專利名稱：抑制癌干細胞生長的醫(yī)藥組成物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于一種抑制癌干細胞生長的醫(yī)藥組成物，其除了可抑制一般癌細胞生長外，還可抑制癌干細胞生長。
背景技術(shù)：
癌癥是位于十大死因之一，且已連續(xù)二十七年為居十大死因的榜首。引發(fā)癌癥起因主要為細胞變成異常且持續(xù)的自行分裂形成更多的細胞，則會產(chǎn)生癌癥。
有鑒于癌癥治療不易，目前除了使用手術(shù)、放射線治療、化學療法、賀爾蒙療法、生物制劑療法等西醫(yī)療法外，還有人選擇以更佳溫和的中醫(yī)療法進行癌癥治療。然而，無論是中醫(yī)或西醫(yī)療法，目前市面上使用的抗癌藥物僅能抑制癌細胞的生長，卻無法抑制癌干細胞。潛存于一般腫瘤細胞中的癌干細胞，雖然數(shù)量不多，但卻具有極高抗藥性，且會由分裂再產(chǎn)生更多的癌細胞形成腫瘤，為癌癥治療的一個瓶頸；目前西方醫(yī)學化學治療藥物只可以毒殺一般癌細胞，無法有效抑制癌干細胞，可以說目前生物醫(yī)學大部分已知的標準癌癥療法對癌干細胞根本束手無策。因此，若能有效抑制癌干細胞生長，勢必對于治療癌癥極具幫助。另一方面，中藥更是民眾普遍認為對身體較溫和的治療藥物，并具有較高的市場接受度。目前雖有一些臨床治療效果顯示，部分用于治療癌細胞的醫(yī)藥組成物確實可達到控制癌癥病情的功效，然而，這些醫(yī)藥組成物卻未經(jīng)實驗證實是否具有對于抑制癌細胞，與抑制癌干細胞的功效。因此，若能發(fā)展出一種醫(yī)藥組成物，其經(jīng)實驗證實后，確實可抑制癌細胞，尤其是癌細胞中前驅(qū)物即癌干細胞的生長，勢必可對于癌癥治療具有相當?shù)膸椭?br>
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種醫(yī)藥組成物，以能抑制癌干細胞的生長。除此之外，本發(fā)明的醫(yī)藥組成物，亦可達到抑制一般癌細胞生長的功效。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的抑制癌干細胞生長的醫(yī)藥組成物，包括一萃取物，該萃取物是將黃蓮、黃芩、黃柏、桅子、甘草、及蒼朮，以含水的溶液或含酒精的溶液加熱萃取而制得。于此醫(yī)藥組成物中，黃蓮為3至5重量份，黃芩為3至5重量份，黃柏為3至5重量份，桅子為3至5重量份，甘草為3至5重量份，蒼朮為3至5重量份。此外，本發(fā)明還提供另一種抑制癌干細胞生長的醫(yī)藥組成物，包括一萃取物，該萃取物是將黃蓮、升麻、當歸、生地黃及牡丹皮，以含水的溶液或含酒精的溶液加熱萃取而制得。
于此另一醫(yī)藥組成物中，黃蓮為3至5重量份，升麻為3至5重量份，當歸為3至5重量份，生地黃為3至5重量份，且牡丹皮為3至5重量份。于上述的兩種醫(yī)藥組成物中，是使用含水或含酒精的溶液加熱萃取所制得。若使用含酒精的溶液，則此含酒精的溶液較佳為20至40%的含酒精水溶液。此外，于萃取的過程中，可將含中藥材的溶液加熱至70°C以上。較佳地是將含中藥材的溶液加熱至70°C以上萃取，并持續(xù)至少60分鐘。由此，可制得本發(fā)明的醫(yī)藥組成物。


圖I是本發(fā)明實施例I的肺癌細胞經(jīng)不同濃度醫(yī)藥組成物處理后，其存活率的統(tǒng)計圖。圖2是本發(fā)明實施例I的肺癌細胞與正常細胞經(jīng)醫(yī)藥組成物處理后，其存活率的 統(tǒng)計圖。圖3是本發(fā)明實施例I的肺癌細胞經(jīng)半抑制量的醫(yī)藥組成物處理后，處理時間與存活率的關(guān)系圖。圖4是本發(fā)明實施例I的于各細胞周期中肺癌細胞所占比率的統(tǒng)計圖。圖5是本發(fā)明實施例I的GO期肺癌細胞的細胞比率統(tǒng)計圖。圖6是本發(fā)明實施例I的醫(yī)藥組成物對癌干細胞倍性變化的統(tǒng)計圖。圖7是本發(fā)明實施例2的肺癌細胞經(jīng)不同濃度醫(yī)藥組成物處理后，其存活率的統(tǒng)計圖。圖8是本發(fā)明實施例2的肺癌細胞與正常細胞經(jīng)醫(yī)藥組成物處理后，其存活率的統(tǒng)計圖。圖9是本發(fā)明實施例2的肺癌細胞經(jīng)半抑制量的醫(yī)藥組成物處理后，處理時間與存活率的關(guān)系圖。圖10是本發(fā)明實施例2的于各細胞周期中肺癌細胞所占比率的統(tǒng)計圖。圖11是本發(fā)明實施例2的GO期肺癌細胞的細胞比率統(tǒng)計圖。圖12是本發(fā)明實施例2的醫(yī)藥組成物對癌干細胞倍性變化的統(tǒng)計圖。
具體實施例方式于本發(fā)明的下述實施例中，是利用A549肺癌細胞株，分析本發(fā)明醫(yī)藥組成物對細胞存活率的影響，并以流式細胞儀檢測細胞周期被本發(fā)明醫(yī)藥組成物阻斷的步驟，也以染色分析法研究本發(fā)明醫(yī)藥組成物促進細胞自戕的作用，再以流式細胞儀雙熒光染色法判斷本發(fā)明醫(yī)藥組成物對癌干細胞毒殺效果。實施例I取藥材黃蓮(IOg)、黃芩(IOg)、黃柏(IOg)、桅子(IOg)、甘草(IOg)、以及蒼朮(IOg)，將上述藥材分別進行切片處理后，與水一起以加熱萃取方式進行藥液的制備，而得一萃取物。其中，加熱的條件為70°c，并持續(xù)加熱90分鐘。所制得的萃取物即為本實施例的醫(yī)藥組成物。測試例I-細胞存活率測試將A549肺癌細胞分別以5 ill、10 ill及50 ill實施例I的醫(yī)藥組成物處理72小時后，以MTT法測定細胞存活率，實驗結(jié)果如圖I所示。其中，橫軸代表控制組以及不同用量的醫(yī)藥組成物；而縱軸為細胞于570nm波長的吸收值，是用以代表細胞的存活率。由圖I的結(jié)果顯示，A549細胞在72小時處理后，隨著醫(yī)藥組成物的用量越高，細胞存活率越低。此外，由圖I的結(jié)果可推知，實施例I的醫(yī)藥組成物對于A549細胞的半抑制劑量為20u I0測試例2-細胞存活率測試接著，將A549肺癌細胞及MRC-5正常細胞，分別以20 yl的實施例I的醫(yī)藥組成物處理72小時后，以MTT法測定細胞存活率，實驗結(jié)果如圖2及圖3所示。其中，圖2是實施例I的肺癌細胞與正常細胞經(jīng)醫(yī)藥組成物處理后，其存活率的統(tǒng)計圖；而圖3是實施例I的肺癌細胞經(jīng)半抑制量的醫(yī)藥組成物處理后，處理時間與存活率的關(guān)系圖。 由圖2的結(jié)果顯示，當以半抑制劑量的實施例I醫(yī)藥組成物處理72小時后，A549肺癌細胞存活率有顯著的下降，而MRC-5正常細胞的存活率沒有下降的趨勢。因此，實施例I的醫(yī)藥組成物可顯著地抑制癌細胞的生長，卻不會對正常細胞生長產(chǎn)生明顯的抑制效果。由圖3的結(jié)果顯示，當以半抑制劑量的實施例I醫(yī)藥組成物處理24、48及72小時后，相較于未經(jīng)實施例I的醫(yī)藥組成物處理的A549肺癌細胞，經(jīng)實施例I的醫(yī)藥組成物處理的A549肺癌細胞，其存活率有顯著的降低。同時，隨著時間的增加，存活率的差異程度越大。測試例3-細胞周期阻斷步驟測試將上述經(jīng)半抑制劑量20 U I的實施例I的醫(yī)藥組成物，處理A549肺癌細胞24、48、及72小時后,進行PI染色，而后以流式細胞儀檢測肺癌細胞的DNA含量，以測量肺癌細胞的細胞周期分布情形。實驗的定量統(tǒng)計結(jié)果如圖4所示，其中，橫軸的G0/G1、S、G2/M分別代表細胞周期，而縱軸則代表各周期細胞所占的比率。由圖4的結(jié)果顯示，相較于未經(jīng)實施例I醫(yī)藥組成物處理的對照組肺癌細胞，經(jīng)實施例I醫(yī)藥組成物處理的肺癌細胞，無論經(jīng)24、48、或72小時，G0/G1期的細胞比率均有顯著上升。此結(jié)果顯示，實施例I的醫(yī)藥組成物可能造成A549肺癌細胞在細胞周期G0/Glg滯的現(xiàn)象。測試例4-細胞周期阻斷步驟測試將經(jīng)半抑制劑量20 U I的實施例I的醫(yī)藥組成物，處理72小時后的A549肺癌細胞，以PI及Ki67抗體共染，而后以流式細胞儀檢測，以測量GO期肺癌細胞的細胞比率。其結(jié)果如圖5所示。由圖5的結(jié)果顯示，相較于未經(jīng)實施例I醫(yī)藥組成物處理的癌癥細胞，經(jīng)實施例I醫(yī)藥組成物處理的癌癥細胞，位于GO期的細胞比率有顯著的上升；此結(jié)果表示經(jīng)由實施例I醫(yī)藥組成物處理后，有較多的A549細胞離開細胞周期，進入不分裂的GO期。測試例5-癌干細胞比率檢測將經(jīng)半抑制劑量20 U I的實施例I的醫(yī)藥組成物，處理72小時后的A549肺癌細胞，以Hoechst33342 (或同時加入reserpine)染色,而后以流式細胞儀檢測外圍族群細胞(side population cell, SP)即癌干細胞比率。通過加入reserpine可抑制細胞ABCG2運輸?shù)鞍讓oechst33342染劑主動排出細胞外，由此比較有無加reserpine的結(jié)果,可定義出ABCG2表現(xiàn)量高的SP癌干細胞。
實驗的定量統(tǒng)計結(jié)果如圖6所示,其中縱軸表示倍性變化(Fold change),即有加reserpine與無加reserpine的比例。由圖6的結(jié)果顯示,經(jīng)由實施例I的醫(yī)藥組成物處理后，倍性變化可降至約0. 1，表示SP癌干細胞的細胞量較低，即癌干細胞的比率有顯著下降。因此，實施例I的醫(yī)藥組成物，確實可達到抑制癌干細胞生長的功效。實施例2取藥材黃蓮(IOg)、升麻(IOg)、當歸(IOg)、生地黃(IOg)、以及牡丹皮(IOg)，將上述藥材分別進行切片處理后，與水一起以加熱萃取方式進行藥液的制備，而得一萃取物。其中，加熱的條件為70°C，并持續(xù)加熱90分鐘。所制得的萃取物即為本實施例的醫(yī)藥組成物。測試例6-細胞存活率測試本測試例的測試方式與測試例I相同，除了使用實施例2的醫(yī)藥組成物取代實施 例I的醫(yī)藥組成物。實驗結(jié)果如圖7所示。由圖I的結(jié)果顯示，A549細胞在72小時處理后，隨著醫(yī)藥組成物的用量越高，細胞存活率越低。此外，由圖7的結(jié)果可推知，實施例I的醫(yī)藥組成物對于A549細胞的半抑制劑量為IlU I。測試例7-細胞存活率測試本測試例的測試方式與測試例2相同，除了使用以11 U I的實施例2的醫(yī)藥組成物，取代20iil的實施例I的醫(yī)藥組成物。實驗結(jié)果如圖8及圖9所示。由圖8的結(jié)果顯示，當以半抑制劑量的實施例2醫(yī)藥組成物處理72小時后，A549肺癌細胞存活率有顯著的下降，而MRC-5正常細胞的存活率沒有下降的趨勢。由圖9的結(jié)果顯示，當以半抑制劑量的實施例2醫(yī)藥組成物處理24、48及72小時后，相較于未經(jīng)實施例2的醫(yī)藥組成物處理的A549肺癌細胞，經(jīng)實施例2的醫(yī)藥組成物處理的A549肺癌細胞，其存活率有顯著的降低。同時，隨著時間的增加，存活率的差異程度越大。測試例8-細胞存活率測試本測試例的測試方式與測試例3相同，除了使用以11 Ul的實施例2的醫(yī)藥組成物，取代20 Ul的實施例I的醫(yī)藥組成物。實驗的定量統(tǒng)計結(jié)果如圖10所示。由圖10的結(jié)果顯示，相較于未經(jīng)實施例2醫(yī)藥組成物處理的對照組肺癌細胞，經(jīng)實施例2醫(yī)藥組成物處理的肺癌細胞，無論經(jīng)24、48、或72小時，G0/G1期的細胞比率均有顯著上升。此結(jié)果顯示，實施例2的醫(yī)藥組成物可能造成A549肺癌細胞在細胞周期G0/G1停滯的現(xiàn)象。測試例9-細胞周期阻斷步驟測試本測試例的測試方式系與測試例4相同，除了使用以11 Ul的實施例2的醫(yī)藥組成物，取代20 Ul的實施例I的醫(yī)藥組成物。實驗的定量統(tǒng)計結(jié)果如圖11所示。由圖11的結(jié)果顯示，相較于未經(jīng)實施例2醫(yī)藥組成物處理的癌癥細胞，經(jīng)實施例2醫(yī)藥組成物處理的癌癥細胞，位于GO期的細胞比率有顯著的上升；此結(jié)果表示經(jīng)由實施例2醫(yī)藥組成物處理后，有較多的A549細胞離開細胞周期，進入不分裂的GO期。測試例10-癌干細胞比率檢測本測試例的測試方式系與測試例4相同，除了使用以11 Ul的實施例2的醫(yī)藥組成物，取代20 iU的實施例I的醫(yī)藥組成物。實驗的定量統(tǒng)計結(jié)果如圖12所示。由圖6的結(jié)果顯示，經(jīng)由實施例2的醫(yī)藥組成物處理后，倍性變化可降至約0. 2，表示SP癌干細胞的表現(xiàn)量較低，即癌干細胞的比率有顯著下降。因此，實施例2的醫(yī)藥組成物，確實可達到抑制癌干細胞生長的功效。由上述測試例I至10的結(jié)果顯示，本發(fā)明所提供的醫(yī)藥組成物，可同時達到抑制 癌細胞生長與癌干細胞生長的功效。上述實施例僅是為了方便說明而舉例而已，本發(fā)明所主張的權(quán)利范圍自應以申請的權(quán)利要求范圍所述為準，而非僅限于上述實施例。
權(quán)利要求
1.一種抑制癌干細胞生長的醫(yī)藥組成物，包括 一萃取物，該萃取物是將黃蓮、升麻、當歸、生地黃及牡丹皮，以含水的溶液或含酒精的溶液加熱萃取而制得。
2.如權(quán)利要求I所述的醫(yī)藥組成物，其中，該黃蓮為3至5重量份，該升麻為3至5重量份，該當歸為3至5重量份，該生地黃為3至5重量份，且該牡丹皮為3至5重量份。
3.如權(quán)利要求I所述的醫(yī)藥組成物，其中，該含酒精的溶液為20至40%的含酒精水溶液。
4.如權(quán)利要求I所述的醫(yī)藥組成物，其中，該萃取物是以該含水的溶液或該含酒精的溶液，加熱至70°C以上萃取而制得。
5.如權(quán)利要求I所述的醫(yī)藥組成物，其中，該萃取物是以該含水的溶液或該含酒精的溶液，加熱至70°C以上萃取，并持續(xù)至少60分鐘而制得。
全文摘要
本發(fā)明是有關(guān)于一種抑制癌干細胞生長的醫(yī)藥組成物，分別為兩組藥材或藥材混合物，以水萃取加熱或是酒精萃取后，取濾液而制得。本發(fā)明其中一組醫(yī)藥組成物包括黃蓮、黃芩、黃柏、梔子、甘草以及蒼朮。
文檔編號A61P35/00GK102670823SQ20121013788
公開日2012年9月19日 申請日期2010年2月5日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月5日
發(fā)明者李政育, 謝秀梅 申請人:李政育, 謝秀梅