冬凌草葉水提物的納米結(jié)構(gòu)及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及冬凌草葉用蒸餾水80℃提取制備水提物、涉及該水提物濃縮得到的固體在水溶液中的納米結(jié)構(gòu)、進(jìn)一步涉及納米結(jié)構(gòu)對(duì)抗骨質(zhì)疏松活性的影響。
【專利說(shuō)明】冬凌草葉水提物的納米結(jié)構(gòu)及應(yīng)用
[0001] _
發(fā)明領(lǐng)域
[0002]本發(fā)明涉及冬凌草葉用蒸餾水80 °C提取制備水提物、涉及該水提物濃縮得到的固體在水溶液中的納米結(jié)構(gòu)、進(jìn)一步涉及納米結(jié)構(gòu)對(duì)抗骨質(zhì)疏松活性的影響。本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
[0003]
【背景技術(shù)】
[0004]冬凌草(DLC),是唇形科香茶菜屬植物碎米極Rabdosia rubescens (Hems1.)Hara的全草。冬凌草為多年生草本植物，廣泛分布于我國(guó)黃河長(zhǎng)江流域，主產(chǎn)于河南濟(jì)源太行山、王屋山區(qū)一帶。因具有清熱解毒、清咽利喉和消腫止痛功能，民間常年將冬凌草葉當(dāng)作茶葉煮水飲用。在過(guò)去的30多年里，冬凌草的化學(xué)成分及藥理作用研究主要集中在葉的脂溶性部分，代表性成分為冬凌草甲素和冬凌草乙素。通過(guò)長(zhǎng)期研究積累，發(fā)明人披露了冬凌草葉水提物的21種酚酸。它們是單咖啡酰酒石酸，丹參素，丹參素咖啡酰酒石酸，
2-綠原酸-3-對(duì)羥基桂皮酸酒石酸酯，單阿魏酰酒石酸，綠原酸，咖啡酰蘋(píng)果酸，二咖啡酰酒石酸，迷迭香酰丹參素酒石酸酯，yuannaneic acid E,紫草酸，咖啡酸，咖啡酰對(duì)羥基桂皮酰酒石酸，氫化紫草酸。2-丹參素-3-乙酰莽草酸酒石酸酯，丹參素咖啡酰酒石酸，2-(丙二?？崴釂熙?-3-丹參素酒石酸奎尼酸單酯，水化丹酚酸B，丹參素酰丹參素酰迷迭香酸酯，丹酚酸B和迷迭香酸。這些酚酸在冬凌草葉水提物中的相對(duì)含量接近83%。應(yīng)當(dāng)指出的是，到目前為止還沒(méi)有任何與冬凌草葉水提物納米結(jié)構(gòu)的報(bào)道。
[0005]通過(guò)長(zhǎng)期研究積累，發(fā)明人認(rèn)識(shí)到這些酚酸在水溶液中可以通過(guò)J1-Ji相互作用，氫鍵相互作用和疏水性相互作用發(fā)生共組裝，形成納米結(jié)構(gòu)。恰恰是這些酚酸在水溶液中共組裝形成的納米結(jié)構(gòu)，使得冬凌草葉水提物顯示重要的生物活性。根據(jù)這些認(rèn)識(shí)，發(fā)明人提出了本發(fā)明。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的第一個(gè)內(nèi)容是提供冬凌草葉水提物。
[0007]本發(fā)明的第二個(gè)內(nèi)容是測(cè)定冬凌草葉水提物的納米結(jié)構(gòu)。
[0008]本發(fā)明的第三個(gè)內(nèi)容是闡明冬凌草葉水提物的納米結(jié)構(gòu)與抗骨質(zhì)疏松活性的關(guān)
系O
[0009]
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0010]圖1在濃度為78.75 mg/ml的超純水溶液中，冬凌草葉的水提物以直徑為102.3nm的納米球的聚集體存在。[0011]圖2在濃度為15.75 mg/ml的超純水溶液中冬凌草莖的水提物以直徑為46.4-110.7 nm的納米球存在。
[0012]圖3在濃度為3.15 mg/ml的超純水溶液中冬凌草莖的水提物以直徑為58.8-147.1 nm的納米球存在。
[0013]圖4在濃度為0.63 mg/ml的超純水溶液中冬凌草葉的水提物以直徑為81.8-218.2 nm的納米球存在。
[0014]
【具體實(shí)施方式】
[0015]為了進(jìn)一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實(shí)施例。這些實(shí)施例完全是例證性的，它們僅用來(lái)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行具體描述，不應(yīng)當(dāng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。
[0016]實(shí)施例1冬凌草葉水提物的制備
21 g干冬凌草葉自來(lái)水洗凈之后加500 ml雙蒸水于60 - 100 0C,優(yōu)選80 °C攪拌提取10 - 60分鐘，優(yōu)選30分鐘。過(guò)濾得到的清液于40 ° C減壓濃縮，得到6.3 g冬凌草葉水提物，為淡黃色固體，研成粉末，供后面的研究使用。
[0017]實(shí)施例2冬凌草葉水提物的納米結(jié)構(gòu)
為了描述冬凌草葉水提物的納米結(jié)構(gòu)，本發(fā)明將冬凌草葉水提物的淡黃色固體配成濃度為 78.75 mg/ml, 15.75 mg/ml, 3.15 mg/ml 和 0.63 mg/ml 的超純水溶液，然后將溶液滴在銅網(wǎng)上，35 ° C揮發(fā)24 h至干溶后按標(biāo)準(zhǔn)操作(20 eV能量窗口，6000 - 400, 000倍)在透射電鏡(JSM- 6360 LV, JE OL, Tokyo, Japan)下觀察納米形態(tài)。測(cè)定的透射電鏡照片顯示在圖1 - 4中。
[0018]圖1說(shuō)明在濃度為78.75 mg/ml的超純水溶液中，冬凌草葉的水提物以直徑為102.3 nm的納米球的聚集體存在。
[0019]圖2說(shuō)明在濃度為15.75 mg/ml的超純水溶液中，冬凌草葉的水提物以直徑為
46.4-110.7 nm的納米球存在。
[0020]圖3說(shuō)明在濃度為3.15 mg/ml的超純水溶液中，冬凌草葉的水提物以直徑為58.8-147.1 nm的納米球存在。
[0021]圖4說(shuō)明在濃度為0.63 mg/ml的超純水溶液中，冬凌草葉的水提物以直徑為81.8-218.2 nm的納米球存在。
[0022]圖2-4說(shuō)明當(dāng)濃度從15.75 mg/ml降至3.15 mg/ml再降至0.63 mg/ml時(shí),冬凌草葉的水提物形成的納米球的直徑逐步增大。這種現(xiàn)象揭示，我們可以通過(guò)控制冬凌草葉的水提物的濃度來(lái)控制冬凌草葉的水提物形成的納米球的直徑。圖1-2說(shuō)明當(dāng)濃度從78.75mg/ml降至15.75 mg/ml時(shí),不僅冬凌草葉的水提物形成的納米球的直徑減小,而且納米球的聚集體也不再存在。這種現(xiàn)象同樣揭示，我們可以通過(guò)控制冬凌草葉的水提物的濃度來(lái)控制冬凌草葉的水提物形成的納米球的直徑和聚集狀態(tài)。
[0023]實(shí)施例3冬凌草葉水提物的抗骨質(zhì)疏松活性評(píng)價(jià)
5周齡ICR小鼠，體重25.7±2.1g, 48只隨機(jī)分組，即卵巢切除組+生理鹽水(稱生理鹽水組)、假手術(shù)組+生理鹽水(稱假手術(shù)組)、卵巢切除+17β-雌二醇(稱雌二醇組)、卵巢切除+冬凌草葉水提物(稱DLC組)。[0024]用2%戊巴比妥鈉按40 mg/kg劑量腹腔注射，麻醉小鼠，剪開(kāi)小鼠腹腔，找到兩側(cè)的輸卵管，在兩側(cè)輸卵管的盲端找到卵巢，去除小鼠雙側(cè)卵巢，結(jié)扎輸卵管(手術(shù)過(guò)程中如果小鼠蘇醒過(guò)來(lái)，則用棉花蘸取適量無(wú)水乙醚置于小鼠的鼻子處使之麻醉)。結(jié)扎好后，滴加幾滴青霉素至小鼠腹腔，再將小鼠腹腔縫合好，于傷口外面涂上適量0.1%苯扎溴銨消毒液，以避免傷口感染。
[0025]術(shù)后5天開(kāi)始口服給藥。卵巢切除組和假手術(shù)組小鼠每天口服0.2 ml生理鹽水。雌二醇組小鼠每天口服0.2 ml 17 β-雌二醇的生理鹽水溶液，劑量為30 μ g/kg。冬凌草葉水提物組小鼠每天口服0.2 ml冬凌草葉水提物的生理鹽水溶液，劑量為5 mg/kg,25 mg/kg, 125 mg/kg和625 mg/kg。給藥四周后用骨密度儀對(duì)小鼠股骨關(guān)節(jié)頭下方0.2 -
0.4 mm處進(jìn)行定量斷斷層掃描，得到骨礦物質(zhì)密度(表4及圖4)、稱體重、處死、分離小鼠的肺、肝、脾、子宮，得它們的凈重(表5)。取小鼠左側(cè)股骨、剔除干凈肌肉組織、用氯仿:甲醇(2:1)浸泡兩次(每次3小時(shí))脫脂、置120 °(:烘箱中烘6小時(shí)稱干重、置800 °馬福爐煅燒8小時(shí)稱灰重、計(jì)算灰重與干重的比值(g/g)得骨礦含量(表1)。
[0026]表1 口服冬凌草葉水提物對(duì)小鼠骨密度的影響
【權(quán)利要求】
1.冬凌草葉水提物的制備工藝，該工藝包括將干冬凌草葉自來(lái)水洗凈之后按1:24的比例加水于60 - 100 0C,優(yōu)選80 ° C攪拌提取10 - 60分鐘，優(yōu)選30分鐘，過(guò)濾得到的清液于40 °C減壓濃縮，得到冬凌草葉水提物干粉，為淡黃色固體。
2.冬凌草葉水提物在水溶液中的納米結(jié)構(gòu)。
3.冬凌草莖水提物在水溶液中的納米結(jié)構(gòu)對(duì)抗骨質(zhì)疏松活性的影響。
【文檔編號(hào)】A61P19/10GK103536652SQ201210236269
【公開(kāi)日】2014年1月29日 申請(qǐng)日期:2012年7月10日 優(yōu)先權(quán)日:2012年7月10日
【發(fā)明者】彭師奇, 趙明, 姚興河, 彭莉 申請(qǐng)人:彭莉