專利名稱：石榴在制備治療或預(yù)防乙型肝炎病毒感染藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，更具體涉及一種石榴在制備治療或預(yù)防乙型肝炎病毒感染藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
乙型肝炎病毒Ofepatitis B virus, HBV)發(fā)現(xiàn)于上世紀(jì)六十年代，是乙型肝炎的病原體。乙型肝炎病毒感染是全球范圍內(nèi)慢性肝炎、肝硬化、肝癌的主要成因之一。HBV主要通過血液、性、母嬰等途徑傳播。全世界有1/4的人生活在HBV流行區(qū)域，有20億人是HBV攜帶者，其中3. 5到4億人為慢性感染者，每年有近100萬人死于由HBV引發(fā)的肝硬化、 肝功能衰竭和肝癌。HBV屬于嗜肝DNA病毒科哺乳動物病毒屬的一員。完整的HBV顆粒直徑僅為42nm，又名Dane顆粒，分為包膜與核心兩個部分。包膜由通常所稱的乙肝表面抗原(HBsAg)，SP小表面蛋白(S蛋白)以及中表面蛋白(M蛋白)和大表面蛋白(L蛋白)構(gòu)成，S蛋白含量最高。核心部分即病毒的核衣殼，直徑約28nm，呈二十面體立體對稱，主要含有核心抗原(HBcAg)等，核衣殼內(nèi)即為HBV的基因組，是高度緊密、共價非閉合環(huán)狀DNA分子，為病毒復(fù)制的主體。HBV基因組全長約3. 2kb，，基因組高度重疊，其中負(fù)鏈DNA為完整長度，正鏈DNA則不完整。含有四個開放讀碼框(ORF)，即S區(qū)、C區(qū)、X區(qū)以及P區(qū)。S區(qū)主要編碼上述S蛋白，M蛋白和L蛋白，C區(qū)主要編碼HBcAg和HBeAg。X區(qū)和P區(qū)分別編碼X蛋白和多聚酶蛋白P，前者具重要的調(diào)節(jié)功能，后者則是一種多功能聚合酶，具有逆轉(zhuǎn)錄酶、RNaseH活性，為HBV復(fù)制所必需。HBV生活周期復(fù)雜，其通過前SI多肽與宿主肝細(xì)胞表面的一個或多個蛋白相互作用從而進(jìn)入宿主體內(nèi)。當(dāng)病毒吸附到細(xì)胞上之后，病毒脫去包膜進(jìn)入到肝細(xì)胞內(nèi)，并脫衣殼。病毒的基因組(rcDNA)進(jìn)入到細(xì)胞核內(nèi)，rcDNA在病毒蛋白和宿主細(xì)胞因子的幫助下修復(fù)成共價閉合的環(huán)狀 DNA(covalently closed circular DNA, cccDNA)。細(xì)胞的 RNA聚合酶II以cccDNA為模板轉(zhuǎn)錄出3. 2kbHBV前基因組RNA(pregenomic RNA, pgRNA)和precore mRNA以及2. 4、2. I和O. 8kb三種長度的mRNA,分別編碼核心蛋白(HBcAg) >HBeAg前體蛋白、病毒聚合酶P蛋白、前SI、前S2、HBsAg蛋白和X蛋白。pgRNA出核后，在胞質(zhì)中形成ε pgRNA,并與病毒的聚合酶P蛋白共價結(jié)合,誘發(fā)核衣殼化。在HBcAg聚集形成衣殼的同時，PgRNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄酶合成負(fù)鏈DNA，與此同時pgRNA被P蛋白的RNaseH亞基降解。然后DNA聚合酶以負(fù)鏈為模板合成正鏈，形成含有rcDNA的成熟的核衣殼。新合成的核衣殼絕大部分和病毒的表面蛋白在肝細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體中進(jìn)行裝配，形成新的具有感染性的病毒粒子，再以出芽的方式從肝細(xì)胞中釋放出來。此外，一部分新合成的核衣殼又進(jìn)入細(xì)胞核中，補(bǔ)充核內(nèi)的cccDNA。目前經(jīng)歐美FDA批準(zhǔn)的用于慢性HBV感染臨床治療的藥物僅為免疫調(diào)節(jié)劑干擾素和核苷(酸)類似物兩大類。干擾素有IFN-α和pegylated IFN-α，而臨床顯示其只對少數(shù)病人有效，但卻需要注射給藥，價格昂貴而且還有諸多副作用。核苷類似物近年發(fā)展迅速，已有五種應(yīng)用于臨床拉米夫定、阿德福韋、恩替卡韋、替比夫定、替諾福韋，均屬于DNA聚合酶抑制劑，雖能有效的抑制病毒的復(fù)制，但并不能有效的清除感染細(xì)胞中的病毒，且長期用藥容易導(dǎo)致病毒發(fā)生突變，從而導(dǎo)致耐藥株的產(chǎn)生。近年來，一些針對HBV生活史的新的靶點的藥物已在臨床前或臨床研究中。但這些藥物都不能徹底清除病毒，也無直接作用于cccDNA的藥物，故亟待研發(fā)新的抗HBV藥物，特別是能直接抑制cccDNA形成或清除已存在于感染細(xì)胞核中的cccDNA。石榴 不僅可以食用，而且具有很多醫(yī)用功能(降血脂、抗氧化、抗病毒、抗腫瘤、抗菌、治療糖尿病、治療腹瀉以及抗蠕蟲等)且無毒，已被用作中藥運(yùn)用到很多疾病的治療中。在中國石榴果皮已經(jīng)被用于治療腹瀉、子宮不規(guī)則出血、子宮滲血、腹痛，石榴花用于治療糖尿病，在印度草藥醫(yī)學(xué)中其樹皮和根用作驅(qū)蟲藥，而在南非則用石榴果治療腹瀉。由于石榴功能眾多，且具有強(qiáng)大的抗氧化功能，現(xiàn)在已越來越受醫(yī)藥科研工作者的青睞。安石榴苷(Punicalagin)是從石榴里提取的天然小分子化合物，目前沒有安石榴苷在抗乙型肝炎病毒方面的應(yīng)用。其水解產(chǎn)物鞣花酸(Ellagic acid)、沒食子酸(Gallic acid)和石榴皮鞣素(Punicalin)也都是石榴多酚的主要組成成分。目前雖有報道從葉下珠里分離的鞣花酸可以抑制HBeAg的分泌，但并無沒食子酸和石榴皮鞣素在抗乙型肝炎病毒方面的作用的報道，也沒有鞣花酸、沒食子酸和石榴皮鞣素在抗乙型肝炎病毒方面的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足，是在于提供了一種石榴及其成分安石榴苷、鞣花酸、沒食子酸和石榴皮鞣素在制備治療或預(yù)防乙型肝炎病毒感染藥物中的應(yīng)用，從而為臨床上乙型肝炎的治療提供安全高效毒副作用小的中藥和小分子化合物。其中安石榴苷在無毒性范圍內(nèi)能夠有效地抑制受感染肝細(xì)胞內(nèi)的cccDNA的形成，這是一種新靶點，因此可進(jìn)一步開發(fā)為治療或預(yù)防乙型肝炎病毒感染的藥物，具有廣泛的應(yīng)用前景。為了實現(xiàn)上述的目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種石榴在制備治療或預(yù)防乙型肝炎病毒藥物中的應(yīng)用，石榴提取物有四個單體化合物安石榴苷，鞣花酸、沒食子酸、石榴皮鞣素。安石槽苷英文名punicalagin,化學(xué)名為 2, 3_(S)-Hexahydroxydiphenoyl_4,6_(S, S)-gallagyl-D_glucose,具有結(jié)構(gòu)式I所示的結(jié)構(gòu)式
權(quán)利要求
1.一種石榴在制備治療或預(yù)防乙型肝炎病毒感染藥物中的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于所述的石榴為石榴或石榴提取物。
3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述石榴提取物為安石榴苷、鞣花酸、沒食子酸、石榴皮鞣素單體或石榴多酚。
4.如權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于所述的石榴或石榴提取物作為活性成分制成任何一種藥學(xué)上可接受的藥用的劑型。
5.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述的石榴或石榴提取物安石榴苷、鞣花酸、沒食子酸、石榴皮鞣素單體或石榴多酚其中的一種或二至五種的任意混合。
6.如權(quán)利要求I或2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的石榴或石榴提取物與拉米夫定任意混合。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種石榴在制備治療或預(yù)防乙型肝炎病毒感染藥物中的應(yīng)用，首先檢測了各石榴來源的藥物對HepG2.117的細(xì)胞毒性，安石榴苷、沒食子酸、石榴皮鞣素的CC50依次為>500μM、334μM和218.86μM。接著檢測了安石榴苷、鞣花酸、沒食子酸和石榴皮鞣素對HBeAg和HBsAg的作用以及安石榴苷對病毒的DNA、RNA作用，結(jié)果顯示這四種化合物都能抑制HBeAg和HBsAg，其中安石榴苷可以顯著下調(diào)cccDNA。安石榴苷在HepG2.2.15細(xì)胞中顯著下調(diào)HBeAg和cccDNA含量而對胞內(nèi)總HBVDNA無作用，說明安石榴苷是以cccDNA為靶標(biāo)，直接清除肝細(xì)胞中的cccDNA。目前用于臨床治療的抗HBV感染的藥物都不能直接作用cccDNA，從而無法徹底清除病毒。實驗結(jié)果揭示了該藥物具有開發(fā)成抗乙型肝炎病毒感染藥物的前景。
文檔編號A61K31/366GK102631384SQ201210129629
公開日2012年8月15日 申請日期2012年4月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月28日
發(fā)明者劉春蘭, 陳緒林 申請人:中國科學(xué)院武漢病毒研究所