專利名稱：一種丹酚酸a組合物及其制備藥物用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種丹酚酸A組合物及其制備藥物用途。
背景技術(shù)：
缺血性心臟病(IHD)是由于冠狀動(dòng)脈循環(huán)改變引起冠狀動(dòng)脈血流和心肌需求之間不平衡而導(dǎo)致的心肌損害，最常見的原因是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化、冠狀動(dòng)脈血栓及冠狀動(dòng)脈痙攣，約占缺血性心臟病的90%左右。其共同點(diǎn)是由于心肌供血不足所致氧的供需矛盾而造成心肌缺血、缺氧，心肌能量代謝不正常，不能支持心臟正常工作，從而發(fā)生一系列病理生理改變及癥狀，引起心絞痛發(fā)作，甚至發(fā)生心肌梗塞而危及生命。根據(jù)冠狀動(dòng)脈病變的部位、范圍及病變嚴(yán)重程度、心肌缺血程度，臨床分五類:無癥狀型心肌缺血、心絞痛型、心肌梗死型、缺血性心肌病型、猝死型。以心絞痛、心肌梗死、心源性猝死較為常見。而這些因冠脈病理改變引起的心臟病統(tǒng)稱為冠狀動(dòng)脈性心臟病簡(jiǎn)稱冠心病。因此一般情況下所說的缺血性心臟病主要指冠心病、心絞痛。心臟沒有“氧倉(cāng)庫”，完全依賴心肌血供，所以一旦缺血，立刻會(huì)引起缺氧。氧是心肌細(xì)胞活動(dòng)必不可少的物質(zhì)，正常心肌細(xì)胞攝取血液氧含量達(dá)65 75 %，其它組織僅攝取10 25 %。心肌缺氧的直接后果是心肌細(xì)胞有氧代謝減弱，產(chǎn)能減小，使心臟活動(dòng)時(shí)必需的能量供應(yīng)不足，引起心絞痛、心律失常、心功能下降。同時(shí)，代謝的廢物也不能被有效及時(shí)地清除，易產(chǎn)生不利影響。缺血、缺氧、缺能量，最終會(huì)影響心臟的收縮功能。若有20% 25%的心肌停止收縮，通常會(huì)出現(xiàn)左室功能衰竭；若有40%以上的心肌不能收縮，就會(huì)有重度心泵功能衰竭。如果這種情況突然發(fā)生，就會(huì)出現(xiàn)非常危險(xiǎn)的心源性休克。急性心肌梗死就常與這種情況相關(guān)。心肌缺血還會(huì)損害舒張功能。收縮不良和舒張不良結(jié)合起來，可引起復(fù)雜的物質(zhì)代謝紊亂和心肌電活動(dòng)失常。因此改善心臟血管功能，增加心肌的供血供氧、降低氧的消耗，改善心肌代謝，緩解心絞痛，減小心肌梗死面積是藥物治療的主要目的。目前治療缺血性心臟病主要包括藥物治療和介入(PICA)或搭橋 等手術(shù)治療。心絞痛發(fā)作時(shí)一般用硝酸脂類藥物，如舌下含化硝酸甘油，起效快，但是只能用于救急，緩解癥狀，不能從根本上治療心肌缺血。緩解期用藥包括硝酸酯類、他汀類、ACE1、β受體阻滯劑、鈣離子拮抗劑、溶栓藥(尿激酶、鏈激酶等)及中藥等。能量代謝障礙是心肌缺損傷的使動(dòng)因素之一，近年來，通過優(yōu)化調(diào)節(jié)心肌能量代謝發(fā)揮抗心絞痛的一類促代謝類藥物亦頗受關(guān)注，有望成為新的一類治療或輔助藥物。而目前主要以冠脈血運(yùn)重建術(shù)、盡快恢復(fù)血流灌注為原則的缺血性心臟病基礎(chǔ)治療方法，亦存在不可忽視的風(fēng)險(xiǎn):動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究發(fā)現(xiàn)，隨著血運(yùn)的恢復(fù)，某些受損的心肌細(xì)胞功能及結(jié)構(gòu)破壞反而加重，即發(fā)生心肌缺血再灌注損傷(myocardial ischemia reperfusioninjury,MIRI)。再灌注損傷是在心肌缺血后，再灌注的早期，氧化應(yīng)激反應(yīng)導(dǎo)致心肌中產(chǎn)生大量氧自由基、超氧陰離子，連同細(xì)胞及線粒體內(nèi)鈣超載等因素加速心肌細(xì)胞凋亡及壞死，使得心肌梗死范圍擴(kuò)大、心功能迅速惡化。臨床表現(xiàn)為在閉塞的冠狀動(dòng)脈再通及梗死區(qū)血液灌流重建后一段時(shí)間內(nèi)，有的患者發(fā)生血壓驟降、心功能不全、心律失常甚至猝死等一系列病情惡化的現(xiàn)象。臨床實(shí)踐中如心肌梗死溶栓再通后、冠脈搭橋、心臟移植、心臟驟停心臟復(fù)蘇后、體外循環(huán)心臟手術(shù)后等均存在再灌注損傷問題。如何做到既保證盡早恢復(fù)缺血組織的血流，又減輕甚至解除再灌注損傷的發(fā)生便成為又一冠心病防治中的重要課題。世界衛(wèi)生組織在《全球疾病負(fù)擔(dān)》報(bào)告中發(fā)出警告，心血管系統(tǒng)疾病已成為全球范圍的主要死因。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，全球每年近2000萬人突發(fā)急性心血管病，致死亡數(shù)占全球死亡的30%以上，其中43%死于冠心病。在地域分布上，80%以上的心血管疾病死亡發(fā)生在低中等收入國(guó)家。據(jù)報(bào)道，美國(guó)每年約有45 50萬人死于心臟性猝死，而其中以缺血性心臟病(冠心病)占猝死原因的80%以上。近幾十年，冠心病發(fā)病率在我國(guó)逐年增高，目前在各類心臟病中居首位。2010年中國(guó)國(guó)家統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，中國(guó)超過40%的人死于心血管疾病。冠心病的有效防治已成為不容忽視的全球性公共健康問題，這類疾病防治藥物的研制已連續(xù)被列為我國(guó)“十一五”、“十二五”創(chuàng)新藥物重大專項(xiàng)研究的重點(diǎn)內(nèi)容，且將成為今后很長(zhǎng)一段時(shí)間重點(diǎn)研究的藥物類別，有著重大的社會(huì)意義和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。丹參為唇形科鼠尾草屬植物丹參Salvia miltiorrhiza Bunge的干燥根及根莖，具有活血化瘀、涼血消癰及養(yǎng)血安神的功效。丹參作為中醫(yī)傳統(tǒng)活血化瘀的藥物，因療效確切，自70年代開始廣泛用于臨床各科，成為臨床應(yīng)用最多最廣的藥物之一。因具有改善微循環(huán)、擴(kuò)張冠脈、抑制血栓形成、抑制血小板聚集、保護(hù)缺血心肌等藥理作用，其制劑的近代臨床實(shí)踐主要應(yīng)用于缺血性心、腦血管疾病。常用含丹參的治療心肌缺血的中成藥有:丹參片、復(fù)方丹參片、心可舒、冠脈寧等；囊括了擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、增加冠脈流量、降低血黏度和血凝、抑制血小板聚集、保護(hù)缺血心肌和改善微循環(huán)等藥理作用。適用于血瘀癥的胸痹病人以及心絞痛急性發(fā)作等。丹參的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)是其中的水溶性酚酸類化合物，包括丹酚酸Α-G、迷迭香酸及其甲酯、丹參素、原兒茶醛、原兒茶酸等，以抗氧化、抗凝和抗炎為特點(diǎn)、同時(shí)具有保護(hù)脈管內(nèi)皮細(xì)胞、降脂、升高HDL、抗凝、激活纖溶、抑制纖維蛋白原合成、螯合鈣鐵離子等多種有益的藥理作用；其中以丹酚酸A活性最強(qiáng)。丹酚酸A可以提高損傷后大鼠心肌H9c2細(xì)胞存活率，抑制細(xì)胞凋亡 ，并有很強(qiáng)的抗氧化作用，可明顯減輕線粒體損傷。因此丹酚酸A可通過減輕心肌細(xì)胞凋亡、提高機(jī)體抗氧化能力和保護(hù)心肌線粒體等機(jī)制對(duì)缺血心肌有保護(hù)作用。丹酚酸A對(duì)心肌缺血再灌注損傷亦具有明顯的保護(hù)作用，而且作用優(yōu)于丹酚酸B (林治榮等.丹酚酸A與丹酚酸B抗大鼠心肌缺血再灌注損傷的比較研究[D].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2011，22(2) =412-424)。但是，丹酚酸A的天然含量極低(約為丹參藥材的0.01-0.06% ),使得原藥材成本過高，分離純化難度過大，嚴(yán)重制約著藥物的開發(fā)和研究，成為其產(chǎn)業(yè)化的瓶頸。另外，現(xiàn)有技術(shù)中，也有實(shí)驗(yàn)證實(shí)丹酚酸B通過酯水解脫羧和苯并二氫呋喃環(huán)開環(huán)反應(yīng)進(jìn)行降解可轉(zhuǎn)化成丹酚酸A，但上述現(xiàn)有技術(shù)的轉(zhuǎn)化過程無法控制，轉(zhuǎn)化副產(chǎn)物多，主產(chǎn)物丹酚酸A的產(chǎn)率較低。盡管現(xiàn)有技術(shù)中也有一些專利文獻(xiàn)提出試圖克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷，但都僅僅是單純的嘗試升溫、改變PH值或提高轉(zhuǎn)化前丹酚酸類化合物的濃度等等，沒有任何一項(xiàng)專利或現(xiàn)有技術(shù)深入、全面地研究轉(zhuǎn)化反應(yīng)都包括哪些主要影響因素，更沒有任何一項(xiàng)專利或現(xiàn)有技術(shù)提出這些因素如轉(zhuǎn)化前丹酚酸類化合物的濃度、PH值、溫度、時(shí)間等彼此之間如何協(xié)同作用共同對(duì)丹酚酸A產(chǎn)率產(chǎn)生影響。在此基礎(chǔ)上，更很少有其他發(fā)明人或現(xiàn)有技術(shù)提出嘗試在轉(zhuǎn)化中加入催化劑以使反應(yīng)更加充分，目前現(xiàn)有技術(shù)中涉及到了采用催化劑進(jìn)行轉(zhuǎn)化的相關(guān)內(nèi)容僅存于在2010年4月6日同一日提交的兩份專利申請(qǐng)文件中，這兩份專利申請(qǐng)文件分別是申請(qǐng)?zhí)枮?010101436787，發(fā)明名稱為“一種催化轉(zhuǎn)化丹酚酸B制備丹酚酸A的方法”的專利申請(qǐng)以及申請(qǐng)?zhí)枮?010101436876，發(fā)明名稱為“一種初步純化丹酚酸B轉(zhuǎn)化原料的方法”的專利申請(qǐng)。在這兩份專利申請(qǐng)的說明書中，雖然公開了催化轉(zhuǎn)化丹酚酸B制備丹酚酸A的技術(shù)內(nèi)容，但其催化劑為尿素，尿素與丹酹酸B的摩爾比為(0.4 0.6): I,要求消耗和加入尿素非常高，因此生產(chǎn)成本非常高。并且，在上述兩份專利申請(qǐng)文件中，也同樣并未關(guān)注PH值及其他相關(guān)因素協(xié)同對(duì)丹酚酸A產(chǎn)率產(chǎn)生的影響。再者，其轉(zhuǎn)化原料為經(jīng)聯(lián)合色譜法初步純化的丹參水提物，其中丹酚酸B > 50%，這對(duì)轉(zhuǎn)化原料的純度及提純工藝均要求較高，工藝也較為復(fù)雜，進(jìn)一步增加了生產(chǎn)成本。更為關(guān)鍵的是，盡管其申請(qǐng)文件中聲稱“使用本方法制備的丹酚酸A丹酚酸B定向轉(zhuǎn)化率> 10%，甚至達(dá)60 %”。但由于尿素實(shí)際上并沒有開環(huán)、脫水、脫羧作用，僅有成酯作用，因此，其轉(zhuǎn)化率根本達(dá)不到60%，并且該申請(qǐng)文件的具體實(shí)施例中的轉(zhuǎn)化率最高僅為53%，而且多個(gè)實(shí)施例的轉(zhuǎn)化率僅為10%、20%和30%。這與實(shí)際產(chǎn)業(yè)化的要求仍有很大差距。

發(fā)明內(nèi)容
為克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷，本發(fā)明提供了一種丹酚酸A組合物用于預(yù)防和或治療缺血性心臟病方面的用途。本發(fā)明提供了一種丹酚酸A組合物用于制備預(yù)防和治療缺血性心臟病藥物的用途，其中所述的組合物中丹酚酸A含量大于93%，小于100%，以及按下述重量配比還包括4個(gè)其他成分:紫草酸0.1% 2%，迷迭香酸0.1% 2%，丹酚酸洲.1(% 2%，丹酚酸C0.1% 2%，所述丹酚酸A組合物采用下制備方法獲得:取丹參藥材，切成飲片或粉碎成直徑約Imm 5mm顆粒，每次加3 15倍量、45 95 0C水溫浸提取，同時(shí)以10 50轉(zhuǎn)/分速度攪拌，或加3 15倍量水煎煮提取，共提取I 3次，每次提取I 4小時(shí)；提取液減壓濃縮至相對(duì)密度1.0 1.25 (600C )，加入乙醇使含醇量在50% 85%，靜置，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至無醇味，得丹參提取液；或者取丹參藥材，切成飲片或粉碎成直徑約Imm 5mm顆粒，每次加3 15倍量30 % 60%乙醇回流提取，每次提取I 4小時(shí)，共提取I 3次；減壓回收乙醇并濃縮至無醇味，得丹參提取液；上述丹參提取液加水稀釋至每Iml含丹酚酸BI 30mg，水溶液用堿調(diào)pH至3.5
6.5，加入與丹酚酸B摩爾百分比0.1 3%氯化鋅作為催化劑，在100 140°C溫度加熱轉(zhuǎn)化I 6小時(shí)；轉(zhuǎn)化液調(diào)pH值至2.5 4.5，靜置、離心，上清液減壓濃縮至每Iml含丹酚酸Al 10mg，經(jīng)HPD-100大孔樹脂柱層析分離，丹酚酸A上樣量與大孔吸附樹脂比為1: 35 I: 70，樹脂柱徑高比為1: 4 1: 30，分別用I 8倍柱體積水、I 10倍柱體積10% 40%乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用2 10倍柱體積20% 60%乙醇洗脫，HPLC檢測(cè)，收集含有丹酚酸A的20% 60%乙醇洗脫部分，減壓回收乙醇并濃縮至無醇味；水溶液濃縮至每Iml含1-1Omg丹酚酸A的溶液，通過聚酰胺層析柱分離，丹酚酸A上樣量與聚酰胺比為1: 5 1: 25，樹脂柱徑高比為1: 4 1: 25，分別用I 10倍柱體積水、5 20倍柱體積20% 60%乙醇溶液洗脫除雜，再用4 15倍柱體積40% 90%乙醇溶液洗脫，收集含有丹酚酸A的40% 90%乙醇溶液部分，減壓回收乙醇并濃縮至無醇味水溶液；水溶液濃縮，調(diào)酸pH至2.0 4.0，用水溶液1_8倍量的叔丁基甲基醚，分2 6次萃取，分離有機(jī)層，減壓回收叔丁基甲基醚，制成每Iml含丹酹酸Alg IOg的萃取液,力口入I 3倍量硅膠，攪拌，揮干；把攪拌樣硅膠加到已裝好的5 20倍量干硅膠柱上，硅膠柱徑高比為1: 4
I: 25，以正戊烷-叔丁基甲基醚為洗脫劑，梯度洗脫，分別用正戊烷-叔丁基甲基醚(4: 6)洗脫6 30倍柱體積，正戊烷-叔丁基甲基醚出:4)洗脫6 30倍柱體積，減壓回收洗脫劑，回收有機(jī)溶劑后的丹酚酸A加5 20倍量水溶解，微波真空干燥，得所述丹酚酸A組合物。優(yōu)選的，微波真空干燥溫度:20-100°C，回差溫度1_5°C，真空度-0.07Mpa以上，微波功率1-100KW，干燥10-200分鐘。優(yōu)選的，微波真空干燥溫度:50-85°C，回差溫度2-4°C，真空度-0.07Mpa以上，微波功率10-80KW，干燥100-150分鐘。優(yōu)選的，微波真空干燥溫度:55-80°C，回差溫度2-3°C，真空度-0.07Mpa以上，微波功率25-60KW，干燥120-140分鐘。優(yōu)選的，其中所述的用于預(yù)防和治療缺血性心臟病的藥物可用于治療以下病癥的一種或幾種:冠心病、心絞痛、缺血性心肌病、心肌梗死、心肌缺血性卒中、急性冠狀動(dòng)脈綜合癥、冠狀動(dòng)脈狹窄、心肌缺血再灌注損傷、動(dòng)脈粥樣硬化。優(yōu)選的，其中所述丹酚酸A組合物用于改善缺血心臟血流動(dòng)力學(xué)的用途。優(yōu)選的，其中所述丹酚酸A組合物用于改善缺血性心臟心功能的用途。優(yōu)選的，其中所述的丹酚酸A組合物用于增加缺血性心臟的冠脈血流量的用途。優(yōu)選的，其中所述的丹酚酸A組合物用于減少缺血性心臟心肌梗死范圍的用途。優(yōu)選的，其中所述的丹酚酸A組合物用于縮小心肌缺血范圍的用途。優(yōu)選的，其中所述的丹酚酸A組合物用于減輕心肌缺血程度的用途。優(yōu)選的，其中所述的丹酚酸A組合物用于保護(hù)心肌細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)調(diào)節(jié)心肌酶活性的用途。優(yōu)選的，其中所述的丹酚酸A組合物用于抑制缺血心肌組織炎癥反應(yīng)的用途。優(yōu)選的，其中所述的丹酚酸A組合物用于保護(hù)心肌線粒體損傷的用途。優(yōu)選的，其中所述的丹酚酸A組合物用于改善心肌代謝的用途。優(yōu)選的，其中所述的丹酚酸A組合物用于改善心肌代謝的用途包括用于改善以下心肌代謝的一種或幾種:心肌氧自由基代謝、脂肪酸代謝、能量代謝。優(yōu)選的，其中所述的丹酚酸A組合物用于降低心肌耗氧量的用途。優(yōu)選的，其中所述的丹酚酸A組合物用于改善血液流變學(xué)的用途。優(yōu)選的，其中所述的丹酚酸A組合物用于抑制血栓形成的用途。本發(fā)明通過對(duì)丹參的提取、轉(zhuǎn)化、純化、干燥工藝，得到了以丹酚酸A為主的化合物:經(jīng)過系統(tǒng)的篩選和優(yōu) 化，首先比較確定了起始原料丹酚酸B的提取溶劑和提取方法，由于丹酚酸B水溶性較好，確定了采用水提取或低濃度醇提取，又由于丹酚酸B熱穩(wěn)定性較差，確定了采用熱水溫浸提取并加攪拌提取方法，或用低濃度乙醇回流提取，使提取溶度低于100°c，保持丹酚酸B不被破壞，通過正交實(shí)驗(yàn)確定了最佳溶劑用量和提取時(shí)間，得到了適應(yīng)工業(yè)化生產(chǎn)的丹酚酸B最佳提取工藝的。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)對(duì)比表明:起始原料用丹參藥材直接提取即可進(jìn)行投料轉(zhuǎn)化，不需對(duì)丹酚酸B進(jìn)行純化后再進(jìn)行轉(zhuǎn)化，即本發(fā)明催化轉(zhuǎn)化反應(yīng)中，反應(yīng)原料丹酚酸B不需要高純度，例如不需要丹酚酸B的純度> 50%。一般認(rèn)為反應(yīng)原料越純?cè)胶茫欢?，本發(fā)明的催化轉(zhuǎn)化反應(yīng)中，丹酚酸B的純度高低對(duì)轉(zhuǎn)化反應(yīng)效果沒有影響。相反，丹酚酸B純度>50%時(shí)不但產(chǎn)生大量雜質(zhì)，且沒有提高轉(zhuǎn)化率，因此，本發(fā)明取得了預(yù)料不到的技術(shù)效果。另外，本發(fā)明還可以將低濃度與高濃度的丹酚酸B混合，只需配成合適的起始轉(zhuǎn)化濃度即可，同樣可以達(dá)到轉(zhuǎn)化成丹酚酸A組合物的目的。因此，這種轉(zhuǎn)化原料的制備工藝非常簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本降低的同時(shí)也非常適于實(shí)際產(chǎn)業(yè)中的應(yīng)用。再者，本發(fā)明通過反復(fù)實(shí)驗(yàn)比較，首先確定了對(duì)丹酚酸A組合物產(chǎn)率產(chǎn)生重要影響的因素如轉(zhuǎn)化前丹酚酸類化合物的濃度、PH值、溫度、時(shí)間等。在此基礎(chǔ)上，又通過付出大量的時(shí)間、物質(zhì)和精力反復(fù)實(shí)驗(yàn)對(duì)溫度、PH值、時(shí)間、丹酚酸B的濃度及其他相關(guān)條件進(jìn)行了研究，以及這些因素彼此之間如何協(xié)同作用共同對(duì)丹酚酸A產(chǎn)率產(chǎn)生影響，從而確定了丹酚酸B轉(zhuǎn)化丹酚酸A的需要控制的最佳溫度、pH值、時(shí)間等，并將丹酚酸B起始濃度控制在lmg/ml 30mg/ml,從而使得本發(fā)明丹酹酸A轉(zhuǎn)化率更加明顯優(yōu)于其他轉(zhuǎn)化條件?；瘜W(xué)反應(yīng)中，反應(yīng)物的純度與濃度常常影響反應(yīng)的效果。一般情況下對(duì)反應(yīng)物有濃度要求，且認(rèn)為濃度高比濃度低好。本發(fā)明的催化轉(zhuǎn)化反應(yīng)中，丹酚酸B的濃度高低對(duì)轉(zhuǎn)化反應(yīng)效果沒有影響。相反，實(shí)驗(yàn)證明含丹酚酸B水溶液中丹酚酸B的濃度并非越高越好，30mg/ml以上濃度轉(zhuǎn)化率反而低，效果更差。因此，本發(fā)明在節(jié)約成本和生產(chǎn)周期方面，取得了預(yù)料不到的技術(shù)效果，具有創(chuàng)造性。在現(xiàn)有技術(shù)沒有給出任何技術(shù)啟示的情況下，本領(lǐng)域技術(shù)人員如果僅從理論上推斷，是不可能得出在上述各條件參數(shù)下將丹酸B轉(zhuǎn)化成丹酚酸A具有更好的轉(zhuǎn)化效果的結(jié)論。更為重要的是，本發(fā)明通過創(chuàng)造性的勞動(dòng)，發(fā)現(xiàn)氯化鋅作為催化劑能顯著提高丹酚酸B轉(zhuǎn)化丹酚酸A組合物的轉(zhuǎn)化率，轉(zhuǎn)化率非常穩(wěn)定的能達(dá)到接近60 %，多數(shù)情況都可以超過60%，這在以往任何 一項(xiàng)現(xiàn)有技術(shù)中都是不可能的，因此，取得了預(yù)料不到的技術(shù)效
果O由于丹酚酸A組合物含量較低，經(jīng)轉(zhuǎn)化后丹酚酸A組合物含量大提高，但還含大量雜質(zhì)，因此，分別選擇了弱極性和非極性大孔吸附樹脂進(jìn)行粗分離，再選擇聚酰胺、溶劑萃取、硅膠分離，并對(duì)不同流份進(jìn)行測(cè)定，去除雜質(zhì)部分后，將丹酚酸A組合物中的丹酚酸A含量從10%左右提高到80%，至90%，至93%，至96%。進(jìn)一步，在顯著提高轉(zhuǎn)化率的同時(shí)，本發(fā)明通過適于實(shí)際產(chǎn)業(yè)應(yīng)用的純化步驟，尤其是通過一系列的分離、洗脫處理等步驟后，沒有采用傳統(tǒng)的常溫干燥，并從真空干燥、噴霧干燥、微波真空干燥方法中優(yōu)選了微波真空干燥，從而徹底克服了以往干燥溫度過高，干燥時(shí)間過長(zhǎng)，對(duì)丹酚酸A組合物的破壞大的缺陷；以及冷凍干燥時(shí)間過長(zhǎng)，成本極高且冷凍干燥所得的組合物有機(jī)溶劑殘留嚴(yán)重的問題。本發(fā)明丹酚酸A組合物中除主要含丹酚酸A外，還含少量丹酚酸B、紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸C ;丹酚酸A通過清除自由基，減輕膜脂質(zhì)過氧化引起的流動(dòng)性和通透性變化，阻止離子的異常通透和酶的漏出，從而降低了由于心肌缺血再灌注而引起的損傷，對(duì)心肌缺血有保護(hù)作用。丹酚酸A組合物可劑量依賴性地抑制腺苷二磷酸(ADP)、凝血酶、花生四烯酸、膠原或U46619誘導(dǎo)的血小板聚集，降低血小板中cAMP水平，以及減少ADP引起的血小板P選擇素的表達(dá)和纖維蛋白原結(jié)合，從而阻止ADP引起的血小板白細(xì)胞聚集，對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化及栓塞形成有防治作用；
丹酚酸A組合物中的丹酚酸B是丹參及其制劑丹參注射液、香丹注射液的主要有效成分，與丹酚酸A組合物一樣對(duì)心肌缺血有保護(hù)作用，對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化及栓塞形成有防治作用；丹酚酸B可以有效減少實(shí)驗(yàn)性心肌梗死大鼠的梗死灶范圍，增加梗死灶內(nèi)成纖維細(xì)胞和毛細(xì)血管數(shù)；可以降低急性心肌缺血模型大鼠的左室舒張末期壓，升高左室內(nèi)壓最大上升及下降速率，大劑量應(yīng)用對(duì)左室收縮和舒張功能均有顯著提高作用；對(duì)家兔心肌缺氧一復(fù)氧損傷模型，丹酚酸B具有負(fù)性頻率、增加冠脈流量和降低冠脈流出液中肌酸激酶、乳酸脫氫酶水平的作用，可減輕心肌細(xì)胞損傷。丹酚酸B可劑量依賴性地減少H2O2所致內(nèi)皮細(xì)胞LDH外漏和MDA生成，并提高NO釋放，還能有效抑制H2O2存在下⑶54表達(dá)和增加中性粒細(xì)胞黏附率，表明丹酚酸B具有減輕H2O2所致內(nèi)皮細(xì)胞的氧化性損傷，降低血管內(nèi)皮細(xì)胞表面細(xì)胞黏附分子表達(dá)和抑制中性粒細(xì)胞黏附的作用，并認(rèn)為這是丹酚酸B抗心肌缺血/再灌注損傷的作用機(jī)制；紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸C作用與丹酚酸A類同，均有較強(qiáng)的抗氧化作用，能清除氧自由基，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，其作用強(qiáng)度高于維生素C、維生素E，是目前已知的抗氧化作用最強(qiáng)的天然產(chǎn)物之一。迷迭香酸還有助于防止自由基造成的細(xì)胞受損，因此降低了癌癥和動(dòng)脈硬化的風(fēng)險(xiǎn)。丹酚酸A組合物中的紫草酸還有抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移，預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化、血管狹窄和血管內(nèi)膜增生，具有擴(kuò)血管作用。能抑制尿酸和過超氧陰離子自由基的形成、抑制過氧化物的產(chǎn)生，有消炎和降尿酸的作用。體外能抑制促黃體激素釋放的作用。丹酚酸A組合物中的丹酚酸C還通過抑制微管蛋白聚合誘導(dǎo)細(xì)胞有絲分裂阻滯從而誘導(dǎo)凋亡，具有抗腫瘤細(xì)胞增殖活性。丹酚酸A組合物中的丹酚酸A、丹酚酸B、紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸C組合后具有共同的心肌缺血保護(hù)作用，降低了由于心肌缺血再灌注而引起的損傷。對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化及栓塞形成的有防治作用，使其比丹酚酸A單體化合物單獨(dú)使用作用更強(qiáng)，同時(shí)還有消炎和降尿酸的作用、降低了癌癥和動(dòng)脈硬化的風(fēng)險(xiǎn)。另一方面，本發(fā)明還提供了其用于預(yù)防和或治療缺血性心臟病藥物的用途，并且通過大量實(shí)驗(yàn)證明:經(jīng)過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)比可知,模型組缺血再灌注60min, CBF> +dp/dtmax、_dp/dtmax明顯下降，LVEDP顯著增高。與模型組比較，陽性藥物組、丹酚酸A組合物高、中、低劑量組、丹酚酸A單體化合物組上述指標(biāo)均有明顯改善，能抑制缺血再灌注引起的冠脈流量減少、左室舒張壓上升、左室內(nèi)壓最大上升速率下降、左室內(nèi)壓最大下降速率下降。且丹酚酸A組合物組高劑量組與陽性藥物組效果相當(dāng)，效果優(yōu)于同劑量丹酚酸A單體化合物組。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示丹酚酸A組合物能減輕大鼠離體心臟缺血再灌注損傷程度，提示丹酚酸A組合物能明顯改善冠脈血流量、改善離體心臟主動(dòng)脈舒張功能和受損心肌的舒縮功能、保護(hù)心臟缺血再灌注損傷。經(jīng)對(duì)心肌缺血大鼠心電及心功能影響的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)比可知，結(jié)扎冠狀動(dòng)脈致大鼠長(zhǎng)期心肌缺血模型大鼠心電圖ST段顯著提高，其HR、動(dòng)脈壓、LVSP, +dp/dtmax、-dp/dtmax均顯著下降，模型組大鼠心肌收縮功能明顯降低，靜脈給藥7d后，各藥物組大鼠ST段明顯下降；各項(xiàng)指標(biāo)綜合顯示，各藥物組中以丹酚酸A組合物中、高劑量對(duì)長(zhǎng)期心肌缺血大鼠的心電及心功能指標(biāo)改善效果最為明顯，提示丹酚酸A組合物能降低心肌缺血大鼠ST段的升高、改善心率、增高其動(dòng)脈壓、改善心肌舒縮力，且效果優(yōu)于同劑量丹酚酸A單體化合物，對(duì)心肌缺血大鼠的心電及心臟功能有明顯的改善作用。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)比可知，丹酚酸A組合物能使心肌缺血大鼠血清中SOD活性增高，抑制MDA的生成，降低血清內(nèi)AST、CK和LDH活性，說明丹酚酸A組合物能抑制氧自由基產(chǎn)生，提高心肌組織的抗氧化能力，保護(hù)心肌細(xì)胞膜，減少酶的溢出，改善心肌的能量供應(yīng)，降低缺血對(duì)心肌的損傷程度，從而起到心肌缺血保護(hù)作用。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)比可知，心肌缺血模型組大鼠出現(xiàn)明顯的心肌缺血梗死，梗死范圍達(dá)53%左右；與模型組相比，不同劑量丹酚酸A組合物注射給藥7d后，大鼠的心肌梗死范圍顯著降低，并呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。同劑量丹酚酸A組合物較丹酚酸A單體化合物組大鼠心肌梗死范圍更小。提示丹酚酸A組合物能縮小心肌梗死范圍，減輕心肌缺血損傷及心梗程度，對(duì)心肌缺血具有明顯治療作用。光鏡和電鏡結(jié)果提示，丹酚酸A組合物能明顯改善心肌缺血大鼠的心肌病理改變，減輕心肌病理損傷，可用于缺血性心臟病的治療。且作用效果比同劑量的丹酚酸A單體化合物更明顯。觀察大鼠心肌缺血-再灌不同時(shí)間心肌梗死范圍，模型組大鼠心肌缺血1.5h，再灌注6h后心肌梗死嚴(yán)重，且在恢復(fù)灌注48h內(nèi)，梗死范圍逐步增大，心肌損傷加劇。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)比可知，與模型組比較，不同劑量丹酚酸A組合物能明顯縮小心肌梗死范圍，減輕心肌缺血再灌損傷，且心肌梗死范圍并不隨缺血再灌時(shí)間延長(zhǎng)而擴(kuò)大；各劑量組之間存在一定劑效關(guān)系，且優(yōu)于同劑量丹酚酸A單體化合物。提示丹酚酸A組合物能縮小實(shí)驗(yàn)性心肌缺血再灌注大鼠的心肌梗死范圍，減輕心肌損傷程度，對(duì)心肌缺血-再灌注損傷具有較好的防治作用。`經(jīng)過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)比可知，大鼠在心肌缺血-再灌注24h，心肌組織SOD、GSH-Px、CAT酶活顯著下降，MDA、XOD酶活顯著升高，提示大鼠心肌缺血-再灌注后，過氧化產(chǎn)物堆積嚴(yán)重，心肌清除過氧化產(chǎn)物能力顯著下降，缺血再灌引起大量氧自由基產(chǎn)生導(dǎo)致心肌損傷加重。藥物組與模型組比較，心肌組織SOD、GSH-Px, CAT酶活不同程度升高，MDA、XOD酶活不同程度降低，丹酚酸A組合物高、中劑量組效果最明顯。提示丹酚酸A能增強(qiáng)心肌清除自由基能力，抑制氧自由基產(chǎn)生，增強(qiáng)大鼠心肌抗氧化能力，抑制心肌缺血-再灌注損傷。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)比可知，結(jié)扎犬冠狀動(dòng)脈后60min到結(jié)扎后ISOmin期間(即給藥后45min到藥后165min期間)，各藥物組犬心外膜電圖ST段抬高總數(shù)(Σ -ST)持續(xù)下降，與模型組比較均有顯著性差異；恢復(fù)再灌注后，各藥物組Σ -ST與模型組比較亦顯著降低。丹酚酸A組合物各劑量組之間存在一定量效關(guān)系，丹酚酸A組合物中劑量組Σ -ST下降幅度與0.5mg/kg注射用鹽酸地爾硫卓組相當(dāng)，丹酚酸A組合物比同劑量丹酚酸A單體化合物組的Σ -ST下降更明顯。提示丹酚酸A組合物能減輕實(shí)驗(yàn)缺血-再灌注犬的心肌缺血程度，且效果優(yōu)于同劑量丹酚酸A單體化合物。提示其能保護(hù)心肌缺血損傷，對(duì)缺血性心臟病具有良好的治療作用。
經(jīng)過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)比可知，結(jié)扎犬冠狀動(dòng)脈后60min到結(jié)扎后ISOmin期間(即給藥后45min到藥后165min期間)，各藥物組犬心外膜電圖N-ST仍持續(xù)降低，且與模型組比較均有顯著性差異；恢復(fù)再灌注后，各藥物組N-ST與模型組比較亦顯著降低。丹酚酸A組合物各劑量組之間存在一定量效關(guān)系，丹酚酸A組合物中劑量組N-ST減少率與0.5mg/kg注射用鹽酸地爾硫卓組相當(dāng)，丹酚酸A組合物比同劑量丹酚酸A單體化合物組的N-ST減少明顯。提示丹酚酸A組合物能減少實(shí)驗(yàn)缺血-再灌注犬的心肌缺血范圍，且效果優(yōu)于同劑量丹酚酸A單體化合物。提示其能保護(hù)心肌缺血損傷，對(duì)缺血性心臟病具有良好的治療作用。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)比可知，模型組犬心肌缺血-再灌注后，心肌梗死較重。丹酚酸A組合物、注射用鹽酸地爾硫卓、丹酚酸A單體化合物均能顯著減少實(shí)驗(yàn)犬心肌梗死范圍，且以丹酚酸A組合物高劑量組犬心肌梗死比值最小，丹酚酸A組合物中劑量組心肌梗死范圍小于同劑量丹酚酸A單體化合物組。與模型組比較，丹酚酸A組合物高、中劑量組能極顯著減少梗死心肌占心臟及心室的比重，丹酚酸A組合物低劑量犬心肌梗死區(qū)占心臟及心室的比重亦明顯降低，提示丹酚酸A組合物能劑量依賴性地縮小實(shí)驗(yàn)犬心肌梗死范圍，能保護(hù)心肌缺血-再灌注損傷，用于治療缺血性心臟病。且效果優(yōu)于同劑量丹酚酸A單體化合物。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)比可知，結(jié)扎犬冠狀動(dòng)脈形成心肌缺血，給藥后45min至給藥后225min(即結(jié)扎60min至240min)，各藥物治療組冠脈流量與給藥前比較，增加了 25.3% 52.6%之間；以丹酚酸A組合物高、中劑量組、注射用鹽酸地爾硫卓組最為顯著，增幅分別為52.6%,40.2%,36.7%。丹酚酸A組合物中劑量組增幅高于同劑量丹酚酸A單體化合物組。提示丹酚酸A組合物能促進(jìn)側(cè)枝循環(huán)開放，增加心肌缺血時(shí)的冠脈血流量，從而對(duì)抗心肌缺血，保護(hù)心肌缺血損傷，提示其在防治缺血性心臟病方面有一定的用途。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)比可知，丹酚酸A組合物給藥后15min(即缺血30min)能顯著抑制LVEDP升高、抑制土 dp/dtmax下降、抑制犬LVW減少、降低TPR，給藥后45min (即缺血60min后)能顯著抑制CO下降；呈劑量依賴性；有優(yōu)于同劑量丹酚酸A單體化合物的趨勢(shì)。提示丹酚酸A組合物給藥后，能改善心肌缺血犬血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)犬的心肌收縮力、改善心肌舒縮功能，降低外周阻力，抑制心輸出量減少、提高心臟的泵血功能，改善心肌血液供應(yīng)，改善心肌缺血狀態(tài)及心功能，發(fā)揮抗心肌缺血作用。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)比可知，心肌缺血模型組犬血清中CK、LDH、AST、CK-MB顯著升高，說明結(jié)扎冠脈缺血后，犬心肌線粒體破壞，心肌細(xì)胞損傷，心肌酶被釋放出來致血清中心肌酶活升高。丹酚酸A組合物各劑量組與模型組比較，能不同程度地降低犬心肌缺血4h后血清中CK、LDH、AST、CK-MB活性，且呈劑量依賴性；中劑量丹酚酸A組合物組比同劑量丹酚酸A單體化合物組效果更顯著。說明丹酚酸A組合物能能穩(wěn)定心肌細(xì)胞膜，減少心肌缺血損傷時(shí)心肌酶的溢出，對(duì)缺血心肌具有明顯保護(hù)作用。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)比可知，模型組犬在缺血4h后，血清中游離脂肪酸(FFA)、過氧化脂質(zhì)(LPO)顯著升高，提示心肌缺血后心肌脂肪酸代謝出現(xiàn)障礙，將會(huì)抑制葡萄糖氧化主要酶的活性，從而增加心肌耗氧量，擴(kuò)大心肌梗塞范圍。而丹酚酸A組合物各劑量組與模型組比較，能顯著降低心肌缺血犬血清中FFA、LP0含量，且呈劑量依賴關(guān)系。提示丹酚酸A組合物能顯著抑制血清中FFA水平升高，改善心肌脂肪酸代謝，降低乳酸的堆積，增加單位氧耗的產(chǎn)能量，降低心肌耗氧量，從而改善心功能，抑制心肌梗塞范圍，保護(hù)心肌缺血損傷。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)比可知，模型組犬心肌缺血4h后血清中MDA含量顯著升高，S0D、GSH-Px活性顯著下降，提示犬心肌缺血后，氧自由基生成明顯增加，體內(nèi)清除氧自由基的酶活顯著降低，而氧自由基會(huì)通過一系列氧化反應(yīng)影響細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)和功能，加劇心肌缺血損傷程度。丹酚酸A組合物各劑量組與模型組比較，能顯著降低心肌缺血犬血清中MDA的含量，同時(shí)使血清中SOD、GSH-Px活性明顯增強(qiáng)，且呈一定的劑效關(guān)系；提示丹酚酸A組合物能通過某種機(jī)制抑制脂質(zhì)過氧化過程，減少氧自由基生成，同時(shí)又能提高內(nèi)源性抗氧化酶活性而減輕氧自由基對(duì)心肌的損傷，提高缺血心肌的抗氧化能力而發(fā)揮抗心肌缺血作用。且效果優(yōu)于同劑量丹酚酸A單體化合物。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)比可知，不同劑量的丹酚酸A組合物能不同程度地減少心肌耗氧量以及氧利用率，其中丹酚酸A組合物高、中劑量組缺血120min (即給藥后105min)氧利用率較給藥前分別降低了近20%、16%。說明丹酚酸A組合物能降低心肌耗氧量及氧利用率，改善心肌氧的供需平衡，改善心室功能，發(fā)揮保護(hù)缺血心肌的作用，防治心肌缺血。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)比可知，不同劑量丹酚酸A組合物能使心肌缺血犬血液粘度、血漿粘度、紅細(xì)胞壓積及血小板粘附率不同程度地降低，明顯降低血漿中纖維蛋白含量；各劑量組之間呈一定劑效趨勢(shì)；提示丹酚酸A組合物能降低血粘度，抑制血小板粘附聚集，預(yù)防血管內(nèi)血栓形成，改善心肌缺血犬血液流變學(xué)，改善微循環(huán)，能用于防治缺血性心臟病。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)比可知 ，不同劑量的丹酚酸A組合物能顯著減輕大鼠血栓濕、干重，對(duì)血栓形成具有明顯的抑制作用；各劑量組之間呈一定的量效關(guān)系，且抑制效果優(yōu)于同劑量丹酚酸A單體化合物。提示丹酚酸A組合物具有抑制大鼠體內(nèi)血栓形成的作用，提示其可用于防治血栓所致的缺血性心臟病。醫(yī)學(xué)和藥學(xué)研究人員無法預(yù)先在不做相關(guān)實(shí)驗(yàn)的前提下，預(yù)先得知丹酚酸A組合物具有上述的良好用途。


圖1.丹酚酸A核磁共振氫譜圖；圖2.丹酚酸A核磁共振碳譜圖；圖3.紫草酸核磁共振氫譜圖；圖4.紫草酸核磁共振碳譜圖；圖5.迷迭香酸核磁共振氫譜圖；圖6.迷迭香酸核磁共振碳譜圖；圖7.丹酚酸B核磁共振氫譜圖；圖8.丹酚酸B核磁共振碳譜圖；圖9.丹酚酸C核磁共振氫譜圖；圖10.丹酚酸C核磁共振碳譜圖；圖11.混合對(duì)照品溶液HPLC圖；圖12.紫草酸對(duì)照品溶液HPLC圖；圖13.迷迭香酸對(duì)照品溶液HPLC圖；圖14.丹酚酸B對(duì)照品溶液HPLC圖；圖15.丹酚酸A對(duì)照品溶液HPLC圖；圖16.丹酚酸C對(duì)照品溶液HPLC圖17.丹酚酸A組合物樣品HPLC具體實(shí)施例方式實(shí)施例1取丹參藥材，粉碎成6目顆粒，每次加7倍量92°C水，溫浸提取3次，同時(shí)以25轉(zhuǎn)/分速度攪拌，每次溫浸提取3小時(shí)；提取液減壓濃縮至相對(duì)密度1.20 (600C )，加入乙醇使含醇量在70%，靜置，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至無醇味；加水稀釋至每Iml含丹酚酸B20mg，水溶液用10%氫氧化鈉調(diào)pH至4.0，加入0.5% ZnCl2作為催化劑，120°C溫度加熱轉(zhuǎn)化4小時(shí)，轉(zhuǎn)化液用20%磷酸調(diào)pH值至2.5，離心，上清液減壓濃縮至每Iml含丹酚酸A3mg，經(jīng)HPD-100大孔樹脂柱層析分離，丹酚酸A上樣量與大孔吸附樹脂比為1: 50，樹脂柱徑高比為1: 10，分別用3倍柱體積水、5倍柱體積25%乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用4倍柱體積40%乙醇洗脫，HPLC檢測(cè)，收集含有丹酚酸A的40%乙醇洗脫部分，減壓回收乙醇并濃縮至無醇味；水溶液濃縮至每ml含5mg丹酚酸A的溶液，通過聚酰胺層析柱分離，丹酚酸A上樣量與聚酰胺比為1: 10，樹脂柱徑高比為1: 8，分別用3倍柱體積水、12倍柱體積40%乙醇溶液洗脫除雜，再用8倍柱體積60%乙醇溶液洗脫，收集含有丹酚酸A的60%乙醇溶液部分，減壓回收乙醇并濃縮至每Iml含丹酚酸A15mg水溶液；水溶液用20%磷酸調(diào)PH至2.5，用水溶液3倍量的叔丁基甲基醚，分3次萃取，分離有機(jī)層，減壓回收叔丁基甲基醚，制成每Iml含丹酚酸A0.5g的萃取液，加入I 3倍量硅膠，攪拌，揮干；把攪拌樣硅膠加到已裝好的15倍量干硅膠柱上，硅膠柱徑高比為1: 10，以正戊烷-叔丁基甲基醚為洗脫劑，梯度洗脫，分別用正戊烷:叔丁基甲基醚(4: 6)洗脫10倍柱體積，正戊烷:叔丁基甲基醚出:4)洗脫10倍柱體積，減壓回收洗脫劑，回收有機(jī)溶劑后的丹酚酸A加12倍量水溶解，用微波真空干燥(干燥溫度50°C，回差溫度4°C，真空度-0.07Mpa以上，微波功率60KW) 130分鐘， 得丹酚酸A組合物。經(jīng)測(cè)定，所述丹酚酸A組合物中丹酚酸A含量為94.57 %，紫草酸含量0.663 %;迷迭香酸含量1.16% ;丹酚酸B含量1.24% ;丹酚酸C含量1.48%。實(shí)施例2取丹參藥材，粉碎成直徑約2mm顆粒，每次加7倍量90°C水，溫浸提取3次，同時(shí)以25轉(zhuǎn)/分速度攪拌，每次溫浸提取3小時(shí)；提取液減壓濃縮至相對(duì)密度1.17(60°C)，加入乙醇使含醇量在70%，靜置，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至無醇味；加水稀釋至每Iml含丹酚酸B20mg，水溶液用10%氫氧化鈉調(diào)pH至3.5，加入0.5% ZnCl2作為催化劑，120°C溫度加熱轉(zhuǎn)化4小時(shí)，轉(zhuǎn)化液用20%磷酸調(diào)pH值至2.5，離心，上清液減壓濃縮至每Iml含丹酚酸A3mg，經(jīng)HPD-100大孔樹脂柱層析分離，丹酚酸A上樣量與大孔吸附樹脂比為1: 50，樹脂柱徑高比為1: 10，分別用3倍柱體積水、5倍柱體積25%乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用4倍柱體積40%乙醇洗脫，HPLC檢測(cè)，收集含有丹酚酸A的40%乙醇洗脫部分，減壓回收乙醇并濃縮至無醇味；水溶液濃縮至每ml含5mg丹酚酸A的溶液，通過聚酰胺層析柱分離，丹酚酸A上樣量與聚酰胺比為1: 10，樹脂柱徑高比為1: 8，分別用3倍柱體積水、12倍柱體積40%乙醇溶液洗脫除雜，再用8倍柱體積60%乙醇溶液洗脫，收集含有丹酚酸A的60%乙醇溶液部分，減壓回收乙醇并濃縮至每Iml含丹酚酸A15mg水溶液；水溶液用20%磷酸調(diào)pH至2.5，用水溶液3倍量的叔丁基甲基醚，分3次萃取，分離有機(jī)層，減壓回收叔丁基甲基醚，制成每Iml含丹酹酸A0.5g的萃取液,加入I 3倍量娃膠,攪拌,揮干；把攪拌樣娃膠加到已裝好的15倍量干硅膠柱上，硅膠柱徑高比為1: 10，以正戊烷-叔丁基甲基醚為洗脫劑，梯度洗脫，分別用正戊烷-叔丁基甲基醚(4: 6)洗脫10倍柱體積，正戊烷-叔丁基甲基醚出:4)洗脫10倍柱體積，減壓回收洗脫劑，回收有機(jī)溶劑后的丹酚酸A加10倍量水溶解，用微波真空干燥(干燥溫度60°C，回差溫度2°C，真空度-0.07Mpa以上，微波功率40KW) 110分鐘，得丹酚酸A組合物。經(jīng)測(cè)定，所述丹酚酸A組合物中丹酚酸A含量為94.63%，紫草酸含量0.69% ;迷迭香酸含量1.12% ;丹酚酸B含量1.20% ;丹酚酸C含量1.48%。實(shí)施例3取丹參藥材，切成飲片，每次加8倍量85°C水溫浸提取3次，同時(shí)以20轉(zhuǎn)/分速度攪拌，每次溫浸提取2.5小時(shí)；提取液減壓濃縮至相對(duì)密度1.18(60°C )，加入乙醇使含醇量在75%，靜置，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至無醇味；加水稀釋至每Iml含丹酚酸B15mg，水溶液用10%氫氧化鉀調(diào)pH至5.0，加入0.6% ZnC12作為催化劑，在120°C溫度加熱轉(zhuǎn)化3.5小時(shí)，轉(zhuǎn)化液用15%鹽酸調(diào)pH值至2.5，離心，上清液減壓濃縮至每Iml含丹酚酸A5mg，經(jīng)HPD-100大孔樹脂柱層析分離，丹酚酸A上樣量與大孔吸附樹脂比為1: 45，樹脂柱徑高比為1: 8，分別用3.5倍柱體積水、4倍柱體積25%乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用5倍柱體積45%乙醇洗脫，HPLC檢測(cè)，收集含有丹酚酸A的45%乙醇洗脫部分，減壓回收乙醇并濃縮至無醇味；水溶液濃縮至每ml含5mg丹酚酸A的溶液，通過聚酰胺層析柱分離，丹酚酸A上樣量與聚酰胺比為1: 9，樹脂柱徑高比為1: 7，分別用4倍柱體積水、10倍柱體積40%乙醇溶液洗脫除雜，再用8倍柱體積65%乙醇溶液洗脫，收集含有丹酚酸A的65%乙醇溶液部分，減壓回收乙醇并濃縮至每Iml含丹酚酸A12mg水溶液；水溶液用15%鹽酸調(diào)pH至2.6，用4倍量的叔丁基甲基醚，分4次萃取，分離有機(jī)層，減壓回收叔丁基甲基醚，制成每Iml含丹酚酸A0.8g的萃取液，加入2 3倍量硅膠，攪拌，揮干；把攪拌樣硅膠加到已裝好的13倍量干硅膠柱上，硅膠柱徑高比為1: 8，以正戊烷叔丁基甲基醚為洗脫劑，梯度洗脫，分別用正戊烷-叔丁基甲基醚(4: 6)洗脫8倍柱體積，正戊烷-叔丁基甲基醚(6: 4)洗脫8倍柱體積，減壓回收洗脫劑，回收有機(jī)溶劑后的丹酚酸A加8倍量水溶解，用微波真空干燥(干燥溫度50°C，回差溫度5°C，真空度-0.07Mpa以上，微波功率80KW) 90分鐘，得丹酚酸A組合物。經(jīng)測(cè)定，所述丹酚酸A組合物中丹酚酸A含量為94.68%，紫草酸含量0.68% ;述迭香酸含量1.07% ;丹酚酸B含量1.19% ;丹酚酸C含量1.47%。實(shí)施例4取丹參藥材，粉碎成直徑約2mm顆粒，每次加9倍量85°C水溫浸提取2次，同時(shí)以30轉(zhuǎn)/分速度攪拌，每次溫浸提取3.5小時(shí)；提取液減壓濃縮至相對(duì)密度1.20 (600C )，加入乙醇使含醇量在75%，靜置，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至無醇味；加水稀釋至每Iml含丹酚酸B18mg，水溶液用10%碳酸鈉調(diào)pH至5.2，加入0.6% ZnCl2作為催化劑，在123°C溫度加熱轉(zhuǎn)化4.5小時(shí)，轉(zhuǎn)化液用15%硝酸調(diào)pH值至2.8，離心，上清液減壓濃縮至每Iml含丹酚酸A6mg，經(jīng)HPD-100大孔樹脂柱層析分離，丹酚酸A上樣量與大孔吸附樹脂比為1: 40，樹脂柱徑高比為1: 7，分別用4倍柱體積水、4倍柱體積25%乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用5倍柱體積40%乙醇洗脫，HPLC檢測(cè)，收集含有丹酚酸A的40%乙醇洗脫部分，減壓回收乙醇并濃縮至無醇味；水溶液濃縮至每ml含6mg丹酚酸A的溶液，通過聚酰胺層析柱分離，丹酚酸A上樣量與聚酰胺比為1: 8，樹脂柱徑高比為1: 8，分別用4倍柱體積水、9倍柱體積40%乙醇溶液洗脫除雜，再用7倍柱體積65%乙醇溶液洗脫，收集含有丹酚酸A的65%乙醇溶液部分，減壓回收乙醇并濃縮至每Iml含丹酚酸AlOmg水溶液；水溶液用15%硝酸調(diào)pH至2.6，用4倍量的叔丁基甲基醚，分4次萃取，分離有機(jī)層，減壓回收乙酸甲酯，制成每Iml含丹酚酸A0.7g的萃取液，加入3倍量硅膠，攪拌，揮干；把攪拌樣硅膠加到已裝好的10倍量干硅膠柱上，硅膠柱徑高比為1: 7，以正戊烷-叔丁基甲基醚為洗脫劑，梯度洗脫，分別用正戊烷-叔丁基甲基醚(4: 6)洗脫8倍柱體積，正戊烷-叔丁基甲基醚(6: 4)洗脫9倍柱體積，減壓回收洗脫劑，回收有機(jī)溶劑后的丹酚酸A加8倍量水溶解，用微波真空干燥(干燥溫度70°C，回差溫度1°C，真空度-0.07Mpa以上，微波功率20KW) 100分鐘，得丹酚酸A組合物。經(jīng)測(cè)定，所述丹酚酸A組合物中丹酚酸A含量為94.72%，紫草酸含量0.62% ;迷迭香酸含量1.10% ;丹酚酸B含量1.28% ;丹酚酸C含量1.46%。實(shí)施例5 取丹參藥材，切成飲片，每次加10倍量80°C水溫浸提取3次，同時(shí)以15轉(zhuǎn)/分速度攪拌，每次溫浸提取3小時(shí)；提取液減壓濃縮至相對(duì)密度1.19 (600C )，加入乙醇使含醇量在70%，靜置，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至無醇味；加水稀釋至每Iml含丹酚酸B20mg，水溶液用10%碳酸氫鈉調(diào)pH至4.4，加入0.8% ZnC12作為催化劑，在128°C溫度加熱轉(zhuǎn)化4.0小時(shí)，轉(zhuǎn)化液用20%硫酸調(diào)pH值至2.6，離心，上清液減壓濃縮至每Iml含丹酚酸A5mg，經(jīng)HPD-100大孔樹脂柱層析分離，丹酚酸A上樣量與大孔吸附樹脂比為1: 40，樹脂柱徑高比為1: 7，分別用4倍柱體積水、4倍柱體積25%乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用5倍柱體積40%乙醇洗脫，HPLC檢測(cè)，收集含有丹酚酸A的40%乙醇洗脫部分，減壓回收乙醇并濃縮至無醇味；水溶液濃縮至每ml含6mg丹酚酸A的溶液，通過聚酰胺層析柱分離，丹酚酸A上樣量與聚酰胺比為1: 10，樹脂柱徑高比為1: 15，分別用4倍柱體積水、7倍柱體積35%乙醇溶液洗脫除雜，再用6倍柱體積60%乙醇溶液洗脫，收集含有丹酚酸A的60%乙醇溶液部分，減壓回收乙醇并濃縮至每Iml含丹酚酸A12mg水溶液；水溶液用20%硫酸調(diào)pH至2.8，用4倍量的叔丁基甲基醚，分4次萃取，分離有機(jī)層，減壓回收叔丁基甲基醚，制成每Iml含丹酚酸A0.5g的萃取液，加入2.5倍量硅膠，攪拌，揮干；把攪拌樣硅膠加到已裝好的9倍量干硅膠柱上，硅膠柱徑高比為1: 8，以正戊烷:叔丁基甲基醚為洗脫劑，梯度洗脫，分別用正戊烷-叔丁基甲基醚(4: 6)洗脫8倍柱體積，正戊烷-叔丁基甲基醚(6: 4)洗脫8倍柱體積，減壓回收洗脫劑，回收有機(jī)溶劑后的丹酚酸A加10倍量水溶解，用微波真空干燥(干燥溫度50°C，回差溫度2V，真空度-0.07Mpa以上，微波功率30KW) 110分鐘，得丹酚酸A組合物。經(jīng)測(cè)定，所述丹酚酸A組合物中丹酚酸A含量為96.13%，紫草酸含量0.55% ;迷迭香酸含量1.00% ;丹酚酸B含量1.02% ;丹酚酸C含量1.34%。實(shí)施例6取丹參藥材，粉碎成直徑約2mm顆粒，每次加9倍量85°C水溫浸提取3次，同時(shí)以20轉(zhuǎn)/分速度攪拌，每次溫浸提取2.5小時(shí)；提取液減壓濃縮至相對(duì)密度1.25 (600C )，加入乙醇使含醇量在70%，靜置，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至無醇味；加水稀釋至每Iml含丹酚酸BlOmg，水溶液用20%檸檬酸鈉調(diào)pH至5.5，加入0.4% ZnCl2作為催化劑，在132°C溫度加熱轉(zhuǎn)化3.5小時(shí)，轉(zhuǎn)化液用20%醋酸調(diào)pH值至2.6，離心，上清液減壓濃縮至每Iml含丹酚酸A5mg，經(jīng)HPD-100大孔樹脂柱層析分離，丹酚酸A上樣量與大孔吸附樹脂比為1: 35，樹脂柱徑高比為1: 8，分別用3倍柱體積水、4.5倍柱體積25%乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用6倍柱體積40%乙醇洗脫，HPLC檢測(cè)，收集含有丹酚酸A的40%乙醇洗脫部分，減壓回收乙醇并濃縮至無醇味；水溶液濃縮至每ml含8mg丹酚酸A的溶液，通過聚酰胺層析柱分離，丹酚酸A上樣量與聚酰胺比為1: 12，樹脂柱徑高比為1: 18，分別用4倍柱體積水、8倍柱體積30%乙醇溶液洗脫除雜，再用5倍柱體積65%乙醇溶液洗脫，收集含有丹酚酸A的65%乙醇溶液部分，減壓回收乙醇并濃縮至每Iml含丹酚酸A15mg水溶液；水溶液用20%醋酸調(diào)pH至2.7，用5倍量的叔丁基甲基醚，分5次萃取，分離有機(jī)層，減壓回收叔丁基甲基醚，制成每Iml含丹酚酸A0.5g的萃取液，加入2倍量硅膠，攪拌，揮干；把攪拌樣硅膠加到已裝好的10倍量干硅膠柱上，硅膠柱徑高比為1: 10，以正戊烷、叔丁基甲基醚為洗脫劑，梯度洗脫，分別用正戊烷-叔丁基甲基醚(4: 6)洗脫8倍柱體積，正戊烷-叔丁基甲基醚出:4)洗脫8倍柱體積，減壓回收洗脫劑，回收有機(jī)溶劑后的丹酚酸A加12倍量水溶解，用微波真空干燥(干燥溫度65°C，回差溫度5°C，真空度-0.07Mpa以上，微波功率90KW) 80分鐘，得丹酚酸A組合物。經(jīng)測(cè)定，所述丹酚酸A組合物中丹酚酸A含量為94.64%，紫草酸含量0.69% ;迷迭香酸含量1.05% ;丹酚酸B含量1.11% ;丹酚酸C含量1.47%。實(shí)施例7取丹參藥材，粉碎成直徑約2mm顆粒，每次加9倍量88°C水溫浸提取3次，同時(shí)以22轉(zhuǎn)/分速度攪拌，每次溫浸提取3.5小時(shí)；提取液減壓濃縮至相對(duì)密度1.23 (600C )，加入乙醇使含醇量在75%，靜置，濾過·，濾液減壓回收乙醇并濃縮至無醇味；加水稀釋至每Iml含丹酚酸B13mg，水溶液用10%氫氧化鈉調(diào)pH至3.6，加入0.5% ZnCl2作為催化劑，在133°C溫度加熱轉(zhuǎn)化4.5小時(shí)，轉(zhuǎn)化液用10%鹽酸調(diào)pH值至2.7，離心，上清液減壓濃縮至每Iml含丹酚酸A5mg，經(jīng)HPD-100大孔樹脂柱層析分離，丹酚酸A上樣量與大孔吸附樹脂比為1: 40，樹脂柱徑高比為1: 9，分別用4倍柱體積水、4倍柱體積22%乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用6倍柱體積43%乙醇洗脫，HPLC檢測(cè)，收集含有丹酚酸A的43%乙醇洗脫部分，減壓回收乙醇并濃縮至無醇味；水溶液濃縮至每ml含IOmg丹酚酸A的溶液，通過聚酰胺層析柱分離，丹酚酸A上樣量與聚酰胺比為1: 15，樹脂柱徑高比為1: 20，分別用4倍柱體積水、8倍柱體積30%乙醇溶液洗脫除雜，再用5倍柱體積60%乙醇溶液洗脫，收集含有丹酚酸A的60%乙醇溶液部分，減壓回收乙醇并濃縮至每Iml含丹酚酸A12mg水溶液；水溶液用10%鹽酸調(diào)pH至2.8，用5倍量的叔丁基甲基醚，分5次萃取，分離有機(jī)層，減壓回收叔丁基甲基醚，制成每Iml含丹酚酸A0.5g的萃取液，加入3倍量硅膠，攪拌，揮干；把攪拌樣硅膠加到已裝好的12倍量干硅膠柱上，硅膠柱徑高比為1: 10，以正戊烷、叔丁基甲基醚為洗脫劑，梯度洗脫，分別用正戊烷-叔丁基甲基醚(4: 6)洗脫6倍柱體積，正戊烷-叔丁基甲基醚出:4)洗脫7倍柱體積，減壓回收洗脫劑，回收有機(jī)溶劑后的丹酚酸A加10倍量水溶解，用微波真空干燥(干燥溫度55°C，回差溫度3°C，真空度-0.07Mpa以上，微波功率50KW) 120分鐘，得丹酚酸A組合物。經(jīng)測(cè)定，所述丹酚酸A組合物中丹酚酸A含量為94.72%，紫草酸含量0.70% ;迷迭香酸含量1.16% ;丹酚酸B含量1.24% ;丹酚酸C含量1.47%。實(shí)施例8取丹參藥材，切成飲片，每次加9倍量90°C水溫浸提取3次，同時(shí)以25轉(zhuǎn)/分速度攪拌，每次溫浸提取3小時(shí)；提取液減壓濃縮至相對(duì)密度1.08 (600C )，加入乙醇使含醇量在75%，靜置，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至無醇味；加水稀釋至每Iml含丹酚酸B20mg，水溶液用10%碳酸鈉調(diào)pH至3.5，加入1.0% ZnCl2作為催化劑，在135°C溫度加熱轉(zhuǎn)化4.5小時(shí)，轉(zhuǎn)化液用15%硫酸調(diào)pH值至3.0,離心,上清液減壓濃縮至每Iml含丹酹酸A5mg,經(jīng)HPD-100大孔樹脂柱層析分離，丹酚酸A上樣量與大孔吸附樹脂比為1: 36，樹脂柱徑高比為1: 9，分別用3倍柱體積水、4倍柱體積25%乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用5倍柱體積45%乙醇洗脫，HPLC檢測(cè)，收集含有丹酚酸A的45%乙醇洗脫部分，減壓回收乙醇并濃縮至無醇味；水溶液濃縮至每Iml含6mg丹酚酸A的溶液，通過聚酰胺層析柱分離，丹酚酸A上樣量與聚酰胺比為1: 10，樹脂柱徑高比為1: 10，分別用4倍柱體積水、8倍柱體積45%乙醇溶液洗脫除雜，再用8倍柱體積65%乙醇溶液洗脫，收集含有丹酚酸A的65%乙醇溶液部分，減壓回收乙醇并濃縮至每Iml含丹酚酸AlOmg水溶液；水溶液用15%硫酸調(diào)pH至2.7，用4倍量的叔丁基甲基醚，分4次萃取，分離有機(jī)層，減壓回收叔丁基甲基醚，制成每Iml含丹酚酸A0.6g的萃取液，加入3倍量硅膠，攪拌，揮干；把攪拌樣硅膠加到已裝好的10倍量干硅膠柱上，硅膠柱徑高比為1: 8，以正戊烷、叔丁基甲基醚為洗脫劑，梯度洗脫，分別用正戊烷-叔丁基甲基醚(4: 6)洗脫8倍柱體積，正戊烷-叔丁基甲基醚出:4)洗脫8倍柱體積，減壓回收洗脫劑，回收有機(jī)溶劑后的丹酚酸A加8倍量水溶解，用微波真空干燥(干燥溫度50°C，回差溫度2 V，真空度-0.07Mpa以上，微波功率60KW) 120分鐘，得丹酚酸A組合物。經(jīng)測(cè)定，所述丹酚酸A組合物中丹酚酸A含量為94.84%，紫草酸含量0.63% ;迷迭香酸含量1.12% ;丹酚酸B含量1.25% ;丹酚酸C含量1.47%。實(shí)驗(yàn)例1:丹酚酸A組合物分析方法及分離、結(jié)構(gòu)鑒定研究一、丹酚酸A組合物分析方法研究1.儀器與試藥儀器:Waters e2695高效液相色譜儀，Empower2色譜工作站,2998 二極管陣列檢測(cè)器；Sartorius cp225D十萬分之一電子天平。色譜柱:YMCC18 色譜柱(250 X 4.6mm，5 μ m)；試劑:甲醇為色譜純，水為Millipore制備的超純水，其他試劑均為分析純。迷迭香酸對(duì)照品、丹酚酸B對(duì)照品均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用；紫草酸對(duì)照品、丹酚酸C對(duì)照品均購(gòu)自上海海燦生物科技有限公司，丹酚酸A對(duì)照品為自制，經(jīng)純度標(biāo)化含量為99.52%。2.對(duì)照品溶液及供試品溶液的制備2.1對(duì)照品溶液的制備:分別精密稱取紫草酸對(duì)照品約10.0Omg、迷迭香酸對(duì)照品約10.0Omg、丹酚酸B對(duì)照品約10.0Omg、丹酚酸C對(duì)照品約10.0Omg、丹酚酸A對(duì)照品約10.00mg，置不同IOOm l量瓶中，分別加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取紫草酸對(duì)照品、迷迭香酸對(duì)照品、丹酚酸B對(duì)照品、丹酚酸C對(duì)照品各IOml，置不同IOOml量瓶中，分別加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。精密吸取上述儲(chǔ)備溶液各10ml，置同一 100ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為混合對(duì)照品溶液。2.3供試品溶液的制備精密稱取實(shí)施例1樣品約10.0Omg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，精密吸取IOml至IOOml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。3.色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流速1.0ml/min ;檢測(cè)波長(zhǎng):286nm ;柱溫300C ;理論板數(shù)按丹酚酸A峰計(jì)算應(yīng)不低于10000。O 10分鐘時(shí)，甲醇的比例由30%升至40%，0.1 0.5%磷酸水溶液的比例由70%降至60% ;10 30分鐘時(shí)，甲醇的比例由40%升至55%，0.1 0.5%磷酸水溶液的比例由50%降至45% ；30 60分鐘時(shí)，甲醇的比例由55%升至80%，0.1 0.5%磷酸水溶液的比例由45 %降至20 %。在上述條件下，5個(gè)對(duì)照品的色譜峰保留時(shí)間見表I，HPLC圖譜見圖11 17。表1.各對(duì)照品的色譜峰保留時(shí)間結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種丹酚酸A組合物用于制備預(yù)防和治療缺血性心臟病藥物的用途，其中所述的組合物中丹酚酸A含量大于93%，小于100 %，以及按下述重量配比還包括4個(gè)其他成分:紫草酸0.1 % 2%，迷迭香酸0.1 % 2%，丹酚酸B0.1 % 2%，丹酚酸C0.1% 2%，所述丹酚酸A組合物采用下制備方法獲得: 取丹參藥材，切成飲片或粉碎成直徑約Imm 5mm顆粒，每次加3 15倍量、45 95°C水溫浸提取，同時(shí)以10 50轉(zhuǎn)/分速度攪拌，或加3 15倍量水煎煮提取，共提取I 3次，每次提取I 4小時(shí) ；提取液減壓濃縮至相對(duì)密度1.0 1.25 (600C )，加入乙醇使含醇量在50% 85%，靜置，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至無醇味，得丹參提取液；或者 取丹參藥材，切成飲片或粉碎成直徑約Imm 5mm顆粒，每次加3 15倍量30% 60%乙醇回流提取，每次提取I 4小時(shí)，共提取I 3次；減壓回收乙醇并濃縮至無醇味，得丹參提取液； 上述丹參提取液加水稀釋至每Iml含丹酚酸BI 30mg，水溶液用堿調(diào)pH至3.5 6.5，加入與丹酚酸B摩爾百分比0.1 3%氯化鋅作為催化劑，在100 140°C溫度加熱轉(zhuǎn)化I 6小時(shí)； 轉(zhuǎn)化液調(diào)PH值至2.5 4.5，靜置、離心，上清液減壓濃縮至每Iml含丹酚酸Al 10mg，經(jīng)HPD-100大孔樹脂柱層析分離，丹酚酸A上樣量與大孔吸附樹脂比為1: 35 I: 70，樹脂柱徑高比為1: 4 1: 30，分別用I 8倍柱體積水、I 10倍柱體積10% 40%乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用2 10倍柱體積20% 60%乙醇洗脫，HPLC檢測(cè)，收集含有丹酚酸A的20% 60%乙醇洗脫部分，減壓回收乙醇并濃縮至無醇味； 水溶液濃縮至每Iml含1-1Omg丹酚酸A的溶液，通過聚酰胺層析柱分離，丹酚酸A上樣量與聚酰胺比為1: 5 1: 25，樹脂柱徑高比為1: 4 1: 25，分別用I 10倍柱體積水、5 20倍柱體積20% 60%乙醇溶液洗脫除雜，再用4 15倍柱體積40% 90%乙醇溶液洗脫，收集含有丹酚酸A的40% 90%乙醇溶液部分，減壓回收乙醇并濃縮至無醇味水溶液； 水溶液濃縮，調(diào)酸pH至2.0 4.0，用水溶液1-8倍量的叔丁基甲基醚，分2 6次萃取，分離有機(jī)層，減壓回收叔丁基甲基醚，制成每Iml含丹酹酸Alg IOg的萃取液,加入I 3倍量硅膠，攪拌，揮干； 把攪拌樣硅膠加到已裝好的5 20倍量干硅膠柱上，硅膠柱徑高比為1: 4 1: 25，以正戊烷-叔丁基甲基醚為洗脫劑，梯度洗脫，分別用正戊烷-叔丁基甲基醚(4: 6)洗脫6 30倍柱體積，正戊烷-叔丁基甲基醚出:4)洗脫6 30倍柱體積，減壓回收洗脫劑，回收有機(jī)溶劑后的丹酚酸A加5 20倍量水溶解，微波真空干燥，得所述丹酚酸A組合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于微波真空干燥溫度:20-100°C，回差溫度1_5°C，真空度-0.07Mpa以上，微波功率1-100KW，干燥10-200分鐘。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于微波真空干燥溫度:50-85°C，回差溫度2-4°C，真空度-0.07Mpa以上，微波功率10-80KW，干燥100-150分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于微波真空干燥溫度:55-80°C，回差溫度2-3°C，真空度-0.07Mpa以上，微波功率25-60KW，干燥120-140分鐘。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述用于預(yù)防和治療缺血性心臟病的病癥包括以下一種或幾種:冠心病、心絞痛、缺血性心肌病、心肌梗死、心肌缺血性卒中、急性冠狀動(dòng)脈綜合癥、冠狀動(dòng)脈狹窄、心肌缺血再灌注損傷、動(dòng)脈粥樣硬化。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或5的用途，其中所述丹酚酸A組合物用于改善缺血心臟血流動(dòng)力學(xué)的用途。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的用途，其中所述丹酚酸A組合物用于改善缺血性心臟心功能的用途。
8.根據(jù)權(quán)利要求6的用途，其中所述的丹酚酸A組合物用于增加缺血性心臟的冠脈血流量的用途。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或5的用途，其中所述的丹酚酸A組合物用于減少缺血性心臟心肌梗死范圍的用途。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的用途，其中所述的丹酚酸A組合物用于縮小心肌缺血范圍的用途。
11.根據(jù)權(quán)利要求9的用途，其中所述的丹酚酸A組合物用于減輕心肌缺血程度的用途。
12.根據(jù)權(quán)利要求9的用途，其中所述的丹酚酸A組合物用于保護(hù)心肌細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)調(diào)節(jié)心肌酶活性的用途。
13.根據(jù)權(quán)利要求9的用途，其中所述的丹酚酸A組合物用于抑制缺血心肌組織炎癥反應(yīng)的用途。
14.根據(jù)權(quán)利要求9的用途，其中所述的丹酚酸A組合物用于保護(hù)心肌線粒體損傷的用途。
15.根據(jù)權(quán)利要求1或5的的用途，其中所述的丹酚酸A組合物用于改善心肌代謝的用途。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的用途，其中所述的丹酚酸A組合物用于改善心肌代謝的用途包括用于改善以下心肌代謝的一種或幾種:心肌氧自由基代謝、脂肪酸代謝、能量代謝。
17.根據(jù)權(quán)利要求1或5的用途，其中所述的丹酚酸A組合物用于降低心肌耗氧量的用途。
18.根據(jù)權(quán)利要求1或5的用途，其中所述的丹酚酸A組合物用于改善血液流變學(xué)的用途。
19.根據(jù)權(quán)利要求1或5的用途，其中所述的丹酚酸A組合物用于抑制血栓形成的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種丹酚酸A組合物用于制備預(yù)防和治療缺血性心臟病藥物的用途，該組合物由丹酚酸A、紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸C組成，其中所述的組合物是由下列重量配比制成丹酚酸A90％～99％，紫草酸0.1％～3％，迷迭香酸0.1％～3％，丹酚酸B0.1％～3％，丹酚酸C0.1％～5％。
文檔編號(hào)A61K31/343GK103142571SQ20121048709
公開日2013年6月12日 申請(qǐng)日期2012年11月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月20日
發(fā)明者廖祝元, 蔡元魁, 李志勇, 曾發(fā)林, 程帆, 王章偉, 湯新乾 申請(qǐng)人:陳飛虹