專(zhuān)利名稱(chēng)：用于維持血小板的功能的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及利用了 N —羥基甲酰胺衍生物的用于維持血小板的功能的組合物、用于調(diào)制血小板的方法、包含血小板的血液制劑、以及用于維持血液制劑中的血小板的功能的方法。
背景技術(shù)：
對(duì)于以白血病為代表的血液相關(guān)疾病的治療，使治療所需的量的血細(xì)胞穩(wěn)定地增殖并供給是極其重要的，因此迄今為止很多研究者進(jìn)行了想要使造血干細(xì)胞或造血前體細(xì)胞有效率地增殖的嘗試。已知在血細(xì)胞中巨核細(xì)胞為血小板前體細(xì)胞，即產(chǎn)生血小板的細(xì)胞，經(jīng)過(guò)proplatelet (胞體突起)結(jié)構(gòu)而產(chǎn)生血小板,在治療性應(yīng)用中處于重要位置。由于血小板在血液凝固(止血)中是必須的，因此在白血病、骨髓移植、抗癌治療等中的需求極其高。在血小板的生產(chǎn)中，迄今為止除了通過(guò)捐獻(xiàn)者的獻(xiàn)血進(jìn)行采集的方法以外，還嘗試了使用施與血小板生成素(TPO)的方法、使用從臍帶血或骨髓細(xì)胞分化巨核細(xì)胞的方法等。最近，也嘗試了使造血前體細(xì)胞在生物體外增殖，由這些前體細(xì)胞調(diào)制血小板的方法等。例如，本發(fā)明者等報(bào)告了由人胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)調(diào)制內(nèi)包造血前體細(xì)胞的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物，由該網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物比較大量并且有效率地進(jìn)行血小板的產(chǎn)生的方法(專(zhuān)利文獻(xiàn)I)、由人工多能性干細(xì)胞(iPS細(xì)胞)通過(guò)體外的培養(yǎng)體系而有效率地調(diào)制成熟巨核細(xì)胞和血小板的方法(專(zhuān)利文獻(xiàn)2)等。這樣，雖然在細(xì)胞外調(diào)制血小板本身的方法的研究進(jìn)展了，但是調(diào)制出的血小板的功能缺乏穩(wěn)定性，因此需要開(kāi)發(fā)出可大量地調(diào)制可耐受長(zhǎng)期保存的功能的血小板的方法。血小板與細(xì)胞外基質(zhì)的結(jié)合在誘導(dǎo)血液凝固(止血、血栓形成等)方面是重要的過(guò)程?？梢哉J(rèn)為該過(guò)程通過(guò)血小板受體GPIb介由α亞基(GPIba)而與血管性血友病因子(von Willebrand factor:VWF)結(jié)合來(lái)開(kāi)始的。然而報(bào)告了，在37°C附近的條件下,金屬蛋白酶的 ADAM17 (a disintegrinand metallopeptidase domain (去整合素和金屬蛋白酶結(jié)構(gòu)域)17)在GPIba的胞外區(qū)脫落(Shedding，切割而除去)，從而GPIb a與VWF的會(huì)合被抑制，血小板的血液凝 固功能消失(非專(zhuān)利文獻(xiàn)I和非專(zhuān)利文獻(xiàn)2)。因此預(yù)想，為了保持在體外調(diào)制的血小板的功能，需要至少抑制ADAM17的活性。實(shí)際上，由本發(fā)明者等報(bào)告了通過(guò)時(shí)機(jī)良好地添加直接抑制金屬蛋白酶活性的抑制劑(GM6001等)、或間接地抑制ADAM17等金屬蛋白酶活性活化的p38MAP激酶抑制劑，從而可以保持在體外調(diào)制的血小板的功能(專(zhuān)利文獻(xiàn)3)。然而，GM6001等抑制劑不僅抑制ADAM17的活性，而且也抑制其它金屬蛋白酶(特別是造血功能所必須的MMP9、MMP14)的活性，因此在利用了這些抑制劑的體外的血小板的調(diào)制中，需要在最多觀察到血小板產(chǎn)生的一定時(shí)期添加這些抑制劑。在缺乏一致性和再現(xiàn)性的細(xì)胞培養(yǎng)中要求估計(jì)該時(shí)機(jī)等復(fù)雜的操作，因此利用了這些抑制劑的血小板的調(diào)制方法，在大量地調(diào)制功能性血小板這方面，特別是在血小板產(chǎn)生體系的工廠化中，仍然不充分。此外認(rèn)為，非選擇性金屬蛋白酶抑制劑，因?yàn)橐种颇ば秃陀坞x型金屬蛋白酶、ADAM等全部金屬蛋白酶活性，因此通過(guò)在生物體內(nèi)部的使用，從而有發(fā)揮各種副作用(由抑制作用于每個(gè)臟器的必須MMP或ADAM產(chǎn)生的弊病)的危險(xiǎn)性。實(shí)際上，非選擇性金屬蛋白酶抑制劑由于會(huì)引起被稱(chēng)為肌肉骨骼綜合征的嚴(yán)重副作用，因此這些多數(shù)抑制劑的開(kāi)發(fā)已經(jīng)中止(非專(zhuān)利文獻(xiàn)3)。此外暗示出GM6001那樣的具有異羥肟酸結(jié)構(gòu)的抑制劑具有致突變性(非專(zhuān)利文獻(xiàn)4)。因此，通過(guò)使用了上述抑制劑的方法而得到的血小板在安全性這樣的方面也仍然不充分。另一方面，現(xiàn)在，作為保存由生物體調(diào)制的血小板的方法，除了在20°C 24°C下一邊攪拌一邊保存的方法以外，不存在有效的方法，因此認(rèn)為在為了保持血小板的功能而利用抑制ADAM17的金屬蛋白酶活性的方法的情況下，在上述室溫(20°C 24°C )條件下進(jìn)行血小板的調(diào)制也是有效的。然而，迄今為止，關(guān)于在室溫條件下，是否能夠由臍帶血或骨髓細(xì)胞分化成巨核細(xì)胞，此外，是否能夠由來(lái)源于ES細(xì)胞等的造血前體細(xì)胞產(chǎn)生血小板，未經(jīng)任何驗(yàn)證。如上所述，現(xiàn)狀是，能夠作為用于維持血小板的功能的組合物的有效成分而實(shí)用化的化合物還未發(fā)現(xiàn)，因此，用于在體外取得功能上穩(wěn)定的血小板的方法，特別是適于安全性高的血小板的大量生產(chǎn)的方法并未確立?，F(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專(zhuān)利文獻(xiàn)專(zhuān)利文獻(xiàn)1:國(guó)際公開(kāi)2008/041370號(hào)專(zhuān)利文獻(xiàn)2:國(guó)際公開(kāi)2009/122747號(hào)專(zhuān)利文獻(xiàn)3:國(guó)際公開(kāi)2009/119105號(hào)

非專(zhuān)利文獻(xiàn)非專(zhuān)利文獻(xiàn)1:Bergmeier 等人，Circulation Research, 2004 年，95 卷，660 670頁(yè)非專(zhuān)利文獻(xiàn)2 =Bergmeier 等人，Blood, 2003 年，102 卷，4229 4235 頁(yè)非專(zhuān)利文獻(xiàn)3:Peterson 等人，Cardiovasc.Res., 2006 年，69 卷，677 687 頁(yè)非專(zhuān)利文獻(xiàn)4:Skipper 等人，Cancer Res.，1980 年,40 卷,4704 4708 頁(yè)

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明所要解決的課題本發(fā)明是鑒于上述現(xiàn)有技術(shù)所具有的課題而提出的，其目的在于，尋找通過(guò)特異性抑制ADAM17的金屬蛋白酶活性，抑制GPIb α的脫落而能夠維持血小板的功能的化合物。進(jìn)一步的本發(fā)明的目的在于，提供利用尋找出的化合物來(lái)維持血小板的功能的組合物，有效率地產(chǎn)生血小板，和謀求血液制劑的品質(zhì)維持的提高。用于解決課題的手段本發(fā)明者等為了達(dá)成上述目的而反復(fù)進(jìn)行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，由來(lái)源于ES細(xì)胞、iPS細(xì)胞等的造血前體細(xì)胞向巨核細(xì)胞的分化誘導(dǎo)、由該巨核細(xì)胞引起的血小板的產(chǎn)生，不能在25°C的室溫條件的培養(yǎng)中進(jìn)行，而優(yōu)選37°C附近的培養(yǎng)條件。因此，本發(fā)明者等人接下來(lái)進(jìn)行了可特異性抑制在37°C附近的培養(yǎng)中發(fā)生的由ADAM17引起的GPIb α的脫落的化合物的探索。其結(jié)果是發(fā)現(xiàn)，具有特定的結(jié)構(gòu)的N—羥基甲酰胺衍生物對(duì)于ADAM17具有特異性的抑制作用，在添加于產(chǎn)生血小板的培養(yǎng)體系、來(lái)源于人外周血的血小板的情況下，可抑制GPIba的脫落，在37°C附近的溫度條件下也可維持血小板的功能。本發(fā)明者等人發(fā)現(xiàn)，由于尋找出的N—羥基甲酰胺衍生物的這樣的作用，該衍生物在有效率的血小板的產(chǎn)生、包含血小板的血液制劑的品質(zhì)維持的提高等方面是極其有用的，從而完成本發(fā)明。本發(fā)明中，更具體而言，提供以下的發(fā)明。(I).用于維持血小板的功能的組合物，其將下述通式(I)所示的化合物、或其鹽、
或它們的溶劑化物作為有效成分，
權(quán)利要求
1.一種用于維持血小板的功能的組合物，其將下述通式(I)所示的化合物、或其鹽、或它們的溶劑化物作為有效成分，
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，上述通式(I)所示的化合物為N— [2 —(4 一丁一2—炔基氧基苯磺?；?一 I 一(4 一二乙基氨基甲基苯基)乙基]一 N —羥基甲酰胺、或N —{4 一[2 — (4 一丁一 2 —炔基氧基苯磺?；?一 I 一(甲?；p基氨基)乙基]節(jié)基}甲磺酰胺。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合物，其為用于維持血小板的功能的試劑或?qū)Π“宓难褐苿┑奶砑觿?br> 4.一種用于調(diào)制血小板的方法，其特征在于，在由可分化成巨核細(xì)胞的細(xì)胞分化誘導(dǎo)成巨核細(xì)胞并由該巨核細(xì)胞產(chǎn)生血小板的培養(yǎng)體系中，添加下述通式(I)所示的化合物、或其鹽、或它們的溶劑化物，
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，上述通式(I)所示的化合物為N—[2 - (4 一丁一 2 -炔基氧基苯磺?；?一 I 一(4 一二乙基氨基甲基苯基)乙基]一 N —羥基甲酰胺、或N -{4 一 [2 —(4 一丁一 2 —炔基氧基苯磺?；?一 I 一(甲?；u基氨基)乙基]芐基}甲磺酰胺。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的方法，其特征在于，上述培養(yǎng)體系中的培養(yǎng)溫度為35 38。。。
7.一種培養(yǎng)物，其在由可分化成巨核細(xì)胞的細(xì)胞分化誘導(dǎo)成巨核細(xì)胞并由該巨核細(xì)胞產(chǎn)生血小板的培養(yǎng)體系中，添加有下述通式(I)所示的化合物、或其鹽、或它們的溶劑化物，
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的培養(yǎng)物，上述通式(I)所示的化合物為N— [2 —(4 一丁一2—炔基氧基苯磺?；?一 1一(4 一二乙基氨基甲基苯基)乙基]一 N —羥基甲酰胺、或N —{4 一[2 — (4 一丁一 2 —炔基氧基苯磺?；?一 1一(甲酰基輕基氨基)乙基]節(jié)基}甲磺酰胺。
9.一種包含血小板的血液制劑，其添加有下述通式(I)所示的化合物、或其鹽、或它們的溶劑化物，
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的血液制劑，上述通式(I)所示的化合物為N— [2 —(4 一丁一 2 —炔基氧基苯磺?；?一 1一(4 一二乙基氨基甲基苯基)乙基]一 N —羥基甲酰胺、或N — {4 一[2 — (4 一丁一 2 —炔基氧基苯磺?；?一 1一(甲?；p基氨基)乙基]芐基}甲磺酰胺。
11.一種用于維持血液制劑中的血小板的功能的方法，其特征在于，在包含血小板的血液制劑中添加下述通式(I)所示的化合物、或其鹽、或它們的溶劑化物，
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，上述通式(I)所示的化合物為N — [2 —(4 一丁一·2 —炔基氧基苯磺?；?一 I 一(4 一二乙基氨基甲基苯基)乙基]一 N —羥基甲酰胺、或N —{4 一[2 — (4 一丁一 2 —炔基氧基苯磺?；?一 1 一(甲酰基輕基氨基)乙基]節(jié)基}甲磺酰胺。
全文摘要
一種用于維持血小板的功能的組合物，其將下述通式(I)所示的化合物、或其鹽、或它們的溶劑化物作為有效成分，式中，X表示亞苯基；Y表示氫原子、或－(CH2)mR1；m表示0～4的任一整數(shù)；R1表示－NR5COR2、－NR5SO2R2、或－NR3R4；R2表示C1～C6烷基、芳基、或C1～C6烷氧基等；R3和R4表示C1～C6烷基等；R5表示氫原子、C1～C6烷基等；Z表示氫原子或C1～C6烷基。
文檔編號(hào)A61K35/14GK103189501SQ20118004469
公開(kāi)日2013年7月3日 申請(qǐng)日期2011年9月16日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月17日
發(fā)明者江藤浩之, 大西椋子, 中內(nèi)啟光, 村田隆彥 申請(qǐng)人:國(guó)立大學(xué)法人東京大學(xué), 科研制藥株式會(huì)社