量的黃芪，既可補(bǔ)脾肺之氣，又可利小便，通血脈，合用可祛邪而不傷正，又佐以丹參活血養(yǎng)血，增強(qiáng)大黃祛瘀之功，并可促進(jìn)組織修復(fù)和再生，改善血液循環(huán)，可以改善貫穿疾病始終的瘀血癥狀。三味藥物合用，相得益彰，標(biāo)本兼治，可有效治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭。
[0011]經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，結(jié)果表明本發(fā)明用于治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭療效確切、可有效降低血肌酐、尿素氮，改善血流變指標(biāo)。[0012]本發(fā)明是由下述重量份配比的原料藥制成:大黃、黃苗、丹參=6-40:10-95:5-65。
[0013]本發(fā)明優(yōu)選下述重量份配比的原料藥制成:大黃、黃芪、丹參=12-30:20-85:15-55 。
[0014]本發(fā)明更優(yōu)選由下述重量份配比的原料藥制成:大黃、黃芪、丹參=15-20:40-70:30-50 。
[0015]本發(fā)明還優(yōu)選由下述重量份配比的原料藥制成:大黃、黃苗、丹參=20:70:50。
[0016]本發(fā)明還優(yōu)選由下述重量份配比的原料藥制成:大黃、黃苗、丹參=20:20:60。
[0017]本發(fā)明還優(yōu)選由下述重量份配比的原料藥制成:大黃、黃芪、丹參=24:18:12。
[0018]本發(fā)明還優(yōu)選由下述重量份配比的原料藥制成:大黃、黃苗、丹參=40:40:40。
[0019]本發(fā)明還優(yōu)選由下述重量份配比的原料藥制成:大黃、黃苗、丹參=40:80:60。
[0020]本發(fā)明還優(yōu)選由下述重量份配比的原料藥制成:大黃、黃苗、丹參=25:75:25。
[0021]本發(fā)明還優(yōu)選由下述重量份配比的原料藥制成:大黃、黃苗、丹參=20:60:40。
[0022]以上重量份配比是以生藥計(jì)算的，如優(yōu)選的重量份配比大黃:黃芪:丹參=600份:2100份:1500份，其中份表示重量份，每份若以克為單位，以上組成可制成藥物制劑1000劑，所述1000劑是指制成的成品藥物制劑，如制成注射劑1000毫升，膠囊劑1000粒，片劑1000片，顆粒劑1000克，滴丸1000丸，口服液1000ml等。以上重量配比的比例是經(jīng)過(guò)科學(xué)篩選得到的，對(duì)于不同病情，不同體質(zhì)的病人，可以相應(yīng)調(diào)整組成量的配比。
[0023]本發(fā)明的目的在于提供一種治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭的中藥組合物。
[0024]本發(fā)明可以制成任何臨床常用制劑，包括注射劑、膠囊劑、片劑、顆粒劑、滴丸、口服液等劑型。為了更好的發(fā)揮各原料藥的藥效，本發(fā)明技術(shù)方案中優(yōu)選的制備方法如下:
(O取大黃、丹參粉碎成粗顆粒，加5-10倍量水浸泡10-30分鐘，第一次加熱超聲提取10-30分鐘，過(guò)濾；第二次加熱超聲提取10-20分鐘，過(guò)濾，合并兩次水提液，減壓濃縮至相對(duì)密度在60°C時(shí)1.19-1.21，加入2%-5%明膠溶液去除鞣質(zhì)，過(guò)濾，加入乙醇使含醇量為75%-80%，靜置，過(guò)濾，取濾液減壓濃縮至相對(duì)密度在60°C時(shí)1.19-1.21，回收乙醇，繼續(xù)加入乙醇使含醇量為80%-85%，靜置，過(guò)濾，回收乙醇，加入注射用水至藥液的2-4倍量，然后加入0.2%-0.7%的活性炭，煮沸20-40min，過(guò)濾，調(diào)pH值6.7-8.2，得到大黃、丹參提取液，備用;
(2)取黃芪切成薄片，加入5-10倍量水，第一次加熱超聲提取10-20分鐘，過(guò)濾；第二次加熱超聲提取5-15分鐘，過(guò)濾，合并兩次水提液，加入注射用水，然后加入0.2%-0.7%的活性炭，煮沸20-40min，過(guò)濾，調(diào)pH值6.7-8.2，得到黃芪提取液，備用；
將上述得到大黃和丹參提取液以及黃芪提取液合并，超濾，調(diào)PH值6.7-8.2，藥液經(jīng)裝有微孔濾膜的過(guò)濾器過(guò)濾后灌封，經(jīng)滅菌，制成小容量注射劑、大輸液，或再經(jīng)過(guò)冷凍干燥，制成凍干粉針制劑。
[0025]本發(fā)明技術(shù)方案中更優(yōu)選的制備方法如下:
(O取大黃、丹參粉碎成粗顆粒，加8倍量水浸泡20分鐘，第一次加熱超聲提取20分鐘，過(guò)濾；第二次加熱超聲提取10分鐘，過(guò)濾，合并兩次水提液，減壓濃縮至相對(duì)密度在60°C時(shí)1.21，加入5%明膠溶液去除鞣質(zhì)，過(guò)濾，加入乙醇使含醇量為75%，靜置，過(guò)濾，取濾液減壓濃縮至相對(duì)密度在60°C時(shí)1.21，回收乙醇，繼續(xù)加入乙醇使含醇量為80%，靜置，過(guò)濾，回收乙醇，加入注射用水至藥液的2-3倍量，然后加入0.3%-0.5%的活性炭，煮沸30min，過(guò)濾，調(diào)PH值7.4-7.7，得到大黃、丹參提取液，備用；
(2)取黃芪切成薄片，加入7倍量水，第一次加熱超聲提取15分鐘，過(guò)濾；第二次加熱超聲提取10分鐘，過(guò)濾，合并兩次水提液，加入注射用水，然后加入0.3%-0.5%的活性炭，煮沸30min，過(guò)濾，調(diào)pH值7.4-7.7，得到黃芪提取液，備用；
將上述得到大黃和丹參提取液以及黃芪提取液合并，超濾，調(diào)PH值7.4-7.7，藥液經(jīng)裝有微孔濾膜的過(guò)濾器過(guò)濾后灌封，經(jīng)滅菌，制成小容量注射劑、大輸液，或再經(jīng)過(guò)冷凍干燥，制成凍干粉針制劑。
[0026]本發(fā)明技術(shù)方案中還優(yōu)選的制備方法如下:
(1)取大黃、丹參粉碎成粗顆粒，加5-10倍量水，煎煮，合并提取液，過(guò)濾，收集濾液，濃縮，進(jìn)入大孔樹(shù)脂柱進(jìn)行吸附分離，收集首次流出液；先用水洗脫，收集洗脫液，然后用40%-70%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇至無(wú)醇味，合并流出液，減壓濃縮至相對(duì)密度在60°C時(shí)1.19-1.21，加入2%-5%明膠溶液去除鞣質(zhì)，過(guò)濾，加入乙醇使含醇量為70%_80%，靜置，過(guò)濾，取濾液減壓濃縮至相對(duì)密度在60°C時(shí)1.19-1.21，回收乙醇，繼續(xù)加入乙醇使含醇量為75%-85%，靜置，過(guò)濾，回收乙醇，加入注射用水至藥液的2-4倍量，然后加入
0.2%-0.7%的活性炭，煮沸20-40min，過(guò)濾，調(diào)pH值6.7-8.2，得到大黃、丹參提取液，備用；
(2)取黃芪切成薄片，加8-12倍水，煎煮，合并提取液，過(guò)濾，收集濾液，濃縮，進(jìn)入大孔樹(shù)脂柱進(jìn)行吸附分離，收集首次流出液；然后用60%-80%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇至無(wú)醇味，合并流出液，加入注射用水，然后加入0.2%-0.7%的活性炭，煮沸20-40min，過(guò)濾，調(diào)PH值6.7-8.2，得到黃芪提取液，備用；
將上述得到大黃和丹參提取液以及黃芪提取液合并，超濾，調(diào)PH值6.7-8.2，藥液經(jīng)裝有微孔濾膜的過(guò)濾器過(guò)濾后灌封，經(jīng)滅菌，制成小容量注射劑、大輸液，或再經(jīng)過(guò)冷凍干燥，制成凍干粉針制劑。
[0027]本發(fā)明技術(shù)方案中更優(yōu)選的制備方法如下:
(O取大黃、丹參粉碎成粗顆粒，加8倍量水煎煮，合并提取液，過(guò)濾，收集濾液,濃縮，進(jìn)入大孔樹(shù)脂柱進(jìn)行吸附分離，收集首次流出液；先用水洗脫，收集洗脫液，然后用50%-60%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇至無(wú)醇味，合并流出液，減壓濃縮至相對(duì)密度在60°C時(shí)1.21，加入5%明膠溶液去除鞣質(zhì)，過(guò)濾，加入乙醇使含醇量為75%，靜置，過(guò)濾，取濾液減壓濃縮至相對(duì)密度在60°C時(shí)1.21，回收乙醇，繼續(xù)加入乙醇使含醇量為80%，靜置，過(guò)濾，回收乙醇，加入注射用水至藥液的2-3倍量，然后加入0.3%-0.5%的活性炭，煮沸30min,過(guò)濾，調(diào)pH值7.4-7.7，得到大黃、丹參提取液，備用；
(2)取黃芪切成薄片，加入10倍量水，煎煮3次，合并提取液，過(guò)濾，收集濾液，濃縮，進(jìn)入大孔樹(shù)脂柱進(jìn)行吸附分離，收集首次流出液；然后用70%-75%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇至無(wú)醇味，合并流出液，加入注射用水，然后加入0.3%-0.5%的活性炭，煮沸30min,過(guò)濾，調(diào)pH值7.4-7.7，得到黃芪提取液，備用；
將上述得到大黃和丹參提取液以及黃芪提取液合并，超濾，調(diào)PH值7.4-7.7，藥液經(jīng)裝有微孔濾膜的過(guò)濾器過(guò)濾后灌封，經(jīng)滅菌，制成小容量注射劑、大輸液，或再經(jīng)過(guò)冷凍干燥，制成凍干粉針制劑。
[0028]本發(fā)明技術(shù)方案中還優(yōu)選的制備方法如下:
(1)取大黃和丹參粉碎成細(xì)顆粒置于萃取釜中進(jìn)行CO2超臨界萃取，進(jìn)入萃取釜的超臨界流體的流速為20-50L/h，萃取壓力為10-60MPa，萃取溫度為35_60°C，萃取時(shí)間為1.5-3h，從萃取釜流出的大黃和丹參高壓流體，進(jìn)入分離釜進(jìn)行分離，分離壓力I為8 Mpa,分離溫度I為30°C;分離壓力II為6 Mpa,分離溫度II為25V，收集大黃和丹參的萃取物，加入注射用水至藥液的2-3倍量，然后加入0.2%-0.7%的活性炭，煮沸20-40min，過(guò)濾，調(diào)pH值6.7-8.2，得到大黃和丹參提取液，備用；
(2)取黃芪粉碎成細(xì)顆粒，和85%-95%的乙醇混合，置于萃取釜中進(jìn)行CO2超臨界萃取，進(jìn)入萃取釜的超臨界流體的流速為20-40L/h，萃取壓力為10-30MPa，萃取溫度為35_45°C，萃取時(shí)間為1.5-2.5h，從萃取釜流出的黃芪高壓流體，進(jìn)入分離釜進(jìn)行分離，分離壓力I為6Mpa，分離溫度I為30°C ;分離壓力II為4Mpa，分離溫度II為25°C，收集黃芪的萃取物，加入注射用水至藥液的2-3倍量，然后加入0.2%-0.7%的活性炭，煮沸20-40min，過(guò)濾，調(diào)pH值6.7-8.2，得到黃芪提取液，備用；
將上述得到大黃和丹參提取液以及黃芪提取液合并，超濾，調(diào)PH值6.7-8.2，藥液經(jīng)裝有微孔濾膜的過(guò)濾器過(guò)濾后灌封，經(jīng)滅菌，制成小容量注射劑、大輸液，或再經(jīng)過(guò)冷凍干燥，制成凍干粉針制劑。
[0029]本發(fā)明技術(shù)方案中更優(yōu)選的制備方法如下:
(1)取大黃和丹參粉碎成細(xì)顆粒置于萃取釜中進(jìn)行CO2超臨界萃取，進(jìn)入萃取釜的超臨界流體的流速為35L/h，萃取壓力為30MPa，萃取溫度為45°C，萃取時(shí)間為2.5h，從萃取釜流出的大黃和丹參高壓流體，進(jìn)入分離釜進(jìn)行分離，分離壓力I為8 Mpa，分離溫度I為30°C;分離壓力II為6 Mpa，分離溫度II為25°C，收集大黃和丹參的萃取物，加入注射用水至藥液的2-3倍量，然后加入0.3%-0.5%的活性炭，煮沸30min，過(guò)濾，調(diào)pH值7.4-7.7，得到大黃和丹參提取液，備用；
(2)取黃芪粉碎成細(xì)顆粒，和80%的乙醇混合，置于萃取釜中進(jìn)行CO2超臨界萃取，進(jìn)入萃取釜的超臨界流體的流速為30L/h，萃取壓力為20MPa，萃取溫度為30°C，萃取時(shí)間為2h，從萃取釜流出的黃芪高壓流體，進(jìn)入分離釜進(jìn)行分離，分離壓力I為6Mpa，分離溫度I為30°C ;分離壓力II為4Mpa，分離溫度II為25°C，收集黃芪的萃取物，加入注射用水至藥液的2-3倍量，然后加入0.3%-0.5%的活性炭，煮沸30min，過(guò)濾，調(diào)pH值7.4-7.7，得到黃芪的提取液，備用；
將上述得到大黃和丹參提取液以及黃芪提取液合并，超濾，調(diào)PH值7.4-7.7，藥液經(jīng)裝有微孔濾膜的過(guò)濾器過(guò)濾后灌封，經(jīng)滅菌，制成小容量注射劑、大輸液，或再經(jīng)過(guò)冷凍干燥，制成凍干粉針制劑。
[0030]本發(fā)明還可按常規(guī)方法制備成口服制劑，包括片劑、顆粒劑或膠囊劑等。
[0031](1)取大黃、丹參粗顆粒，經(jīng)過(guò)兩次超聲處理和兩次乙醇沉淀后，過(guò)濾，濃縮成浸膏，干燥，備用；取黃芪切片，經(jīng)兩次超聲處理后，合并提取液，濃縮成浸膏，干燥。合并浸膏，加入適當(dāng)?shù)妮o料，常規(guī)方法制成片劑、顆粒劑、膠囊劑等。
[0032](2)取大黃、丹參和黃芪粉碎成粗顆粒，經(jīng)過(guò)煎煮后，加入大孔樹(shù)脂中吸附分離，收集流出液，現(xiàn)用水洗脫，再用乙醇梯度洗脫，收集洗脫液，合并流出液和洗脫液，適當(dāng)濃縮，加入適當(dāng)?shù)妮o料，常規(guī)方法制成片劑、顆粒劑、膠囊劑等。
[0033](3)取大黃、丹參和黃芪細(xì)顆粒置于萃取釜中進(jìn)行CO2超臨界萃取，得到的萃取液適當(dāng)濃縮，加入適當(dāng)?shù)妮o料，常規(guī)方法制成片劑、顆粒劑、膠囊劑等。
[0034]本發(fā)明技術(shù)方案具有創(chuàng)造性的有益效果有:
一、組方藥物的提取工藝
本發(fā)明組方由大黃、黃芪和丹參組成，其組方精簡(jiǎn)得當(dāng)，用于治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭作用顯著。在確定制備工藝過(guò)程中，發(fā)明人綜合考慮了藥材物理性質(zhì)、有效成分特性和生產(chǎn)成本等諸多要素，具體的改進(jìn)有:
1)將大黃、丹參和黃芪進(jìn)行超聲提取，保證有效成分的提取率明顯高于常規(guī)的水煎煮提取方法，因?yàn)槌曁崛∈峭ㄟ^(guò)超聲波的空化作用、機(jī)械作用和熱作用，這些獨(dú)特的作用特點(diǎn)可促使藥材細(xì)胞組織破裂或變形，從而加速有效成分的釋放和溶出，提取的更充分，并可大大縮短提取時(shí)間和降低能耗、保護(hù)環(huán)境，有利于產(chǎn)品產(chǎn)業(yè)化和推廣使用。
[0035](2)大黃、丹參和黃芪采用水提后，進(jìn)入大孔樹(shù)脂柱分離純化，較之普通的水提醇沉工藝能更好的分離有效成分。并可增加產(chǎn)品的穩(wěn)定性，縮減了生產(chǎn)周期。
[0036](3)大黃、丹參和黃芪采用CO2超臨界萃取，操作簡(jiǎn)便，且可以大大減少有機(jī)溶劑的使用，節(jié)省資源。
[0037]二、本發(fā)明用于治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭的效果
為證實(shí)本發(fā)明的創(chuàng)造性，發(fā)明人將本發(fā)明組方制劑對(duì)慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭的治療作用，與已授權(quán)發(fā)明專利96117626.1的腎康注射液和按照本發(fā)明提取純化工藝制成的大黃、黃芪注射液進(jìn)行比較，在進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)研究中，以相同的給藥劑量觀察比較各組藥物對(duì)慢性腎小球腎炎、高血壓腎病和慢性腎功能衰竭大鼠的治療效果，以闡明本發(fā)明產(chǎn)品的顯著療效，說(shuō)明本發(fā)明有顯著的有益技術(shù)效果。本發(fā)明對(duì)慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭大鼠的治療作用實(shí)驗(yàn)資料如下:
實(shí)驗(yàn)例I本發(fā)明對(duì)慢性腎小球腎炎大鼠的治療作用
1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠70只，雌雄各半，體重160-200g，購(gòu)自第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。新西蘭白兔6只，購(gòu)自西安市迪樂(lè)普生物資源開(kāi)發(fā)有限公司。
[0038]2.實(shí)驗(yàn)藥物本發(fā)明藥物注射液、腎康注射液和大黃、黃芪組注射液，其中本發(fā)明和大黃、黃芪組注射液每毫升均相當(dāng)于原生藥4.2g，以上藥物均由西安世紀(jì)盛康藥業(yè)有限公司提供。
[0039]3.實(shí)驗(yàn)方法
(I)制備兔抗大鼠胸腺細(xì)胞血清取無(wú)菌的SD大鼠，處死，小心摘取大鼠胸腺和肝臟。將肝臟用PBS緩沖液沖洗干凈后制成肝粉待用；另將胸腺置于PBS緩沖液中，沖洗2-3次，小心分離、去除其表面的淋巴結(jié)和血管，置200目不銹鋼網(wǎng)篩上，用解剖針輕輕劃破胸腺游離出胸腺細(xì)胞，用PBS緩沖液沖洗，收集胸腺細(xì)胞懸液，離心10min，用PBS緩沖液重制2 X IO7/ ml的胸腺細(xì)胞懸液，按體積比1:2混合胸腺細(xì)胞懸液和弗氏完全佐劑，充分混勻，以混合后的懸液作為大鼠胸腺細(xì)胞免疫抗原液。將大鼠胸腺細(xì)胞免疫抗原液多點(diǎn)注射于6只新西蘭白兔背部皮下，每只兔子注射3ml。常規(guī)飼養(yǎng)2周后，兔耳緣靜脈注射2X IO7/ ml的胸腺細(xì)胞懸液，每只注射1.5 ml。7d后心臟抽取兔子血液，收集兔血清。用免疫擴(kuò)散法測(cè)抗兔抗大鼠胸腺細(xì)胞血清效價(jià)為1:160-1:320。兔抗大鼠胸腺細(xì)胞血清于56°C、30 min滅活后，分別用同個(gè)體大鼠肝粉吸附以去除非特異性抗體，室溫離心30min,棄去肝粉，收集兔抗大鼠胸腺細(xì)胞血清，_20°C保存?zhèn)溆谩?br> [0040](2)慢性腎小球腎炎大鼠模型的制備取健康SD大鼠60只，適應(yīng)性喂養(yǎng)3天后，收集尿液，檢測(cè)尿蛋白，結(jié)果均為陰性。隨即分為正常對(duì)照組、模型組、本發(fā)明組、腎康注射液組、大黃和黃芪組，每組12只。除給予正常對(duì)照組大鼠尾靜脈注射2ml生理鹽水外，其余組大鼠一次性尾靜脈注射兔抗大鼠胸腺細(xì)胞血清2ml。
[0041](3)給藥方法及指標(biāo)測(cè)定注射兔抗大鼠胸腺細(xì)胞血清6天后，本發(fā)明組、腎康注射液組和大黃、黃芪組大鼠尾靜脈注射相應(yīng)中藥組合物8g生藥/kg，正常對(duì)照組和模型組給予等體積生理鹽水，每天給藥一次，連續(xù)給藥2周。末次給藥24小時(shí)后，腹主動(dòng)脈取血，分別測(cè)定血流變和分離血清測(cè)定IL-6、IL-8和TNF-α水平，解剖腎臟，進(jìn)行病理學(xué)考察。
[0042]4.結(jié)果
(I)本發(fā)明對(duì)慢性腎小球腎炎大鼠血液流變學(xué)的影響 表1本發(fā)明對(duì)慢性腎小球腎炎大鼠血液流變學(xué)的影響(i+i)
【權(quán)利要求】
1.一種治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭的中藥組合物，其特征在于它是由下述重量份配比的原料藥制成:大黃、黃芪、丹參=6-40:10-95:5-65。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭的中藥組合物，其特征在于各原料藥的重量配比為:大黃、黃芪、丹參=12-30:20-85:15-55。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭的中藥組合物，其特征在于各原料藥的重量配比為:大黃、黃芪、丹參=15-20:40-70:30-50。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭的中藥組合物，其特征在于各原料藥的重量配比為:大黃、黃芪、丹參=20:70:50。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭的中藥組合物，其特征在于各原料藥的重量配比為:大黃、黃芪、丹參=20:20:60。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭的中藥組合物，其特征在于各原料藥的重量配比為:大黃、黃芪、丹參=24:18:12。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭的中藥組合物，其特征在于各原料藥的重量配比為:大黃、黃芪、丹參=40:40:40。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭的中藥組合物，其特征在于各原料藥的重量配比為:大黃、黃芪、丹參=40:80:60。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭的中藥組合物，其特征在于各原料藥的重量配比為:大黃、黃芪、丹參=25:75:25。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭的中藥組合物，其特征在于各原料藥的重量配比為:大黃、黃芪、丹參=20:60:40。
11.權(quán)利要求ι-?ο任一所述治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭的中藥組合物的制備方法，其特征在于:(I)取大黃、丹參粉碎成粗顆粒，加5-10倍量水浸泡10-30分鐘，第一次加熱超聲提取10-30分鐘，過(guò)濾；第二次加熱超聲提取10-20分鐘，過(guò)濾，合并兩次水提液，減壓濃縮至相對(duì)密度在60°C時(shí)1.19-1.21，加入2%-5%明膠溶液去除鞣質(zhì)，過(guò)濾，加入乙醇使含醇量為75%-80%，靜置，過(guò)濾，取濾液減壓濃縮至相對(duì)密度在60°C時(shí)1.19-1.21，回收乙醇，繼續(xù)加入乙醇使含醇量為80%-85%，靜置，過(guò)濾，回收乙醇，加入注射用水至藥液的2-4倍量，然后加入0.2%-0.7%的活性炭，煮沸20-40min，過(guò)濾，調(diào)pH值6.7-8.2，得到大黃、丹參提取液，備用； (2)取黃芪切成薄片，加入5-10倍量水，第一次加熱超聲提取10-20分鐘，過(guò)濾；第二次加熱超聲提取5-15分鐘，過(guò)濾，合并兩次水提液，加入注射用水，然后加入0.2%-0.7%的活性炭，煮沸20-40min，過(guò)濾，調(diào)pH值6.7-8.2，得到黃芪提取液，備用； 將上述得到大黃和丹參提取液以及黃芪提取液合并，超濾，調(diào)PH值6.7-8.2，藥液經(jīng)裝有微孔濾膜的過(guò)濾器過(guò)濾后灌封，經(jīng)滅菌，制成小容量注射劑、大輸液，或再經(jīng)過(guò)冷凍干燥，制成凍干粉針制劑。
12.權(quán)利要求1-10任一所述治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭的中藥組合物的制備方法，其特征在于:(I)取大黃、丹參粉碎成粗顆粒，加8倍量水浸泡20分鐘，第一次加熱超聲提取20分鐘，過(guò)濾；第二次加熱超聲提取10分鐘，過(guò)濾，合并兩次水提液，減壓濃縮至相對(duì)密度在60°C時(shí)1.21，加入5%明膠溶液去除鞣質(zhì)，過(guò)濾，加入乙醇使含醇量為75%，靜置，過(guò)濾，取濾液減壓濃縮至相對(duì)密度在60°C時(shí)1.21，回收乙醇，繼續(xù)加入乙醇使含醇量為80%，靜置，過(guò)濾，回收乙醇，加入注射用水至藥液的2-3倍量，然后加入0.3%-0.5%的活性炭，煮沸30min，過(guò)濾，調(diào)pH值7.4-7.7，得到大黃、丹參提取液，備用； (2)取黃芪切成薄片，加入7倍量水，第一次加熱超聲提取15分鐘，過(guò)濾；第二次加熱超聲提取10分鐘，過(guò)濾，合并兩次水提液，加入注射用水，然后加入0.3%-0.5%的活性炭，煮沸30min，過(guò)濾，調(diào)pH值7.4-7.7，得到黃芪提取液，備用； 將上述得到大黃和丹參提取液以及黃芪提取液合并，超濾，調(diào)PH值7.4-7.7，藥液經(jīng)裝有微孔濾膜的過(guò)濾器過(guò)濾后灌封，經(jīng)滅菌，制成小容量注射劑、大輸液，或再經(jīng)過(guò)冷凍干燥，制成凍干粉針制劑。
13.權(quán)利要求1-10任一所述治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭的中藥組合物的制備方法，其特征在于:(1)取大黃、丹參粉碎成粗顆粒，加5-10倍量水，煎煮，合并提取液，過(guò)濾，合并濾液，濃縮，進(jìn)入大孔樹(shù)脂柱進(jìn)行吸附分離，收集首次流出液；先用水洗脫，收集洗脫液，然后用40%-70%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇至無(wú)醇味，合并流出液，減壓濃縮至相對(duì)密度在60°C時(shí)1.19-1.21，加入2%-5%明膠溶液去除鞣質(zhì)，過(guò)濾，加入乙醇使含醇量為70%-80%，靜置，過(guò)濾，取濾液減壓濃縮至相對(duì)密度在60°C時(shí)1.19-1.21，回收乙醇，繼續(xù)加入乙醇使含醇量為75%-85%，靜置，過(guò)濾，回收乙醇，加入注射用水至藥液的2-4倍量，然后加入0.2%-0.7%的活性炭，煮沸20-40min，過(guò)濾，調(diào)pH值6.7-8.2，得到大黃、丹參提取液，備用； (2)取黃芪切成薄片，加8-12倍水，煎煮，合并提取液，過(guò)濾，收集濾液，濃縮，進(jìn)入大孔樹(shù)脂柱進(jìn)行吸附分離，收集首次流出液；然后用60%-80%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇至無(wú)醇味，合并流出液，加入注射用水，然后加入0.2%-0.7%的活性炭，煮沸20-40min，過(guò)濾，調(diào)PH值6.7-8.2，得到黃芪提取液，備用； 將上述得到大黃和丹參提取液以及黃芪提取液合并，超濾，調(diào)PH值6.7-8.2，藥液經(jīng)裝有微孔濾膜的過(guò)濾器過(guò)濾后灌封，經(jīng)滅菌，制成小容量注射劑、大輸液，或再經(jīng)過(guò)冷凍干燥，制成凍干粉針制劑。
14.權(quán)利要求1-10任一所述治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭的中藥組合物的制備方法，其特征在于:(1)取大黃、丹參粉碎成粗顆粒，加8倍量水煎煮，合并提取液，過(guò)濾，收集濾液，濃縮，進(jìn)入大孔樹(shù)脂柱進(jìn)行吸附分離，收集首次流出液；先用水洗脫，收集洗脫液，然后用50%-60%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇至無(wú)醇味，合并流出液，減壓濃縮至相對(duì)密度在60°C時(shí)1.21，加入5%明膠溶液去除鞣質(zhì)，過(guò)濾，加入乙醇使含醇量為75%，靜置，過(guò)濾，取濾液減壓濃縮至相對(duì)密度在60°C時(shí)1.21，回收乙醇，繼續(xù)加入乙醇使含醇量為80%，靜置，過(guò)濾，回收乙醇，加入注射用水至藥液的2-3倍量，然后加入0.3%-0.5%的活性炭，煮沸30min，過(guò)濾，調(diào)pH值7.4-7.7，得到大黃、丹參提取液，備用； (2)取黃芪切成薄片，加入10倍量水，煎煮3次，合并提取液，過(guò)濾，合并濾液，濃縮，進(jìn)入大孔樹(shù)脂柱進(jìn)行吸附分離，收集首次流出液；然后用70%-75%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇至無(wú)醇味，合并流出液，加入注射用水，然后加入0.3%-0.5%的活性炭，煮沸30min,過(guò)濾，調(diào)pH值7.4-7.7，得到黃芪提取液，備用； 將上述得到大黃和丹參提取液以及黃芪提取液合并，超濾，調(diào)PH值7.4-7.7，藥液經(jīng)裝有微孔濾膜的過(guò)濾器過(guò)濾后灌封，經(jīng)滅菌，制成小容量注射劑、大輸液，或再經(jīng)過(guò)冷凍干燥，制成凍干粉針制劑。
15.權(quán)利要求1-10任一所述治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭的中藥組合物的制備方法，其特征在于:(I)取大黃和丹參粉碎成細(xì)顆粒置于萃取釜中進(jìn)行CO2超臨界萃取，進(jìn)入萃取釜的超臨界流體的流速為20-50L/h，萃取壓力為10-60MPa，萃取溫度為35_60°C，萃取時(shí)間為1.5-3h，從萃取釜流出的大黃和丹參高壓流體，進(jìn)入分離釜進(jìn)行分離，分離壓力I為8 Mpa,分離溫度I為30°C;分離壓力II為6 Mpa,分離溫度II為25°C，收集大黃和丹參的萃取物，加入注射用水至藥液的2-3倍量，然后加入0.2%-0.7%的活性炭，煮沸20-40min，過(guò)濾，調(diào)PH值6.7-8.2，得到大黃和丹參提取液，備用； (2)取黃芪粉碎成細(xì)顆粒，和85%-95%的乙醇混合，置于萃取釜中進(jìn)行CO2超臨界萃取，進(jìn)入萃取釜的超臨界流體的流速為20-40L/h，萃取壓力為10-30MPa，萃取溫度為35_45°C，萃取時(shí)間為1.5-2.5h，從萃取釜流出的黃芪高壓流體，進(jìn)入分離釜進(jìn)行分離，分離壓力I為6Mpa，分離溫度I為30°C ;分離壓力II為4Mpa，分離溫度II為25°C，收集黃芪的萃取物，加入注射用水至藥液的2-3倍量，然后加入0.2%-0.7%的活性炭，煮沸20-40min，過(guò)濾，調(diào)pH值6.7-8.2，得到黃芪提取液，備用； 將上述得到大黃和丹參提取液以及黃芪提取液合并，超濾，調(diào)PH值6.7-8.2，藥液經(jīng)裝有微孔濾膜的過(guò)濾器過(guò)濾后灌封，經(jīng)滅菌，制成小容量注射劑、大輸液，或再經(jīng)過(guò)冷凍干燥，制成凍干粉針制劑。
16.權(quán)利要求1-10任一所述治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭的中藥組合物的制備方法，其特征在于:(I)取大黃和丹參粉碎成細(xì)顆粒置于萃取釜中進(jìn)行CO2超臨界萃取，進(jìn)入萃取釜的超臨界流體的流速為35L/h，萃取壓力為30MPa，萃取溫度為45°C，萃取時(shí)間為2.5h，從萃取釜流出的大黃和丹參高壓流體，進(jìn)入分離釜進(jìn)行分離，分離壓力I為8 Mpa，分離溫度I為30°C ;分離壓力II為6 Mpa，分離溫度II為25°C，收集大黃和丹參的萃取物，加入注射用水至藥液的2-3倍 量，然后加入0.3%-0.5%的活性炭，煮沸30min，過(guò)濾，調(diào)pH值7.4-7.7，得到大黃和丹參提取液，備用； (2)取黃芪粉碎成細(xì)顆粒，和80%的乙醇混合，置于萃取釜中進(jìn)行CO2超臨界萃取，進(jìn)入萃取釜的超臨界流體的流速為30L/h，萃取壓力為20MPa，萃取溫度為30°C，萃取時(shí)間為2h，從萃取釜流出的黃芪高壓流體，進(jìn)入分離釜進(jìn)行分離，分離壓力I為6Mpa，分離溫度I為30°C ;分離壓力II為4Mpa，分離溫度II為25°C，收集黃芪的萃取物，加入注射用水至藥液的2-3倍量，然后加入0.3%-0.5%的活性炭，煮沸30min，過(guò)濾，調(diào)pH值7.4-7.7，得到黃芪的提取液，備用； 將上述得到大黃和丹參提取液以及黃芪提取液合并，超濾，調(diào)PH值7.4-7.7，藥液經(jīng)裝有微孔濾膜的過(guò)濾器過(guò)濾后灌封，經(jīng)滅菌，制成小容量注射劑、大輸液，或再經(jīng)過(guò)冷凍干燥，制成凍干粉針制劑。
17.根據(jù)權(quán)利要求1-10任一所述的治療慢性腎臟病和慢性腎功能衰竭中藥組合物的制備方法，其特征在于按常規(guī)制劑方法制成臨床常用的所有劑型。
18.權(quán)利要求1所述的中藥組合物在制備治療慢性腎臟病及繼發(fā)性腎病的藥物中的應(yīng)用。
19.權(quán)利要求1所述的中藥組合物在制備治療慢性腎功能衰竭的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P13/12GK103893284SQ201210579888
【公開(kāi)日】2014年7月2日 申請(qǐng)日期:2012年12月28日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月28日
【發(fā)明者】曹鳳君, 呂延英, 詹芳, 王光建, 趙興, 王俊平 申請(qǐng)人:西安世紀(jì)盛康藥業(yè)有限公司