專利名稱：生物功能性蛋白大分子的兩親嵌段共聚物膠束及其制備和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有治療作用的生物功能性蛋白大分子的兩親嵌段共聚物膠束及其制備方法以及該膠束在藥物制劑中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
蛋白藥物是生物技術(shù)藥物中很重要的一類，一般通過靜脈和皮下注射給藥。經(jīng)靜脈和皮下注射后常伴有蛋白質(zhì)降解，導(dǎo)致活性降低，生物利用度低，要達(dá)到需要的血藥濃度和治療效果需要反復(fù)給藥，不僅給患者帶來不便，且易產(chǎn)生耐受性，耐藥性及免疫原性等不良反應(yīng)，因此臨床上需要研制長效的蛋白藥物制劑。目前延長蛋白藥物半衰期的方法主要基于三種原理:1、增大蛋白藥物的分子量，減少腎小球?yàn)V過率；2、用游離型藥物和結(jié)合型藥物在血漿內(nèi)形成平衡的特性，緩慢釋放游離型蛋白藥物，使結(jié)合型藥物和游離型物的平衡向游離型藥物方向移動(dòng)；3、減少異源蛋白免疫原性，從而減少其體內(nèi)清除率。方法主要有:構(gòu)建突變體，PEG化修飾，血清白蛋白融合，但制備過程比較復(fù)雜，成本較高。近幾年，聚合物膠束以其制備簡單，增加溶解及靶向作用等優(yōu)點(diǎn)被越來越多的研發(fā)機(jī)構(gòu)所關(guān)注。膠束粒徑一般小于lOOnm，可以避免體內(nèi)網(wǎng)狀內(nèi)皮組織(RES)的非選擇性截留，從而實(shí)現(xiàn)藥物的靶向供給，而且避免快速的腎臟消除。帶正電的膠束很容易和血液中白蛋白發(fā)生吸附作用，帶負(fù)電的有被血小板表面附著的傾向，而且電勢(shì)絕對(duì)值越大，越容易吸附。膠束接近中性的表面可以減少膠束和這些成分吸附，提高在血液中穩(wěn)定性。聚合物膠束由疏水內(nèi)核和親水外壁組成，具有很多優(yōu)點(diǎn)，如制備方法簡單，增加溶解及靶向作用等。PEG，PEO是常用的親水外壁，在膠束內(nèi)核和水相外界中提供一個(gè)穩(wěn)定的界面；PLA生物可降解性和 生物相容性良好；目前PEG-PLA，PEG-PCL，PEO-PLA等嵌段聚合物膠束主要用于解決疏水性藥物的溶解性，其中Sanyang公司Generol PM在韓國已經(jīng)上市，多柔比星與PEG-P(Asp)形成的聚合物膠束NK911在日本已經(jīng)進(jìn)入Phase II。但用于蛋白藥物包封的報(bào)道特別是用于生物功能性蛋白大分子，目前還沒有。

發(fā)明內(nèi)容
本申請(qǐng)人經(jīng)過深入研究，提供了一種含有治療作用的生物功能性蛋白大分子的兩親嵌段共聚物膠束，所述聚合物膠束是指合成的兩親性嵌段共聚物在水相中自主裝形成的一種熱力學(xué)穩(wěn)定的膠體溶液；所述有治療作用的生物功能性蛋白大分子是指執(zhí)行一些在體內(nèi)的生物學(xué)功能，且分子量大于15K道爾頓的具有生物活性的蛋白質(zhì)。膠束提高有治療作用的生物功能性蛋白大分子生物利用度，延長其半衰期。同時(shí)提供一種膠束的制備方法，包括將兩親性聚合物與有治療作用的生物功能性蛋白大分子溶液注入到PH值為有治療作用的生物功能性蛋白大分子等電點(diǎn)±2.0的緩沖溶劑，成功的將有治療作用的生物功能性蛋白大分子(促紅細(xì)胞生成素，干擾素，抗體等)包入嵌段聚合物形成膠束。膠束含有治療作用的生物功能性蛋白大分子和兩親嵌段共聚物，所述兩親嵌段共聚物為兩親性的人工合成聚合物及其衍生物，優(yōu)選在生物功能性蛋白大分子中加入賴氨酸，更優(yōu)選加入賴氨酸的量與生物功能性蛋白大分子的質(zhì)量比至少大于1:1。所述兩親嵌段共聚物親水嵌段為聚乙二醇類、聚丙烯酸類、聚氧乙烯類、聚乙烯醇類，疏水嵌段為內(nèi)酯類共聚物或均聚物；優(yōu)選親水嵌段是聚乙二醇，疏水嵌段是聚乳酸(PLA)或乳酸和乙醇酸的共聚物(PLGA)；所述兩親嵌段共聚物，親水嵌段具有500-30，000的重均分子量，疏水嵌段具有500-50，000的重均分子量；優(yōu)選親水嵌段重均分子量是4000-20, 000，疏水嵌段重均分子量是5000-20，000。所述治療作用的生物功能的蛋白大分子為促紅細(xì)胞生成素(ΕΡ0)，干擾素，粒細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)，曲妥珠單抗。生物功能的蛋白大分子的等電點(diǎn)為促紅細(xì)胞生成素(EPO) 3.7-4.1 ;干擾素
5.7-6.2 ;細(xì)胞集落刺激因子5.8-6.6 ；曲妥珠單抗8.5-9.2。膠束中有治療作用的生物功能性蛋白大分子與兩親嵌段共聚物的質(zhì)量比為1:50 500，優(yōu)選質(zhì)量比為1:50 200。膠束的制備方法，包括下列步驟:將兩親嵌段聚合物在有機(jī)溶劑中溶解或分散，將有治療作用的生 物功能性蛋白大分子用溶液溶解后，優(yōu)選在生物功能性蛋白大分子溶液中加入賴氨酸，更優(yōu)選加入賴氨酸的量與生物功能性蛋白大分子的質(zhì)量比至少大于1:1，將兩種溶液注入到PH值為有治療作用的生物功能性蛋白大分子等電點(diǎn)±2.0的緩沖溶劑中，攪拌揮發(fā)除去有機(jī)溶劑，除去游離藥物，制得粒徑為IO-1OOOnm的膠束溶液；所述有機(jī)溶劑為乙腈、二氯甲烷、二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、丙酮等有機(jī)溶劑，或其混合溶劑；優(yōu)選丙酮。所述緩沖溶液PH值優(yōu)選為有治療作用的生物功能性蛋白大分子等電點(diǎn)±1.0，最優(yōu)為等電點(diǎn)；緩沖溶液為制劑研究及生產(chǎn)常用試劑，例如PBS，HEPES，檸檬酸鹽緩沖液等。所述制備方法得到的有治療作用的生物功能性蛋白大分子聚合物膠束制成注射液制劑或注射用凍干制劑，將膠束溶液按注射液制劑常用工藝，直接分裝于安瓿或西林瓶中制得；或?qū)⒛z束溶液凍干成固體粉末，按凍干制劑制備常用工藝，制成注射用凍干制劑。實(shí)施例中采用的原料和檢測(cè)方法如下:有治療作用的生物功能性蛋白大分子聚合物膠束的兩親嵌段共聚物制備，參考論文(碩士論文，PLA-PEG嵌段共聚物的合成及在組織工程藥物釋放中的應(yīng)用，天津大學(xué)，2006 ；PEG-PCL,共聚物納米粒降解行為及其用作藥物載體的研究，上海交通大學(xué)，2008)制備PEG-PLA，PEG-PCL, PEO-PLA嵌段共聚物的方法，在辛酸亞錫催化下，PEG或PEO作為大分子引發(fā)劑，在無水無氧，120度下加熱20h，引發(fā)丙交酯或己內(nèi)酯聚合，最終形成PEG-PLA，PEG-PCL,PEO-PLA。
權(quán)利要求
1.一種膠束，其特征在于，含有治療作用的生物功能性蛋白大分子和兩親嵌段共聚物，所述兩親嵌段共聚物為兩親性的人工合成聚合物及其衍生物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠束，其特征在于，所述兩親嵌段共聚物親水嵌段為聚乙二醇類、聚丙烯酸類、聚氧乙烯類、聚乙烯醇類，疏水嵌段為內(nèi)酯類共聚物或均聚物；優(yōu)選親水嵌段是聚乙二醇，疏水嵌段是聚乳酸或乳酸和乙醇酸的共聚物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的膠束，其特征在于，所述兩親嵌段共聚物，親水嵌段具有500-30, 000的重均分子量，疏水嵌段具有500-50，000的重均分子量；優(yōu)選親水嵌段重均分子量是4000-2，0000，疏水嵌段重均分子量是5000-20，000。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠束，其特征在于，所述有治療作用的生物功能性蛋白大分子為促紅細(xì)胞生成素，干擾素，粒細(xì)胞集落刺激因子，曲妥珠單抗。
5.根據(jù)權(quán)利要 求1所述的膠束，其特征在于，所述有治療作用的生物功能性蛋白大分子與兩親嵌段共聚物的質(zhì)量比為1:5(Γ500。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠束，其特征在于，所述有治療作用的生物功能性蛋白大分子與兩親嵌段共聚物的質(zhì)量比為1:5(Γ200。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠束的制備方法，包括下列步驟:將兩親嵌段聚合物在有機(jī)溶劑中溶解或分散，將有治療作用的生物功能性蛋白大分子用溶液溶解后，將兩種溶液注入到PH值為有治療作用的生物功能性蛋白大分子等電點(diǎn)±2.0的緩沖溶劑中，攪拌揮發(fā)除去有機(jī)溶劑，除去游離藥物，制得膠束溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的制備方法，其特征在于，所述有機(jī)溶劑為乙腈、二氯甲烷、二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、丙酮等有機(jī)溶劑，或其混合溶劑；優(yōu)選丙酮。
9.根據(jù)權(quán)利要求7的制備方法，其特征在于，所述緩沖溶液pH值優(yōu)選為有治療作用的生物功能性蛋白大分子等電點(diǎn)±1.0，最優(yōu)為等電點(diǎn)。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的膠束，其特征在于，所述膠束中含有賴氨酸，優(yōu)選賴氨酸與生物功能性蛋白大分子的質(zhì)量比大于1:1。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種含有治療作用的生物功能性蛋白大分子的兩親嵌段共聚物膠束，提高有治療作用的生物功能性蛋白大分子生物利用度，延長其半衰期；同時(shí)提供一種膠束的制備方法。本發(fā)明將生物功能性蛋白大分子(促紅細(xì)胞生成素，干擾素，抗體等)成功包入嵌段聚合物膠束，粒徑小于100nm, Zeta電位接近0mv, 包封率顯著提高。生物功能性蛋白大分子膠束大大提高了蛋白的穩(wěn)定性，膠束溶液制成注射制劑或注射用凍干制劑用于臨床，實(shí)現(xiàn)藥物的長效緩釋，提高生物利用度。
文檔編號(hào)A61K38/18GK103120644SQ20121045527
公開日2013年5月29日 申請(qǐng)日期2012年11月13日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月17日
發(fā)明者史亞楠, 李又欣, 孫考祥, 劉萬卉, 王濤, 魯越 申請(qǐng)人:山東綠葉制藥有限公司, 南京綠葉思科藥業(yè)有限公司