專利名稱：用于治療流行性感冒的組合物和方法
用于治療流行性感冒的組合物和方法相關(guān)申請的交叉引用本申請要求于2010年7月6日提交的序列號61/361，898的美國臨時專利申請和于2011年I月10日提交的序列號61/431，218的美國臨時專利申請的優(yōu)先權(quán)，它們的全部內(nèi)容通過引用并入本文。
背景技術(shù)：
流行性感冒是常見的呼吸系統(tǒng)傳染病,其與正粘病毒(Orthomyxoviridae)科病毒有關(guān)。由于該病毒的高度變異性，通常需要每年用將毒株變異考慮在內(nèi)的重新配制的疫苗進(jìn)行疫苗接種。美國每年開發(fā)的疫苗的組成由食品和藥物管理局疫苗及相關(guān)生物制品顧問委員會(the Department of Food and Drug Administration Vaccines and theRelated Biologicals Advisory Committee)確定。類似地，世界衛(wèi)生組織(WHO)運(yùn)作一個全球?qū)嶒?yàn)室監(jiān)控網(wǎng)，用于檢測新的流感變體(Lavanchy、Vaccinel999 ；17:S24(1999))?；谧钚路蛛x的流感病毒的抗原性分析、抗原性變體的傳播模式和最新接受疫苗接種個體的抗體應(yīng)答來進(jìn)行選擇。甲型流 感和乙型流感是造成人流行疾病的兩種流感病毒。甲型流感病毒基于兩種表面抗原(血凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(N))而被進(jìn)一步分成亞型。例如，甲型流感病毒的HlNl亞型具有血凝素I型抗原(Hl)和神經(jīng)氨酸酶I型抗原(NI)，而H3N2亞型具有血凝素3型抗原(H3)和神經(jīng)氨酸酶2型抗原(N2)。乙型流感病毒未被分為亞型。自1977年以來，甲型流感(HlNl)病毒、甲型流感(H3N2)病毒和乙型流感病毒已經(jīng)在全球傳播。認(rèn)為接種疫苗是在處于感染流行性感冒和相關(guān)并發(fā)癥嚴(yán)重疾病高風(fēng)險的人中對流感進(jìn)行預(yù)防和削弱的惟一最有效方法。接種由滅活流感病毒制備的抗原能夠刺激產(chǎn)生特異性抗體。保護(hù)僅針對制備疫苗的病毒毒株或密切相關(guān)的毒株。每年的疫苗包含了來源于三種病毒毒株的抗原(稱作三價疫苗，通常包含有來源于兩種甲型毒株的抗原和一種乙型毒株的抗原)，其代表被認(rèn)為在即將到來的冬天可能流行的流感病毒。當(dāng)前的以及新出現(xiàn)的流感病毒毒株的抗原性特征為每年疫苗所包含的毒株的選擇提供了基礎(chǔ)。WHO綜評每年的世界疫情并且在必要時根據(jù)當(dāng)前的流行病學(xué)證據(jù)推薦新的毒株。盡管流感疫苗成功降低了全世界流感的發(fā)生率，但是本領(lǐng)域依然需要穩(wěn)定并且保持效力的改進(jìn)的流感疫苗。

發(fā)明內(nèi)容
本公開內(nèi)容提供了可用于治療流行性感冒的組合物和方法。如本文所述，所提供的組合物和方法基于包含有與脂質(zhì)囊泡組合的流感病毒血凝素抗原的特定組合物的開發(fā)，所述脂質(zhì)囊泡包含有非離子型表面活性劑(NISV)和任選的佐劑。在某些實(shí)施方案中，即使不儲存在標(biāo)準(zhǔn)冷鏈系統(tǒng)中，所提供的組合物依然保持效力(即，它們是熱穩(wěn)定的)。在一個方面，本公開內(nèi)容提供了包含有流感病毒血凝素抗原和脂質(zhì)囊泡的組合物，其中，脂質(zhì)囊泡由脂質(zhì)構(gòu)成，其在組合物中的存在量使得脂質(zhì):抗原的重量比為約50: I至約400: 1，并且脂質(zhì)包含有非離子型表面活性劑。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物是免疫原性的。在另一個方面，本公開內(nèi)容提供了包含有流感病毒血凝素抗原和脂質(zhì)囊泡的免疫原性組合物，其中，脂質(zhì)囊泡由脂質(zhì)構(gòu)成，其在組合物中的存在量使得脂質(zhì):抗原的重量比為至少約50: 1，并且脂質(zhì)包含有非離子型表面活性劑。在某些實(shí)施方案中，前述組合物是液體。在某些實(shí)施方案中，前述組合物是干燥(例如，凍干)的。在另一個方面，本公開內(nèi)容提供了包含有流感病毒血凝素抗原和脂質(zhì)囊泡的干燥(例如，凍干)組合物，其中，脂質(zhì)囊泡由脂質(zhì)構(gòu)成，其在組合物中的存在量使得脂質(zhì):抗原的重量比為至少約30: 1，并且脂質(zhì)包含有非離子型表面活性劑，組合物的水分含量按重量計低于約2%。在某些實(shí)施方案中，脂質(zhì):抗原的重量比為至少約40: I或50: I。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物的水分含量按重量計低于約1.9%、1.8%、1.7%、1.6%、1.5%、1.4%、1.3%、1.2%、1.1%、1%、 0.9%、0.8%、0.7%、0.6%、0.5%或 0.4%。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物的水分含量按重量計為約0.4%至約2%。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物的水分含量按重量計為約0.5%至約1.9%。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物的水分含量按重量計為約0.6%至約1.8%。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物的水分含量按重量計為約0.7%至約1.7%。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物的水分含量按重量計為約0.8%至約1.6%。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物的水分含量按重量計為約0.9%至約1.5%。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物的水分含量按重量計為約1%至約1.4%。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物的水分含量按重量計為約0.5%至約1%。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物的水分含量按重量計為約0.5%至約1.5%。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物的水分含量按重量計為約0.5%至約2%。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物的水分含量按重量計為約1%至約1.5%。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物的水分含量按重量計為約1%至約2%。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物的水分含量按重量計為約1.5%至約2%。在某些實(shí)施方案中，一種前述組合物中脂質(zhì):抗原的重量比為至少約60: 1、70: 1、80: 1、90: UlOO: UllO: 1,120: 1,130: 1,140: 1,150: 1,160: 1、170: 1,180: 1,190: 1,200: 1,210: 1,220: 1,230: 1,240: 1,250: 1,260: 1、270: 1,280: 1,290: I或300: I。在某些實(shí)施方案中，一種前述組合物中脂質(zhì):抗原的重量比為至少約 400: 1,390: 1,380: 1,370: 1,360: 1,350: 1,340: 1,330: 1、320: I 或 310: I。在某些實(shí)施方案中，一種前述組合物中脂質(zhì):抗原的重量比在約50: I至約60: 1、70: 1、80: 1、90: UlOO: UllO: 1,120: 1,130: 1,140: 1,150: 1、160: 1,170: 1,180: 1,190: 1,200: 1,210: 1,220: 1,230: 1,240: 1,250: 1、260: 1,270: 1,280: 1,290: 1,300: 1,310: 1,320: 1,330: 1,340: 1,350: 1、360: 1,370: 1,380: 1,390: I或400: I的范圍內(nèi)。在某些實(shí)施方案中，一種前述組合物中脂質(zhì):抗原的重量比在約50: 1、60: 1、70: 1、80: 1、90: UlOO: UllO: 1、120: 1,130: 1,140: 1,150: 1,160: 1,170: 1,180: 1,190: 1,200: 1,210: 1、220: 1,230: 1,240: 1,250: 1,260: 1,270: 1,280: 1,290: 1,300: 1,310: 1、320: 1,330: 1,340: 1,350: 1,360: 1,370: 1,380: I 或 390: I 至約 400: I
的范圍內(nèi)。在某些實(shí)施方案中，一種前述組合物中脂質(zhì):抗原的重量比為約50: I至約100: 1、約 50: I 至約 150: 1、約 50: I 至約 200: 1、約 50: I 至約 250: 1、約 50: I至約300: 1、約50: I至約350: I或約50: I至約400: I。在某些實(shí)施方案中，一種前述組合物中脂質(zhì):抗原的重量比為約100: I至約150: 1、約100: I至約200: 1、約 100: I 至約 250: 1、約 100: I 至約 300: 1、約 100: I 至約 350: I 或約 100: I至約400: I。在某些實(shí)施方案中，一種前述組合物中脂質(zhì):抗原的重量比為約150: I至約 200: 1、約 150: I 至約 250: 1、約 150: I 至約 300: 1、約 150: I 至約 350: I或約150: I至約400: I。在某些實(shí)施方案中，一種前述組合物中脂質(zhì):抗原的重量比為約 200: I 至約 250: 1、約 200: I 至約 300: 1、約 200: I 至約 350: I 或約 200: I至約400: I。在某些實(shí)施方案中，一種前述組合物中脂質(zhì):抗原的重量比為約250: I至約300: 1、約250: I至約350: I或約250: I至約400: I。在某些實(shí)施方案中，一種前述組合物中脂質(zhì):抗原的重量比為約300: I至約350: I或約300: I至約400: I。在某些實(shí)施方案中，一種前述組合物中脂質(zhì):抗原的重量比為約350: I至約400: I。在某些實(shí)施方案中，一種前述組合物中脂質(zhì):抗原的重量比為約200: 1,210: 1,220: 1、230: 1,240: 1,250: 1,260: 1,270: 1,280: 1,290: 1,300: 1,310: 1,320: 1、330: 1,340: 1,350: 1,360: 1,370: 1,380: 1,390:1 或 400:1。在某些實(shí)施方案中，當(dāng)在40°C儲存6個月后，前述組合物通過血凝素抑制(HAI)試驗(yàn)確定的免疫原性的改變低于50%。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物的免疫原性的改變低于40%、低于30%、低于20%、低于10%、低于5%或低于2%0在某些實(shí)施方案中，當(dāng)在40°C儲存6個月后，前述組合物通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)確定的抗原含量的損失低于50%。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物的抗原含量的損失低于40%、低于30%、低于20%、低于10%、低于5%或低于2% ο在某些實(shí)施方案中，當(dāng)在40°C儲存6個月后，前述組合物比缺少脂質(zhì)囊泡的參照組合物更穩(wěn)定。在某些實(shí)施方案中，穩(wěn)定性是基于通過HAI試驗(yàn)確定的免疫原性。在某些實(shí)施方案中，穩(wěn)定性是基于通過ELISA確定的抗原含量。在又一個方面，本公開內(nèi)容提供了包含有流感病毒血凝素抗原和脂質(zhì)囊泡的免疫原性組合物，其中，脂質(zhì)囊泡由包含有非離子型表面活性劑的脂質(zhì)構(gòu)成，并且當(dāng)在40°C儲存6個月后，所述組合物通過HAI試驗(yàn)確定的免疫原性的改變低于50%。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物的免疫原性的改變低于40%、低于30%、低于20%、低于10%、低于5%或低于2%。在又一個方面，本公開內(nèi)容提供了包含有流感病毒血凝素抗原和脂質(zhì)囊泡的免疫原性組合物，其中，脂質(zhì)囊泡由包含有非離子型表面活性劑的脂質(zhì)構(gòu)成，并且當(dāng)在40°C儲存6個月后，所述組合物通過ELISA確定的抗原含量損失的低于50%。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物的抗原含量損失低于40%、低于30%、低于20%、低于10%、低于5%或低于
2%。在又一個方面，本公開內(nèi)容提供了包含有流感病毒血凝素抗原和脂質(zhì)囊泡的免疫原性組合物，其中，脂質(zhì)囊泡由包含有非離子型表面活性劑的脂質(zhì)構(gòu)成，并且當(dāng)在40°C儲存6個月后，所述組合物比缺少脂質(zhì)囊泡的參照組合物更穩(wěn)定。在某些實(shí)施方案中，穩(wěn)定性是基于通過HAI試驗(yàn)確定的免疫原性。在某些實(shí)施方案中，穩(wěn)定性是基于通過ELISA確定的抗原含量。在某些實(shí)施方案中，前述組合物通過包括以下步驟的方法制備:熔化脂質(zhì)以產(chǎn)生熔融脂質(zhì)；將熔融脂質(zhì)與包含有流感病毒血凝素抗原的水溶液合并；和使所得產(chǎn)物均質(zhì)化。在某些實(shí)施方案中，以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)期望的脂質(zhì):抗原的重量比(例如，至少約50: I或任一前述范圍)的相對量合并脂質(zhì)(熔融脂質(zhì))和水溶液。在某些實(shí)施方案中，將熔融脂質(zhì)加入到包含有流感病毒血凝素抗原的水溶液中。在某些實(shí)施方案中，將包含有流感病毒血凝素抗原的水溶液加入到熔融脂質(zhì)中。在某些實(shí)施方案中，以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)至少約10mg/ml的脂質(zhì)濃度的相對量和體積合并脂質(zhì)(例如熔融脂質(zhì))和水溶液。在某些實(shí)施方案中，實(shí)現(xiàn)至少約15、20、25、
30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90 或 95mg/ml 的脂質(zhì)濃度。在某些實(shí)施方案中，脂質(zhì)濃度在約 10mg/ml 至約 15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95 或100mg/ml的范圍內(nèi)。在某些實(shí)施方案中，脂質(zhì)濃度在約10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、
60、65、70、75、80、85、90或95mg/ml至約100mg/ml的范圍內(nèi)。在某些實(shí)施方案中，脂質(zhì)濃度為約 25mg/ml 至約 100mg/ml、約 25mg/ml 至約 75mg/ml、約 25mg/ml 至約 50mg/ml、約 50mg/ml 至約 75mg/ml 或約 50mg/ml 至約 100mg/ml。在某些實(shí)施方案中，以在所得產(chǎn)物中同時實(shí)現(xiàn)期望的脂質(zhì):抗原的重量比(例如，至少約50: I或任一前述范 圍)和至少約10mg/ml的脂質(zhì)濃度(或任一其他脂質(zhì)濃度范圍)的相對量和體積合并脂質(zhì) (例如熔融脂質(zhì))和水溶液。在某些實(shí)施方案中，以實(shí)現(xiàn)每單位劑量組合物(例如，在再水化前儲存在密封容器中的干燥的單位劑量組合物)至少約5mg脂質(zhì)含量的相對量合并脂質(zhì)(例如熔融脂質(zhì))和水溶液。在某些實(shí)施方案中，實(shí)現(xiàn)每單位劑量組合物至少約6、7、8、9、10、15、20、25、30、
35、40、45或50mg脂質(zhì)含量。在某些實(shí)施方案中，脂質(zhì)含量為約5mg至約50mg、約5mg至約40mg、約 5mg 至約 30mg、約 IOmg 至約 50mg、約 IOmg 至約 40mg、約 IOmg 至約 30mg、約 20mg至約50mg、約20mg至約40mg或約20mg至約30mg。在某些實(shí)施方案中，以同時實(shí)現(xiàn)期望的脂質(zhì):抗原的重量比(例如，至少約50: I或任一前述范圍)和每單位劑量至少約5mg的脂質(zhì)含量(或任一其他脂質(zhì)含量范圍)的相對量和體積合并脂質(zhì)(例如熔融脂質(zhì))和水溶液。在某些實(shí)施方案中，以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)期望的脂質(zhì):抗原的重量比(例如，至少約50: I或任一前述范圍)、每單位劑量至少約5mg的脂質(zhì)含量(或任一其他脂質(zhì)含量范圍)和至少約10mg/ml的脂質(zhì)濃度(或任一其他脂質(zhì)濃度范圍)的相對量和體積合并脂質(zhì)(例如熔融脂質(zhì))和水溶液。在又一個方面，本公開內(nèi)容提供了包含有流感病毒血凝素抗原和脂質(zhì)囊泡的組合物，其中，脂質(zhì)囊泡由包含有非離子型表面活性劑的脂質(zhì)構(gòu)成，并且所述組合物通過包括以下步驟的方法制備:熔化脂質(zhì)以產(chǎn)生熔融脂質(zhì)；將熔融脂質(zhì)與包含有流感病毒血凝素抗原的水溶液合并；和使所得產(chǎn)物均質(zhì)化，其中，以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)期望的脂質(zhì):抗原的重量比(例如，至少約50: I或任一前述范圍)的相對量合并熔融脂質(zhì)和水溶液。在某些實(shí)施方案中，將熔融脂質(zhì)加入到包含有流感病毒血凝素抗原的水溶液中。在某些實(shí)施方案中，將包含有流感病毒血凝素抗原的水溶液加入到熔融脂質(zhì)中。在又一個方面，本公開內(nèi)容提供了包含有流感病毒血凝素抗原和脂質(zhì)囊泡的組合物，其中，脂質(zhì)囊泡由包含有非離子型表面活性劑的脂質(zhì)構(gòu)成，并且所述組合物通過包括以下步驟的方法制備:熔化脂質(zhì)以產(chǎn)生熔融脂質(zhì)；將熔融脂質(zhì)與包含有流感病毒血凝素抗原的水溶液合并；和使所得產(chǎn)物均質(zhì)化，其中，以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)至少約10mg/ml的脂質(zhì)濃度(或任一其他脂質(zhì)濃度范圍)的相對量和體積合并熔融脂質(zhì)和水溶液。在某些實(shí)施方案中，以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)期望的脂質(zhì):抗原的重量比(例如，至少約50: I或任一前述范圍)和至少約10mg/ml的脂質(zhì)濃度(或任一其他脂質(zhì)濃度范圍)的相對量和體積合并熔融脂質(zhì)和水溶液。在某些實(shí)施方案中，脂質(zhì)含量還是每單位劑量至少約5mg(或任一其他脂質(zhì)含量范圍)。在某些實(shí)施方案中，將熔融脂質(zhì)加入到包含有流感病毒血凝素抗原的水溶液中。在某些實(shí)施方案中，將包含有流感病毒血凝素抗原的水溶液加入到熔融脂質(zhì)中。在某些實(shí)施方案中，流感病毒血凝素抗原來源于甲型流感HlNl毒株。在某些實(shí)施方案中，流感病毒血凝素抗原來源于甲型流感H3N2毒株。在某些實(shí)施方案中，流感病毒血凝素抗原來源于乙型流感毒株。在某些實(shí)施方案中，流感病毒血凝素抗原來源于甲型流感HlNl毒株、甲型流感H3N2毒株和乙型流感毒株中的兩種或更多種。在某些實(shí)施方案中，流感病毒血凝素抗原來源于甲型流感HlNl毒株、甲型流感H3N2毒株和乙型流感毒株。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物包含有大致相同量的來源于每一種毒株的流感病毒凝血素抗原。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物包含有一種或更多種含有流感病毒血凝素抗原的滅活流感病毒。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物包含有一種或更多種含有流感病毒血凝素抗原的減毒流感病毒。在某些實(shí)施方案中，流感病毒血凝素抗原作為裂解病毒抗原存在(split virus antigen)。在某些實(shí)施方案中,流感病毒血凝素抗原作為亞單位抗原存在。在某些實(shí)施方案中，流感病毒血 凝素抗原的至少一部分與脂質(zhì)囊泡聯(lián)合。在某些實(shí)施方案中，流感病毒血凝素抗原的至少一部分包圍在脂質(zhì)囊泡中。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物還包含有佐劑。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物包含有TLR-4激動劑佐劑。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物包含有弱化的脂質(zhì)A衍生物。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物包含有脂質(zhì)A的單磷?；苌?。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物包含有脂質(zhì)A的3-脫?；鶈瘟柞；苌?。在某些實(shí)施方案中，TLR-4激動劑佐劑的至少一部分與脂質(zhì)囊泡聯(lián)合。在某些實(shí)施方案中，在所提供的組合物的制備過程中，將TLR-4激動劑佐劑與脂質(zhì)共熔。在某些實(shí)施方案中，在所提供的組合物的制備過程中，將TLR-4激動劑佐劑與熔融脂質(zhì)和包含有流感病毒血凝素抗原的水溶液合并(例如，在包含有流感病毒凝血素抗原的水溶液與熔融脂質(zhì)合并前與之混合)。在某些實(shí)施方案中，在干燥(例如凍干)所提供的組合物前添加TLR-4激動劑佐劑。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物通過不包括在溫度受控的條件下儲存的方法制備。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物通過包括在至少臨時超過8 °C、15 °C、20°C、25 °C、30°C或35°C的溫度下儲存的方法制備。在某些實(shí)施方案中，所提供的組合物通過包括以干燥(例如，凍干)形式儲存的方法制備。在另一個方面，本公開內(nèi)容提供了治療受到流感感染或有流感感染風(fēng)險的對象的方法，通過:提供干燥(例如凍干)形式的前述組合物之一；使所述組合物再水化；向所述對象施用治療有效量的再水化組合物。在某些實(shí)施方案中，通過肌內(nèi)注射施用再水化組合物。而在另一個方面，本公開內(nèi)容提供了制備包含有流感病毒血凝素抗原和脂質(zhì)囊泡的組合物的方法，其中，脂質(zhì)囊泡由包含有非離子型表面活性劑的脂質(zhì)構(gòu)成，所述方法包括:熔化脂質(zhì)以產(chǎn)生熔融脂質(zhì)；將熔融脂質(zhì)與包含有流感病毒血凝素抗原的水溶液合并；使所得產(chǎn)物均質(zhì)化，其中，以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)期望的脂質(zhì):抗原的重量比(例如，至少約50: I或任一前述范圍)的相對量合并熔融脂質(zhì)和水溶液。在某些實(shí)施方案中，將熔融脂質(zhì)加入到包含有流感病毒血凝素抗原的水溶液中。在某些實(shí)施方案中，將包含有流感病毒血凝素抗原的水溶液加入到熔融脂質(zhì)中。而在另一個方面，本公開內(nèi)容提供了制備包含有流感病毒血凝素抗原和脂質(zhì)囊泡的組合物的方法，其中，脂質(zhì)囊泡由包含有非離子型表面活性劑的脂質(zhì)構(gòu)成，所述方法包括:熔化脂質(zhì)以產(chǎn)生熔融脂質(zhì)；將熔融脂質(zhì)與包含有流感病毒血凝素抗原的水溶液合并；使所得產(chǎn)物均質(zhì)化，其中，以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)至少約10mg/ml的脂質(zhì)濃度(或任一其他脂質(zhì)濃度范圍)的相對量和體積合并熔融脂質(zhì)和水溶液。在某些實(shí)施方案中，以在所得產(chǎn)物中同時實(shí)現(xiàn)期望的脂質(zhì):抗原的重量比(例如，至少約50: I或任一前述范圍)和至少約10mg/ml的脂質(zhì)濃度(或任一其他脂質(zhì)濃度范圍)的相對量和體積合并熔融脂質(zhì)和水溶液。在某些實(shí)施方案中，將熔融脂質(zhì)加入到包含有流感病毒血凝素抗原的水溶液中。在某些實(shí)施方案中，將包含有流感病毒血凝素抗原的水溶液加入到熔融脂質(zhì)中。


圖1示出了示例性TLR-4激動劑佐劑磷酸化六酰基二糖(銨鹽)或PHAD (來自Alabaster, AL 的 Avanti Polar Lipids 公司)的化學(xué)結(jié)構(gòu)。圖2示出了另一示例性TLR-4激動劑佐劑二 [3_脫氧-D-甘露-辛酮糖基]-脂質(zhì)A(銨鹽)(來自Alabaster, AL的Avanti Polar Lipids公司)的化學(xué)結(jié)構(gòu)。圖3示出了如實(shí)施例2表4所述小鼠中與NISV配制(組2)或未與NISV配制(組3)的具有示例性TLR-4激動劑佐劑PHAD的示例性已許可流感疫苗(1/30 X標(biāo)準(zhǔn)人單位劑量的劑量節(jié)省型(dose sparing)，“標(biāo)準(zhǔn)小鼠單位劑量”是0.1X標(biāo)準(zhǔn)人單位劑量，即將人與小鼠之間的大小差異考慮在內(nèi))針對HlNl病毒的效力，將其與不與NISV或佐劑配制在一起的已許可流感疫苗(0.1X標(biāo)準(zhǔn)人單位劑量的劑量等同型，“標(biāo)準(zhǔn)小鼠單位劑量”是0.1X標(biāo)準(zhǔn)人單位劑量，即將人與小鼠之間的大小差異考慮在內(nèi))(組I)進(jìn)行比較。圖4示出了如實(shí)施例2表4所述與NISV配制(組2)或未與NISV配制(組3)的具有示例性TLR-4激動劑佐劑PHAD的示例性已許可流感疫苗(1/30X標(biāo)準(zhǔn)人單位劑量的劑量節(jié)省型)對比于未與NISV或佐劑配制在一起的已許可流感疫苗(0.1X標(biāo)準(zhǔn)人單位劑量的劑量等同型)(組I)在小鼠體內(nèi)對抗H3N2病毒的效力。圖5示出了未配制(即，“原樣”使用)的已許可流感疫苗(0.1X標(biāo)準(zhǔn)人單位劑量的劑量等同型)在小鼠體內(nèi)對抗HlNl病毒㈧和H3N2病毒⑶的效力，將其與NISV配制并且無佐劑或者與NISV配制并且具有量逐漸增加(1-SOyg)的示例性TLR-4激動劑佐劑PHAD的已許可流感疫苗(1/30X標(biāo)準(zhǔn)人單位劑量的劑量節(jié)省型)進(jìn)行比較。所有組合物肌內(nèi)注射進(jìn)小鼠并且在第二次免疫15天后檢驗(yàn)血清。結(jié)果表示為對抗HlNl和H3N2的HAI效價和同一數(shù)據(jù)組的幾何平均值。圖6示出了如實(shí)施例4表6所述與NISV配制或未與NISV配制的具有示例性TKR-4激動劑佐劑PHAD的示例性已許可流感疫苗(1/30X標(biāo)準(zhǔn)人單位劑量的劑量節(jié)省型)在小鼠體內(nèi)對抗HlNl病毒(A)和H3N2病毒⑶的效力，將其與未與NISV或佐劑配制在一起的已許可流感疫苗(0.1X標(biāo)準(zhǔn)人單位劑量的劑量等同型)進(jìn)行比較。所有組合物在4°C和40°C儲存6個月然后肌內(nèi)注射進(jìn)小鼠并且在第二次免疫15天后檢驗(yàn)血清。結(jié)果表示為對抗HlNl和H3N2的HAI效價。圖7示出了如實(shí)施例4表6所述與NISV配制的無佐劑的示例性已許可流感疫苗(0.1X標(biāo)準(zhǔn)人單位劑量的劑量等同型)對比已許可流感疫苗(0.1X標(biāo)準(zhǔn)人單位劑量的劑量等同型)在小鼠體內(nèi)對抗HlNl病毒(A)和H3N2病毒(B)的效力。所有組合物在4°C和40°C儲存6個月然后肌內(nèi)注射進(jìn)小鼠并且在第二次免疫15天后檢驗(yàn)血清。結(jié)果表示為對抗HlNl和H3N2的HAI效價。表8示出了 (A)與NISV配制或(B)無NISV的商品化F丨UZOIie 通過sELISA確定的HA抗原含量的體外數(shù)據(jù)；在41:、251:和401: T = 0、1、3和6個月。兩種組合物都是劑量節(jié)省型的并且加入有示例性TLR-4激動劑佐劑PHAD。圖9示出了未配制的商品化流感疫苗Fluzonee、Fhwirine^FtaLavalm對比與NISV配制的相同商品化流感疫苗的HA抗原含量的體外數(shù)據(jù)。通過sELISA分析重構(gòu)樣品的等份以確定在4°C和40°C T = 3個月的組合物的抗原含量(或“體外效力”)。圖10示出了與NISV配制且加入示例性TLR-4激動劑佐劑PHDA或者與NISV配制而無佐劑的示例性已許可流感疫苗(1/3X 標(biāo)準(zhǔn)人單位劑量的劑量節(jié)省型，“標(biāo)準(zhǔn)猴單位劑量”是I X標(biāo)準(zhǔn)人單位劑量)在恒河猴體內(nèi)對抗H3N2病毒的效力，將其與未與NISV或佐劑配制在一起的已許可流感疫苗(IX標(biāo)準(zhǔn)人單位劑量的劑量等同型，“標(biāo)準(zhǔn)猴單位劑量”是IX標(biāo)準(zhǔn)人單位劑量)。圖1i示出了未配制的商品化Fluzone (試驗(yàn)物品8)對比300:1脂質(zhì):抗原比的Nisv Fluzone 組合物(試驗(yàn)物品3)、ιοο:1脂質(zhì):抗原比的Nisv Fluzone 組合物(試驗(yàn)物品2)和30:1脂質(zhì):抗原比的NISVF!uz_e 組合物(試驗(yàn)物品D的體外HA抗原含量。通過sELISA分析重構(gòu)樣品的等份以確定在4°C (A)T = O和(B)T = 3個月的組合物的抗原含量(或“體外效力”)。圖12不出了如實(shí)施例7所述具有不同脂質(zhì):抗原比、脂質(zhì)濃度和脂質(zhì)含量的多種NISV Ruzone泯組合物對抗(A)HlNl病毒和(A)H3N2病毒的效力。在T = O將組合物肌內(nèi)注射進(jìn)小鼠并且在第二次免疫15天后檢驗(yàn)血清。結(jié)果表示為針對HlNl和H3N2的單獨(dú)HAI效價和同一數(shù)據(jù)組的幾何平均值。圖13示出了如實(shí)施例7所述具有不同脂質(zhì):抗原比和不同脂質(zhì)濃度(均質(zhì)化和/或重構(gòu)過程中)的多種NISV Fluzone 組合物對抗(A)HlNl病毒和(A)H3N2病毒的效力。所有組合物在4°c和40°C儲存3個月然后肌內(nèi)注射進(jìn)小鼠并且在第二次免疫15天后檢驗(yàn)血清。結(jié)果表示為針對HlNl和H3N2的HAI效價的幾何平均值。
定義在本公開內(nèi)容全文中使用了許多術(shù)語，其在以下段落中進(jìn)行了定義。本文所使用的術(shù)語“抗原”是指包含有一種或更多種被抗體識別的表位(線性表位、構(gòu)象表位或兩者)的物質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，抗體是人抗體，在一些實(shí)施方案中，其在暴露于抗原的人體組織中產(chǎn)生，在一些實(shí)施方案中，該暴露發(fā)生于血流或包括血流暴露。在某些實(shí)施方案中，抗原可以是“免疫原”。本文所使用的術(shù)語“免疫應(yīng)答”是指在宿主動物體內(nèi)引起的應(yīng)答。免疫應(yīng)答可以指細(xì)胞免疫、體液免疫或可以包括這兩者。免疫應(yīng)答可以局限于免疫系統(tǒng)的一部分。例如，在某些實(shí)施方案中，認(rèn)為提高的IFNy應(yīng)答是免疫應(yīng)答。在某些實(shí)施方案中，認(rèn)為粘膜IgA應(yīng)答(例如在鼻和/或直腸沖洗液中測量)是免疫應(yīng)答。在某些實(shí)施方案中，認(rèn)為系統(tǒng)性IgG應(yīng)答(例如在血清中測量)是免疫應(yīng)答。在某些實(shí)施方案中，認(rèn)為宿主動物產(chǎn)生抑制凝血素的抗體(例如通過血凝素抑制(HAI)試驗(yàn)測量)是免疫應(yīng)答。本文所使用的術(shù)語“免疫原性”用來指代在宿主動物中產(chǎn)生針對非宿主實(shí)體(例如，流感病毒)的免疫應(yīng)答的物質(zhì)。在某些實(shí)施方案中，該免疫應(yīng)答形成了由針對特定感染性生物(例如流感病毒)的疫苗引起的保護(hù)性免疫的基礎(chǔ)。在某些實(shí)施方案中，免疫原性物質(zhì)在人體內(nèi)產(chǎn)生免疫應(yīng)答。在某些實(shí)施方案中，免疫原性物質(zhì)在與機(jī)體(例如人體)的血流接觸時產(chǎn)生免疫應(yīng)答。本文所使用的術(shù)語“治療有效量”是指當(dāng)作為治療性給藥方案的一部分施用時，在治療對象中足以表現(xiàn)出顯著益處的量。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，在一些實(shí)施方案中，如果特定的組合物包含有適合在治 療性給藥方案中以單位劑量形式施用的量時，可以認(rèn)為其包含有治療有效量，即使該量作為單次單位劑量施用時可能不足以獲得顯著益處。本領(lǐng)域技術(shù)人員還應(yīng)當(dāng)理解，對于接受組合物的不同對象，免疫原性組合物的治療有效量可能不同，例如，其取決于這些因素:期望的生物學(xué)終點(diǎn)、組合物的性質(zhì)、施用途徑、治療對象的健康狀況、大小和/或年齡等。在一些實(shí)施方案中，治療有效量是這樣的量，當(dāng)作為特定治療性給藥方案(例如單次施用，或多次施用，例如常規(guī)的“加強(qiáng)”方案)的一部分施用時，其與有益效果相關(guān)聯(lián)。在一些實(shí)施方案中，治療有效量是這樣的量，其被治療許可機(jī)構(gòu)(例如，食品和藥品管理局或歐洲藥品管理局)批準(zhǔn)作為特定治療性劑量方案的一部分(例如，見食品和藥品管理局針對許可的一價疫苗在WWW, fda.gov/BiologicsBloodVaccines/Vaccines/ApprovedProducts/ucm!81950.htm 和針對許可的三價疫苗在 www.fda.gov/Bio1gicsBloodVaccines/Vaccines/ApprovedProducts/ucm094045.htm 給出的多種許可流感疫苗的說明書)。本文所使用的術(shù)語“治療”是指以減緩、減輕、改變、改善、提高或影響疾病、疾病癥狀或疾病素因?yàn)槟康?，向患有或易患疾病、疾病癥狀或疾病素因的對象施用所提供的組合物。在某些實(shí)施方案中，術(shù)語“治療”是指向?qū)ο蠼臃N疫苗。一般而言，治療可減輕疾病的一種或更多種癥狀或特征的嚴(yán)重程度和/或頻率和/或可以推遲一種或更多種癥狀或特征的發(fā)作。
具體實(shí)施例方式所有疫苗都隨著時間損失效力，并且效力損失的速率是溫度依賴性的。因此，建立了冷鏈系統(tǒng)以確保通過將疫苗儲存在冷藏條件下(大多數(shù)情況下為2°C至8°C )直至使用時，以保持疫苗的效力。建立用于疫苗儲存和配送的冷鏈?zhǔn)侵卮蠊ぷ鞑⑶移渚S持很困難。還很明顯的是，盡管盡最大努力，但是因?yàn)槿舾蓡栴}冷鏈不一定總能如預(yù)期發(fā)揮功能，例如:維護(hù)不恰當(dāng)或冷凍設(shè)備過時、斷電導(dǎo)致的設(shè)備故障、不遵從冷鏈程序和監(jiān)控不當(dāng)。結(jié)果是冷鏈中的疫苗經(jīng)常遭受溫度漂移(即，溫度處于目標(biāo)范圍之外)。對于當(dāng)前市場上的流感三價疫苗(其主要作為液體組合物可得)，重要的是理解冷鏈需求和正確疫苗管理的重要性，以確保對象接受穩(wěn)定的有效力的流感疫苗。如果未恰當(dāng)保存流感疫苗(例如，未保持在2°C至8°C的所需溫度范圍內(nèi))，疫苗可能變得不穩(wěn)定，其進(jìn)而顯著影響效力，導(dǎo)致接種疫苗的對象在免疫后不能夠發(fā)生血清學(xué)轉(zhuǎn)化。接種疫苗的對象認(rèn)為他們得到了保護(hù)，因?yàn)樗麄円呀?jīng)進(jìn)行了免疫，但實(shí)際上他們依然易感染流行性感冒，因?yàn)橐呙缬捎跍囟绕茖?dǎo)致的不穩(wěn)定而沒有效力。本公開內(nèi)容提供了用于治療流行性感冒的組合物和方法，其解決了這些問題的一些。如本文所述，所提供的組合物和方法基于包含有與脂質(zhì)囊泡組合的流感病毒凝血素抗原的特定組合物的開發(fā)，所述脂質(zhì)囊泡包含有非離子型表面活性劑(NISV)和任選的佐劑。在某些實(shí)施方案中，即使未儲存在標(biāo)準(zhǔn)冷鏈系統(tǒng)中，所提供的組合物依然有效力(即，它們是熱穩(wěn)定的)。
1.流感病毒血凝素抗原一般而言，本公開內(nèi)容的組合物包含有流感病毒血凝素抗原。根據(jù)本發(fā)明使用的血凝素抗原不限于全長野生型血凝素抗原，因此本文所使用的術(shù)語“血凝素抗原”也包括全長野生型血凝素抗原的免疫原性片度和變體。術(shù)語“血凝素抗原”還包括包含有任意前述內(nèi)容的融合蛋白和輟合物?？梢岳帽绢I(lǐng)域已知的任意方法確定所提供的組合物中的血凝素抗原的量。在一些實(shí)施方案中，可通過ELISA(例如，一種或更多種亞型特異性sELISA)確定血凝素抗原的量。該方法常用于裂解病毒疫苗中抗原的量的標(biāo)準(zhǔn)化。對于所使用的血凝素抗原的類型沒有限制。特別地，血凝素抗原可獲自單種流感病毒毒株或流感病毒毒株的組合。如上所述，當(dāng)前的流感疫苗通常是“三價”疫苗，其包含有來源于兩種甲型流感病毒毒株(例如，HlNl和H3N2)和一種乙型流感毒株的抗原。因此，在某些實(shí)施方案中，本公開內(nèi)容的三價組合物可包含有來源于甲型流感HlNl毒株、甲型流感H3N2毒株和乙型流感毒株的血凝素抗原。某些三價組合物可包含有大致等量的來源于每一種這些毒株的血凝素抗原。一價疫苗在本領(lǐng)域也是已知的，并且包括在本發(fā)明中。在一些實(shí)施方案中，所提供的組合物是一價的。通常認(rèn)為一價疫苗在例如大流行的情況下特別有用。一價的大流行流感疫苗最可能包含有源于單一種甲型毒株的血凝素抗原。在一些實(shí)施方案中，用于一價組合物的血凝素抗原來源于大流行流感毒株。例如，在一些實(shí)施方案中，用于一價組合物的血凝素抗原來源于甲型流感(豬源的H1N1)毒株。如在實(shí)施例中證明的，包含有來源于甲型流感H3N2毒株的血凝素抗原(單獨(dú)或與其他抗原組合)的組合物特別能有意義，因?yàn)閬碓从谠摱局甑目乖坪鯇Ω邷靥貏e敏感。對于所使用的血凝素抗原的來源(即，天然的、重組的、合成的等)也沒有限制。全世界主要使用三種疫苗來保護(hù)對抗流感:全病毒疫苗、包含有病毒的外部和內(nèi)部組件的裂解病毒疫苗以及僅由病毒的外部組件(血凝素和神經(jīng)氨酸酶)構(gòu)成的亞單位疫苗。
在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物包含有一種或更多種含有血凝素抗原的全病毒。在某些實(shí)施方案中，流感疫苗是滅活的。應(yīng)當(dāng)理解，可以使用任何方法來制備滅活流感病毒。W009/029695描述了產(chǎn)生滅活全病毒疫苗的示例性方法。一般而言，這些方法包括:使流感病毒在宿主細(xì)胞中繁殖；任選地裂解宿主細(xì)胞以釋放病毒；分離然后滅活病毒。通常使用化學(xué)處理(例如，福爾馬林、甲醛等)滅活用于制備疫苗的病毒。但是，應(yīng)理解也可以使用其他方法，例如氯處理，暴露于高溫等。在這些處理中，通常使外部的病毒殼保持完整而破壞復(fù)制功能。在某些實(shí)施方案中，流感病毒是減毒的。如本領(lǐng)域所熟知的，使用減毒病毒制備疫苗的一個優(yōu)點(diǎn)在于更高免疫原性的潛力，這導(dǎo)致其在體內(nèi)穩(wěn)定復(fù)制而不造成全感染。由弱化毒株制備的活病毒疫苗優(yōu)選缺少致病性但是依然能夠在宿主中復(fù)制。本領(lǐng)域使用制備減毒流感病毒的一個方法是病毒適應(yīng)(viral adaptation)，其包括使病毒毒株以多個細(xì)胞培養(yǎng)物連續(xù)傳代。隨著時間，病毒發(fā)生突變，然后可鑒別出減毒的毒株。在某些實(shí)施方案中，可使病毒通過不同的細(xì)胞培養(yǎng)物傳代。在某些實(shí)施方案中，在降低的溫度下進(jìn)行一步或更多步的細(xì)胞培養(yǎng)可能是有利的。在某些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明使用的流感病毒血凝素抗原基于裂解病毒疫苗技術(shù)。裂解病毒疫苗通常包含有較高濃度的病毒最具免疫原性的部分(例如，血凝素和神經(jīng)氨酸酶)，而降低較低免疫原性的病毒蛋白和來源于(用于生產(chǎn)病毒)的卵的非病毒蛋白或外部試劑(例如，禽白血病病毒、其他微生物和細(xì)胞碎片)的濃度。一般地，裂解病毒疫苗通過物理方法制備，包括:通常使用有機(jī)溶劑或去污劑(例如Triton X-100)破壞病毒顆粒，以及通過蔗糖梯度離心或使尿囊液通過色譜柱來分離或純化病毒蛋白質(zhì)至不同程度。在一些實(shí)施方案中，在病毒破壞和分離后進(jìn)行透析或超濾。本領(lǐng)域已知裂解病毒的方法和合適的裂解劑(例如，見美國專利公開N0.20090155309)。在某些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明使用的流感病毒血凝素抗原基于亞單位疫苗技術(shù)。一般而言，亞單位疫苗僅包含有進(jìn)行有效疫苗接種所需(例如，引起保護(hù)性免疫應(yīng)答)的流感病毒部分。在一些實(shí)施方案中，亞單位流感抗原由病毒顆粒(例如，純化的病毒特定組分)制備。在一些實(shí)施方案中，亞單位流感抗原通過重組方法(例如，在細(xì)胞培養(yǎng)物中表達(dá))制備。例如，美國專利N0.5，858，368描述了利用DNA技術(shù)制備重組流感疫苗的方法。所得三價流感疫苗基于克隆自具有流 行潛力的流感病毒的重組血凝素抗原的混合物。重組血凝素抗原是由培養(yǎng)的昆蟲細(xì)胞中的桿狀病毒表達(dá)載體產(chǎn)生并且在非變性條件下純化的全長未切割糖蛋白。在一些實(shí)施方案中，亞單位抗原通過合成方法(例如肽合成)產(chǎn)生。亞單位疫苗還可包含有由WHO確定的選定毒株制備的純化血凝素抗原。在某些實(shí)施方案中，血凝素抗原可來源于一種或更多種已許可流感疫苗。在某些實(shí)施方案中，血凝素抗原(任選地與其他抗原，例如神經(jīng)氨酸酶抗原)可純化自已許可流感疫苗，然后使用在所提供的組合物中。在某些實(shí)施方案中，已許可流感疫苗可“原樣”使用而不需要任何純化。表I是已許可流感疫苗非限制性列表。可以從制造商或供應(yīng)商和/或食品和藥品管理局(例如，參見針對許可的一價疫苗的WWW, fda.ROv/Bio1gicsBloodVaccines/Vaccines/ApprovedProducts/ucm!81950.htm 和針對許可的三價疫苗的 www.fda.gov/Bio1gicsBloodVaccines/Vaccines/ApprovedProducts/ucm094045.htm)為疫苗本身提供的說明書中得到有關(guān)這些許可疫苗全部的處方信息和詳情。這些說明書的全部內(nèi)容通過引用并入本文。
表I

權(quán)利要求
1.一種包含流感病毒血凝素抗原和脂質(zhì)囊泡的組合物，其中所述脂質(zhì)囊泡由脂質(zhì)構(gòu)成，所述脂質(zhì)在所述組合物中的存在量使得脂質(zhì):抗原的重量比為約50: I至約400: 1，并且所述脂質(zhì)包含非離子型表面活性劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，所述組合物是免疫原性的。
3.一種包含流感病毒血凝素抗原和脂質(zhì)囊泡的免疫原性組合物，其中所述脂質(zhì)囊泡由脂質(zhì)構(gòu)成，所述脂質(zhì)在所述組合物中的存在量使得脂質(zhì):抗原的重量比為至少約50: 1，并且所述脂質(zhì)包含非離子型表面活性劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述組合物是液體。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述組合物是干燥的。
6.一種包含流感病毒血凝素抗原和脂質(zhì)囊泡的干燥組合物，其中所述脂質(zhì)囊泡由脂質(zhì)構(gòu)成，所述脂質(zhì)在所述組合物中的存在量使得脂質(zhì):抗原的重量比為至少約30: 1，所述脂質(zhì)包含非離子型表面活性劑，并且所述組合物的水分含量按重量計低于約2%。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述脂質(zhì):抗原的重量比為至少約 100: I。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述脂質(zhì):抗原的重量比為至少約 200: I。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述脂質(zhì):抗原的重量比為至少約 250: 10
10.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述脂質(zhì):抗原的重量比低于約350: I。
11.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述脂質(zhì):抗原的重量比為約250: I 至約 350:1。
12.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述脂質(zhì):抗原的重量比為約300: 10
13.根據(jù)權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述組合物在40°C儲存6個月后其通過HAI試驗(yàn)確定的免疫原性改變低于50%。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的組合物，其中所述組合物的免疫原性改變低于10%。
15.根據(jù)權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述組合物在40°C儲存6個月后其通過ELISA確定的抗原含量損失低于50%。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的組合物，其中所述組合物的抗原含量損失低于10%。
17.根據(jù)權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述組合物與缺少脂質(zhì)囊泡的參照組合物相比在40°C儲存6個月后的穩(wěn)定性更高。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的組合物，其中穩(wěn)定性是基于通過HAI試驗(yàn)確定的免疫原性。
19.根據(jù)權(quán)利要求17所述的組合物，其中穩(wěn)定性是基于通過ELISA確定的抗原含量。
20.一種包含流感病毒血凝素抗原和脂質(zhì)囊泡的免疫原性組合物，其中所述脂質(zhì)囊泡由包含非離子型表面活性劑的脂質(zhì)構(gòu)成，并且所述組合物在40°C儲存6個月后其通過HAI試驗(yàn)確定的免疫原性改變低于50%。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的組合物，其中，所述組合物的免疫原性改變低于10%。
22.一種包含流感病毒血凝素抗原和脂質(zhì)囊泡的免疫原性組合物，其中所述脂質(zhì)囊泡由包含非離子型表面活性劑的脂質(zhì)構(gòu)成，并且所述組合物在40°C儲存6個月后其通過ELISA確定的抗原含量損失低于50%。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的組合物，其中所述組合物的抗原含量損失低于10%。
24.一種包含流感病毒血凝素抗原和脂質(zhì)囊泡的免疫原性組合物，其中所述脂質(zhì)囊泡由包含非離子型表面活性劑的脂質(zhì)構(gòu)成，并且其中所述組合物與缺少脂質(zhì)囊泡的參照組合物相比在40°C儲存6個月后的穩(wěn)定性更高。
25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的組合物，其中，穩(wěn)定性是基于通過HAI試驗(yàn)確定的免疫原性。
26.根據(jù)權(quán)利要求24所述的組合物，其中，穩(wěn)定性是基于通過ELISA確定的抗原含量。
27.根據(jù)權(quán)利要求1至26中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述組合物通過包括以下步驟的方法制備: 熔化所述脂質(zhì)以產(chǎn)生熔融脂質(zhì)； 將所述熔融脂質(zhì)與包含所述流感病毒血凝素抗原的水溶液合并；和 使所得產(chǎn)物均質(zhì)化，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)至少約50: I的脂質(zhì):抗原重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的組合物，其中，將所述熔融脂質(zhì)加入到包含所述流感病毒血凝素抗原的所述水溶液中。
29.根據(jù)權(quán)利要求27所述的組合物，其中，將包含所述流感病毒血凝素抗原的所述水溶液加入到所述熔融脂質(zhì)中。
30.根據(jù)權(quán)利要求1至29中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述組合物通過包括以下步驟的方法制備: 熔化所述脂質(zhì)以產(chǎn)生熔融脂質(zhì)； 將所述熔融脂質(zhì)與包含所述流感病毒血凝素抗原的水溶液合并；和 使所得產(chǎn)物均質(zhì)化，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)至少約10mg/ml的脂質(zhì)濃度的相對量和體積合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的組合物，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)約10mg/ml至約IOOmg/ml的脂質(zhì)濃度的相對量和體積合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
32.一種包含流感病毒血凝素抗原和脂質(zhì)囊泡的組合物，其中所述脂質(zhì)囊泡由包含非離子型表面活性劑的脂質(zhì)構(gòu)成，并且所述組合物通過包括以下步驟的方法制備: 熔化所述脂質(zhì)以產(chǎn)生熔融脂質(zhì)； 將所述熔融脂質(zhì)與包含所述流感病毒血凝素抗原的水溶液合并；和 使所得產(chǎn)物均質(zhì)化，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)至少約50: I的脂質(zhì):抗原重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
33.根據(jù)權(quán)利要求32所述的組合物，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)至少約100: I的脂質(zhì):抗原重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
34.根據(jù)權(quán)利要求32所述的組合物，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)至少約200: I的脂質(zhì):抗原重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
35.根據(jù)權(quán)利要求32所述的組合物，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)至少約250: I的脂質(zhì):抗原重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
36.根據(jù)權(quán)利要求32所述的組合物，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)低于約400: I的脂質(zhì):抗原重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
37.根據(jù)權(quán)利要求32所述的組合物，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)低于約350: I的脂質(zhì):抗原重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
38.根據(jù)權(quán)利要求32所述的組合物，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)約250: I至約350: I的脂質(zhì):抗原重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
39.根據(jù)權(quán)利要求32所述的組合物，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)約300: I的脂質(zhì):抗原重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
40.根據(jù)權(quán)利要求32至39中任一項(xiàng)所述的組合物，其中將所述熔融脂質(zhì)加入到包含所述流感病毒血凝素抗原的所述水溶液中。
41.根據(jù)權(quán)利要求32至39中任一項(xiàng)所述的組合物，其中將包含所述流感病毒血凝素抗原的所述水溶液加入到所述熔融脂質(zhì)中。
42.一種包含流感病毒血凝素抗原和脂質(zhì)囊泡的組合物，其中所述脂質(zhì)囊泡由包含非離子型表面活性劑的脂質(zhì)構(gòu)成，并且所述組合物通過包括以下步驟的方法制備: 熔化所述脂質(zhì)以產(chǎn)生熔融脂質(zhì)； 將所述熔融脂質(zhì)與包含所述流感病毒血凝素抗原的水溶液合并；和 使所得產(chǎn)物均質(zhì)化，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)至少約10mg/ml的脂質(zhì)濃度的相對量和體積合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
43.根據(jù)權(quán)利要求42所述的組合物，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)約10mg/ml至約IOOmg/ml的脂質(zhì)濃度的相對量和體積合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
44.根據(jù)權(quán)利要求42至43中任一項(xiàng)所述的組合物，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)至少約50: I的脂質(zhì):抗原的重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
45.根據(jù)權(quán)利要求44所述的組合物，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)至少約100: I的脂質(zhì):抗原的重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
46.根據(jù)權(quán)利要求44所述的組合物，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)至少約200: I的脂質(zhì):抗原的重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
47.根據(jù)權(quán)利要求44所述的組合物，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)至少約250: I的脂質(zhì):抗原的重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
48.根據(jù)權(quán)利要求44所述的組合物，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)低于約400: I的脂質(zhì):抗原的重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
49.根據(jù)權(quán)利要求44所述的組合物，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)低于約350: I的脂質(zhì):抗原的重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
50.根據(jù)權(quán)利要求44所述的組合物，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)約250: I至約350: I的脂質(zhì):抗原的重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
51.根據(jù)權(quán)利要求44所述的組合物，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)約300: I的脂質(zhì):抗原的重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
52.根據(jù)權(quán)利要求42至51中任一項(xiàng)所述的組合物，其中將所述熔融脂質(zhì)加入到包含所述流感病毒血凝素抗原的所述水溶液中。
53.根據(jù)權(quán)利要求42至 51中任一項(xiàng)所述的組合物，其中將包含所述流感病毒血凝素抗原的所述水溶液加入到所述熔融脂質(zhì)中。
54.根據(jù)權(quán)利要求1至53中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述流感病毒血凝素抗原來自甲型流感HlNl毒株。
55.根據(jù)權(quán)利要求1至53中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述流感病毒血凝素抗原來自甲型流感H3N2毒株。
56.根據(jù)權(quán)利要求1至53中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述流感病毒血凝素抗原來自乙型流感毒株。
57.根據(jù)權(quán)利要求1至53中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述流感病毒血凝素抗原來自甲型流感HlNl毒株、甲型流感H3N2毒株和乙型流感毒株中的兩種或更多種。
58.根據(jù)權(quán)利要求1至53中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述流感病毒血凝素抗原來自甲型流感HlNl毒株、甲型流感H3N2毒株和乙型流感毒株。
59.根據(jù)權(quán)利要求58所述的組合物，其中所述組合物包含大致等量的來自每一種毒株的流感病毒血凝素抗原。
60.根據(jù)權(quán)利要求1至59中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述組合物包含一種或更多種含有所述流感病毒血凝素抗原的滅活流感病毒。
61.根據(jù)權(quán)利要求1至59中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述組合物包含一種或更多種含有所述流感病毒血凝素抗原的減毒流感病毒。
62.根據(jù)權(quán)利要求1至59中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述流感病毒血凝素抗原作為裂解病毒抗原存在于所述組合物中。
63.根據(jù)權(quán)利要求1至59中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述流感病毒血凝素抗原作為亞單位抗原存在于所述組合物中。
64.根據(jù)權(quán)利要求1至63中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述非離子型表面活性劑是酯聯(lián)表面活性劑。
65.根據(jù)權(quán)利要求64所述的組合物，其中所述非離子型表面活性劑是甘油酯。
66.根據(jù)權(quán)利要求64所述的組合物，其中所述非離子型表面活性劑是1-棕櫚酸單甘油酯。
67.根據(jù)權(quán)利要求1至63中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述非離子型表面活性劑是醚聯(lián)表面活性劑。
68.根據(jù)權(quán)利要求67所述的組合物，其中所述非離子型表面活性劑是甘醇單醚或甘油單醚。
69.根據(jù)權(quán)利要求67所述的組合物，其中，所述非離子型表面活性劑是1-單十六烷基甘油醚或二甘醇十六烷基醚。
70.根據(jù)權(quán)利要求1至69中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述脂質(zhì)還包含離子兩親物。
71.根據(jù)權(quán)利要求70所述的組合物，其中所述離子兩親物是磷酸二鯨蠟酯。
72.根據(jù)權(quán)利要求1至71中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述脂質(zhì)還包含類固醇。
73.根據(jù)權(quán)利要求72所述的組合物，其中所述類固醇是膽固醇。
74.根據(jù)權(quán)利要求1至73中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述脂質(zhì)包含非離子型表面活性劑、離子兩親物和類固醇。
75.根據(jù)權(quán)利要求1至73中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述脂質(zhì)包含1-棕櫚酸單甘油酯、磷酸二鯨蠟酯和膽固醇。
76.根據(jù)權(quán)利要求1至75中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述組合物中存在的所述流感病毒血凝素抗原的至少一部分與所述脂質(zhì)囊泡聯(lián)合。
77.根據(jù)權(quán)利要求1至75中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述組合物中存在的所述流感病毒血凝素抗原的至少一部分包裹在所述脂質(zhì)囊泡中。
78.根據(jù)權(quán)利要求1至77中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述組合物還包含佐劑。
79.根據(jù)權(quán)利要求78所述的組合物，其中所述佐劑包含TLR-4激動劑。
80.根據(jù)權(quán)利要求79所述的組合物，其中所述佐劑包含弱化的脂質(zhì)A衍生物。
81.根據(jù)權(quán)利要求79所述的組合物，其中所述佐劑包含脂質(zhì)A的單磷?；苌铩?br> 82.根據(jù)權(quán)利要求79所述的組合物，其中所述佐劑包含脂質(zhì)A的3-脫?；鶈瘟柞；苌?。
83.根據(jù)權(quán)利要求78所述的組合物，其中所述佐劑包含TLR-7/8激動劑。
84.根據(jù)權(quán)利要求78所述的組合物，其中所述佐劑包含TLR-9激動劑。
85.根據(jù)權(quán)利要求78至84中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述組合物中存在的所述佐劑的至少一部分與所述脂質(zhì)囊泡聯(lián)合。
86.根據(jù)權(quán)利要求78至84中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述組合物中存在的所述佐劑的至少一部分不與所述脂質(zhì)囊泡聯(lián)合。
87.根據(jù)權(quán)利要求78至 84中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述組合物通過包括以下步驟的方法制備: 熔化所述脂質(zhì)以產(chǎn)生熔融脂質(zhì)； 將所述熔融脂質(zhì)與包含所述流感病毒血凝素抗原的水溶液合并；和 使所得產(chǎn)物均質(zhì)化，其中將所述將佐劑與所述脂質(zhì)一起熔化。
88.根據(jù)權(quán)利要求78至84中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述組合物通過包括以下步驟的方法制備: 熔化所述脂質(zhì)以產(chǎn)生熔融脂質(zhì)； 將所述熔融脂質(zhì)與包含所述流感病毒血凝素抗原的水溶液合并；和 使所得產(chǎn)物均質(zhì)化，其中將所述佐劑與所述脂質(zhì)和包含所述流感病毒血凝素抗原的水溶液合并。
89.根據(jù)權(quán)利要求78至84中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述組合物通過包括以下步驟的方法制備: 熔化所述脂質(zhì)以產(chǎn)生熔融脂質(zhì)； 將所述熔融脂質(zhì)與包含所述流感病毒血凝素抗原的水溶液合并；和 均質(zhì)化然后干燥所得產(chǎn)物，其中，在干燥前將所述佐劑加入到所得產(chǎn)物中。
90.根據(jù)權(quán)利要求1至89中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述組合物通過不包括將所述組合物在溫度受控條件下儲存的方法制備。
91.根據(jù)權(quán)利要求1至89中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述組合物通過包括將所述組合物在至少臨時超過8 0C的溫度下儲存的方法制備。
92.根據(jù)權(quán)利要求1至89中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述組合物通過包括將所述組合物在至少臨時超過15 0C的溫度下儲存的方法制備。
93.根據(jù)權(quán)利要求1至89中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述組合物通過包括將所述組合物在至少臨時超過20℃的溫度下儲存的方法制備。
94.根據(jù)權(quán)利要求1至89中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述組合物通過包括將所述組合物在至少臨時超過25 °C的溫度下儲存的方法制備。
95.根據(jù)權(quán)利要求1至94中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述組合物通過包括以干燥形式儲存所述組合物的方法制備。
96.一種用于治療患有流感感染或者有流感感染風(fēng)險的對象的方法，所述方法包括: 提供干燥形式的根據(jù)權(quán)利要求1至95中任一項(xiàng)所述的組合物； 使所述組合物再水合；和 向所述對象施用治療有效量的所述再水合組合物。
97.根據(jù)權(quán)利要求96所述的方法，其中所述再水合組合物通過肌內(nèi)注射施用。
98.一種制備包含流感病毒血凝素抗原和脂質(zhì)囊泡的組合物的方法，其中，所述脂質(zhì)囊泡由包含非離子型表面活性劑的脂質(zhì)構(gòu)成，所述方法包括: 熔化所述脂質(zhì)以產(chǎn)生熔融脂質(zhì)； 將所述熔融脂質(zhì)與包含所述流感病毒血凝素抗原的水溶液合并；和 使所得產(chǎn)物均質(zhì)化，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)至少約50: 1的脂質(zhì):抗原重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
99.根據(jù)權(quán)利要求98所述的方法，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)至少約100: 1的脂質(zhì):抗原重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
100.根據(jù)權(quán)利要求98所述的方法，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)至少約200: 1的脂質(zhì):抗原重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
101.根據(jù)權(quán)利要求98所述的方法，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)至少約250: 1的脂質(zhì):抗原重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
102.根據(jù)權(quán)利要求98所述的方法，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)低于約400: 1的脂質(zhì):抗原重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
103.根據(jù)權(quán)利要求98所述的方法，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)低于約350: 1的脂質(zhì):抗原重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
104.根據(jù)權(quán)利要求98所述的方法，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)約250: 1至約350: 1的脂質(zhì):抗原重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
105.根據(jù)權(quán)利要求98所述的方法，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)約300: 1的脂質(zhì):抗原重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
106.根據(jù)權(quán)利要求98至105中任一項(xiàng)所述的方法，其中將所述熔融脂質(zhì)加入到包含所述流感病毒血凝素抗原的所述水溶液中。
107.根據(jù)權(quán)利要求98至105中任一項(xiàng)所述的方法，其中將包含所述流感病毒血凝素抗原的所述水溶液加入到所述熔融脂質(zhì)中。
108.一種制備包含流感病毒血凝素抗原和脂質(zhì)囊泡的組合物的方法，其中所述脂質(zhì)囊泡由包含非離子型表面活性劑的脂質(zhì)構(gòu)成，所述方法包括: 熔化所述脂質(zhì)以產(chǎn)生熔融脂質(zhì)； 將所述熔融脂質(zhì)與包含所述流感病毒血凝素抗原的水溶液合并；和使所得產(chǎn)物均質(zhì)化，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)至少約10mg/ml的脂質(zhì)濃度的相對量和體積合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
109.根據(jù)權(quán)利要求108所述的方法，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)約10mg/ml至約IOOmg/ml的脂質(zhì)濃度的相對量和體積合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
110.根據(jù)權(quán)利要求108至109中任一項(xiàng)所述的方法，其中在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)至少約50: I的脂質(zhì):抗原重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
111.根據(jù)權(quán)利要求110所述的方法，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)至少約100: I的脂質(zhì):抗原重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
112.根據(jù)權(quán)利要求110所述的方法，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)至少約200: I的脂質(zhì):抗原重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
113.根據(jù)權(quán)利要求110所述的方法，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)至少約250: I的脂質(zhì):抗原重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
114.根據(jù)權(quán)利要求110所述的方法，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)低于約400: I的脂質(zhì):抗原重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
115.根據(jù)權(quán)利要求110所述的方法，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)低于約350: I的脂質(zhì):抗原重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
116.根據(jù)權(quán)利要求110所述的方法，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)約250: I至約350: I的脂質(zhì):抗原重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
117.根據(jù)權(quán)利要求110所述的方法，其中以在所得產(chǎn)物中實(shí)現(xiàn)約300: I的脂質(zhì):抗原重量比的相對量合并所述熔融脂質(zhì)和所述水溶液。
118.根據(jù)權(quán)利要求108至117中任一項(xiàng)所述的方法，其中將所述熔融脂質(zhì)加入到包含所述流感病毒血凝素抗原的所述水溶液中。
119.根據(jù)權(quán)利要求108至117中任一項(xiàng)所述的方法，其中，將包含所述流感病毒血凝素抗原的所述水溶液加入到所述熔融脂質(zhì)中。
全文摘要
本公開內(nèi)容提供了可用于治療流行性感冒的組合物和方法。如本文所述，所提供的組合物和方法基于包含有與脂質(zhì)囊泡組合的流感病毒血凝素抗原的特定組合物的開發(fā)，所述脂質(zhì)囊泡包含有非離子型表面活性劑(NISV)和任選的佐劑。在某些實(shí)施方案中，即使未儲存在標(biāo)準(zhǔn)冷鏈系統(tǒng)中，所提供的組合物依然保持效力(即，它們是熱穩(wěn)定的)。
文檔編號A61K39/145GK103096922SQ201180042971
公開日2013年5月8日 申請日期2011年7月6日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月6日
發(fā)明者大衛(wèi)·E·安德森, 安德烈·奧格雷爾, 羅納德·歐文·博赫, 杰夫·巴克斯特 申請人:變異生物技術(shù)公司