專利名稱：促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物，更詳細(xì)而言，本發(fā)明涉及一種包含鮭魚魚白提取物、啤酒酵母提取物、雞膠原蛋白、含礦物質(zhì)酵母(含有Zn、Se、Cu)的脂聯(lián)素產(chǎn)生促進(jìn)劑。
背景技術(shù)：
脂聯(lián)素(Adiponectin)是由包含244個(gè)氨基酸的脂肪組織分泌的激素，于1996年自人脂肪組織中被分離出來。脂聯(lián)素是脂肪組織特異性的分泌蛋白(非專利文獻(xiàn)2)，不僅大量存在于脂肪組織中，而且還大量存在于血液中(在正常人中為flOyg/ml)(非專利
文獻(xiàn)3)。已知其在骨骼肌和肝臟中通過活化AMP激酶(AMP-activated protein kinase ；AMPK)而促進(jìn)脂肪的燃燒和糖的攝取。已知該脂聯(lián)素在小型脂肪細(xì)胞中大量地分泌，當(dāng)脂肪細(xì)胞肥大化時(shí)，其分泌量會(huì)減少。此外，脂聯(lián)素作為抑制動(dòng)脈硬化的有益脂肪細(xì)胞因子而為人所知。脂肪細(xì)胞因子中，除上述有益脂肪細(xì)胞因子以外，還存在PAI-1、TNF-α等促進(jìn)動(dòng)脈硬化的有害脂肪細(xì)胞因子。在正常狀態(tài)下，這些有益脂肪細(xì)胞因子和有害脂肪細(xì)胞因子的分泌量保持平衡。但是，當(dāng)由于肥胖等導(dǎo)致脂肪細(xì)胞肥大化時(shí)，有益脂肪細(xì)胞因子的分泌量會(huì)減少，而另一方面，有害脂肪細(xì)胞因子會(huì)過剩地分泌。結(jié)果，兩者的平衡崩潰而成為II型糖尿病、動(dòng)脈硬化癥等生活習(xí)慣病發(fā)病的原因?？梢?，脂聯(lián)素與肥胖及伴隨肥胖而來的生活習(xí)慣病相關(guān)，認(rèn)為活化該脂聯(lián)素對(duì)預(yù)防或治療生活習(xí)慣病有效。而且，還已知脂聯(lián)素具有抑制肝纖維化的效果。已發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素具有改善高血壓、改善脂代謝、改善胰島素敏感性、抗炎作用、抑制肝纖維化、促進(jìn)正常肝細(xì)胞增殖的效果(專利文獻(xiàn)I)、抗炎效果(專利文獻(xiàn)2)等多方面的作用(專利文獻(xiàn)2 5)，可以說使血中的脂聯(lián)素濃度上升的藥品或飲食品顯示出對(duì)代謝綜合征具有預(yù)防、改善作用。在上述背景下，作為促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的藥劑，已知有噻唑烷衍生物。但是，該噻唑烷衍生物有時(shí)伴有腹瀉、便秘、惡心等消化系統(tǒng)癥狀、肝臟損傷等副作用。此外，提出了若干種促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的化合物或成分。例如，專利文獻(xiàn)6中公開了 N-乙酰半胱氨酸使脂肪細(xì)胞的脂聯(lián)素的表達(dá)量增加；以及夾竹桃麻素使血漿中的脂聯(lián)素濃度上升且使脂肪組織中的脂聯(lián)素的表達(dá)量增加。專利文獻(xiàn)7中公開了姜辣素化合物，專利文獻(xiàn)8中公開了余甘子果實(shí)或其提取物使脂聯(lián)素的產(chǎn)生增強(qiáng)。除這些物質(zhì)以外，還期待優(yōu)良的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的物質(zhì)。因此，在代謝綜合征的對(duì)策成為社會(huì)問題的當(dāng)前，要求開發(fā)出一種具有促進(jìn)并增強(qiáng)脂聯(lián)素在體內(nèi)產(chǎn)生的作用的安全的物質(zhì)?，F(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)I :日本特開2002-363094號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)2 :日本特開2000-256208號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)3 :日本專利第3018186號(hào)公報(bào)
專利文獻(xiàn)4 :美國(guó)專利申請(qǐng)公開第2002/0132773號(hào)專利文獻(xiàn)5 :日本特開2005-325072號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)6 :日本特開2005-232059號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)7 :日本特開2006-45210號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)8 :日本特開2006-56836號(hào)公報(bào)非專利文獻(xiàn)非專利文獻(xiàn)I :馬場(chǎng) t 辦江等，F(xiàn)oods&Food Ingredients Journal of Japan, 1998年，No. 178，p. 52-60非專利文獻(xiàn)2 :Maeda K et al. , Biochem. Biophys. Res. Commun. , 221:286 (1996) 非專利文獻(xiàn)3:Arita Y et al. , Biochem. Biophys. Res.Commun.，257:79 83(1999)

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明所要解決的問題本發(fā)明的課題在于提供一種促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生且在副作用和毒性等安全性方面不存在問題并且能夠口服攝取的組合物。用于解決問題的手段發(fā)明人對(duì)各種食材進(jìn)行了關(guān)于脂聯(lián)素產(chǎn)生的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過將鮭魚魚白提取物、啤酒酵母提取物、雞膠原蛋白、含礦物質(zhì)酵母(含有Zn、Se、Cu)組合而制備的混合物顯示出優(yōu)良的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的能力，從而完成了本發(fā)明。S卩，本發(fā)明涉及[1] 一種促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物，其特征在于，含有鮭魚魚白提取物、啤酒酵母提取物、雞膠原蛋白和含礦物質(zhì)酵母，并且具有促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的作用；如上述[I]所述的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物，其特征在于，鮭魚魚白提取物為含有通過對(duì)鮭魚魚白進(jìn)行酶處理而分解成寡核苷酸和寡肽的低分子成分的鮭魚魚白提取物；[3]如上述[I]或[2]所述的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物，其特征在于，啤酒酵母提取物為含有5(Γ80%的RNA的啤酒酵母提取物；[4]如上述[1Γ[3]中任一項(xiàng)所述的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物，其特征在于，含礦物質(zhì)酵母為在干酵母中含有2 3%的鋅、0. 3^0. 5%的銅和0.01、. 02%的硒的含礦物質(zhì)酵母；[5]如上述[1Γ[4]中任一項(xiàng)所述的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物，其特征在于，每100質(zhì)量份的鮭魚魚白提取物含有16 17質(zhì)量份的啤酒酵母提取物、33 34質(zhì)量份的雞膠原蛋白和22 23質(zhì)量份的含礦物質(zhì)酵母。發(fā)明效果本發(fā)明的脂聯(lián)素產(chǎn)生促進(jìn)劑在以鮭魚魚白提取物作為主要成分并單獨(dú)含有啤酒酵母提取物、雞膠原蛋白、含礦物質(zhì)酵母時(shí)不具有產(chǎn)生脂聯(lián)素的能力，而通過將上述物質(zhì)混合則具有優(yōu)良的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的效果。本發(fā)明的脂聯(lián)素產(chǎn)生促進(jìn)劑對(duì)改善、治療或預(yù)防糖尿病、肥胖、動(dòng)脈硬化癥以及起因于上述疾病的癥狀例如糖尿病并發(fā)癥(糖尿病視網(wǎng)膜病變、糖尿病神經(jīng)病變、糖尿病性腎病等)、腦梗塞、心肌梗塞、腎硬化癥等有效。


圖I是表示使用本發(fā)明的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物測(cè)定分泌到脂肪細(xì)胞的培養(yǎng)上清中的脂聯(lián)素濃度而得到的結(jié)果的圖。
具體實(shí)施例方式作為本發(fā)明的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物，只要是含有鮭魚魚白提取物、啤酒酵母提取物、雞膠原蛋白和含礦物質(zhì)酵母并且具有促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的作用的組合物，則沒有特別限制，在此，促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的作用是指促進(jìn)作為糖代謝、脂代謝等的重要調(diào)節(jié)因子的脂聯(lián)素的分泌、從而使體內(nèi)特別是血中的脂聯(lián)素量增加的作用。作為上述鮭魚魚白提取物，只要是可以作為食品用途使用的鮭魚魚白提取物則沒有特別限制，優(yōu)選含有通過對(duì)鮭魚魚白進(jìn)行酶處理而分解成寡核苷酸和寡肽的低分子成分的鮭魚魚白提取物。特別優(yōu)選含有2(Γ70%的分子量100(Γ3000的寡核苷酸、寡肽的鮭魚魚白提取物。這樣的鮭魚魚白提取物例如可以從株式會(huì)社工>·工7 · 7 r々卜U —等獲得。另外，上述鮭魚魚白提取物也可以依據(jù)日本特開2004-16143中記載的方法來制備。即，從鮭魚的魚白中除去皮、肌肉、血管等后，進(jìn)行純化而去除油分，接著利用蛋白酶和 核酸酶進(jìn)行處理。上述蛋白酶是以胰蛋白酶作為主體的蛋白酶。胰蛋白酶為具有高特異性的絲氨酸蛋白酶，在精氨酸和賴氨酸的羧基側(cè)選擇性地水解肽鍵，因此適于含有大量精氨酸的魚精蛋白的水解。另外，上述蛋白酶除了包含胰蛋白酶以外，還可以包含其他蛋白酶例如胰凝乳蛋白酶等。作為良好的蛋白酶，可以列舉777才4 >夕' 7卜丨J一株式會(huì)社制造的蛋白酶。另外，利用核酸酶進(jìn)行水解反應(yīng)的溫度為6(T75°C的范圍，其中最優(yōu)選70°C。蛋白酶處理和核酸酶處理的順序沒有特別限制，優(yōu)選先利用蛋白酶進(jìn)行處理，接著利用核酸酶進(jìn)行處理。作為上述啤酒酵母提取物，只要是可以作為食品用途使用的啤酒酵母提取物則沒有特別限制，優(yōu)選含有5(Γ80%的RNA的啤酒酵母提取物。這樣的啤酒酵母提取物例如可以從株式會(huì)社"> 工^ · 7 r夕卜U —等獲得。作為上述雞膠原蛋白，沒有特別限制，可以優(yōu)選使用食品用的雞膠原蛋白，可以優(yōu)選列舉例如株式會(huì)社二斤 二 7 · 7 r夕卜U —制造的雞膠原蛋白。作為上述含礦物質(zhì)酵母，只要是提高了礦物質(zhì)含量的面包酵母則沒有特別限制，優(yōu)選在干酵母中含有2 3%的鋅的含礦物質(zhì)酵母，其中可以列舉在干酵母中含有2 3%的鋅、O. 3^0. 5%的銅、O. 0Γ0. 02%的硒的含礦物質(zhì)酵母。這樣的含礦物質(zhì)酵母可以從株式會(huì)社工> ·工7 · 7 r々卜U —等獲得。另外，可以通過將富含鋅的鋅酵母、富含銅的銅酵母、富含硒的硒酵母混合來制備這樣的含礦物質(zhì)酵母。富含各礦物質(zhì)的酵母可以從株式會(huì)社工A ·工7 · 7 r夕卜J 一等獲得。另外，作為本發(fā)明的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物中的鮭魚魚白提取物、啤酒酵母提取物、雞膠原蛋白和含礦物質(zhì)酵母的配合比例，可以優(yōu)選例示每100質(zhì)量份的鮭魚魚白提取物含有1(Γ25質(zhì)量份、優(yōu)選16 17質(zhì)量份的啤酒酵母提取物，25^40質(zhì)量份、優(yōu)選33 34質(zhì)量份的雞膠原蛋白和15 30質(zhì)量份、優(yōu)選22 23質(zhì)量份的含礦物質(zhì)酵母的組合物。本發(fā)明的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物中，除了可以添加藥學(xué)上容許的通常的載體、粘合劑、穩(wěn)定劑、賦形劑、稀釋劑、PH緩沖劑、崩解劑、增溶劑、助溶劑、等滲劑等各種調(diào)劑用配合成分以外，還可與其他脂聯(lián)素產(chǎn)生促進(jìn)劑等治療藥并用。本發(fā)明的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物可以用作對(duì)治療或預(yù)防由脂聯(lián)素的產(chǎn)生下降引起的疾病有用的藥品、補(bǔ)充品、食品、飼料等，施用量或攝取量?jī)?yōu)選為成年人每人每天
O.I 10g，更優(yōu)選O. 5 5g。作為可以應(yīng)用本發(fā)明的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物的食 品或食品材料的種類，沒有特別限制，可以列舉例如酸奶、飲料型酸奶、果汁、牛奶、豆奶、酒類、咖啡、紅茶、煎茶、烏龍茶、運(yùn)動(dòng)飲料等各種飲料，布丁、餅干、面包、蛋糕、果凍、煎餅等烘烤糕點(diǎn)，羊羹等日式糕點(diǎn)，冷凍甜點(diǎn)、口香糖等的面包/糕點(diǎn)類，烏冬面、蕎麥面等面類，魚糕、火腿、魚肉香腸等摻有魚肉的制品，味卩曾、醫(yī)油、調(diào)味汁、蛋黃醫(yī)、甜味料等調(diào)味品類，奶釀、奶油等乳制品， 腐、魔芋以及咸烹海味、餃子、炸肉餅、沙拉等各種家常菜。另外，可以根據(jù)需要在應(yīng)用了促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物的食品或食品材料中進(jìn)一步配合維生素、礦物質(zhì)等其他營(yíng)養(yǎng)成分。在將本發(fā)明的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物應(yīng)用于食品或飼料中的情況下，可以在食品或食品材料或者飼料或飼料材料的包裝體或附帶的說明書中標(biāo)明具有促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的作用的主旨。以下，利用實(shí)施例具體地說明本發(fā)明，但本發(fā)明的技術(shù)范圍并不限定于這些例示。實(shí)施例I[試樣的制備]將60mg鮭魚魚白提取物(株式會(huì)社工> ·工7 · 7 r夕卜一制造的“ ” V tT>”)、10mg啤酒酵母提取物(株式會(huì)社二 > 二；^ · 7 r夕卜一制造的“啤酒酵母提取RNA”)、20mg膠原蛋白(株式會(huì)社二 >· 二 7^*7 r 卜一制造的“雞膠原蛋白”)、13· 5mg含礦物質(zhì)酵母(株式會(huì)社工> 工7 · 7 r々卜U —制造的“混合含礦物質(zhì)酵母C”)懸浮于PBS中，制備成2. 5mg/ml后,利用Φ O. 45 μ m的過濾器進(jìn)行過濾。使用該濾液，以表I所示的試樣濃度進(jìn)行評(píng)價(jià)。表I
ΓΓWm I Wma#3
(/ig/ml)(Mg/ml)(yg/ml)
鮭魚魚白提取物 — O2 9I 45 —啤酒酵母提取物 O4~iYa
膠原蛋白 ........................................................................................... O9.7.......... 4 8.5
含礦物質(zhì)酵母 ~ O6.5 —… 3 2.5
總計(jì) OI 5 O2 5 0[促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的效果](1)3T3_L1細(xì)胞的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)將3T3-L1細(xì)胞(小鼠成纖維細(xì)胞)在含有10%胎牛血清的杜爾貝科改良的伊格爾培養(yǎng)基(CS-DMEM)中培養(yǎng)至達(dá)到密集的狀態(tài)(鋪滿)后，除去培養(yǎng)燒瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基，并利用PBS (-)洗滌2次。然后，添加O. 1%胰蛋白酶-EDTA溶液而將細(xì)胞從燒瓶底面剝離，將該剝離的細(xì)胞和O. 1%胰蛋白酶-EDTA溶液轉(zhuǎn)移至離心沉淀管中。向其中添加等體積的10%CS-DMEM，并以1500rpm進(jìn)行5分鐘的離心分離。然后，使細(xì)胞在10%FCS_DMEM中達(dá)到均勻，接種至燒瓶中并放入CO2孵育箱中，在5%C02的條件下在37°C下進(jìn)行培養(yǎng)。(2)向脂肪細(xì)胞的分化誘導(dǎo)在10%CS_DMEM中培養(yǎng)3T3-L1細(xì)胞，自達(dá)到密集狀態(tài)(鋪滿)之日起2天后，將培養(yǎng)基更換為分化培養(yǎng)基I并進(jìn)一步培養(yǎng)2天。接著，將培養(yǎng)基更換為分化培養(yǎng)基2并培養(yǎng)2天。向脂肪細(xì)胞的分化誘導(dǎo)中使用了分化培養(yǎng)基I和分化培養(yǎng)基2。
分化培養(yǎng)基I為包含10%FBS、0. 5mM異丁基-I-甲基黃嘌呤(IBMX)、I μ M地塞米松(DEX)和10μ g/ml胰島素的DMEM。分化培養(yǎng)基I的制備通過將10mg/ml胰島素、500mMIBMX和ImM DEX的混合液用10%FCS_DMEM稀釋來進(jìn)行。另外，分化培養(yǎng)基2為包含10%FCS和I μ M胰島素的DMEM。分化培養(yǎng)基2的制備通過將10mg/ml胰島素用10%FCS_DMEM稀釋來進(jìn)行。(3)促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的效果的評(píng)價(jià)分化成脂肪細(xì)胞后，將培養(yǎng)基更換為O. P/oBSA-DMEM并培養(yǎng)24小時(shí)。然后，添加混合物以分別達(dá)到O μ g/ml (試樣I) >50 μ g/ml (試樣2) >250 μ g/ml (試樣3)，進(jìn)而在37。。下孵育48小時(shí)。收集培養(yǎng)上清，使用脂聯(lián)素ELISA試劑盒(大塚制藥株式會(huì)社)測(cè)定上清中的脂聯(lián)素量。結(jié)果示于圖I中，數(shù)值化后的結(jié)果示于表2中。結(jié)果，添加50 μ g/ml和250 μ g/ml時(shí)與未添加(試樣I)時(shí)相比，觀察到脂聯(lián)素濃度呈濃度依賴性地增加。若將未添加時(shí)(對(duì)照)設(shè)為100%，則在添加50 μ g/ml的混合物時(shí)分泌到培養(yǎng)上清中的脂聯(lián)素濃度顯示為對(duì)照的126%，在添加250μ g/ml的混合物時(shí)分泌到培養(yǎng)上清中的脂聯(lián)素濃度顯示為對(duì)照的183%(顯著性水平為1%時(shí)具有顯著差異)。此時(shí)，在任何濃度下對(duì)存活率均無影響。表權(quán)利要求
1.一種促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物，其特征在于，含有鮭魚魚白提取物、啤酒酵母提取物、雞膠原蛋白和含礦物質(zhì)酵母，并且具有促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的作用。
2.如權(quán)利要求I所述的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物，其特征在于，鮭魚魚白提取物為含有通過對(duì)鮭魚魚白進(jìn)行酶處理而分解成寡核苷酸和寡肽的低分子成分的鮭魚魚白提取物。
3.如權(quán)利要求I或2所述的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物，其特征在于，啤酒酵母提取物為含有5(Γ80%的RNA的啤酒酵母提取物。
4.如權(quán)利要求廣3中任一項(xiàng)所述的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物，其特征在于，含礦物質(zhì)酵母為在干酵母中含有2 3%的鋅、O. 3^0. 5%的銅和O. 0Γ0. 02%的硒的含礦物質(zhì)酵母。
5.如權(quán)利要求f4中任一項(xiàng)所述的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物，其特征在于，每100質(zhì)量份的鮭魚魚白提取物含有16 17質(zhì)量份的啤酒酵母提取物、33 34質(zhì)量份的雞膠原蛋白和22^23質(zhì)量份的含礦物質(zhì)酵母。
全文摘要
本發(fā)明要解決的課題在于提供一種促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生且在副作用和毒性等安全性方面不存在問題并且能夠口服攝取的組合物。制備一種促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物，其含有鮭魚魚白提取物、啤酒酵母提取物、雞膠原蛋白和含礦物質(zhì)酵母，并且具有促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的作用。作為鮭魚魚白提取物，優(yōu)選含有通過對(duì)鮭魚魚白進(jìn)行酶處理而分解成寡核苷酸和寡肽的低分子成分。作為啤酒酵母提取物，優(yōu)選含有50~80%的RNA。作為含礦物質(zhì)酵母，優(yōu)選在干酵母中含有2~3%的鋅、0.3~0.5%的銅和0.01~0.02%的硒。另外，優(yōu)選每100質(zhì)量份的鮭魚魚白提取物含有16~17質(zhì)量份的啤酒酵母提取物、33~34質(zhì)量份的雞膠原蛋白和22~23質(zhì)量份的含礦物質(zhì)酵母。
文檔編號(hào)A61P9/10GK102892423SQ20118002477
公開日2013年1月23日 申請(qǐng)日期2011年5月13日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月21日
發(fā)明者許善花 申請(qǐng)人:最終未來國(guó)際股份有限公司