一種海蛇提取物及其制備方法和用途
【專利摘要】本發(fā)明提供一種海蛇提取物及其制備方法和用途。所述制備方法包含下列步驟：取海蛇干燥體，加水煎煮，水煎液離心濾過；采用截留分子量為2000～8000的有機(jī)膜過濾，并將濾液濃縮至相對密度為1.05～1.20，放置，析出沉淀，過濾，取沉淀干燥，即得。本發(fā)明制備的海蛇提取物，具有良好的抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎作用，可用于制備預(yù)防和/或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物。
【專利說明】一種海蛇提取物及其制備方法和用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于天然藥物領(lǐng)域，具體涉及一種海蛇提取物及其制備方法和其在制備用于預(yù)防和/或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]海蛇(拉丁名Pelamis platurus)，爬行綱，眼鏡蛇科，海蛇亞科，是生活在海洋里的爬行動物，有毒，身長1.5~2米。海蛇具有祛風(fēng)止痛，滋補(bǔ)強(qiáng)壯的功效，常用于治療風(fēng)寒濕痹，關(guān)節(jié)疼痛，屈伸不利，皮膚瘙癢，體虛和小兒營養(yǎng)不良等。
[0003]海蛇在中醫(yī)領(lǐng)域中的應(yīng)用歷史悠久，其功效已被臨床實(shí)踐充分證實(shí)。近年來，對海蛇在抗菌消炎、抗病毒、抗癌、治療呼吸系統(tǒng)疾病以及免疫系統(tǒng)疾病等方面的研究表明，其在臨床應(yīng)用上前景廣闊，開發(fā)利用潛力很大。但海蛇化學(xué)成分復(fù)雜，除了對蛇毒的研究比較多以外，其他成分的研究尚不系統(tǒng)深入，且海蛇的應(yīng)用均是采用原料藥材直接入藥，或是采用簡單水提法或醇提法后入藥。目前，海蛇產(chǎn)品的開發(fā)形式主要有兩種，一是以海蛇干體為主藥配伍活血理氣藥制成復(fù)方制劑；二是以海蛇精制成各種保健酒。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]基于海蛇現(xiàn)有的應(yīng)用情況，本發(fā)明的目的是提供一種海蛇有效部位的制備方法。采用本發(fā)明制備方法制得的海蛇提取物，具有良好的抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎作用，可用于制備預(yù)防和/或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物。
[0005]本發(fā)明提供了一種海蛇提取物的制備方法，所述的制備方法包括下列步驟:
[0006]1)取海蛇干燥體，加水煎煮，水煎液離心濾過；
[0007]2)采用截留分子量為2000~8000的有機(jī)膜過濾步驟I)得到的濾液，并將濾液濃縮至在15°C~80°C下相對密度為1.05~1.20，放置，析出沉淀，過濾，取沉淀干燥，即得。
[0008]優(yōu)選的情況，本發(fā)明所述的制備方法包括下列步驟:
[0009]1)取海蛇干燥體，加水煎煮3次，每次加水5~30倍量、煎煮10分鐘~2小時(shí)，濾過，合并水煎液，離心濾過；
[0010]2)采用截留分子量為2000~8000的有機(jī)膜過濾步驟I)得到的濾液，并將濾液濃縮至在15°C~80°C下相對密度為1.05~1.20，放置24小時(shí)以上，析出沉淀，過濾，取沉淀
干燥，即得。
[0011]優(yōu)選的情況，本發(fā)明所述的制備方法包括下列步驟:
[0012]1)取海蛇干燥體，加水煎煮2~3次，每次加水10倍量、煎煮I小時(shí)，濾過，合并水煎液，離心濾過；
[0013]2)采用截留分子量為2000~8000的有機(jī)膜過濾步驟I)得到的濾液，并將濾液濃縮至在15°C~80°C下相對密度為1.05~1.20，放置24小時(shí)以上，析出沉淀，過濾，取沉淀干燥，即得。優(yōu)選的情況，本發(fā)明所述的制備方法包括下列步驟:
[0014]1)取海蛇干燥體，加水煎煮2次，每次加水I O倍量、煎煮I小時(shí),濾過,合并水煎液，離心濾過；
[0015]2)采用截留分子量為3000的有機(jī)膜過濾步驟I)得到的濾液，并將濾液濃縮至在7(T80°C下相對密度為1.10，放置72小時(shí)，析出沉淀，過濾，取沉淀干燥，即得。
[0016]優(yōu)選的情況，本發(fā)明所述的制備方法包括下列步驟:
[0017]I)取海蛇干燥體，加水煎煮，水煎液離心濾過；
[0018]2)采用截留分子量為2000~8000的有機(jī)膜過濾步驟I)得到的濾液，并將濾液濃縮至在80°C下相對密度為1.10，放置，析出沉淀，過濾，取沉淀干燥，即得。
[0019]優(yōu)選的情況，本發(fā)明所述的制備方法包括下列步驟:
[0020]I)取海蛇干燥體，加水煎煮3次，每次加水5~30倍量、煎煮10分鐘~2小時(shí)，濾過，合并水煎液，離心濾過；
[0021]2)采用截留分子量為2000~8000的有機(jī)膜過濾步驟I)得到的濾液，并將濾液濃縮至在80°C下相對密度為1.10，放置24小時(shí)以上，析出沉淀，過濾，取沉淀干燥，即得。
[0022]優(yōu)選的情況，本發(fā)明所述的制備方法包括下列步驟:
[0023]I)取海蛇干燥體，加水煎煮2~3次，每次加水10倍量、煎煮I小時(shí)，濾過，合并水煎液，離心濾過；
[0024]2)采用截留分子量為2000~8000的有機(jī)膜過濾步驟I)得到的濾液，并將濾液濃縮至在80°C下相對密度為1.10，放置24小時(shí)以上，析出沉淀，過濾，取沉淀干燥，即得。
[0025]優(yōu)選的情況，本發(fā)明所述的制備方法包括下列步驟:`[0026]I)取海蛇干燥體，加水煎煮2次，每次加水10倍量、煎煮I小時(shí),濾過,合并水煎液，離心濾過；
[0027]2)采用截留分子量為3000的有機(jī)膜過濾步驟I)得到的濾液，并將濾液濃縮至在80°C下相對密度為1.10，放置72小時(shí)，析出沉淀，過濾，取沉淀干燥，即得。
[0028]本發(fā)明還提供所述制備方法制得的海蛇提取物。
[0029]本發(fā)明還提供一種用于預(yù)防和/或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物組合物，該藥物組合物包含所述海蛇提取物。
[0030]本發(fā)明還提供所述海蛇提取物在制備預(yù)防和/或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物中的用途。
[0031]本發(fā)明制備的海蛇提取物，具有良好的抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎作用，可用于制備預(yù)防和/或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物；實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明所述制備方法得到的海蛇提取物，與單純的水提法或醇提法得到的海蛇提取物相比，在改善SD大鼠CIA模型關(guān)節(jié)指數(shù)(Al)和關(guān)節(jié)病理學(xué)表現(xiàn)方面取得的效果更為明顯。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0032]以下，結(jié)合附圖來詳細(xì)說明本發(fā)明的實(shí)施方案，其中:
[0033]圖1表示空白對照組SD大鼠踝關(guān)節(jié)。
[0034]圖2表示CIA模型組SD大鼠踝關(guān)節(jié)。
[0035]圖3表示海蛇治療組SD大鼠踝關(guān)節(jié)。
【具體實(shí)施方式】[0036]以下參照具體的實(shí)施例來說明本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，其不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
[0037]下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的藥材原料、試劑材料等，如無特殊說明，均為市售購買產(chǎn)品。
[0038]實(shí)施例1
[0039]取海蛇干燥體(購買自廣州清平藥材市場，經(jīng)鑒定為海蛇Pelamis platurus) I千克，加水煎煮提取3次，每次加水10倍量，每次煎煮I小時(shí)，合并水煎煮提取液，離心濾過，冷卻至室溫，濾液再采用截留分子量為2000的有機(jī)濾膜濾過，濾液濃縮至在15°C下相對密度為1.05，放置I小時(shí)，沉淀析出，過濾，取沉淀干燥，得海蛇提取物23克。
[0040]實(shí)施例2
[0041]取海蛇干燥體(購買自廣州清平藥材市場，經(jīng)鑒定為海蛇Pelamis platurus) I千克，加水煎煮提取2次，每次加水10倍量，每次煎煮I小時(shí)，合并水煎煮提取液，離心濾過，冷卻至常溫，濾液再采用截留分子量為3000的有機(jī)濾膜濾過，濾液濃縮至在15°C下相對密度為1.20，放置48小時(shí)，沉淀析出，過濾，取沉淀干燥，得海蛇提取物52克。
[0042]實(shí)施例3
[0043]取海蛇干燥體(購買自廣州清平藥材市場，經(jīng)鑒定為海蛇Pelamis platurus) I千克，加水煎煮提取2次，每次加水10倍量，每次煎煮I小時(shí)，合并水煎煮提取液，離心濾過，冷卻至常溫，濾液再采用截留分子量為3000的有機(jī)超濾膜濾過，濾液濃縮至在80°C下相對密度為1.10，放置72小時(shí)，沉淀析出，過濾，取沉淀干燥，得海蛇提取物61克。
[0044]實(shí)施例4
[0045]取海蛇干燥體(購買自廣州清平藥材市場，經(jīng)鑒定為海蛇Pelamis platurus) I千克，加水煎煮提取3次，每次加水10倍量，每次煎煮I小時(shí)，合并水煎煮提取液，離心濾過，冷卻至常溫，濾液再采用截留分子量為8000的有機(jī)超濾膜濾過，濾液濃縮至在80°C下相對密度為1.20，放置48小時(shí)，沉淀析出，過濾，取沉淀干燥，得海蛇提取物56克。
[0046]實(shí)施例5
[0047]海蛇提取物的藥效試驗(yàn)包含以下步驟:
[0048](1)將64只雄性SD大鼠隨機(jī)分為8組:空白對照組、CIA (膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎)模型組、海蛇治療I組(即實(shí)施例1提取物組)、海蛇治療2組(即實(shí)施例2提取物組)、海蛇治療3組(即實(shí)施例3提取物組)、海蛇治療4組(即實(shí)施例4提取物組)、海蛇治療5組(即單純水提法組)、海蛇治療6組(即醇提法組)，每組8只。
[0049](2)參照文獻(xiàn)(Xiao C，Li J, Dong X 等人.Ant1-oxidative and TNF- αsuppressive activities of puerarin derivative(4AC)in RAW264.7cells andcollagen-1nduced arthritic rats.Eur J Pharmacol.2011 Jun 4 ；666 (3)242-250),于實(shí)驗(yàn)開始第I天，取適量濃度為2mg/ml的II型膠原蛋白(Collagen II)溶液，將該II型膠原蛋白溶液逐滴加入等容積的不完全弗氏佐劑中后，在冰浴中，用勻漿器將其充分混勻乳化，以滴加水中不擴(kuò)散為度，配成II型膠原蛋白濃度為lmg/ml的乳劑。
[0050](3)對于CIA模型組和海蛇治療組，取步驟(2)所得乳劑，分別按每只SD大鼠
0.2ml乳劑量于尾根部皮下免疫；對于空白對照組，按每只SD大鼠以0.2ml等容積蒸餾水于尾根部皮下注射。實(shí)驗(yàn)開始7天后，對于CIA模型組和海蛇治療組，按每只SD大鼠0.1ml乳劑量于尾根部皮下再加強(qiáng)免疫一次；對于空白對照組，按每只SD大鼠以0.1ml等容積蒸餾水于尾根部皮下注射。
[0051 ] (4)實(shí)驗(yàn)開始第7天(即第二次免疫后)，對于海蛇治療各組，按每只SD大鼠以1.84g/kg.d的生藥劑量，lml/100g體重的體積灌胃給藥；對于空白對照組和CIA模型組，分別按每只SD大鼠以lml/100g體重的體積給予生理鹽水灌胃。
[0052](5) 28天期間內(nèi)對6組SD大鼠進(jìn)行關(guān)節(jié)炎指數(shù)(Arthritis Index, Al)檢測,用來判斷其大體發(fā)病率。SD大鼠全身病變按5級評分法評價(jià)，可以得出SD大鼠的4只肢體病變程度累計(jì)積分，然后計(jì)算出關(guān)節(jié)炎指數(shù)(Al)。5級評分法具體計(jì)分方法為:0分表示無紅腫；1分表示小趾關(guān)節(jié)紅腫；2分表示趾關(guān)節(jié)和足跖腫脹；3分表示踝關(guān)節(jié)以下的足爪腫脹；4分表示包括踝關(guān)節(jié)在內(nèi)的全部足爪腫脹。累計(jì)以上所述各個(gè)關(guān)節(jié)的積分，即為每只SD大鼠的關(guān)節(jié)炎指數(shù)(Al)，每只SD大鼠最高得分為I 6分。
[0053](6)治療結(jié)束后，將SD大鼠在乙醚麻醉下取全血；后處死SD大鼠，取其膝關(guān)節(jié)，用多聚甲醛固定36小時(shí)后，放入1096EDTA脫鈣溶液，再用酒精逐級脫水，二甲苯透明處理，石蠟包埋、切片后進(jìn)行常規(guī)HE染色(即蘇木精-伊紅染色)，后于光鏡下觀察滑膜、軟骨、骨的病理改變。
[0054]結(jié)果顯示:關(guān)節(jié)炎指數(shù)檢測表明，各海蛇治療組對C II所致SD大鼠CIA模型關(guān)節(jié)炎指數(shù)均有不同程度的降低，但以海蛇治療3組(即本發(fā)明制備方法制得的海蛇提取物實(shí)施例3提取物)關(guān)節(jié)炎指數(shù)降低最明顯(見表1)。病理學(xué)觀察顯示，與空白對照組(圖1)相比，CIA模型組踝關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞增生，滑膜組織內(nèi)可見有擴(kuò)張的血管、新生毛細(xì)血管，并伴有淋巴細(xì)胞浸潤；各跗骨關(guān)節(jié)的軟骨基質(zhì)及軟骨細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的退行性變，嚴(yán)重處軟骨壞死剝脫、變性，剝脫的軟骨表面，可見由滑膜細(xì)胞和毛細(xì)血管增生所形成的血管翳，軟骨下骨也受到血管翳的侵襲，出現(xiàn)退行性變(見圖2);各海蛇治療組對C II所致SD大鼠CIA模型踝關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞增生、炎性細(xì)胞浸潤、血管翳形成、軟骨及骨質(zhì)破壞等病理學(xué)改變均有不同程度的減輕，但以海蛇治療3組(即本發(fā)明制備方法制得的海蛇提取物實(shí)施例3提取物)上述病理學(xué)改變最明顯(見圖3)。
`[0055]表1:大鼠 Al 的變化(i±s，0=8)[0056]
【權(quán)利要求】
1.一種海蛇提取物的制備方法，其特征在于，該制備方法包括下列步驟: 1)取海蛇干燥體,加水煎煮,水煎液離心濾過； 2)采用截留分子量為2000~8000的有機(jī)膜過濾步驟1)得到的濾液，并將濾液濃縮至在15°C~80°C下相對密度為1.05~1.20，放置，析出沉淀，過濾，取沉淀干燥，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括下列步驟: 1)取海蛇干燥體,加水煎煮f3次，每次加水5~30倍量、煎煮I O分鐘~2小時(shí)，濾過，合并水煎液，離心濾過； 2)采用截留分子量為2000~8000的有機(jī)膜過濾步驟I)得到的濾液，并將濾液濃縮至在15°C~80°C下相對密度為1.05~1.20，放置24小時(shí)以上，析出沉淀，過濾，取沉淀干燥，即得。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括下列步驟: 1)取海蛇干燥體,加水煎煮2~3次，每次加水10倍量、煎煮I小時(shí)，濾過，合并水煎液，離心濾過； 2)采用截留分子量為2000~8000的有機(jī)膜過濾步驟I)得到的濾液，并將濾液濃縮至在15°C~80°C下相對密度為1.05~1.20，放置24小時(shí)以上，析出沉淀，過濾，取沉淀干燥，即得。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括下列步驟: 1)取海蛇干燥體,加水煎煮2次，每次加水IO倍量、煎煮I小時(shí)，濾過，合并水煎液，離心濾過； 2)采用截留分子量為3000的有機(jī)膜過濾步驟I)得到的濾液，并將濾液濃縮至在7(T80°C下相對密度為1.10，放置72小時(shí)，析出沉淀，過濾，取沉淀干燥，即得。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，所述步驟2)中將濾液濃縮至在80°C下相對密度為1.10。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的制備方法制得的海蛇提取物。
7.一種用于預(yù)防和/或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物包含根據(jù)權(quán)利要求6所述的海蛇提取物。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的海蛇提取物在制備預(yù)防和/或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物中的用途。
【文檔編號】A61P29/00GK103800379SQ201210453697
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2012年11月13日 優(yōu)先權(quán)日:2012年11月13日
【發(fā)明者】肖誠, 徐世杰 申請人:肖誠