專利名稱：載藥納米膠束及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及納米醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，特別是涉及一種載藥納米膠束及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
傳統(tǒng)的已經(jīng)研究出多種可以同時攜載基因與化療藥物的傳輸體系，如Meng等用介孔二氧化娃納米顆粒連接聚乙烯亞胺(PEI)同時攜載了 P糖蛋白小干擾RNA(Pgp siRNA)和阿霉素，有效地增強了耐藥性腫瘤細胞對阿霉素的攝取并誘導(dǎo)了細胞凋亡；Cao等合成了一種兩嵌段共聚物共同負載Bcl-2siRNA和阿霉素，有效地抑制了肝癌細胞的生長。但是上述載藥體系普遍存在生物膜透過性及毒性問題，且負載藥物或基因的效率不高。

發(fā)明內(nèi)容
基于此，有必要提供一種生物膜透過性好、無毒且負載效率較高的載藥納米膠束及其制備方法。一種載藥納米膠束，包括Bcl_2siRNA、多烯紫杉醇以及由兩親性三嵌段共聚物形成的具有三層結(jié)構(gòu)的復(fù)合體，其中，所述兩親性三嵌段共聚物為包含聚乙二醇衍生物、聚賴氨酸和聚亮氨酸的線性高分子化合物，所述聚賴氨酸的一端通過酰胺鍵與所述聚乙二醇衍生物相連，另一端通過肽鍵與所述聚亮氨酸相連；所述聚亮氨酸構(gòu)成所述復(fù)合體的內(nèi)層，所述聚賴氨酸構(gòu)成所述復(fù)合體的中間層，所述聚乙二醇衍生物構(gòu)成所述復(fù)合體的外層；所述Bcl-2siRNA分散在中間層的所述聚賴氨酸中，所述多烯紫杉醇分散在內(nèi)層的所述聚亮氨酸層中。在其中一個實施例中，所述聚乙二醇衍生物為氨基聚乙二醇羧酸。在其中一個實施例中，所述兩親性三嵌段共聚物中所述聚乙二醇衍生物、所述聚賴氨酸及所述聚亮氨酸的單體摩爾比為45:10:40。
在其中一個實施例中，所述Bcl_2siRNA包括序列為SEQ ID NO: I的正義鏈及序列為SEQ ID NO:2的反義鏈。一種載藥納米膠束的制備方法，包括如下步驟配制濃度范圍為O. 5-2mg/ml的多烯紫杉醇溶液及濃度范圍為2_4mg/ml的兩親性三嵌段共聚物溶液，將所述多烯紫杉醇溶液與所述兩親性三嵌段共聚物溶液按照體積比為50-100:1000的比例混合后得到混合溶液，其中，所述兩親性三嵌段共聚物為包含聚乙二醇衍生物、聚賴氨酸和聚亮氨酸的線性高分子化合物，所述聚賴氨酸的一端通過酰胺鍵與所述聚乙二醇衍生物相連，另一端通過肽鍵與所述聚亮氨酸相連，所述多烯紫杉醇溶液及所述兩親性三嵌段共聚物溶液中溶劑均為二甲基亞砜；向所述混合溶液中逐滴加入與所述兩親性三嵌段共聚物溶液同體積的超純水，隨后將得到的混合液置于分子截留量在3500的透析袋中，于超純水中室溫透析得到包含多烯紫杉醇的聚合物復(fù)合體，所述聚亮氨酸的疏水作用使所述兩親性三嵌段共聚物形成具有三層結(jié)構(gòu)的復(fù)合體，所述聚亮氨酸構(gòu)成所述復(fù)合體的內(nèi)層，所述聚賴氨酸構(gòu)成所述復(fù)合體的中間層，所述聚乙二醇構(gòu)成所述復(fù)合體的外層，疏水性的所述多烯紫杉醇分散在內(nèi)層的所述聚亮氨酸中；按照所述包含多烯紫杉醇的聚合物復(fù)合體與Bcl-2 siRNA的質(zhì)量比為530:1的比例，將所述包含多烯紫杉醇的聚合物復(fù)合體加入至濃度為50-100 μ g/ml的Bcl-2 siRNA焦碳酸二乙酯水溶液中，混合均勻，室溫下靜置20分鐘，Bcl-2 siRNA被帶正電荷的聚賴氨酸吸附而分散在中間層的所述聚賴氨酸中，得到所述載藥納米膠束。在其中一個實施例中，所述兩親性三嵌段共聚物中所述聚乙二醇衍生物、所述聚賴氨酸及所述聚亮氨酸的單體摩爾比為45:10:40。在其中一個實施例中，所述Bcl-2 siRNA包括序列為SEQ ID N0:1的正義鏈及序列為SEQ ID NO:2的反義鏈。上述共同負載Bcl-2 siRNA和多烯紫杉醇藥物的載藥納米膠束，由于其載體聚乙二醇衍生物-聚賴氨酸-聚亮氨酸(PEG-PLL-PLLeu)兩親性三嵌段共聚物具有良好的生物 相容性，可生物降解并通過正常的生理途徑吸收或排出體外，解決了生物膜透過性問題和載體的毒性問題；其次，納米膠束包載疏水性藥物多烯紫杉醇，使得難溶于水的多烯紫杉醇具有水溶性，且其通過納米膠束輸送可以提高藥物療效，具有被動靶向性，降低毒副作用；再次，納米膠束負載Bcl-2 siRNA進入細胞并使其不被降解，從而提高基因表達效率，解決了 Bcl-2 siRNA穿透細胞膜的能力極差的問題，而且納米膠束的聚乙二醇外殼使得納米膠束具備保護Bcl-2 siRNA穩(wěn)定性、以及長循環(huán)等特點。上述載藥納米膠束共同負載Bcl-2 siRNA基因藥物和多烯紫杉醇藥物，將基因治療藥物與化療藥物聯(lián)合治療癌癥能夠發(fā)揮兩種藥物的協(xié)同增效作用，為更好的治療乳腺癌指明了方向，可以廣泛應(yīng)用在制備治療乳腺癌藥物領(lǐng)域。通過透析的方法使兩親性三嵌段共聚物、基因和藥物在水溶液中自組裝，形成具有輸送Bcl-2 siRNA和多烯紫杉醇能力的三層結(jié)構(gòu)的膠束納米顆粒，制備方法簡便易行，便于操作推廣。


圖I為一實施方式的兩親性三嵌段共聚物的示意圖；圖2為圖I中兩親性三嵌段共聚物形成的具有三層結(jié)構(gòu)的復(fù)合體示意圖；圖3為一實施方式的載藥納米膠束的示意圖；圖4為一實施方式的載藥納米膠束制備方法的流程圖；圖5為實施例4的載藥納米膠束在細胞學(xué)上的共傳遞效果檢測圖；圖6為實施例2-6的載藥納米膠束的基因負載效率檢測圖。
具體實施例方式下面結(jié)合附圖及具體實施例對載藥納米膠束及其制備方法和應(yīng)用進行進一步的說明。如圖I所示，一實施方式的兩親性三嵌段共聚物，其為包含聚乙二醇衍生物、聚賴氨酸和聚亮氨酸的線性高分子化合物(聚乙二醇衍生物-聚賴氨酸-聚亮氨酸，PEG-PLL-PLLeu)。分子量范圍優(yōu)選在3000-60000。其中，聚賴氨酸一端通過酰胺鍵與聚乙二醇衍生物相連，另一端通過肽鍵與聚亮氨酸相連。且該聚乙二醇衍生物的分子量為2000，聚乙二醇衍生物、聚賴氨酸和聚亮氨酸的單體摩爾比為45:10:40。優(yōu)選的，本實施方式的聚乙二醇衍生物為氨基聚乙二醇羧酸(NH2-PEG-COOH)t5聚乙二醇(PEG)具有良好的生物相容性、生物可降解性并且降解產(chǎn)物沒有毒性，在美國得到FDA的批準(zhǔn)，并被廣泛應(yīng)用于生物材料領(lǐng)域和納米醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。納米材料經(jīng)PEG表面修飾以后，可以降低其細胞粘附性，減少血清內(nèi)物質(zhì)的吸附性，同時減少巨噬細胞的排異吞噬，因此PEG修飾后的納米材料可顯著增加體內(nèi)循環(huán)的時間。該兩親性三嵌段共聚物，即聚乙二醇衍生物-聚賴氨酸-聚亮氨酸三嵌段共聚物(PEG-PLL-PLLeu)，結(jié)合了聚乙二醇和聚氨基酸的優(yōu)勢，可以在水溶液中自組裝形成具有三層結(jié)構(gòu)的納米載體，如圖2所示，其中最內(nèi)層的聚亮氨酸鏈段聚集形成疏水性內(nèi)核，中間層的聚賴氨酸構(gòu)成正電荷層，最外層的PEG衍生物起保護作用。以聚乙二醇衍生物-聚賴氨酸-聚亮氨酸三嵌段共聚物為基礎(chǔ)制備而成的陽離子納米載體由于其特殊的結(jié)構(gòu)使得聚賴氨酸正電荷得到聚集形成了一個正電荷層，大大曾強了負載基因和蛋白質(zhì)等負電物質(zhì)的能力，同時由于聚亮氨酸具有α-螺旋的二級結(jié)構(gòu)使得陽離子納米載體穩(wěn)定性得到增加，由于該陽離子納米載體同時具有疏水性內(nèi) 核和正電荷層，因此可以同時有效的負載小分子疏水性藥物、基因物質(zhì)以及蛋白質(zhì)或多肽，是一種多功能的納米載體。本實施方式還提供了一種兩親性三嵌段共聚物的制備方法，包括如下步驟步驟SllO :以聚乙二醇衍生物作為引發(fā)劑，通過NCA開環(huán)聚合的方法合成包含聚乙二醇衍生物、側(cè)鏈保護的聚賴氨酸及聚亮氨酸的線性三嵌段共聚物，其中，側(cè)鏈保護的聚賴氨酸一端通過酰胺鍵與聚乙二醇衍生物相連，另一端通過肽鍵與聚亮氨酸相連，且聚乙二醇衍生物的分子量為2000，側(cè)鏈保護的聚賴氨酸的聚合度為10-200，聚亮氨酸的聚合度為 10-200。具體如下將分子量為2000的聚乙二醇衍生物溶于有機溶劑中，濃度范圍為
1-lOOmg/mL,氮氣保護下加熱至30_50°C后加入LysZ-NCA (節(jié)氧羰基賴氨酸的環(huán)狀酸酐,一種側(cè)鏈保護的賴氨酸環(huán)狀酸酐)單體，LysZ-NCA單體與聚乙二醇衍生物的摩爾比為10:1，氮氣保護下恒溫反應(yīng)24-120小時后加入Leu-NCA (亮氨酸的環(huán)狀酸酐)單體，Leu-NCA單體與聚乙二醇衍生物的摩爾比為40:1，氮氣保護下繼續(xù)恒溫反應(yīng)24-120小時，反應(yīng)結(jié)束后加入5-50倍于反應(yīng)體系體積的乙醚沉淀、過濾、干燥得到包含聚乙二醇衍生物、側(cè)鏈保護的聚賴氨酸及聚亮氨酸的三嵌段共聚物。步驟S120 :脫去側(cè)鏈保護的聚賴氨酸的側(cè)鏈保護基團，得到包含聚乙二醇衍生物、聚賴氨酸和聚亮氨酸、且分子量在3000-60000的兩親性三嵌段共聚物。具體如下將包含聚乙二醇衍生物、側(cè)鏈保護的聚賴氨酸及聚亮氨酸的三嵌段共聚物溶于(TC的三氟乙酸中，加入一定量的HBr體積濃度為30%的HBr/HAc溶液反應(yīng)2_4小時后，再加入5-50倍于反應(yīng)體系體積的乙醚進行沉淀、過濾，其中，加入的HBr的摩爾量為賴氨酸側(cè)鏈保護基團摩爾量的2-4倍；將過濾后固體產(chǎn)物溶解于極性有機溶劑中，使用截留分子量為2000-8000的透析袋在水中透析12-96小時，每2_6小時換透析水一次，隨后凍干，得到兩親性三嵌段共聚物。通過使用NCA開環(huán)聚合的方法合成該兩親性三嵌段共聚物，制備過程簡單，合成效率高。
如圖3所示，一實施方式的載藥納米膠束包括Bcl-2 siRNA、多烯紫杉醇以及上述介紹的由兩親性三嵌段共聚物形成的具有三層結(jié)構(gòu)的復(fù)合體。其中，Bcl-2 siRNA分散在中間層的聚賴氨酸中，多烯紫杉醇分散在內(nèi)層的聚亮氨酸層中。在本實施方式中，抗凋亡蛋白小干擾RNA (Bcl-2 siRNA)是長度為21個核苷酸的雙股RNA，包括序列為SEQ ID NO: I的正義鏈，及序列為SEQ ID NO: 2的反義鏈。上述共同負載Bcl-2 siRNA和多烯紫杉醇藥物的載藥納米膠束，由于其載體聚乙二醇衍生物-聚賴氨酸-聚亮氨酸(PEG-PLL-PLLeu)兩親性三嵌段共聚物具有良好的生物相容性，可生物降解并通過正常的生理途徑吸收或排出體外，解決了生物膜透過性問題和載體的毒性問題；其次，納米膠束包載疏水性藥物多烯紫杉醇，使得難溶于水的藥物多烯紫杉醇具有水溶性，且其通過納米膠束輸送可以提高藥物療效，具有被動靶向性，降低毒副作用；再次，納米膠束負載Bcl-2 siRNA進入細胞并使其不被降解，從而提高基因表達效率，解決了 Bcl-2 siRNA穿透細胞膜的能力極差的問題，而且納米膠束的聚乙二醇外殼使得納 米膠束具備保護Bcl-2 siRNA穩(wěn)定性、以及長循環(huán)等特點。上述載藥納米膠束共同負載Bcl-2 siRNA基因藥物和多烯紫杉醇藥物，將基因治療藥物與化療藥物聯(lián)合治療癌癥能夠發(fā)揮兩種藥物的協(xié)同增效作用，為更好的治療乳腺癌指明了方向，可以廣泛應(yīng)用在制備治療乳腺癌藥物領(lǐng)域。此外，本實施方式還提供了一種載藥納米膠束制備方法，采用透析自組裝的方法制備基因與藥物共傳輸納米膠束，如圖2所示，具體包括如下步驟步驟S210，配制濃度范圍為O. 5-2mg/ml的多烯紫杉醇溶液及濃度范圍為2_4mg/ml的兩親性三嵌段共聚物溶液，將多烯紫杉醇溶液與兩親性三嵌段共聚物溶液按照體積比為50-100:1000的比例混合后得到混合溶液。在本實施方式中，多烯紫杉醇溶液及兩親性三嵌段共聚物溶液中溶劑均為二甲基亞砜(DMSO)。步驟S220，向混合溶液中逐滴加入與兩親性三嵌段共聚物溶液同體積的超純水，聚亮氨酸的疏水作用使兩親性三嵌段共聚物形成具有三層結(jié)構(gòu)的復(fù)合體，聚亮氨酸構(gòu)成復(fù)合體的內(nèi)層，聚賴氨酸構(gòu)成復(fù)合體的中間層，聚乙二醇衍生物構(gòu)成復(fù)合體的外層，疏水性的多烯紫杉醇分散在內(nèi)層的聚亮氨酸中，隨后將得到的混合液置于分子截留量在3500的透析袋中，于超純水中室溫透析得到包含多烯紫杉醇的聚合物復(fù)合體。步驟S230，按照包含多烯紫杉醇的聚合物復(fù)合體與Bcl-2 siRNA的質(zhì)量比為5-30:1的比例，將包含多烯紫杉醇的聚合物復(fù)合體加入至濃度為50-100 μ g/ml的Bcl_2siRNA焦碳酸二乙酯(DEPC)水溶液中，混合均勻，室溫下靜置20分鐘，Bcl_2 siRNA被帶正電荷的聚賴氨酸吸附而分散在中間層的聚賴氨酸中，得到載藥納米膠束。通過透析的方法使共聚物、基因和藥物在水溶液中自組裝，形成具有輸送Bcl-2siRNA和多烯紫杉醇能力的三層結(jié)構(gòu)的膠束納米顆粒。該方法簡便易行，便于操作推廣。以下為具體實施例部分實例I、羧基聚乙二醇-聚賴氨酸-聚亮氨酸三嵌段共聚物的制備將聚合管抽真空后充氮氣保護，將O. 5g分子量為2000的NH2-PEG-C00H用20mLDMF溶解后加入到聚合管內(nèi)，按LysZ-NCA單體與CH3O-PEG-NH2的摩爾比為10:1的比例加入LysZ-NCA單體，氮氣保護下恒溫反應(yīng)24小時，然后按Leu-NCA單體與CH3O-PEG-NH2的摩爾比為40:1的比例加入Leu-NCA單體，氮氣、保護下繼續(xù)恒溫反應(yīng)48小時，反應(yīng)結(jié)束后加入20倍于反應(yīng)體系體積的乙醚沉淀、過濾、干燥得到PEG-PLysZ-PLeu三嵌段共聚物。將以上所得PEG-PLysZ-PLeu聚合物溶于(TC的三氟乙酸中，加入HBr體積濃度為30%的HBr/HAc溶液反應(yīng)2時后，加入15倍于反應(yīng)體系體積的乙醚沉淀、過濾，其中，HBr的摩爾量為賴氨酸側(cè)鏈保護基團摩爾量的2倍；將所得產(chǎn)物溶解于N，N-二甲基甲酰胺，使用截留分子量為3500的透析袋在水中透析12小時，每2小時換透析水一次，隨后凍干得到PEG-PLys-PLeu三嵌段共聚物，平均分子量為8300。實例2兩親性三嵌段共聚物采用實施例I制備得到的羧基聚乙二醇-聚賴氨酸-聚亮氨酸三嵌段共聚物。
配制濃度范圍為O. 5mg/ml的多烯紫杉醇溶液及濃度范圍為2mg/ml的兩親性三嵌段共聚物溶液，將100 μ I多烯紫杉醇溶液與Iml兩親性三嵌段共聚物溶液混合，得到混合溶液。向混合溶液中逐滴加入Iml超純水，隨后將得到的混合液置于分子截留量在3500的透析袋中，于2000ml超純水中室溫透析24小時，得到包含多烯紫杉醇的聚合物復(fù)合體。配置濃度為100 μ g/ml的Bcl-2 siRNA焦碳酸二乙酯水溶液，將O. 5 μ g的包含多烯紫杉醇的聚合物復(fù)合體與含有I μ I的Bcl-2 SiRNA焦碳酸二乙酯水溶液在室溫下混合，靜置共培育20分鐘，得到載藥納米膠束。實例3兩親性三嵌段共聚物采用實施例I制備得到的羧基聚乙二醇-聚賴氨酸-聚亮氨酸三嵌段共聚物的制備。配制濃度范圍為lmg/ml的多烯紫杉醇溶液及濃度范圍為2mg/ml的兩親性三嵌段共聚物溶液，將50 μ I多烯紫杉醇溶液與Iml兩親性三嵌段共聚物溶液混合，得到混合溶液。向混合溶液中逐滴加入Iml超純水，隨后將得到的混合液置于分子截留量在3500的透析袋中，于2000ml超純水中室溫透析24小時，得到包含多烯紫杉醇的聚合物復(fù)合體。配置濃度為50 μ g/ml的Bcl_2 siRNA焦碳酸二乙酯水溶液，將O. 5 μ g的包含多烯紫杉醇的聚合物復(fù)合體與含有2μ I的Bcl-2 siRNA焦碳酸二乙酯水溶液在室溫下混合，靜置共培育20分鐘，得到載藥納米膠束。實例4兩親性三嵌段共聚物采用實施例I制備得到的羧基聚乙二醇-聚賴氨酸-聚亮氨酸三嵌段共聚物的制備。配制濃度范圍為2mg/ml的羅丹明B修飾的多烯紫杉醇溶液及濃度范圍為2mg/ml的兩親性三嵌段共聚物溶液，將50 μ I羅丹明B修飾的多烯紫杉醇溶液與Iml兩親性三嵌段共聚物溶液混合，得到混合溶液。向混合溶液中逐滴加入Iml超純水，隨后將得到的混合液置于分子截留量在10000的透析袋中，于2000ml超純水中室溫透析24小時，得到包含多烯紫杉醇的聚合物復(fù)合體。配置濃度為80 μ g/ml的羧基熒光素(FAM)標(biāo)記的siRNA焦碳酸二乙酯水溶液，將O. 5 μ g的包含多烯紫杉醇的聚合物復(fù)合體與含有I. 25 μ I的羧基熒光素(FAM)標(biāo)記的siRNA焦碳酸二乙酯水溶液在室溫下混合，靜置共培育20分鐘，得到載藥納米膠束。如圖5所示為實例4制備的基因與藥物共傳輸納米膠束進入細胞的激光共聚焦圖片，該實驗結(jié)果表明，該納米膠束載體所攜載的基因與藥物在細胞內(nèi)共定位，基因與藥物是同時進入細胞的。實例5兩親性三嵌段共聚物采用實施例I制備得到的羧基聚乙二醇-聚賴氨酸-聚亮氨酸三嵌段共聚物。配制濃度范圍為2mg/ml的多烯紫杉醇溶液及濃度范圍為2mg/ml的兩親性三嵌段共聚物溶液，將100 μ I多烯紫杉醇溶液與Iml兩親性三嵌段共聚物溶液混合，得到混合溶液。
向混合溶液中逐滴加入Iml超純水，隨后將得到的混合液置于分子截留量在12000的透析袋中，于2000ml超純水中室溫透析24小時，得到包含多烯紫杉醇的聚合物復(fù)合體。配置濃度為100 μ g/ml的Bcl_2 siRNA焦碳酸二乙酯水溶液，將I μ g的包含多烯紫杉醇的聚合物復(fù)合體與含有I μ I的Bcl-2 SiRNA焦碳酸二乙酯水溶液在室溫下混合，靜置共培育20分鐘，得到載藥納米膠束。實例6兩親性三嵌段共聚物采用實施例I制備得到的羧基聚乙二醇-聚賴氨酸-聚亮氨酸三嵌段共聚物。配制濃度范圍為2mg/ml的多烯紫杉醇溶液及濃度范圍為4mg/ml的兩親性三嵌段共聚物溶液，將100 μ I多烯紫杉醇溶液與Iml兩親性三嵌段共聚物溶液混合，得到混合溶液。向混合溶液中逐滴加入Iml超純水，隨后將得到的混合液置于分子截留量在9000的透析袋中，于2000ml超純水中室溫透析24小時，得到包含多烯紫杉醇的聚合物復(fù)合體。配置濃度為50 μ g/ml的Bcl_2 siRNA焦碳酸二乙酯水溶液，將2 μ g的包含多烯紫杉醇的聚合物復(fù)合體與含有2μ I的Bcl-2 siRNA焦碳酸二乙酯水溶液在室溫下混合，靜置共培育20分鐘，得到載藥納米膠束。如圖6所示為實例2-6制備的不同比例的藥物載體與siRNA電泳圖，該實驗結(jié)果證明了，當(dāng)載體與siRNA的質(zhì)量比大于等于5時基因是可以完全負載的。以上所述實施例僅表達了本發(fā)明的幾種實施方式，其描述較為具體和詳細，但并不能因此而理解為對本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬于本發(fā)明的保護范圍。因此，本發(fā)明專利的保護范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。
權(quán)利要求
1.一種載藥納米膠束，其特征在于，所述載藥納米膠束為Bcl-2 siRNA、多烯紫杉醇以及由兩親性三嵌段共聚物形成的具有三層結(jié)構(gòu)的復(fù)合體，其中，所述兩親性三嵌段共聚物為包含聚乙二醇衍生物、聚賴氨酸和聚亮氨酸的線性高分子化合物，所述聚賴氨酸的一端通過酰胺鍵與所述聚乙二醇衍生物相連，另一端通過肽鍵與所述聚亮氨酸相連；所述聚亮氨酸構(gòu)成所述復(fù)合體的內(nèi)層，所述聚賴氨酸構(gòu)成所述復(fù)合體的中間層，所述聚乙二醇衍生物構(gòu)成所述復(fù)合體的外層；所述Bcl-2 siRNA分散在中間層的所述聚賴氨酸中，所述多烯紫杉醇分散在內(nèi)層的所述聚亮氨酸層中。
2.如權(quán)利要求I所述的載藥納米膠束，其特征在于，所述聚乙二醇衍生物為氨基聚乙二醇羧酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的載藥納米膠束，其特征在于，所述兩親性三嵌段共聚物中所述聚乙二醇衍生物、所述聚賴氨酸及所述聚亮氨酸的單體摩爾比為45:10:40。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的載藥納米膠束，其特征在于，所述Bcl-2siRNA包括序列為SEQ ID NO: I的正義鏈及序列為SEQ ID NO: 2的反義鏈。
5.如權(quán)利要求1-4中任一項所述的載藥納米膠束在制備治療乳腺癌藥物中的應(yīng)用。
6.一種載藥納米膠束的制備方法，其特征在于，包括如下步驟 配制濃度范圍為O. 5-2mg/ml的多烯紫杉醇溶液及濃度范圍為2_4mg/ml的兩親性三嵌段共聚物溶液，將所述多烯紫杉醇溶液與所述兩親性三嵌段共聚物溶液按照體積比為50-100:1000的比例混合后得到混合溶液，其中，所述兩親性三嵌段共聚物為包含聚乙二醇衍生物、聚賴氨酸和聚亮氨酸的線性高分子化合物，所述聚賴氨酸的一端通過酰胺鍵與所述聚乙二醇衍生物相連，另一端通過肽鍵與所述聚亮氨酸相連，所述多烯紫杉醇溶液及所述兩親性三嵌段共聚物溶液中溶劑均為二甲基亞砜； 向所述混合溶液中逐滴加入與所述兩親性三嵌段共聚物溶液同體積的水，隨后將得到的混合液置于分子截留量在3500的透析袋中，于水中室溫透析得到包含多烯紫杉醇的聚合物復(fù)合體，所述聚亮氨酸的疏水作用使所述兩親性三嵌段共聚物形成具有三層結(jié)構(gòu)的復(fù)合體，所述聚亮氨酸構(gòu)成所述復(fù)合體的內(nèi)層，所述聚賴氨酸構(gòu)成所述復(fù)合體的中間層，所述聚乙二醇衍生物構(gòu)成所述復(fù)合體的外層，疏水性的所述多烯紫杉醇分散在內(nèi)層的所述聚亮氨酸中； 按照所述包含多烯紫杉醇的聚合物復(fù)合體與Bcl-2 siRNA的質(zhì)量比為5-30:1的比例，將所述包含多烯紫杉醇的聚合物復(fù)合體加入至濃度為50-100 μ g/ml的Bcl-2 siRNA焦碳酸二乙酯水溶液中，混合均勻,靜置20分鐘，Bcl-2 siRNA被帶正電荷的聚賴氨酸吸附而分散在中間層的所述聚賴氨酸中，得到所述載藥納米膠束。
7.如權(quán)利要求6所述的載藥納米膠束的制備方法，其特征在于，所述聚乙二醇衍生物為氨基聚乙二醇羧酸。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的載藥納米膠束的制備方法，其特征在于，所述兩親性三嵌段共聚物中所述聚乙二醇衍生物、所述聚賴氨酸及所述聚亮氨酸的單體摩爾比為45:10:40。
9.如權(quán)利要求6所述的載藥納米膠束的制備方法，其特征在于，所述Bcl-2siRNA包括序列為SEQ ID NO: I的正義鏈及序列為SEQ ID NO: 2的反義鏈。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種載藥納米膠束及其制備方法和應(yīng)用。該載藥納米膠束以聚乙二醇衍生物-聚賴氨酸-聚亮氨酸兩親性三嵌段共聚物為載體，在水溶液中自組裝形成具有傳輸基因與藥物的三層結(jié)構(gòu)的納米膠束；其中，聚亮氨酸之間的疏水作用使共聚物在水中形成膠束的核，用于包載疏水性藥物多烯紫杉醇；聚賴氨酸使納米膠束帶正電荷，用于結(jié)合帶負電的抗凋亡蛋白小干擾RNA；聚乙二醇用于保護載有藥物和基因的納米膠束的穩(wěn)定性，延長納米膠束在體內(nèi)的循環(huán)時間。納米膠束共同負載抗凋亡蛋白小干擾RNA基因藥物和多烯紫杉醇藥物，將基因治療藥物與化療藥物聯(lián)合治療癌癥能夠發(fā)揮兩種藥物的協(xié)同增效作用，為更好的治療乳腺癌指明了方向。
文檔編號A61K31/337GK102920649SQ201210305540
公開日2013年2月13日 申請日期2012年8月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月24日
發(fā)明者蔡林濤, 鄭翠芳, 鄧吉喆, 龔萍, 鄭明彬, 易虎強 申請人:中國科學(xué)院深圳先進技術(shù)研究院