專利名稱：山茱萸裂苷在制備治療糖尿病腎病藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及山茱萸裂苷在制備治療糖尿病腎病藥物中的應用。
背景技術：
糖尿病腎病(diabetic nephropathy, DN),又稱糖尿病腎小球硬化癥,是糖尿病常見的慢性微血管并發(fā)癥，通常指由于糖尿病引起的腎小球基底膜增厚，系膜擴張以及胞外基質增生，導致腎小球的高濾過和蛋白尿，其特點以腎小球血管受損、硬化為主，形成結節(jié)性病變，進而出現(xiàn)腎功能的異常，最終形成終末期腎衰(ESRD)，終末期腎衰是DN病人的主要死亡原因之一。據世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，2011年全球有3. 36億人患有糖尿病，糖尿病已經成為全球第三號殺手，僅次于心腦血管疾病。糖尿病的病程長，若失治、誤治，則極易出現(xiàn)血管、腎臟、視網膜及神經系統(tǒng)慢性并發(fā)疾病。其中有1/3的患者轉化為糖尿病腎病，糖尿病腎病是糖尿病最常見的并發(fā)癥，也是糖尿病患者的主要死亡原因之一。我國糖尿病的最新流行病學調查報告顯示，20歲以上人群糖尿病患病率達9. 7%，而糖尿病前期的患病率高達15. 5%，估計目前我國約有九千二百萬糖尿病患者，一億四千八百萬糖尿病前期患者。 可見，中國已成為糖尿病大國，而糖尿病已成為威脅我國公眾健康的重大疾病之一。在終末期腎功能衰竭患者中，糖尿病腎病占16%。腎功能的損害，使腎臟不能保留對人體有用的蛋白質，不能排泄廢物而引起浮腫(下肢、臉部明顯)，容易發(fā)展成為尿毒癥。鑒于此，DN 應得到早期的診斷與治療。然而早期DN發(fā)病較隱匿，臨床診斷較困難。
自主開發(fā)創(chuàng)新藥物是我國目前的一項緊迫任務，從中藥中尋找治療糖尿病腎病的活性成分是一條途徑，是我國治療糖尿病腎病創(chuàng)新藥物研制的優(yōu)勢所在，也將極大地提高產品的市場競爭力，填補市場空白，產生良好的社會效益、獲得可觀的經濟效益。
山茱萸為山茱萸科植物山茱萸(Cornus officinalis Sieb. et Zucc.)的干燥成熟果肉，主要產地為豫西、浙江，味酸、澀，微溫，歸肝、腎經。其功效為補益肝腎，澀精固脫。 臨床用于內熱消渴，眩暈耳鳴，腰膝酸痛，陽痿遺精，遺尿、尿頻，崩漏帶下，大汗虛脫等。目前已有研究發(fā)現(xiàn)，山茱萸對糖尿病腎病具有確切的療效。環(huán)烯醚萜總苷能顯著降低糖尿病血管并發(fā)癥模型大鼠血清可溶性細胞間黏附分子(sICAM-1)，腫瘤壞死因子(TNF-α )水平，部分恢復一氧化氮(NO)和內皮素(ET)的動態(tài)平衡，保護血管內皮細胞，有利于控制糖尿病血管并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展。山茱萸環(huán)烯醚萜總苷能抑制糖尿病大鼠腎皮質糖化終產物 (AGEs)的形成，使其受體mRNA表達水平下降，具有減輕糖尿病腎病變的作用。山茱萸環(huán)烯醚萜總苷可改善糖尿病大鼠腎組織形態(tài)學病變及修復Na+，K+-ATP酶活性，對DN所引起的結構和功能改變都具有一定的防治作用。糖尿病患者由于高糖時葡萄糖的自動氧化增多及非酶糖化反應過程中非酶糖基化終產物的形成需通過氧化反應，會引起大量的自由基蓄積，同時由于醛糖還原酶通路活性增強的含量降低，導致還原型谷胱 甘肽過氧化物酶含量降低，機體抗氧化能力降低，引起廣泛的自由基損傷。環(huán)烯醚萜總苷及氨基胍均能顯著增加 SOD的含量。山茱萸環(huán)烯醚萜總苷對糖尿病血管并發(fā)癥引起的氧化應激損傷具有保護作用。由此可見，山茱萸是對糖尿病微血管病變具有確切的療效，其中環(huán)烯醚萜苷類成分是主要的有效部位。盡管目前對環(huán)烯醚萜苷類成分治療糖尿病腎病的作用機理進行了較為深入的研究，但是見局限于某類化學成分治療糖尿病腎病機制的研究，并沒有從整體上研究山茱萸治療糖尿病腎病作用機制。生物代謝研究表明，山茱萸中環(huán)烯醚萜苷類成分經過腎臟作用后的代謝產物是體內產生抗腎損傷的物質基礎，而且代謝產物體內外降糖強腎作用均強于環(huán)烯醚萜苷，此研究表明腎臟代謝在山茱萸環(huán)烯醚萜苷類成分的降糖強腎作用中起到了重要的作用。
山茱萸裂苷，(cornuside)是從山茱萸科植物山茱萸(Cornus officinalis Sieb. et Zucc.)的干燥成熟果肉中提取的單體，分子結構式見圖1。文獻研究表明，山茱萸裂苷具有良好的抗炎、抗病毒、肝保護和心臟保護效果，但這種效應對于糖尿病狀態(tài)下引起的并發(fā)癥腎損傷的保護作用尚未見相關研究報道。發(fā)明內容
本發(fā)明提供一種山茱萸裂苷在制備治療糖尿病腎病藥物中的應用。
本發(fā)明解決其技術問題所采用的技術方案是一種山茱萸裂苷在制備治療糖尿病腎病藥物中的應用。
作為優(yōu)選，將山茱萸裂苷加工成口服劑型藥物中的應用，包括顆粒劑、片劑、膠囊劑和口服液體劑。另一種方案是，將山茱萸裂苷加工成注射劑型藥物中的應用。將山茱萸裂苷初產品，加入適量輔料，制成相關劑型，包括口服劑型與注射劑型，口服劑型包括顆粒劑(沖服劑)、片劑(素片、包衣片、分散片、速崩片、泡騰片等)、膠囊劑(硬膠囊、軟膠囊)、口服液體劑。該藥物可用于治療糖尿病腎病。作為優(yōu)選，山茱萸裂苷的有效治療量為O.lg-5. 5g/kg。經實驗驗證，給藥量達O. lg-5. 5g/kg的山茱萸裂苷，對糖尿病腎病的治療具有顯著療效。
一種治療糖尿病腎病的含山茱萸裂苷的膠囊或片劑，制備方法如下制劑處方 山茱萸裂苷120g、微晶纖維120g、淀粉30g、乳糖28g、糊精3g ;根據處方按照配比將各組分混合均勻，之后加入體積分數(shù)80%的乙醇溶液制粒，整粒；制成膠囊或者壓制成片劑。
一種治療糖尿病腎病的含山茱萸裂苷的顆粒劑，制備方法如下顆粒劑處方山茱萸裂苷120g、乳糖1015g;將山茱萸裂苷與乳糖混合均勻，用體積分數(shù)70%的乙醇溶液制軟材，制粒、干燥、整粒、分裝即得。
一種治療糖尿病腎病的含山茱萸裂苷的注射液，制備方法如下取20g山茱萸裂苷加適量注射用水，加熱溶解，調PH值至7. 0，加入活性炭O. 2g，加熱至80-85°C保溫，過濾后，加注射用水至2000ml，O. 2μπι微孔濾膜過濾，灌封，即得。
本發(fā)明提出了山茱萸裂苷在制備治療`糖尿病腎病藥物中的新用途，為治療糖尿病腎病提供了新的藥物選擇。


圖1是山茱萸裂苷的分子結構式。
圖2是未知化合物I的液相色譜圖。
圖3是未知化合物I的LC-MS負離子模式圖。
圖4是未知化合物I的LC-MS正離子模式圖。
圖5是未知化合物鑒定的紫外光譜圖。
圖6是山茱萸裂苷對STZ誘導的糖尿病腎損傷大鼠體重的影響數(shù)據圖，其中■ 與正常組相比*P < O. 05 ;與模型組相比flP < O. 05。
圖7是山茱萸裂苷對STZ誘導的糖尿病腎損傷大鼠腎重的影響數(shù)據圖，其中 與正常組相比**P < 0.01 ;與模型組相比##P < O. 01。
圖8是western blot蛋白印跡表達圖。
圖9是山茱萸裂苷對糖尿病腎病大鼠腎組織相關蛋白表達效果圖。
具體實施方式
下面通過具體實施例，對本發(fā)明的技術方案作進一步的具體說明。應當理解，本發(fā)明的實施并不局限于下面的實施例，對本發(fā)明所做的任何形式上的變通和/或改變都將落入本發(fā)明保護范圍。
在本發(fā)明中，若非特指，所有的份、百分比均為重量單位，所有的設備和原料等均可從市場購得或是本行業(yè)常用的。
實施例1山茱萸裂苷的制備1.實驗材料儀器山茱萸生品，Agilent LC /MSD TOF (USA) ； Agilent 1100 二元泵(USA); Agilent 1100標準自動進樣器(USA);Milli_Q 超純水機(MiIlipore, Bedford, MA, USA) 試劑甲酸(分析純，上海凌峰化學試劑有限公司)；乙腈(色譜純，F(xiàn)isher Science);水為超純水。
甲醇提取樣品的制備稱取山茱萸生、制品粉末各I g，精密稱定，分別置25 mL容量瓶中，加80%甲醇定容到刻度，密塞，稱重，超聲提取45 min，再次稱重，用甲醇補充丟失的重量。
2.實驗方法的確立液相色譜條件色譜柱為Ag ilent Zorbax C18 (250mm X 4. 6 mm, 5. O μπι)柱,柱溫 30 °C。流動相A為0.1%的甲酸溶液；B為乙腈，梯度洗脫，洗脫程序如下梯度洗脫0 10 min, 2% B ; 10 15 min, 2% 5% B ; 15 20 min, 5% 10% B ；20 30 min, 10% 15% B ；30 40 min, 15% 20% B ；40 50 min, 20% 25% B ；50 60 min, 25% 50% B。進樣量為10 yL，流速為I mL/min，柱后分流，分流比約為1:1。DAD檢測器記錄190 400 nm的光譜數(shù)據，結果見圖2，圖中色譜峰I是我們需要制備的化合物。
質譜條件=LC-MS系統(tǒng)使用ESI離子源，在正離子模式與負離子模式下分別采集數(shù)據。數(shù)據采集范圍m/z550 1100。離子源參數(shù)干燥氣(N2),流速8 mL/min ;霧化壓力 35 psi ;干燥氣溫度320 °C。LC-MS分析結果見圖3和圖4。
3.電離方式的確定在電噴霧過程中，由于樣品中各組分帶上正電和負電的難易程度不同，有必要進行正離子和負離子電離方法的比較，以選擇一種適合這兩個成分的電離方法。實驗過程中發(fā)現(xiàn)在ESI正負兩種離子化方式下都能帶上電荷，本實驗采用兩種電離方法來檢測這未知成分 (見圖3和圖4)。
負離子模式的結果化合物I的m/z= +541. 1466，可能分子式見表I。
表I未知化合物I的可能分子式和分子量
權利要求
1.一種山茱萸裂苷在制備治療糖尿病腎病藥物中的應用。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于將山茱萸裂苷加工成口服劑型藥物中的應用，包括顆粒劑、片劑、膠囊劑和口服液體劑。
3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于將山茱萸裂苷加工成注射劑型藥物中的應用。
4.根據權利要求1所述的應用，其特征在于山茱萸裂苷的有效治療量為O.lg-5. 5g/kg ο
5.一種治療糖尿病腎病的含山茱萸裂苷的膠囊或片劑，其特征在于制劑處方山茱萸裂苷120g、微晶纖維120g、淀粉30g、乳糖28g、糊精3g ;根據處方按照配比將各組分混合均勻，之后加入體積分數(shù)80%的乙醇溶液制粒，整粒；制成膠囊或者壓制成片劑。
6.一種治療糖尿病腎病的含山茱萸裂苷的顆粒劑，其特征在于顆粒劑處方山茱萸裂苷120g、乳糖1015g;將山茱萸裂苷與乳糖混合均勻，用體積分數(shù)70%的乙醇溶液制軟材，制粒、干燥、整粒、分裝即得。
7.一種治療糖尿病腎病的含山茱萸裂苷的注射液，其特征在于取20g山茱萸裂苷加適量注射用水，加熱溶解，調PH值至7. 0，加入活性炭O. 2g，加熱至80-85°C保溫，過濾后， 加注射用水至2000ml，O. 2 μ m微孔濾膜過濾，灌封，即得。
全文摘要
本發(fā)明涉及山茱萸裂苷在制備治療糖尿病腎病藥物中的應用。本發(fā)明提出了山茱萸裂苷在制備治療糖尿病腎病藥物中的新用途，為治療糖尿病腎病提供了新的藥物選擇。經實驗驗證，給藥量達0.1g-5.5g/kg的山茱萸裂苷，對糖尿病腎病的治療具有顯著療效。山茱萸苷對糖尿病狀態(tài)下腎組織具有滿意的抗炎癥損傷、改腎功能的效應，是治療糖尿病腎病的有效藥物。
文檔編號A61K31/7048GK103054890SQ20121053242
公開日2013年4月24日 申請日期2012年12月12日 優(yōu)先權日2012年12月12日
發(fā)明者曹崗, 蔡寶昌, 杜偉鋒, 岳顯可 申請人:浙江中醫(yī)藥大學