專利名稱：鴨病毒性肝炎卵黃抗體凍干保護劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于家禽免疫制劑技術領域，具體涉及ー種鴨病毒性肝炎卵黃抗體凍干保護劑。
背景技術：
鴨病毒性肝炎疾病是鴨類養(yǎng)殖業(yè)中的常見病、多發(fā)病，主要以危害7-20日齡雛鴨為主，病死率達50-60%，常會對集約化養(yǎng)殖場造成毀滅性打擊。鴨肝炎卵黃抗體是鴨肝炎疫苗免疫禽類后由卵黃中分離得到的特異性抗體，在臨床常作為鴨肝炎疾病的特效藥使用，有效率高達90%以上，是防治臨床鴨病毒性肝炎疾病的有力武器。目前，國內常規(guī)鴨病毒性肝炎卵黃抗體和精制鴨病毒性肝炎卵黃抗體都是經(jīng)稀釋分裝而成的液體劑型，存在著體積大，運輸不便等缺點，需低溫保存和運輸。由于反復凍融 和運輸不當很容易造成效價降低。而冷凍干燥能使萃取抗體在預先冷凍的狀態(tài)下，不經(jīng)液態(tài)直接升華除去水分而獲得凍干制劑，它避免了液態(tài)下保存的抗體易失活易變性的缺點，使產(chǎn)品質量穩(wěn)定，體積縮小，便于運輸及長時間保存。目前常用的凍干保護劑種類有多羥基化合物、糖類、蛋白質、聚合物、氨基酸、鹽和表面活性劑等。但鑒于畜禽養(yǎng)殖用藥開發(fā)的特點，凍干保護劑成本不能太高、而且凍干操作要簡單。因此，研發(fā)ー種新的配方簡單、成本低廉和能夠批量制備的鴨病毒性肝炎卵黃抗體凍干保護劑就顯得尤為迫切和重要。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供ー種鴨病毒性肝炎卵黃抗體凍干保護劑及其制備方法，從而彌補現(xiàn)有技術的不足。本發(fā)明的鴨病毒性肝炎卵黃抗體的凍干保護劑，為包含有甘露醇、海藻糖和甘氨酸的蒸餾水溶液。上述的凍干保護劑，其各組份的質量體積百分比(g/ml)為甘露醇為1_5%、海藻糖為O. 5-3%、甘氨酸為O. 8-1. 2%。各組分濃度優(yōu)選為4%甘露醇、1%海藻糖、1%甘氨酸。上述的凍干保護劑中還加入有大豆蛋白胨，加入的大豆蛋白胨的質量體積百分比g/ml濃度為5-10%，優(yōu)選為8%。將鴨病毒性肝炎卵黃抗體與上述凍干保護劑以7:1比例混合，作為鴨病毒性肝炎卵黃抗體凍干液體。本發(fā)明的凍干保護劑組分簡單、成本低廉、易于制備。解決了鴨病毒性肝炎卵黃抗體的長途運輸、保存的低溫儲存難題。本發(fā)明的凍干保護劑配方可使鴨病毒性肝炎卵黃抗體在2-8°C下保存12個月以上，25°C下保存6個月以上。
具體實施例方式下面結合具體實施方式
來進ー步描述本發(fā)明，但這些實例僅是范例性的，并不對本發(fā)明所用到的常規(guī)方法構成限制。本領域技術人員應該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明的技術方案的細節(jié)和形式進行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明保護范圍內。實施例I鴨病毒性肝炎卵黃抗體的凍干保護劑配制在IOOml的蒸餾水中加入4g甘露醇、Ig海藻糖、Ig甘氨酸后，使各組分充分溶解后，調pH值至7. 2 7. 4，經(jīng)滅菌處理后，2 8°C保存?zhèn)溆?。實施?鴨病毒性肝炎卵黃抗體的凍干保護劑配制在IOOml的蒸餾水中加入4g甘露醇、Ig海藻糖、Ig甘氨酸、8g大豆蛋白胨后，使各組分充分溶解，調PH值至7. 2 7. 4，經(jīng)滅菌處理2 8°C保存?zhèn)溆?。實施?鴨病毒性肝炎卵黃抗體的凍干
將鴨病毒性肝炎卵黃抗體與上述實施例I或實施例2制備的凍干保護劑以體積比7:1比例混合，作為鴨病毒性肝炎卵黃抗體凍干液體。該凍干液用于制備鴨病毒性肝炎卵黃抗體的凍干制劑，包括如下的步驟I)預凍階段凍干液體常溫進箱，I小時將制品降至_40°C并維持4小時；2)升華階段1小時將制品從_40°C升至_8°C并維持14小時；3)解吸干燥階段0. 5小時將制品從_8°C升至28°C并維持10小時完成制備。凍干全程30. 5小時。實施例4 :鴨病毒性肝炎卵黃抗體的凍干制劑的性狀、剩余水分和抗體效價將凍干的鴨病毒性肝炎卵黃抗體的凍干制劑分別放置2_8°C和25°C環(huán)境下保存，定期觀察抗體的性狀、剰余水分和效力。其中性狀、剰余水分檢測方法參見現(xiàn)行《獸用生物制品檢驗規(guī)程》，抗體效價采用雞胚中和試驗法將抗體用生理鹽水作2倍系列稀釋，取1:256、1:512、1:1024、1:2048 4個稀釋度，分別與每O. Iml含200ELD50鴨肝炎病毒等量混合，置37°C中和60分鐘，每個稀釋度尿囊腔內接種10日齡SPF雞胚5枚，每胚O. 2ml ;設病毒對照5枚，每胚接種同條件處理的病毒與生理鹽水混合液O. 2ml ;空白対照5枚，每胚注射生理鹽水O. 2ml。置37°C繼續(xù)孵育，48小時內死亡的雞胚棄去不計，在48 168小時死亡的雞胚，隨時取出。培養(yǎng)觀察168小時，記錄每組雞胚死亡情況，計算其半數(shù)保護量(PD50)。病毒對照組應全部死亡，空白對照組全部健活，能使50%雞胚保護的最高抗體稀釋倍數(shù)即為該抗體的中和效價。實驗結果如下鴨病毒性肝炎卵黃抗體的凍干后在2_8°C保存12個月、25°C保存6個月，抗體物理性狀保持穩(wěn)定，均為微黃色疏松團塊，易與瓶壁分離；剩余水分均為I. 86%左右；抗體效價均為1:512以上，未見明顯下降(表I)。表I鴨病毒性肝炎卵黃抗體凍干制劑檢驗結果
權利要求
1.ー種鴨病毒性肝炎卵黃抗體凍干保護劑，所述的凍干保護劑為包含有甘露醇、海藻糖和甘氨酸的蒸餾水溶液。
2.如權利要求I所述的凍干保護劑，其特征在于所述的甘露醇、海藻糖和甘氨酸的濃度如下甘露醇為1_5%、海藻糖為0. 5-3%、甘氨酸為0. 8-1. 2%。
3.如權利要求2所述的凍干保護劑，其特征在于所述的甘露醇、海藻糖和甘氨酸的濃度如下甘露醇為4%、海藻糖為1%、甘氨酸為I %。
4.權利要求I所述的凍干保護劑，其特征在于，所述的凍干保護劑還加入有大豆蛋白胨。
5.如權利要求4所述的凍干保護劑，其特征在于所述的大豆蛋白胨的加入濃度為5-10%。
6.如權利要求5所述的凍干保護劑，其特征在于所述的大豆蛋白胨的加入濃度為8%。
7.ー種鴨病毒性肝炎卵黃抗體的凍干制劑，其特征在于，所述的凍干制劑的制備方法如下首先將鴨病毒性肝炎卵黃抗體與權利要求I所述的凍干保護劑以7:1比例混合，作為鴨病毒性肝炎卵黃抗體凍干液體，將凍干液體常溫下放入冷凍箱，I小時將制品降至_40°C并維持4小時；然后在I小時內將制品從_40°C升至_8°C并維持14小時；最后在0. 5小時將制品從_8°C升至28°C并維持10小時完成制備。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種鴨病毒性肝炎卵黃抗體的凍干保護劑，所述的凍干保護劑為包含有甘露醇、海藻糖和甘氨酸的蒸餾水溶液。上述的凍干保護劑中還加入了大豆蛋白胨。本發(fā)明的凍干保護劑組分簡單、成本低廉、易于制備。從而解決了鴨病毒性肝炎卵黃抗體的長途運輸、保存的低溫儲存難題，凍干保護劑配方可使鴨病毒性肝炎卵黃抗體在2-8℃下保存12個月以上，25℃下保存6個月以上。
文檔編號A61K47/18GK102813932SQ201210316840
公開日2012年12月12日 申請日期2012年8月30日 優(yōu)先權日2012年8月30日
發(fā)明者王宏華, 凌紅麗, 徐麗麗, 高亞東, 楊光烈 申請人:青島康地恩藥業(yè)股份有限公司, 青島寶依特生物制藥有限公司