專利名稱：紅旱蓮總黃酮及其提取方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及紅旱蓮黃酮及其提取方法與應(yīng)用
背景技術(shù)：
紅旱蓮為藤黃科金絲桃屬植物(Hypericum ascyron L),別稱黃海棠等,有平肝、止血、清熱解毒功效。用于治療出血、跌打損傷、瘡癤腫痛等癥。目前對(duì)紅旱蓮的功效成分研究尚少，申請(qǐng)?zhí)?00610038949公開(kāi)了一種提取紅旱蓮中總黃酮類成分的方法，包括40 95%醇提、濃縮、AB-8, HPD- 100大孔樹(shù)脂或過(guò)聚酰胺柱、洗脫、濃縮干燥等步驟。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種快速高效提取紅旱蓮總黃酮的方法。本發(fā)明的技術(shù)方案為
紅旱蓮總黃酮，依照下列步驟來(lái)制備
(1)取紅旱蓮全草原料經(jīng)5(T60°C干燥至含水量1(Γ15%，粉碎；
(2)取紅旱蓮全草粉末，按1:3(Γ50的固液比加入體積分?jǐn)?shù)為5(Γ60%的乙醇，以60(T800W的微波功率輔助提取3. 5^4. 5分鐘；
(3)真空濃縮直至無(wú)醇味，用NKA- 9型大孔樹(shù)脂對(duì)紅旱蓮總黃酮進(jìn)行靜態(tài)分離純化，其工藝條件為上樣濃度3 - 4 mg/mL、吸附pH5 - 7、吸附溫度30 - 40°C、解吸乙醇濃度60 - 70%、解吸液料比10-20:1 ;收集解吸液；
(4)將解吸液真空濃縮，干燥。紅旱蓮總黃酮的提取方法，其特征在于包含下列步驟
(1)取紅旱蓮全草原料經(jīng)5(T60°C干燥至含水量1(Γ15%，粉碎；
(2)取紅旱蓮全草粉末，按1:3(Γ50的固液比加入體積分?jǐn)?shù)為5(Γ60%的乙醇，以60(T800W的微波功率輔助提取3. 5^4. 5分鐘；
(3)真空濃縮直至無(wú)醇味，用NKA- 9型大孔樹(shù)脂對(duì)紅旱蓮總黃酮進(jìn)行靜態(tài)分離純化，其工藝條件為上樣濃度3 - 4 mg/mL、吸附pH5 - 7、吸附溫度30 - 40°C、解吸乙醇濃度60 - 70%、解吸液料比10-20:1 ;收集解吸液；
(4)將解吸液真空濃縮，干燥。前述靜態(tài)分離純化可以用蒸餾水將黃酮濃縮液稀釋至上樣濃度3 - 4 mg/mL，調(diào)節(jié)PH5 - 7 ;以樹(shù)脂濕重上樣量為1:2(Γ25的比例配制黃酮與樹(shù)脂的吸附溶液，將溶液置于3(T40°C的恒溫振蕩器上振蕩充分吸附，吸附結(jié)束后將溶液過(guò)濾，Γ3倍體積蒸餾水沖洗樹(shù)月旨，并加入60 - 70%的乙醇并置于振蕩器上充分解吸，收集解吸液。為了達(dá)到更好的提取效果，紅旱蓮原料粉碎后過(guò)4(Γ80目篩。為了達(dá)到更好的解吸效率及保護(hù)總黃酮的活性，解吸過(guò)程可以在振蕩器上實(shí)行，2小時(shí)即可達(dá)到較好的解吸效果。采用真空濃縮及真空冷凍干燥。本發(fā)明還涉及到一種藥物組合物，包含所述的紅旱蓮總黃酮和藥學(xué)上可接受的輔料。所述藥物組合物的劑型為片劑、膠囊、顆粒劑、散劑、丸劑、浸膏劑、口服液或糖漿劑等常規(guī)的藥學(xué)劑型。本發(fā)明還涉及到紅旱蓮總黃酮作為抗氧化劑的應(yīng)用。本發(fā)明的有益效果
(I)提取時(shí)間短，效率高，節(jié)約能源。本發(fā)明在紅旱蓮總黃酮提取上采用微波提取
3.5^4. 5分鐘即可達(dá)到常規(guī)回流提取3小時(shí)左右、或超聲輔助提取20分鐘左右相近的提取率，大大節(jié)約了時(shí)間。微波提取通過(guò)偶極子旋轉(zhuǎn)和離子傳導(dǎo)兩種方式里外同時(shí)加熱，無(wú)溫度梯度升溫快速均勻，熱效率高。常規(guī)回流提取需要在90°C下回流提取3小時(shí)左右，熱效率較低，并需要大量的冷卻水冷卻。超聲輔助提取需要在75°C左右下提取22分鐘，熱效率不高 并需要配備加熱設(shè)備，相比之下微波提取在節(jié)約能源上更具優(yōu)勢(shì)。(2)選擇性好在微波場(chǎng)中，不同物質(zhì)對(duì)微波能的吸收程度不同，這樣就使得原料中的某些區(qū)域或某些組分被選擇性加熱，從而選擇性的提取原料中有效成分。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)超聲提取液很難過(guò)濾，回流提取液顏色較深。(4)本發(fā)明在紅旱蓮總黃酮純化上使用NKA - 9型大孔樹(shù)脂，所得紅旱蓮總黃酮純化物的純度高達(dá)75 - 82%，純化效果好，純化工藝簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本低，易實(shí)現(xiàn)工業(yè)化；黃酮的回收率能達(dá)到75 - 85%，吸附量大、回收率高。(5)本發(fā)明方案提取純化后的紅旱蓮總黃酮活性保護(hù)好，抗氧化實(shí)驗(yàn)展示出良好的抗氧化能力。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明?？傸S酮含量測(cè)定方法及黃酮得率計(jì)算
(I)總黃酮含量測(cè)定方法采用NaNO2- Al(NO3)3- NaOH比色法測(cè)定總黃酮含量。具體操作如下取I mL提取液于10 mL比色管中，用95%的乙醇定容至5 mL。加入5% NaNO2溶液O. 5 mL,搖勻，放置6 min后加入10% Al (NO3) 3溶液O. 5 mL,搖勻，放置6 min后加入4%NaOH溶液4 mL搖勻，靜置15 min后，以相應(yīng)溶液空白為參比，于500 nm處測(cè)定其紫外吸光度A。(2)黃酮得率的計(jì)算以蘆丁為對(duì)照，取質(zhì)量濃度為O. 098 mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液。準(zhǔn)確吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液0、1、2、3、4、5 mL于10 mL比色管中，后續(xù)操作同樣品。得蘆丁含量C (mg/mL)與吸光度(A)的回歸方程·Λ = 10. 093C + O. 002，R2 = O. 9996，線性范圍為O. 098 - O. 490 mg/mL。通過(guò)回歸方程得黃酮得率計(jì)算式
半*Π,日 ι/η 八(J-0.002)x IOx ICr3 V 1ΛΛ
黃酮得率(％) = ----X — XlUO
'10.093W
式中A :紫外吸光值 V:提取液體積(mL) W:樣品質(zhì)量(g)
實(shí)施例I
取紅旱蓮全草原料，經(jīng)5(T60°C干燥至含水量1(Γ15%，粉碎。取粉末20 g，加入800 mL60%的乙醇溶液，放入微波爐中以640W的功率微波輔助提取4 min。提取結(jié)束后冷卻至室溫，真空過(guò)濾并測(cè)定黃酮的得率為5.9%。濾液在50°C下進(jìn)行真空濃縮直至無(wú)醇味。用蒸餾水將黃酮濃縮液稀釋至3. 5 mg/mL并用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至6。以樹(shù)脂濕重上樣量為1:25的比例配制黃酮與樹(shù)脂的吸附溶液。將溶液置于35°C的恒溫振蕩器上振蕩吸附6 h。吸附結(jié)束后將溶液過(guò)濾，用2倍體積的蒸餾水沖洗樹(shù)脂，并加入200 mL的60%的乙醇并置于振蕩器上解吸2 h。解吸結(jié)束后過(guò)濾解吸液去除樹(shù)脂，計(jì)算的黃酮的回收率為85%。將濾液在50°C下真空濃縮成濃稠的膏狀物。將膏狀物于_80°C下預(yù)凍6 h，_60°C下真空冷凍干燥12 h。最終黃酮的純度為81%。實(shí)施例2
取紅旱蓮全草原料，經(jīng)5(T60°C干燥至含水量10 15%，粉碎。取粉末20 g，加入1000 mL50%的乙醇溶液，放入微波爐中以800W的功率微波輔助提取3. 5 min。提取結(jié)束后冷卻至室溫，真空過(guò)濾并測(cè)定黃酮的得率為5.6%。濾液在50°C下進(jìn)行真空濃縮直至無(wú)醇味。用蒸餾水將黃酮濃縮液稀釋至3 mg/mL并用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至5。以樹(shù)脂濕重上樣量為1:25的比例配制黃酮與樹(shù)脂的吸附溶液。將溶液置于40°C的恒溫振蕩器上振蕩吸附6 h。吸附 結(jié)束后將溶液過(guò)濾，用2倍體積的蒸餾水沖洗樹(shù)脂，并加入100 mL的70%的乙醇并置于振蕩器上解吸2 h。解吸結(jié)束后過(guò)濾解吸液去除樹(shù)脂，計(jì)算的黃酮的回收率為81%。將濾液在45°C下真空濃縮成濃稠的膏狀物。將膏狀物于_80°C下預(yù)凍6 h，_60°C下真空冷凍干燥12 h。最終黃酮的純度為77%。實(shí)施例3
取紅旱蓮全草原料，經(jīng)5(T60°C干燥至含水量1(Γ15%，粉碎。取粉末20 g，加入600 mL50%的乙醇溶液，放入微波爐中以640W的功率微波輔助提取4. 5min。提取結(jié)束后冷卻至室溫，真空過(guò)濾并測(cè)定黃酮的得率為5.5%。濾液在45°C下進(jìn)行真空濃縮直至無(wú)醇味。用蒸餾水將黃酮濃縮液稀釋至4 mg/mL并用稀氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至7。以樹(shù)脂濕重上樣量為1:25的比例配制黃酮與樹(shù)脂的吸附溶液。將溶液置于30°C的恒溫振蕩器上振蕩吸附6 h。吸附結(jié)束后將溶液過(guò)濾，用2倍體積的蒸餾水沖洗樹(shù)脂，并加入200mL的70%的乙醇并置于振蕩器上解吸2 h。解吸結(jié)束后過(guò)濾解吸液去除樹(shù)脂，計(jì)算的黃酮的回收率為76%。將濾液在50°C下真空濃縮成濃稠的膏狀物。將膏狀物于_80°C下預(yù)凍6h，_60°C下真空冷凍干燥12 h。最終黃酮的純度為75%。實(shí)施例4紅旱蓮黃酮抗氧化能力的測(cè)定
取實(shí)施例I純化的紅旱蓮總黃酮，配成不同濃度，進(jìn)行抗氧化能力測(cè)定的實(shí)驗(yàn)。通過(guò)測(cè)定紅旱蓮黃酮對(duì)DPPH自由基、羥基自由基、總還原能力、總抗氧化能力以評(píng)價(jià)紅旱蓮總黃酮的抗氧化能力。結(jié)果表明，同等條件下，紅旱蓮總黃酮清除DPPH自由基的EC5tl為O. 00797mg/mL, VC為O. 00371 mg/mL,由此看出，紅旱蓮總黃酮有較好的清除DPPH自由基的能力。紅旱蓮總黃酮清除羥基自由基的EC5tl為O. 145mg/mL,VC為O. 190 mg/mL,由此看出，紅旱蓮總黃酮有較好的清除羥基自由基的能力(優(yōu)于VC)。此外，I mg/mL的紅旱蓮總黃酮的總還原能力與O. 4 mg/mL的VC的總還原能力相當(dāng)；與VC的總抗氧化能力相比較，紅旱蓮總黃酮也呈現(xiàn)出一定的抗氧化性。由此可見(jiàn)，紅旱蓮黃酮是一種比較好的天然抗氧化劑。實(shí)施例5微波提取與常規(guī)提取紅旱蓮總黃酮對(duì)比試驗(yàn)
(I)溶劑回流法
取紅旱蓮全草粉末20 g，加入600 mL 60%的乙醇溶液，常規(guī)回流提取最佳工藝條件為乙醇濃度60%，固液比1:30，提取溫度90°C，提取時(shí)間180分鐘。此條件下紅旱蓮總黃酮的提取率為6. 3%。
(2)超聲輔助提取法
取紅旱蓮全草粉末20 g，加入600 mL 60%的乙醇溶液，超聲輔助提取的最佳工藝條件為超聲功率90W，超聲溫度75°C，超聲時(shí)間22分鐘，乙醇濃度60%，固液比1:20。此條件下紅旱蓮總黃酮的提取率為5. 4%。實(shí)施例1、2、3提取率與上述常規(guī)提取結(jié)果相比，可見(jiàn)微波提取在提取時(shí)間上，能耗上，都有非常好的效果。實(shí)施例6紅旱蓮黃酮提取物不同劑型的制備
a)丸劑取紅旱蓮黃酮提取物、淀粉、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉分別粉碎過(guò)100目篩，混合均勻，用水泛丸，干燥，每丸含紅旱蓮黃酮提取物O. I - 100 mg，檢驗(yàn)合格，包裝即得。b) 口服液取紅旱蓮黃酮提取物，加水溶解，加矯味劑適量，加活性炭5 g，加熱 30分鐘，濾過(guò)，加水至1000 ml，濾過(guò)，灌封，滅菌，每ml紅旱蓮黃酮提取物O. I - 100 mg，檢驗(yàn)合格，包裝即得。c)糖漿取紅旱蓮黃酮提取物，加水溶解，加蔗糖500 g及防腐劑適量，煮沸使溶解，濾過(guò)，加水至1000 ml，濾過(guò)，灌封，滅菌，每ml含紅旱蓮黃酮提取物O. I - 100 mg，檢驗(yàn)合格，包裝即得。d)散劑、片劑、膠囊、顆粒劑、浸膏劑均按常規(guī)工藝制備，每片或每顆膠囊中含紅旱蓮黃酮提取物O. I - 100 mg ;散劑或顆粒劑每小袋為I g含紅旱蓮黃酮提取物0.1-100 mg，經(jīng)檢驗(yàn)合格后，包裝即得。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.紅旱蓮總黃酮，其特征在于依照下列步驟來(lái)制備 (1)取紅旱蓮全草原料經(jīng)5(T60°C干燥至含水量1(Γ15%，粉碎； (2)取紅旱蓮全草粉末，按1:3(Γ50的固液比加入體積分?jǐn)?shù)為5(Γ60%的乙醇，以60(T800W的微波功率輔助提取3. 5^4. 5分鐘； (3)真空濃縮直至無(wú)醇味，用NKA- 9型大孔樹(shù)脂對(duì)紅旱蓮總黃酮進(jìn)行靜態(tài)分離純化，其工藝條件為上樣濃度3 - 4 mg/mL、吸附pH5 - 7、吸附溫度30 - 40°C、解吸乙醇濃度60 - 70%、解吸液料比10-20:1 ;收集解吸液； (4)將解吸液真空濃縮，干燥。
2.如權(quán)利要求I所述的紅旱蓮總黃酮的提取方法，其特征在于包含下列步驟 (1)取紅旱蓮全草原料經(jīng)5(T60°C干燥至含水量1(Γ15%，粉碎； (2)取紅旱蓮全草粉末，按1:3(Γ50的固液比加入體積分?jǐn)?shù)為5(Γ60%的乙醇，以60(T800W的微波功率輔助提取3. 5^4. 5分鐘； (3)真空濃縮直至無(wú)醇味，用NKA- 9型大孔樹(shù)脂對(duì)紅旱蓮總黃酮進(jìn)行靜態(tài)分離純化，其工藝條件為上樣濃度3 - 4 mg/mL、吸附pH5 - 7、吸附溫度30 - 40°C、解吸乙醇濃度60 - 70%、解吸液料比10-20:1 ;收集解吸液； (4)將解吸液真空濃縮，干燥。
3.如權(quán)利要求2所述的提取方法，其特征在于靜態(tài)分離純化為用蒸餾水將黃酮濃縮液稀釋至上樣濃度3 - 4 mg/mL,調(diào)節(jié)pH5 - 7 ;以樹(shù)脂濕重上樣量為1:20^25的質(zhì)量比配制黃酮與樹(shù)脂的吸附溶液，將溶液置于3(T40°C的恒溫振蕩器上振蕩充分吸附，吸附結(jié)束后將溶液過(guò)濾，蒸餾水沖洗樹(shù)脂，并加入60 - 70%的乙醇并置于振蕩器上充分解吸，收集解吸液。
4.如權(quán)利要求2所述的提取方法，其特征在于所述的干燥為真空冷凍干燥。
5.一種藥物組合物，其特征在于包含權(quán)利要求I所述的紅旱蓮總黃酮和藥學(xué)上可接受的輔料。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物的劑型為片劑、膠囊、顆粒劑、散劑、丸劑、浸膏劑、口服液或糖漿劑。
7.權(quán)利要求I所述的紅旱蓮總黃酮作為抗氧化劑的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及紅旱蓮總黃酮及其提取方法與應(yīng)用，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。本發(fā)明通過(guò)原料干燥，粉碎，提取，NKA–9型大孔樹(shù)脂純化等步驟對(duì)紅旱蓮總黃酮進(jìn)行了提取，本方案提取速度快，效率高，得到總黃酮純度高，回收率高，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A61P39/06GK102805759SQ20121031599
公開(kāi)日2012年12月5日 申請(qǐng)日期2012年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月2日
發(fā)明者張國(guó)文, 周佳, 胡明明, 潘軍輝 申請(qǐng)人:南昌大學(xué)