專利名稱：Aparpar多肽修飾的隱形脂質(zhì)體及遞藥系統(tǒng)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬藥物制劑領(lǐng)域，具體涉及一種APARPAR多肽修飾的隱形脂質(zhì)體及遞藥系統(tǒng)。
背景技術(shù)：
原發(fā)性腦瘤已成為癌癥的十大死因之一，每100000人中就有5到10人患惡性腦膠質(zhì)瘤。根據(jù)WHO對膠質(zhì)瘤的分級系統(tǒng)，4級膠質(zhì)瘤的診斷最困難，患者的平均存活時(shí)間僅為12個(gè)月。從總體看，幾乎沒有病人存活能超過3年。侵入性腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞能夠快速地浸潤和破壞正常腦組織結(jié)構(gòu)，因而難以通過手術(shù)完全切除腫瘤。即使使用手術(shù)切除、放療和化療聯(lián)合治療，惡性腦膠質(zhì)瘤病人的平均生存時(shí)間也不超過一年。化療方法失敗的主要原因是抗癌藥通過靜脈給藥后對腫瘤組織無選擇性，導(dǎo)致嚴(yán)重的毒副作用。即使是目前研究廣泛的主動靶向納米遞藥系統(tǒng)，也存在對腫瘤組織滲透能力差的缺點(diǎn)，使其對神經(jīng)膠質(zhì)瘤的治療效果不佳。神經(jīng)氈蛋自-1(NRP-1)是細(xì)胞表面的一種I型跨膜糖蛋白，通常表達(dá)在一些腫瘤細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞表面，是血管內(nèi)皮生長因子165(VEGF165)的受體，在腫瘤轉(zhuǎn)移、血管新生、調(diào)節(jié)血管通透性等方面發(fā)揮重要功能。研究表明，NRP-1在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞表面高表達(dá)，但在相應(yīng)的正常組織上皮細(xì)胞中沒有表達(dá)。APARPAR多肽是通過噬菌體展示技術(shù)篩選得到的一個(gè)直鏈七肽，是NRP-1的配體，它對NRP-1高表達(dá)的腫瘤細(xì)胞和腫瘤血管表現(xiàn)出特異親和性。APARPAR多肽屬于“腫瘤穿透肽”，具有腫瘤血管穿透性和腫瘤組織穿透性，這類多肽可以介導(dǎo)與其共價(jià)連接的藥物分子或納米遞藥系統(tǒng)穿透腫瘤血管壁并滲透進(jìn)入腫瘤內(nèi)部，分布到整個(gè)腫瘤組織 中，與目前常見的主動靶向分子相比具有明顯的優(yōu)越性。目前尚未見利用APARPAR多肽介導(dǎo)納米遞藥系統(tǒng)用于腫瘤靶向治療的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種APARPAR多肽修飾的隱形脂質(zhì)體及遞藥系統(tǒng)。本發(fā)明的遞藥系統(tǒng)可通過靜脈注射給藥，通過腫瘤EPR效應(yīng)和APARPAR介導(dǎo)作用將其靶向至腫瘤部位，并可穿透腫瘤血管壁，滲透進(jìn)入整個(gè)腫瘤組織內(nèi)部，提高藥物的抗腫瘤作用；本發(fā)明的遞藥系統(tǒng)可用作神經(jīng)膠質(zhì)瘤治療藥物的靶向遞送。本發(fā)明是通過以下的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的，第一方面，本發(fā)明涉及一種APARPAR多肽修飾的隱形脂質(zhì)體，所述APARPAR多肽修飾在隱形脂質(zhì)體的表面上。優(yōu)選地，所述隱形脂質(zhì)體的膜包含氫化大豆磷脂、膽固醇、聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-APARPAR ;各組分的質(zhì)量比依次為(14 16) (6 8) (2 4) (I 3)。第二方面，本發(fā)明涉及一種脂質(zhì)體遞藥系統(tǒng)，所述遞藥系統(tǒng)由前述APARPAR多肽修飾的隱形脂質(zhì)體包裹抗腫瘤藥物而組成。
優(yōu)選地，所述脂質(zhì)體遞藥系統(tǒng)中，所述隱形脂質(zhì)體的重量百分比為70 98%，余量為抗腫瘤藥物。優(yōu)選地，所述抗腫瘤藥物為阿霉素或表阿霉素。第三方面，本發(fā)明還涉及一種脂質(zhì)體遞藥系統(tǒng)的制備方法，包括如下步驟步驟一，將各組分用氯仿或甲醇溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，加(NH4)2SO4溶液放入40 70°C水浴并同時(shí)旋轉(zhuǎn)震蕩的條件下進(jìn)行超聲分散，得空白脂質(zhì)體混懸液；之后通過50nm孔徑的碳酸脂膜，得空白脂質(zhì)體；步驟二，將空白脂質(zhì)體以生理鹽水為流動相過葡聚糖凝膠柱，收集脂質(zhì)體，將其與抗腫瘤藥物溶液混合后，在40 70°C靜置5 40分鐘，然后以生理鹽水為流動相過葡聚糖凝膠柱，收集脂質(zhì)體部分，即得所述脂質(zhì)體遞藥系統(tǒng)。優(yōu)選地，所述(NH4) 2S04溶液的濃度為O.1 O. 5M。優(yōu)選地，步驟一中，所述各組分為隱形脂質(zhì)體的膜包含氫化大豆磷脂、膽固醇、聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-APARPAR ;各組分的質(zhì)量比依次為(14 16) (6 8) (2 4) (I 3)。第四方面，本發(fā)明還涉及前述APARPAR多肽修飾的隱形脂質(zhì)體在制備治療神經(jīng)膠質(zhì)瘤靶向治療藥物中的用途。

本發(fā)明具有如下的有益效果本發(fā)明提供的脂質(zhì)體遞藥系統(tǒng)可用于神經(jīng)膠質(zhì)瘤的靶向治療，其可以在APARPAR多肽的介導(dǎo)作用下穿透腫瘤血管壁，滲透進(jìn)入整個(gè)腫瘤組織內(nèi)部，大大提高對腫瘤的殺傷作用。


通過閱讀參照以下附圖對非限制性實(shí)施例所作的詳細(xì)描述，本發(fā)明的其它特征、目的和優(yōu)點(diǎn)將會變得更明顯圖1為APARPAR修飾的阿霉素脂質(zhì)體和未修飾的阿霉素脂質(zhì)體粒徑分布圖；圖2為藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)中裸鼠生存時(shí)間對比結(jié)果圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的試驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，例如薩姆布魯克等分子克隆實(shí)驗(yàn)手冊第三版(科學(xué)出版社，2002)中所述的條件，或者按照各制造商所建議的條件。實(shí)施例1、APARPAR-脂質(zhì)體/DOX的制備和表征脂質(zhì)體膜材料處方組成為HSPC (氫化大豆磷脂)/Chol (膽固醇)/PEG-DSPE (聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺復(fù)合物)(14 6 2，mol/mol) ,APARPAR修飾的PEG脂質(zhì)體膜材料處方為 HSPC/Chol/mPEG-DSPE/APARPAR-PEG-DSPE(14 :6:2: l，mol/mol)。將各組分用氯仿溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，加濃度為O.1M的(NH4)2SO4溶液至脂膜中，超聲分散并在水浴40°C時(shí)旋轉(zhuǎn)震蕩，得空白脂質(zhì)體混懸液；再擠壓過50nm孔徑大小的碳酸脂膜，得空白脂質(zhì)體；將空白脂質(zhì)體以生理鹽水為流動相過葡聚糖凝膠柱，收集脂質(zhì)體部分，將其與適量的阿霉素溶液混合后，在40°C靜置5分鐘，然后以生理鹽水為流動相過葡聚糖凝膠柱，收集脂質(zhì)體部分，即得，其中隱形脂質(zhì)體的重量百分比為70%，抗腫瘤藥物的重量百分比為30%。脂質(zhì)體用動態(tài)光散射法測定粒徑，結(jié)果顯示，平均粒徑均為90nm左右，APARPAR修飾對其粒徑無明顯影響。圖1為APARPAR修飾的阿霉素脂質(zhì)體和未修飾的阿霉素脂質(zhì)體粒徑分布圖；由圖1可知，兩者粒徑大小及分布無顯著差異，說明APARPAR的修飾對脂質(zhì)體粒徑無顯著影響。實(shí)施例2、APARPAR-脂質(zhì)體/DOX的制備和表征脂質(zhì)體膜材料處方組成為HSPC (氫化大豆磷脂)/Chol (膽固醇)/PEG-DSPE (聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺復(fù)合物)(16 6 4，mol/mol) ,APARPAR修飾的PEG脂質(zhì)體膜材料處方為 HSPC/Chol/mPEG-DSPE/APARPAR-PEG-DSPE(16 :6:4: l，mol/mol)。將各組分用甲醇溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，加濃度為O. 5M的(NH4) 2S04溶液至脂膜中，超聲分散并在水浴70°C時(shí)旋轉(zhuǎn)震蕩，得空白脂質(zhì)體混懸液；再擠壓過50nm孔徑大小的碳酸脂膜，得空白脂質(zhì)體；將空白脂質(zhì)體以生理鹽水為流動相過葡聚糖凝膠柱，收集脂質(zhì)體部分，將其與適量的阿霉素溶液混合后，在70°C靜置40分鐘，然后以生理鹽水為流動相過葡聚糖凝膠柱，收集脂質(zhì)體部分，即得，其中隱形脂質(zhì)體的重量百分比為98%，抗腫瘤藥物的重量百分比為2%。脂質(zhì)體用動態(tài)光散射法測定粒徑，結(jié)果顯示，平均粒徑均為90nm左右，APARPAR修飾對其粒徑無明顯影響。實(shí)施例3、APARPAR-脂質(zhì)體/DOX的制備和表征脂質(zhì)體膜材料處方組成為HSPC (氫化大豆磷脂)/Chol (膽固醇)/PEG-DSPE (聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺復(fù)合物)(14 6 2，mol/mol) ,APARPAR修飾的PEG脂質(zhì)體膜材料處方為 HSPC/Chol/mPEG-DSPE/APARPAR-PEG-DSPE(14 :6:2: l，mol/mol)。將各組分用氯仿溶 解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，加濃度為O. 3M的(NH4)2SO4溶液至脂膜中，超聲分散并在水浴50°C時(shí)旋轉(zhuǎn)震蕩，得空白脂質(zhì)體混懸液；再擠壓過50nm孔徑大小的碳酸脂膜，得空白脂質(zhì)體；將空白脂質(zhì)體以生理鹽水為流動相過葡聚糖凝膠柱，收集脂質(zhì)體部分，將其與適量的阿霉素溶液混合后，在50°C靜置30分鐘，然后以生理鹽水為流動相過葡聚糖凝膠柱，收集脂質(zhì)體部分，即得，其中隱形脂質(zhì)體的重量百分比為80%，抗腫瘤藥物的重量百分比為20%。脂質(zhì)體用動態(tài)光散射法測定粒徑，結(jié)果顯示，平均粒徑均為90nm左右，APARPAR修飾對其粒徑無明顯影響。 實(shí)施例4、APARPAR-脂質(zhì)體/DOX的制備和表征脂質(zhì)體膜材料處方組成為HSPC (氫化大豆磷脂)/Chol (膽固醇)/PEG-DSPE (聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺復(fù)合物)(14 7 3，m0l/m0l) ,APARPAR修飾的PEG脂質(zhì)體膜材料處方為 HSPC/Chol/mPEG-DSPE/APARPAR-PEG-DSPE(14 :7:3: 2，mol/mol)。將各組分用甲醇溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，加濃度為O. 4M的(NH4)2SO4溶液至脂膜中，超聲分散并在水浴50°C時(shí)旋轉(zhuǎn)震蕩，得空白脂質(zhì)體混懸液；再擠壓過50nm孔徑大小的碳酸脂膜，得空白脂質(zhì)體；將空白脂質(zhì)體以生理鹽水為流動相過葡聚糖凝膠柱，收集脂質(zhì)體部分，將其與適量的阿霉素溶液混合后，在50°C靜置30分鐘，然后以生理鹽水為流動相過葡聚糖凝膠柱，收集脂質(zhì)體部分，即得，其中隱形脂質(zhì)體的重量百分比為80%，抗腫瘤藥物的重量百分比為20%。脂質(zhì)體用動態(tài)光散射法測定粒徑，結(jié)果顯示，平均粒徑均為90nm左右，APARPAR修飾對其粒徑無明顯影響。實(shí)施例5、APARPAR-脂質(zhì)體/DOX的制備和表征
脂質(zhì)體膜材料處方組成為HSPC(氫化大豆磷脂)/Chol (膽固醇)/PEG-DSPE (聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺復(fù)合物)(15 8 4，mol/mol) ,APARPAR修飾的PEG脂質(zhì)體膜材料處方為 HSPC/Chol/mPEG-DSPE/APARPAR-PEG-DSPE(15 :8:4: 3，mol/mol)。將各組分用氯仿溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，加濃度為O. 2M的(NH4)2SO4溶液至脂膜中，超聲分散并在水浴50°C時(shí)旋轉(zhuǎn)震蕩，得空白脂質(zhì)體混懸液；再擠壓過50nm孔徑大小的碳酸脂膜，得空白脂質(zhì)體；將空白脂質(zhì)體以生理鹽水為流動相過葡聚糖凝膠柱，收集脂質(zhì)體部分，將其與適量的阿霉素溶液混合后，在50°C靜置30分鐘，然后以生理鹽水為流動相過葡聚糖凝膠柱，收集脂質(zhì)體部分，即得，其中隱形脂質(zhì)體的重量百分比為80%，抗腫瘤藥物的重量百分比為20%。脂質(zhì)體用動態(tài)光散射法測定粒徑，結(jié)果顯示，平均粒徑均為90nm左右，APARPAR修飾對其粒徑無明顯影響。實(shí)施例6、APARPAR修飾的阿霉素脂質(zhì)體的抗神經(jīng)膠質(zhì)瘤效果研究14只原位圣經(jīng)膠質(zhì)瘤模型裸鼠隨機(jī)分成2組(η = 7)，分別在第7、12、17和22天注射100 μ I APARPAR-脂質(zhì)體/DOX和脂質(zhì)體/D0X，累積DOX的注射劑量為20mg/Kg，記錄模型裸鼠的生存時(shí)間。結(jié)果顯示，APARPAR-脂質(zhì)體/DOX組和脂質(zhì)體/DOX組裸鼠的平均生存期分別為43和37天。與生理鹽水相比，APARPAR修飾的膠束可與腫瘤細(xì)胞以及腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞上的神經(jīng)氈蛋白-1受體結(jié)合，提高了遞藥系統(tǒng)對腫瘤組織的靶向效率和在腫瘤組織內(nèi)部的傳遞效率，從而提高達(dá)到了增強(qiáng)藥效的目的。圖2為藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)中裸鼠生存時(shí)間對比結(jié)果圖，由圖2所示，APARPAR-脂質(zhì)體/DOX組荷瘤裸鼠的生存時(shí)間遠(yuǎn)長于脂質(zhì)體/DOX組，說明APARPAR的修飾可顯著增強(qiáng)阿霉素脂質(zhì)體的抗腫瘤作用。以上對本發(fā)明的具體實(shí)施例進(jìn)行了描述。需要理解的是，本發(fā)明并不局限于上述特定實(shí)施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在權(quán)利要求的范圍內(nèi)做出各種變形或修改，這并不影響本發(fā)明的實(shí)質(zhì)內(nèi)容。`
權(quán)利要求
1.一種APARPAR多肽修飾的隱形脂質(zhì)體，其特征在于，所述APARPAR多肽修飾在隱形脂質(zhì)體的表面上。
2.如權(quán)利要求1所述的APARPAR多肽修飾的隱形脂質(zhì)體，其特征在于，所述隱形脂質(zhì)體的膜包含氫化大豆磷脂、膽固醇、聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-APARPAR;各組分的質(zhì)量比依次為(14 16) (6 8) (2 4) (I 3)。
3.一種脂質(zhì)體遞藥系統(tǒng)，其特征在于，所述遞藥系統(tǒng)由如權(quán)利要求1所述的APARPAR多肽修飾的隱形脂質(zhì)體包裹抗腫瘤藥物而組成。
4.如權(quán)利要求3所述的脂質(zhì)體遞藥系統(tǒng)，其特征在于，所述脂質(zhì)體遞藥系統(tǒng)中，所述隱形脂質(zhì)體的重量百分比為70 98%，余量為抗腫瘤藥物。
5.如權(quán)利要求3所述的脂質(zhì)體遞藥系統(tǒng)，其特征在于，所述抗腫瘤藥物為阿霉素或表阿霉素。
6.一種如權(quán)利要求3所述的脂質(zhì)體遞藥系統(tǒng)的制備方法，其特征在于，包括如下步驟步驟一，將各組分用氯仿或甲醇溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，加(NH4)2SO4溶液放入40 70°C水浴并同時(shí)旋轉(zhuǎn)震蕩的條件下進(jìn)行超聲分散，得空白脂質(zhì)體混懸液；之后通過50nm孔徑的碳酸脂膜，得空白脂質(zhì)體；步驟二，將空白脂質(zhì)體以生理鹽水為流動相過葡聚糖凝膠柱，收集脂質(zhì)體，將其與抗腫瘤藥物溶液混合后，在40 70°C靜置5 40分鐘，然后以生理鹽水為流動相過葡聚糖凝膠柱，收集脂質(zhì)體部分，即得所述脂質(zhì)體遞藥系統(tǒng)。
7.如權(quán)利要求6所述的脂質(zhì)體遞藥系統(tǒng)的制備方法，其特征在于，所述(NH4)2SO4溶液的濃度為O.1 O. 5M。
8.如權(quán)利要求6所述的脂質(zhì)體遞藥系統(tǒng)的制備方法，其特征在于，步驟一中，所述各組分為隱形脂質(zhì)體的膜包含氫化大豆磷脂、膽固醇、聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-APARPAR ;各組分的質(zhì)量比依次為(14 16) (6 8) (2 4) (I 3)。
9.一種如權(quán)利要求1所述的APARPAR多肽修飾的隱形脂質(zhì)體在制備治療神經(jīng)膠質(zhì)瘤靶向治療藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種APARPAR多肽修飾的隱形脂質(zhì)體及遞藥系統(tǒng)；所述APARPAR多肽修飾在隱形脂質(zhì)體的表面上，所述隱形脂質(zhì)體的膜包含氫化大豆磷脂、膽固醇、聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-APARPAR，本發(fā)明還涉及一種脂質(zhì)體遞藥系統(tǒng)，所述遞藥系統(tǒng)由APARPAR多肽修飾的隱形脂質(zhì)體包裹抗腫瘤藥物而組成。本發(fā)明提供的脂質(zhì)體遞藥系統(tǒng)可用于神經(jīng)膠質(zhì)瘤的靶向治療，其可以在APARPAR多肽的介導(dǎo)作用下穿透腫瘤血管壁，滲透進(jìn)入整個(gè)腫瘤組織內(nèi)部，大大提高對腫瘤的殺傷作用。
文檔編號A61K31/704GK103040755SQ20121057946
公開日2013年4月17日 申請日期2012年12月27日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月27日
發(fā)明者楊一祎, 閆志強(qiáng), 魏岱旭, 鐘建, 金彩虹, 余震, 何丹農(nóng) 申請人:上海交通大學(xué), 上海納米技術(shù)及應(yīng)用國家工程研究中心有限公司