專利名稱：一種治療腸癌和抑制腸癌血管擬態(tài)形成的藥物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療腸癌和抑制腸癌血管擬態(tài)形成的藥物及其應(yīng)用，具體地說，是一種以中草藥為原料制備的中成藥。
背景技術(shù)：
大腸癌是常見惡性腫瘤之一，其全球發(fā)病率已位列腫瘤的2-3位。由于腸癌早期的診斷率較低，大部分一經(jīng)發(fā)現(xiàn)，就已屬中晚期，導(dǎo)致其死亡率極高。據(jù)NCHS (美國國家衛(wèi)生統(tǒng)計中心)2010年的統(tǒng)計報告，腸癌死亡率占所有腫瘤的第2位，晚期患者5年生存率僅為8. 1%。盡管傳統(tǒng)的手術(shù)、放化療以及較新的生物靶向治療有一定療效，但目前仍有大部分腸癌尤其是腸癌轉(zhuǎn)移得不到有效控制，因此，提高療效仍是腸癌治療亟待解決的問題。腫瘤生長依賴腫瘤微循環(huán)，抑制腫瘤微循環(huán)從而減少或阻斷腫瘤細(xì)胞血供是抗腫 瘤最重要的研究方向之一。多年來，人們對腫瘤微循環(huán)的認(rèn)識多集中于內(nèi)皮細(xì)胞依賴的腫瘤血管生成上，由此開發(fā)了一些包括大腸癌在內(nèi)的腫瘤血管靶向藥物，但臨床療效卻差強人意。1999年血管擬態(tài)(Vascular Mimicry, VM)的發(fā)現(xiàn)為研究提供了新的方向。與經(jīng)典的腫瘤血管結(jié)構(gòu)完全不同，VM是高侵襲性腫瘤細(xì)胞為了滿足自身血供，通過自身表型重塑和重構(gòu)細(xì)胞外基質(zhì)而形成的一種血管樣管道，是以腫瘤細(xì)胞為結(jié)構(gòu)細(xì)胞的一種全新的微循環(huán)模式。諸多研究證實，VM與腫瘤的生長、分化、轉(zhuǎn)移以及不良的臨床預(yù)后都有著密切的關(guān)系，VM的存在合理地解釋了腫瘤血管靶向藥物臨床療效不佳的原因。迄今為止，包括大腸癌在內(nèi)的大多數(shù)腫瘤中都發(fā)現(xiàn)了 VM的存在，因此，在未來腸癌治療中重視VM的治療將有望獲得良好療效。目前，VM尚無有效的治療方法和藥物，研究仍處于基礎(chǔ)階段。中藥是腸癌綜合治療的重要組成部分，其療效已得到廣泛認(rèn)可，在腫瘤VM尚無有效解決辦法的背景下，從中醫(yī)藥中尋找解決腸癌VM的方法是值得探索的一條路徑。中醫(yī)認(rèn)為，腸癌屬于積聚范疇，病機為正虛邪實，虛實夾雜。正虛以脾虛為主，基本上為眾醫(yī)家所公認(rèn)；而邪實多為血瘀、痰濕、熱毒，其中血瘀更為眾醫(yī)家所強調(diào)，如清代高秉均在《瘍科心得集》中指出“癌瘤者，非陰陽正氣所結(jié)腫塊，乃五臟血瘀，濁氣痰滯而成”。王清任認(rèn)為“肚腹結(jié)塊，必有形之血凝聚”。因此，歸納起來，腸癌主要病理機制為脾虛，血瘀兼有痰濕或熱毒。但是目前關(guān)于中藥復(fù)方抗腸癌VM形成相關(guān)的文獻(xiàn)報道較少。中國期刊《安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報》第30卷第I期，2011年2月，刊出的論文《抑癌方對小鼠結(jié)腸癌移植瘤微血管及血管擬態(tài)形成的影響》，公開了一種由莪術(shù)、木饅頭、藤梨根、冬瓜子、馬齒莧組成的中藥復(fù)方對腸癌有較好的療效，對小鼠移植瘤有一定的抑制作用，能夠抑制結(jié)腸癌移植瘤中MV (微血管生成,Microvascular)和VM (血管生成擬態(tài),VasculogenicMimicry)的形成，可能是抑癌方抗腸癌的作用機制之一。中國期刊《上海中醫(yī)藥雜志》2011年第45卷第I期，刊出的論文《抑癌方對小鼠移植性腸癌作用的實驗研究》，通過動物實驗證實了抑癌方(主要成分為木饅頭、藤梨根、冬瓜子、莪術(shù)、馬齒莧等)有抑制小鼠腸癌移植瘤生長及提高荷瘤鼠生存質(zhì)量的作用，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，這可能是抑癌方抗腸癌作用的主要機制之一。但是上述論文并未公開該中藥復(fù)方的原料藥配比。本發(fā)明旨在提供一種能夠在一定程度上抑制小鼠結(jié)腸癌移植瘤血管擬態(tài)形成、治療腸癌效果顯著的藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種治療腸癌和抑制腸癌血管擬態(tài)形成的藥物。本發(fā)明的再一的目的是，提供一種上述藥物的用途。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是
一種治療腸癌和抑制腸癌血管擬態(tài)形成的藥物，它是由下列重量份的原料藥制成莪術(shù)6-12份、黃芪10-20份、薜荔果15-21份、藤梨根25-35份、冬瓜子10-20份。所述的莪術(shù)是8-10份，所述的黃芪是13-17份，所述的薜荔果是16_20份，所述的藤梨根是27-33份，所述的冬瓜子是13-17份。 所述的黃芪是15份，所述的薜荔果18份，所述的藤梨根是30份，所述的冬瓜子是15份。所述的藥物的藥劑是片劑、膠囊劑、顆粒、口服液、合劑或糖漿劑。為實現(xiàn)上述第二個目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是
如上任一所述的藥物在制備治療腸癌藥物中的應(yīng)用。如上任一所述藥物在制備抑制腸癌血管擬態(tài)形成藥物中的應(yīng)用。需要說明的是,所述的莪術(shù)的拉丁名為Rhizoma Curcumae Aeruginosae ;所述的薜荔果俗稱木饅頭，是?？崎艑僦参镛道驠icus pumila L.的花序托(俗稱果實)。本發(fā)明藥物的優(yōu)點在于
1、能夠抑制腸癌腫瘤的生長，具有抑制腸癌血管擬態(tài)形成的作用；
2、由純中藥制成，具有無毒副作用、價格低等優(yōu)點，易于被患者接受；
3、藥味數(shù)少，原材料豐富，制備工藝簡單，對環(huán)境無危害，在治療腸癌方面有良好的應(yīng)用前景。


附圖I是各組小鼠皮下移植瘤大小圖。由上至下依次是陰性對照組、藥物高劑量組、藥物中劑量組、藥物低劑量組、化療組和標(biāo)尺。
具體實施例方式下面結(jié)合附圖對本發(fā)明提供的具體實施方式
作詳細(xì)說明。實施例I治療腸癌和抑制腸癌血管擬態(tài)形成藥物的制備(一)
莪術(shù)6份、黃芪20份、薜荔果15份、藤梨根35份、冬瓜子10份，常規(guī)方法煎煮。實施例2治療腸癌和抑制腸癌血管擬態(tài)形成藥物的制備(二)
莪術(shù)12份、黃芪10份、薜荔果21份、藤梨根25份、冬瓜子20份，常規(guī)方法煎煮。實施例3治療腸癌和抑制腸癌血管擬態(tài)形成藥物的制備(三)
莪術(shù)6份、黃芪10份、薜荔果21份、藤梨根35份、冬瓜子10份，常規(guī)方法煎煮。實施例4治療腸癌和抑制腸癌血管擬態(tài)形成藥物的制備(四)
莪術(shù)12份、黃芪10份、薜荔果15份、藤梨根35份、冬瓜子20份，常規(guī)方法煎煮。
實施例5治療腸癌和抑制腸癌血管擬態(tài)形成藥物的制備(五)
莪術(shù)6份、黃芪20份、薜荔果21份、藤梨根35份、冬瓜子10份，常規(guī)方法煎煮。實施例6治療腸癌和抑制腸癌血管擬態(tài)形成藥物的制備(六)
莪術(shù)8份、黃芪17份、薜荔果16份、藤梨根33份、冬瓜子13份，常規(guī)方法煎煮。實施例7治療腸癌和抑制腸癌血管擬態(tài)形成藥物的制備(七)
莪術(shù)10份、黃芪13份、薜荔果20份、藤梨根27份、冬瓜子17份，常規(guī)方法煎煮。實施例8治療腸癌和抑制腸癌血管擬態(tài)形成藥物的制備(八)
莪術(shù)9份、黃芪15份、薜荔果18份、藤梨根30份、冬瓜子15份，常規(guī)方法煎煮。需要說明的是，實施例1-8所述的常規(guī)方法煎煮是中藥湯劑常規(guī)的制作方法，SP將所述的原料藥加水煎煮成湯劑。 實施例9治療腸癌和抑制腸癌血管擬態(tài)形成藥物片劑/膠囊的制備
取實施例1-8任一所述的藥物，加9-11倍量水，煎煮2-3. 5小時，濾出藥汁。再加9倍量水，煎煮2. 5小時，濾出藥汁，合并二次煎液，靜置，濾取上清液，濃縮，放冷，加濃縮液3倍量酒精，攪拌沉淀過夜。取上清液，濃縮至稠浸膏；加入制藥輔料，真空干燥，粉碎制粒，壓制成片劑或填充裝膠囊。實施例10治療腸癌和抑制腸癌血管擬態(tài)形成藥物顆粒的制備
取實施例1-8任一所述的藥物，加8-10倍量水，煎煮3小時，濾出藥汁。再加10倍量水，煎煮2. 5小時，濾出藥汁，合并二次煎液，靜置，濾取上清液，濃縮，放冷，加濃縮液2倍量酒精，攪拌沉淀過夜。取上清液，濃縮至稠浸膏；加適當(dāng)制藥輔料，制粒，干燥，整粒，得20g顆粒，分裝IOg/袋。實施例11治療腸癌和抑制腸癌血管擬態(tài)形成藥物合劑/ 口服液/糖漿劑的制備 取實施例1-8任一所述的藥物，加8-11倍量水，煎煮3小時，濾出藥汁。再加8倍量水，
煎煮3小時，濾出藥汁，合并二次煎液，靜置，濾取上清液，濃縮，放冷，加濃縮液3. 5倍量酒精，攪拌沉淀過夜。取上清液，濃縮至稠浸膏；加適當(dāng)制藥輔料，制成合劑、口服液或糖漿劑。實施例12本發(fā)明藥物治療腸癌的動物實驗 I材料
I.I動物與瘤株
SPF級裸鼠，雄性，體重20±2g，購于上海市斯萊克實驗動物有限公司，許可證號SCXK(滬)2003-2003 ；HCT116細(xì)胞(人結(jié)直腸癌細(xì)胞)，由中科院上海分院細(xì)胞庫所提供。I. 2藥品與試劑
實施例8制備的中藥組合物，煎煮至4g (生藥含量)/ml的溶液，密封，4°C保存，臨用前稀釋(藥物中劑量組按5倍生理鹽水稀釋，高劑量組按3倍稀釋，低劑量按8倍稀釋。5-Fu，250mg/10ml，購于江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司KD34兔抗多克隆抗體，克隆號ZDP01，購于美國R&D公司；PAS溶液。2 方法
2.1裸鼠鼠皮下移植瘤造模及分組處理
①造模取對數(shù)生長期的CT26細(xì)胞，用胰酶消化后制備單細(xì)胞懸液，濃度lX106/ml，按O. 2ml/只接種于裸鼠右腋部皮下。②分組及處理待全部出瘤后，按瘤體大小隨機分為五組，每組12只。陰性對照(NS)組每只灌胃O. 5mL生理鹽水；本發(fā)明藥物高(YAH)、中(YAM)、低劑量(YAL)組分別按 5mg/d、10mg/d、15mg/d 給藥,每只 O. 5mL ;化療組采用 5_Fu (25mg/kg 只)0. 2ml 腹腔注射，2次/周，共12天。2. 2觀察和檢測
①觀察項目每日觀察裸鼠飲食、排便、活動狀態(tài)、體重、移植瘤生長情況；實驗結(jié)束后脫臼處死全部動物，稱重；剝離瘤體，觀察移植瘤大小，稱瘤重。②抑瘤率按抑瘤率=[(陰性對照組平均瘤重一實驗組平均瘤重)/陰性對照組平均瘤重]X 100%計算。
2. 3⑶34及PAS雙重染色及VMD (血管生成擬態(tài)密度)測定
方法可參見文獻(xiàn)張詩武，郭華，張丹芳，趙秀蘭，谷彥軍，孫保存.惡性黑色素瘤血管生成擬態(tài)的形態(tài)學(xué)觀察.中國腫瘤臨床，2005，32(23) :1329-1332.本發(fā)明的方法在文獻(xiàn)提供的方法上略有改動，具體如下按Envision法進(jìn)行⑶34免疫組織化學(xué)染色，DAB顯色后光學(xué)顯微鏡下觀察，待血管內(nèi)皮細(xì)胞染成棕黃色后，用水沖洗終止顯色，用O. 5%高碘酸溶液還原切片10 min，水流沖洗2 min后置于Schiff液中，避光處理10 min,隨后用自來水沖洗，光學(xué)顯微鏡下觀察出現(xiàn)櫻桃紅色(或粉紅色)時，即用蘇木精淺染細(xì)胞核，鹽酸乙醇分化，氨水返藍(lán)，乙醇梯度脫水，二甲苯透明，中性樹膠固封。光學(xué)顯微鏡下觀察內(nèi)皮細(xì)胞特異標(biāo)記CD34陰性，細(xì)胞外基質(zhì)PAS染色陽性者為有VM形成。每張病理切片任意選取5個視野計數(shù)VM數(shù)目，求其平均值即為腫瘤內(nèi)VM密度。2. 4統(tǒng)計學(xué)方法
應(yīng)用SPSS 15. O軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，數(shù)據(jù)用
X 土S表示，進(jìn)行單因素方差分析LSD兩兩比較，P〈0. 05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。3 結(jié)果
3.1各組裸鼠皮下移植瘤大小比較
用藥12天后，處死全部動物，稱重，剝離瘤體，觀察移植瘤大小，具體見圖I。由圖I可知，藥物高、中、低劑量組移植瘤大小明顯小于陰性對照組；藥物高劑量組移植瘤大小與化療組相當(dāng)，說明本發(fā)明藥物具備抑制腸癌腫瘤生長的作用。3. 2各組腫瘤組織VM的比較
各組腫瘤組織VM形成情況見表I。各組HCTl 16細(xì)胞裸鼠移植瘤VMD的比較見表2。由表I和表2可知，化療組與陰性對照組相比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P〈0. 05);藥物高、中、低劑量組與陰性對照組相比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P〈0. 05);藥物高、中、低劑量組與化療組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0. 05)，但藥物高劑量組有更好地抑制腸癌VM形成的趨勢。表I各組腫瘤組織VM形成情況的比較
權(quán)利要求
1.一種治療腸癌和抑制腸癌血管擬態(tài)形成的藥物，其特征在于，它是由下列重量份的原料藥制成莪術(shù)6-12份、黃芪10-20份、薜荔果15-21份、藤梨根25-35份、冬瓜子10-20份。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的藥物，其特征在于，所述的莪術(shù)是8-10份，所述的黃芪是13-17份，所述的薜荔果16-20份，所述的藤梨根是27-33份，所述的冬瓜子是13-17份。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物，其特征在于，所述的莪術(shù)是9份，所述的黃芪是15份，所述的薜荔果18份，所述的藤梨根是30份，所述的冬瓜子是15份。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的中藥組合物，其特征在于，所述的藥物的藥劑是片劑、膠囊齊U、顆粒、口服液、合劑或糖漿劑。
5.權(quán)利要求1-4任一所述的藥物在制備治療腸癌藥物中的應(yīng)用。
6.權(quán)利要求1-4任一所述藥物在制備抑制腸癌血管擬態(tài)形成藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種治療腸癌和抑制腸癌血管擬態(tài)形成的藥物，所述的藥物是由下列重量份的原料藥制成莪術(shù)6-12份、黃芪10-20份、薜荔果15-21份、藤梨根25-35份、冬瓜子10-20份。本發(fā)明還提供了上述藥物在制備治療腸癌和抑制腸癌血管擬態(tài)形成藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明藥物的優(yōu)點在于能夠抑制腸癌的生長，具有抑制腸癌血管擬態(tài)形成的作用；由純中藥制成，具有無毒副作用、價格低等優(yōu)點，易于被患者接受；藥味數(shù)少，原材料豐富，制備工藝簡單，對環(huán)境無危害，在治療腸癌方面有良好的應(yīng)用前景。
文檔編號A61P35/00GK102824606SQ20121033462
公開日2012年12月19日 申請日期2012年9月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月12日
發(fā)明者侯風(fēng)剛 申請人:上海市中醫(yī)醫(yī)院