專利名稱：一種右歸丸的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及右歸丸的一種應(yīng)用，具體說(shuō)，是涉及右歸丸在改善慢性肝損傷藥物中的應(yīng)用，屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
反復(fù)慢性肝損傷是在臨床上較為常見的肝損傷，各種病因所導(dǎo)致的慢性肝損傷，均可引起肝細(xì)胞炎癥壞死，并繼發(fā)肝纖維化，肝纖維化(Hepatic fibrosis)是指肝臟纖維組織過(guò)度沉積，是纖維增生和纖維分解不平衡的結(jié)果。如果肝纖維化得不到有效控制，可最終發(fā)展為肝硬化并引起嚴(yán)重的并發(fā)癥(門脈高壓、肝衰竭、肝癌等)。因此保護(hù)肝細(xì)胞，減少各種損傷因素，可以防止或延緩肝纖維化及其并發(fā)癥的進(jìn)展。肝細(xì)胞壞死后，肝細(xì)胞內(nèi)的一些酶類進(jìn)入血液，血清中轉(zhuǎn)氨酶(ALT等)水平升高，血清轉(zhuǎn)氨酶的升高在一定程度上反映了肝細(xì)胞的損傷程度，因此ALT活性升高是肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞損傷的標(biāo)記。慢性肝損傷一般都伴有肝纖維化改變，表現(xiàn)為膠原面積增加，肝組織羥脯氨
酸含量增高。目前對(duì)抗肝纖維化藥物的研究比較多，中醫(yī)中藥尤其受到人們的極大重視。右歸丸出自《景岳全書》，由10味藥組成。方中以附子、肉桂、鹿角膠為君藥，溫補(bǔ)腎陽(yáng)，填精補(bǔ)髓。臣以熟地黃、枸杞子、山茱萸、山藥滋陰益腎，養(yǎng)肝補(bǔ)脾。佐以菟絲子補(bǔ)陽(yáng)益陰，固精縮尿；杜仲補(bǔ)益肝腎，強(qiáng)筋壯骨；當(dāng)歸補(bǔ)血養(yǎng)肝。諸藥配合，共奏溫補(bǔ)腎陽(yáng)，填精止遺之功。藥理研究顯示右歸丸本方具有調(diào)節(jié)免疫、改善機(jī)體內(nèi)分泌功能、改善骨代謝、抗衰老，調(diào)節(jié)性激素含量等作用，常用于治療男性不育癥、坐骨神經(jīng)痛、肥大性脊椎炎等。至今，未見右歸丸有改善肝功能的報(bào)道。中醫(yī)認(rèn)為“肝腎同源、乙癸同源”，如果能揭示右歸丸具有改善慢性肝損傷的作用，將為臨床治療慢性肝損傷提供一種新的選擇。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供右歸丸的一種新應(yīng)用，即，右歸丸在制備用于改善慢性肝損傷藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明人經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期研究發(fā)現(xiàn):右歸丸不僅能夠降低CCl4小鼠血清ALT水平，減少肝組織膠原面積，降低肝組織Hyp含量；右歸丸還能夠減少DMN大鼠肝組織膠原面積，降低肝組織Hyp含量，增加大鼠體重。右歸丸具有改善慢性肝損傷的作用，其作用機(jī)制可能是:一、通過(guò)保護(hù)肝細(xì)胞，從而避免肝細(xì)胞內(nèi)的酶進(jìn)入血液，血清中轉(zhuǎn)氨酶水平升高；二、通過(guò)改善肝纖維化，減少膠原沉積，降低肝組織羥脯氨酸(Hyp)含量。


圖1是CCl4模型中小鼠肝組織天狼染色圖(光鏡，200倍)；圖2是DMN模型中大鼠肝組織天狼染色圖(光鏡，200倍)；

圖中:N為正常組；M為模型組；Y為右歸丸組。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例和附圖，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。這些實(shí)施例應(yīng)理解為僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不是用于限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。在閱讀了本發(fā)明記載的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等效變化和修飾同樣落入本發(fā)明權(quán)利要求書所限定的范圍。實(shí)施例1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?觀察右歸丸對(duì)慢性肝損傷的影響2.實(shí)驗(yàn)材料2.1 藥物右歸丸:熟地240克，附子(炮附片)60克，肉桂60克，山藥120克，山茱萸(酒炙)90克，菟絲子120克，鹿角膠120克，枸杞子120g，當(dāng)歸90克，杜仲(鹽炒)120克。中藥飲片購(gòu)自上海華宇藥業(yè)有限公司，由上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥所制備成浸膏，方法如下:水煎煮2次，第I次用水量為藥物10倍量，第2次為藥物8倍量，從沸騰計(jì)時(shí)每次I小時(shí)，兩次煎煮液再合煎濃縮至所需溫度，_20°C保存，灌胃前37°C溫育。2.2 試劑CCl4 (分析純，批號(hào):20080107)、橄欖油:(化學(xué)純，批號(hào):F20090324)、DMN(批號(hào):EPK2669)，購(gòu)自和光純藥工業(yè)株式會(huì)社、對(duì) 二甲氨基苯甲醛(分析純，批號(hào):F20100820)、氯氨_Τ(分析純，批號(hào):Τ20090505)，均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。Hyp標(biāo)準(zhǔn)品(ALDRICH, lot:H54409)，購(gòu)自 sigma。ALT(20101123)購(gòu)自南京建成有限公司。2.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物10周齡C57BL/6小鼠雄性45只，清潔級(jí)，體重20±5g，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，許可證號(hào):SCXK (滬)2007-0005，所有小鼠飼養(yǎng)于上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，自由飲食。6周齡WISTAR大鼠雄性36只，清潔級(jí)，體重200±20g，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，許可證號(hào):SCXK(滬)2007-0005，所有小鼠飼養(yǎng)于上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，自由飲食。3.實(shí)驗(yàn)方法3.1采用兩種不同的肝損傷動(dòng)物模型觀察右歸丸改善慢性肝損傷的作用四氯化碳(CCl4)致小鼠慢性肝損傷模型:雄性C57BL/6小鼠45只隨機(jī)分為3組，即:正常組、模型組、右歸丸組。模型組和右歸丸組小鼠以10% CC14橄欖油溶液2ml/kg體重腹腔注射，每周注射3次(隔天I次)，連續(xù)注射5周。正常組、模型組每天給予等量超純水灌胃。右歸丸用超純水1:1稀釋，右歸丸組于造模之日起給予右歸丸17.14ml.k^1 (相當(dāng)于70克成人體重的10倍量)。給藥第5周末，摘眼球取血，常溫放置2-3h，3000rpm離心15min，血清_80°C保存?zhèn)溆?；小鼠頸椎脫臼后處死，打開腹腔，摘取肝臟，取0.5X0.5X0.5cm3大小肝組織2塊放入包埋框，4%中性甲醛固定液固定，24h后逐級(jí)酒精脫水，二甲苯透明，60°C石蠟包埋，用于普通病理實(shí)驗(yàn)；其余肝組織EP管分裝成2管，-80°C保存。取小鼠血清檢測(cè)ALT含量；取肝組織病理切片，經(jīng)天狼星紅染色檢測(cè)膠原面積；取肝組織，采用Jamall氏鹽酸水解法檢測(cè)羥脯氨酸含量。
二甲基亞硝胺(DMN)致大鼠慢性肝損傷模型:雄性WISTAR大鼠36只，隨機(jī)分為3組，即正常組、模型組、右歸丸組。模型組和右歸丸組以0.5% DMN溶液按2ml/kg體重腹腔注射，每周連續(xù)注射3次，連續(xù)注射6周。造模兩周后，正常組、模型組每天給予等量清水灌胃，右歸丸用超純水1:1稀釋，右歸丸治療組給予右歸丸10.3ml *kg-l(相當(dāng)于70克成人體重的6倍量)灌胃，連續(xù)四周。造模結(jié)束后，大鼠乙醚麻醉后，打開腹腔，腹主動(dòng)脈取血，常溫放置2 3h，3000rpm離心15min，血清_80°C保存?zhèn)溆?摘取肝臟，取0.5X0.5X0.5cm3大小肝組織2塊，放入包埋框，4%中性甲醛固定液固定，24h后逐級(jí)酒精脫水，二甲苯透明，60°C石蠟包埋，用于普通病理實(shí)驗(yàn)；其余肝組織EP管分裝成2管，_80°C保存。取大鼠血清檢測(cè)ALT含量；取肝組織病理切片，經(jīng)天狼星紅染色檢測(cè)膠原面積；取肝組織，采用Jamall氏鹽酸水解法檢測(cè)羥脯氨酸含量。3.2統(tǒng)計(jì)學(xué)分析計(jì)量資料以[±s表示，采用單因素方差分析，采用SPSS 11.0軟件統(tǒng)計(jì)分析。4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1對(duì)CC14致小鼠慢性肝損傷模型血清ALT影響與正常組比較，模型組小鼠ALT顯著增高(P < 0.01)。與模型組比較，右歸丸組小鼠ALT顯著降低(P < 0.01)。結(jié)果見表I所示。表I右歸丸對(duì)CCl4致慢性肝損傷小鼠血清ALT的影響(x±S)
權(quán)利要求
1.一種右歸丸的應(yīng)用，其特征在于:右歸丸在制備用于改善慢性肝損傷藥物中的應(yīng)用 。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種右歸丸的應(yīng)用，即，右歸丸在制備用于改善慢性肝損傷藥物中的應(yīng)用。右歸丸能夠降低CCl4小鼠血清ALT水平，減少肝組織膠原面積，降低肝組織Hyp含量；右歸丸還能夠減少DMN大鼠肝組織膠原面積，降低肝組織Hyp含量，增加大鼠體重。
文檔編號(hào)A61K36/815GK103070979SQ20111033011
公開日2013年5月1日 申請(qǐng)日期2011年10月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月26日
發(fā)明者王曉玲, 閆曉風(fēng), 葉目亭杰, 劉平 申請(qǐng)人:上海中醫(yī)藥大學(xué)