專利名稱：一種能降解多種中藥材的醋酸桿菌的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物，具體是一種能降解多種中藥材的醋酸桿菌及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
中醫(yī)中藥起源于中國。幾千年來中藥為我國人們的健康做出了重要的貢獻(xiàn)，并經(jīng)過積累，形成了系統(tǒng)的中醫(yī)藥理論和大量的經(jīng)過實(shí)踐檢驗(yàn)的成藥驗(yàn)方。它是中華民族的瑰寶，在預(yù)防和治療疾病方面發(fā)揮著重要的作用。隨著國際交流的加深，中藥作為天然藥物的優(yōu)勢逐漸顯現(xiàn)，引起了世界的關(guān)注。作為天然藥物的有效成分，是中藥發(fā)揮藥效的基礎(chǔ)；有效成分含量低，結(jié)構(gòu)復(fù)雜， 不易合成，在野生植物中分離難以達(dá)到工業(yè)生產(chǎn)的要求；含有有效成分的中藥材人工培育成本高，周期長，無法保證市場的需求。傳統(tǒng)中藥材炮制工藝是通過熬制，把中藥材中的有效成分用水煮的方法提取出來。這種方法有以下缺點(diǎn)1、由于熬制時間、溫度、壓力不能統(tǒng)一，中藥材中的有效成分難以完全被提取出來；2、熬制過程中溫度很高，有可能破壞了那些熱敏感性的有效成分；3、通過單純熬制浸提出的中藥成分大多是有效成分的中間體，須經(jīng)人體內(nèi)的益生菌轉(zhuǎn)化，最終成為起作用的有效成分，進(jìn)入血液，由于人體益生菌狀況不同，從而產(chǎn)生見效慢或不見效等情況。目前，中藥材發(fā)酵已引起廣泛關(guān)注，在微生物的生長繁殖過程中產(chǎn)生的各種酶，將中藥材的有效成分釋放、轉(zhuǎn)化出來，將中藥材成分轉(zhuǎn)化為活性成分或?qū)⒍拘猿煞址纸鈴亩档退幬锏亩靖弊饔?。且中藥材發(fā)酵是在常溫常壓下進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化過程，最大限度的保護(hù)了中藥材中的活性成分。研究表明，中藥材有效成分大多是微生物次生代謝產(chǎn)物，利用微生物發(fā)酵轉(zhuǎn)化的方法可大大提高中藥材中活性成分的含量。但是，以往常見的醋酸桿菌繁殖、生長常常被本申請?zhí)峒暗闹兴幉挠行С煞炙种啤?br>
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是要提供一種能降解多種中藥材的醋酸桿菌及其應(yīng)用。本發(fā)明采用的醋酸桿菌為一種新型的醋酸桿菌，經(jīng)鑒定，為厚壁菌門，梭菌綱，梭菌目，真桿菌科，醋酸桿菌屬(Acetobacter sp.)。我們命名為GLYSM66,已于2011年7月5日保藏在武漢大學(xué)中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱CCTCC)，保藏編號為CCTCC NO:M2011238，該菌株形態(tài)特征細(xì)胞呈桿狀，細(xì)胞的長度和直徑比列約為2-5:1，暫未發(fā)現(xiàn)該菌株對人、動物和植物有害，并且該微生物對環(huán)境沒有污染。本醋酸桿菌GLYSM66是本專利申請人從普通醋酸桿菌中分離、篩選得到，其篩選方法包括如下步驟
(O取向陽花、蕎麥根、千斤撥、一朵云葉、七葉一枝花五種中藥材，粉碎、過100目篩，之后分別高壓滅菌30分鐘，五種中藥材等量混合或單獨(dú)成粉備用；
(2)取米醋用溫火煮開后自然冷卻至室溫；(3)用米醋浸泡藥材，藥材與米醋的質(zhì)量體積比(公斤升)為I: 5，浸泡溫度20-35°C，浸泡時間10天，備用；
(4)用中藥發(fā)酵液中的一般的醋酸桿菌使用LB培養(yǎng)基培養(yǎng)擴(kuò)大；
(5)將步驟(4)培養(yǎng)擴(kuò)大的醋酸桿菌接種到步驟(3)的浸泡液中；
(6)接種后放在陰涼處，20-35°C發(fā)酵；
(7)取不同發(fā)酵時間的發(fā)酵液，測定一般的有效成分一總黃酮和總皂苷，同時經(jīng)過1000倍顯微鏡鏡檢，比較五種中藥材等量混合的樣品與五種中藥材單一的樣品，結(jié)果發(fā)現(xiàn)前者不但總黃酮和總皂苷含量高，而且發(fā)酵液中存有單一的微生物；后者液體中的微生物種類比較多。對前者的微生物進(jìn)行分離篩選，繼代培養(yǎng)，最終得到一種能降解多種復(fù)配中藥的醋酸桿菌，經(jīng)鑒定，我們命名為GLYSM66，于2011年7月5日保藏在武漢大學(xué)中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱CCTCC)，保藏編號為CCTCC NO :M2011238。
·
所述的LB培養(yǎng)基由氯化鈉IOg,蛋白胨IOg,酵母膏5g加水定容至IL制成。本發(fā)明的積極意義是本發(fā)明分離篩選出了一種能降解多種中藥材或其復(fù)配的混合料的醋酸桿菌，這種醋酸桿菌使中藥中的有效成分最大程度地釋放出來，為提高中藥有效成分的含量、降低中藥的毒副作用、增強(qiáng)中藥的療效創(chuàng)出了一條新路。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明醋酸桿菌(Acetobactersp. ) GLYSM66. CCTCC NO M2011238 的篩選方法是將一般的醋酸桿菌經(jīng)LB培養(yǎng)基活化培養(yǎng)后，接種到向陽花、蕎麥根、千斤撥、一朵云葉、七葉一枝花等多種中藥材或其復(fù)配的混合料的浸泡液中，置于陰涼處20-35°C發(fā)酵，選取發(fā)酵液中黃酮和皂苷含量高的菌株進(jìn)行分離、篩選、繼代培養(yǎng)得到。我們推測該菌株是對環(huán)境適應(yīng)被誘變出的醋酸桿菌。實(shí)施例I
應(yīng)用本發(fā)明醋酸桿菌降解向陽花、蕎麥根、千斤撥、一朵云葉和七葉一枝花五種復(fù)配中藥材的方法是
(1)將本發(fā)明醋酸桿菌使用LB培養(yǎng)基培養(yǎng)繁殖，LB培養(yǎng)基的組成氯化鈉10g，蛋白胨IOg,酵母膏5g，加水定容到1L，溶液pH7. O,培養(yǎng)溫度30°C，不添加抗生素；
(2)取經(jīng)粉碎、過100目篩的向陽花、蕎麥根、千斤撥、一朵云葉和七葉一枝花各I千克混合，之后常規(guī)高壓滅菌30分鐘；
(3)將米醋用溫火煮開后自然冷卻至室溫；
(4)用米醋浸泡藥材，藥材與米醋的質(zhì)量體積比(公斤升)=1 (5-10)，浸泡溫度20-35°C，浸泡時間10天;
(5)將步驟(I)培養(yǎng)擴(kuò)大的醋酸桿菌接種到步驟(4)的浸泡液中；
(6)置于在陰涼處，20-35°C發(fā)酵一年，使藥材中的活性成分被降解釋放出來。經(jīng)過比較發(fā)酵后的液體和發(fā)酵前的液體總黃酮、總皂苷等有效成分的含量，發(fā)現(xiàn)前者總黃酮和總皂苷等有效成分的含量都高出后者20倍以上；同時推測前者由于在酸性環(huán)境下，絕大多數(shù)黃酮和皂苷分子處在還原態(tài)。表明本發(fā)明提供的菌株在加入到上述復(fù)合中藥中后，通過自身的生長繁殖代謝，可促進(jìn)復(fù)合中草藥材的發(fā)酵，使中藥材有效成分徹底地釋放出來。
實(shí)施例2
應(yīng)用本發(fā)明的醋酸桿菌分別降解向陽花、蕎麥根、千斤撥、一朵云葉和七葉一枝花的方 法是 按實(shí)施例I的方法步驟制備，不同的是將向陽花、蕎麥根、千斤撥、一朵云葉和七葉一枝花分別與米醋浸泡。
權(quán)利要求
1.一種能降解多種中藥材的醋酸桿菌(Acetobacter sp. ) GLYSM66 CCTCC NO:M2011238。
2.權(quán)利要求I所述醋酸桿菌在降解多種中藥材中的應(yīng)用，其特征是該醋酸桿菌是通過包括如下步驟的篩選方法得到的(1)將本發(fā)明醋酸桿菌使用LB培養(yǎng)基培養(yǎng)繁殖，不添加抗生素，繁殖培養(yǎng)溫度30°C； (2)選用向陽花、蕎麥根、千斤撥、一朵云葉和七葉一枝花五種中藥材，分別粉碎、過100目篩，之后常規(guī)高壓滅菌30分鐘，單獨(dú)或等量混合備用； (3)將米醋用溫火煮開后自然冷卻至室溫； (4)用米醋浸泡藥材，藥材與米醋的質(zhì)量體積比(公斤升)=1 (5-10)，浸泡溫度20-35°C，浸泡時間10天; (5)將步驟(I)培養(yǎng)擴(kuò)大的醋酸桿菌接種到步驟(4)的浸泡液中； (6)置于在陰涼處，20-35°C發(fā)酵一年。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征是所述的LB培養(yǎng)基的組成氯化鈉10g，蛋白胨10g，酵母膏5g加水定容到1L，溶液的pH為7.0。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種能降解多種中藥材的醋酸桿菌及其應(yīng)用，其特征是醋酸桿菌為厚壁菌門，梭菌綱，梭菌目，真桿菌科，醋酸桿菌屬(Acetobactersp.)，名稱為GLYSM66，已于2011年7月5日保藏在武漢大學(xué)中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱CCTCC)，保藏編號為CCTCCNOM2011238。本發(fā)明的積極意義是本發(fā)明分離篩選出了一種能降解多種復(fù)配中藥的醋酸桿菌，這種醋酸桿菌能使中藥中的一般有效成分最大程序釋放出來，為提高中藥有效成分含量、降低中藥的毒副作用、增強(qiáng)中藥的療效創(chuàng)出了一條新路。
文檔編號A61K36/896GK102816722SQ20121029094
公開日2012年12月12日 申請日期2012年8月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月2日
發(fā)明者莫壽科, 郝再彬 申請人:莫壽科