專利名稱：脫氧核苷與核苷組合在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及脫氧核苷與核苷組合在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，具體地說是將一種或兩種脫氧核苷與其它核苷中的一種或多種按組合成藥用于治療腫瘤，屬于腫瘤藥物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
核苷(nucleoside)由堿基和五碳糖(核糖或脫氧核糖)連接而成，即嘌呤的N-9 或嘧啶的N-I與核糖或脫氧核糖的C-I通過β糖苷鍵連接而成的化合物，包括核糖核苷和脫氧核糖核苷兩類，核糖核苷是構(gòu)成RNA的核苷，主要有腺苷、鳥苷、胞苷和尿苷；脫氧核糖核苷(簡稱脫氧核苷)是構(gòu)成DNA的核苷，主要有脫氧腺苷、脫氧鳥苷、脫氧胞苷和脫氧胸腺苷。核苷可從水解核酸來制備。用吡啶水溶液、氧化鋁或酶促水解核糖核酸RNA，可得到核糖核苷；用氧化鋁或酶水解脫氧核糖核酸DNA可得到脫氧核糖核苷。核苷也可用化學(xué)方法合成。適當(dāng)保護的核糖或脫氧核糖與堿基衍生物縮合，可得到相應(yīng)的核糖核苷和脫氧核糖核苷。
核糖核苷，由除胸腺嘧啶外的嘌呤或嘧啶與核糖分子共價結(jié)合而成的化合物，主要有腺苷、鳥苷、胞苷和尿苷。腺嘌呤核苷(adenosine)簡稱腺苷，化學(xué)名9_i3-D-呋喃核糖基腺嘌呤，CAS號58-61-7，分子式=CltlH13N5O4，分子量J67. 24。鳥嘌呤核苷簡稱鳥苷，化學(xué)名9-β -D-呋喃核苷鳥嘌，CAS號118-00-3，分子式=CltlH13N5O5,分子量』83. 24。胞嘧啶核苷簡稱胞苷，化學(xué)名1_β-D-呋喃核糖基胞嘧啶，CAS號65-46-3，分子式=C9H13N3O5，分子量Μ3. 22。尿嘧啶核苷簡稱尿苷，化學(xué)名l-i3_D-呋喃核糖基尿嘧啶，CAS號58-96-8， 分子式=C9H12N2O6,分子量M4. 20。
脫氧核糖核苷(deoxynucleoside)，是嘌呤堿(腺嘌呤、鳥嘌呤)的N-9或嘧啶堿 (胞嘧啶、胸腺嘧啶)的N-I與2-脫氧-D-核糖的C-I通過β糖苷鍵相連接而成的化合物， 體內(nèi)主要的脫氧核苷有脫氧腺苷、脫氧鳥苷、脫氧胞苷、胸腺嘧啶脫氧核苷(簡稱胸苷)。脫氧腺苷(deoxyadenosine)即2'-腺嘌呤脫氧核苷，化學(xué)名9_β _D_2‘-脫氧呋喃核苷腺嘌呤，是腺嘌呤的N-9與2-脫氧-D-核糖的C-I通過β糖苷鍵相連所形成的化合物，CAS 號958-09-8，分子式CltlH13N5O3,分子量251. 24。脫氧鳥苷(deoxyguanosine)即 2'-鳥嘌呤脫氧核苷，化學(xué)名9-β-2'-呋喃脫氧核苷鳥嘌呤，是鳥嘌呤的N-9與2-脫氧-D-核糖的C-I通過β糖苷鍵相連接所形成的化合物，CAS號961-07-9，分子式=CltlH13N5O4，分子量267. 24。脫氧胞苷(deoxycytidine)即2'-脫氧胞嘧啶核苷，化學(xué)名1-β_2'-呋喃脫氧核苷胞嘧啶，是胞嘧啶的N-I與2-脫氧-D-核糖的C-I通過β糖苷鍵相連接所形成的化合物，CAS號951-77-9，分子式=C9H13N3O4,分子量227. 22。胸腺嘧啶脫氧核苷簡稱胸苷(Thymidine)即2'-脫氧胸腺嘧啶核苷，或β-胸苷，化學(xué)名9_ β-D-呋喃核苷胸腺嘧啶，CAS 號:50-89-5，分子式CltlH14N2O5，分子量為 242. 023。
脫氧核糖核苷是構(gòu)成脫氧核糖核酸DNA的結(jié)構(gòu)片段，脫氧核苷及其衍生物具有良好的生理活性，是基因藥物和基因工程研究的重要原料。如2-氯脫氧腺苷用于治療白血病，從復(fù)合蟲草素中提取的2’脫氧腺苷和3’脫氧腺苷及2脫氧腺苷和3脫氧腺苷對腫瘤有明顯的抑制作用，脫氧無環(huán)鳥苷(地昔洛偉)有顯著的抗病毒作用，2脫氧胞苷(扎西胞苷) 是臨床上常用的治療艾滋病的藥物。因此脫氧核苷類似物是許多抗病毒、抗腫瘤、抗艾滋病藥物的良好中間體。但是將脫氧核苷或/與其它核苷按組合，用于抗腫瘤領(lǐng)域，尚未見相關(guān)報道。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，提供了脫氧核苷與核苷組合在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用， 將四種脫氧核苷包括脫氧腺苷、脫氧鳥苷、脫氧胞苷、胸苷中的一種或兩種與其它核苷包括腺苷、鳥苷、胞苷、尿苷、脫氧腺苷、脫氧鳥苷、脫氧胞苷、胸苷的一種或多種組合作為治療腫瘤的藥物成分使用，較單獨應(yīng)用能夠達到明顯提高抗腫瘤效果，減少毒副作用和延緩耐藥性發(fā)生的目的。
本發(fā)明的技術(shù)方案為脫氧核苷與核苷組合在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，所述的脫氧核苷包括脫氧腺苷、 脫氧鳥苷、脫氧胞苷、胸苷；所述的核苷包括腺苷、鳥苷、胞苷、尿苷、脫氧腺苷、脫氧鳥苷、脫氧胞苷、胸苷。
其中，所述的脫氧核苷為脫氧腺苷、脫氧鳥苷、脫氧胞苷、胸苷中的一種或兩種；所述的核苷為腺苷、鳥苷、胞苷、尿苷、脫氧腺苷、脫氧鳥苷、脫氧胞苷、胸苷中的一種或多種。
優(yōu)選地，所述的脫氧核苷為脫氧腺苷、脫氧鳥苷、脫氧胞苷、胸苷中的一種；所述的核苷為腺苷、鳥苷、胞苷、尿苷、脫氧腺苷、脫氧鳥苷、脫氧胞苷、胸苷中的一種或兩種，且選擇的脫氧核苷與核苷不同。
優(yōu)選地，所述的脫氧核苷為脫氧腺苷、脫氧鳥苷、脫氧胞苷、胸苷中的兩種；所述的核苷為腺苷、鳥苷、胞苷、尿苷、脫氧腺苷、脫氧鳥苷、脫氧胞苷、胸苷中的一種或兩種，且選擇的脫氧核苷與核苷不同。
進一步地，所述的脫氧核苷為脫氧腺苷、脫氧鳥苷、脫氧胞苷、胸苷中的兩種，所述的核苷為腺苷、鳥苷、胞苷、尿苷、脫氧腺苷、脫氧鳥苷、脫氧胞苷、胸苷中的一種。
優(yōu)選地，所述的脫氧核苷為脫氧腺苷和脫氧鳥苷，所述的核苷為一種核糖核苷。
進一步地，上述各成分的摩爾數(shù)相同。
所述的腫瘤包括胃癌、肺癌、肝癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、白血病、生殖系統(tǒng)腫瘤等多種常見惡性腫瘤。
經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)不同的核苷組合用藥比單一用藥血液中的單一藥物濃度降低，因而毒副作用下降。同時多藥用藥可延緩腫瘤耐藥性的發(fā)生。通過組合用藥，能夠降低各成分單一用藥時的用藥量，而每種具體核苷的絕對濃度明顯下降，藥物對機體的毒副作用就下降； 同時，二種或多種化療藥物組合用藥可大大降低耐藥性的發(fā)生。相比脫氧核苷與另一種核苷用藥，脫氧核苷與另兩種核苷的組合，其耐藥性大大降低；相比脫氧核苷與另四種核苷組合用藥，脫氧核苷與另兩種核苷的組合，在降低了耐藥性的同時，使用起來也方便，容易配制。
將脫氧核苷與其它核苷組合后，用在制備治療上述腫瘤的藥物中，直接制成注射劑，進行注射使用；注射劑可以是常規(guī)注射劑，也可是各種類型的緩釋注射劑。
不同腫瘤有不同的核苷代謝與組成特點，對不同腫瘤細胞每種核苷有不同的抑制強度。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，嘌呤核苷的抗腫瘤作用強于嘧啶核苷，且嘌呤核苷的代謝產(chǎn)物次黃嘌呤核苷(即肌苷)也有一定的抗腫瘤作用；同一堿基的核苷脫氧核苷抗腫瘤作用強于非脫氧核苷。脫氧腺苷、脫氧鳥苷、脫氧胞苷與其對應(yīng)的非脫氧核苷(即腺苷、鳥苷、胞苷、尿苷) 分子中差一個氧原子，分子量小為16D，在濃度0. 03mmol/L以上表現(xiàn)出抗腫瘤活性，在濃度 0. 4mmol/L體外抑瘤率達80%以上。脫氧核苷抗腫瘤作用明顯，單一脫氧腺苷治療腫瘤瘤體大小的15%完全緩解，有效率為91.0%以上，且使用劑量低，為4.0 35.0 mmol /Kg/天， 持續(xù)緩慢靜脈點滴。
本發(fā)明的優(yōu)點在于1、脫氧核苷與其它核苷組合用于制備治療胃癌、肺癌、肝癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、生殖系統(tǒng)腫瘤等多種常見惡性腫瘤的藥物，抗腫瘤效果明顯，具有高效、廣譜、低毒的特點；2、脫氧核苷與其它核苷組合用藥比單一用藥血液中的單一藥物濃度降低，從而毒副作用降低；3、脫氧核苷與其它核苷組合用藥可延緩腫瘤耐藥性的發(fā)生。
具體實施方式
以下對本發(fā)明的優(yōu)選實施例進行說明，應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的優(yōu)選實施例僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
實施例1脫氧核苷與其它核苷的抑瘤實驗一、試驗方法將人肝癌Bel-7402腫瘤細胞和人肺癌細胞PG(中國科學(xué)院上海細胞所提供)，用含10% 新生牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，取對數(shù)生長期的細胞，用0. 25%胰蛋白酶消化后以 3 X IO3個/孔接種于96孔板，置于37°C、5%0)2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)M小時，每組設(shè)8個復(fù)孔，試驗組分別加入總濃度為10. Ommol/L的核苷溶液60uL，補充培養(yǎng)液至每孔200 μ L，對照組的5-FU試驗組的脫氧腺苷的用量(mmol/L)相同，用無血清培養(yǎng)基稀釋，0. 22 μ m的無菌微孔濾膜過濾。在擬定的測量時間48小時，倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)并拍照，然后每孔加入 5mg/mL的MTT溶液20 μ L，置于37°C、5%0)2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4小時，終止培養(yǎng)，吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)的上清液，每孔加入150 μ L DMS0,震蕩10分鐘，使結(jié)晶物充分溶解后，以自動酶標(biāo)儀 (Thermo,型號MULTISKAN MK3)測量570mn處吸光度。每一板每組設(shè)8個復(fù)孔，每個實驗重復(fù)3次，表1中數(shù)據(jù)為三次實驗的平均均數(shù)。在以后的實施例中，數(shù)據(jù)的計算完全與本實施例相同。
腫瘤細胞生長抑制率計算公式如下腫瘤細胞存活率(%)=加藥孔的實際OD值/陰性對照孔的OD值； 腫瘤細胞生長抑制率(%)=100% —細胞存活率。
表1.各種核苷對7402、PG腫瘤細胞48小時抑制率(％)
權(quán)利要求
1.脫氧核苷與核苷組合在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，所述的脫氧核苷包括脫氧腺苷、脫氧鳥苷、脫氧胞苷、胸苷；所述的核苷包括腺苷、鳥苷、胞苷、尿苷、脫氧腺苷、脫氧鳥苷、脫氧胞苷、胸苷。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脫氧核苷與核苷組合在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的脫氧核苷為脫氧腺苷、脫氧鳥苷、脫氧胞苷、胸苷中的一種或兩種；所述的核苷為腺苷、鳥苷、胞苷、尿苷、脫氧腺苷、脫氧鳥苷、脫氧胞苷、胸苷中的一種或多種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脫氧核苷與核苷組合在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的脫氧核苷為脫氧腺苷、脫氧鳥苷、脫氧胞苷、胸苷中的一種；所述的核苷為腺苷、鳥苷、胞苷、尿苷、脫氧腺苷、脫氧鳥苷、脫氧胞苷、胸苷中的一種或兩種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脫氧核苷與核苷組合在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的脫氧核苷為脫氧腺苷、脫氧鳥苷、脫氧胞苷、胸苷中的兩種；所述的核苷為腺苷、鳥苷、胞苷、尿苷、脫氧腺苷、脫氧鳥苷、脫氧胞苷、胸苷中的一種或兩種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脫氧核苷與核苷組合在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的脫氧核苷為脫氧腺苷、脫氧鳥苷、脫氧胞苷、胸苷中的兩種，所述的核苷為腺苷、鳥苷、胞苷、尿苷、脫氧腺苷、脫氧鳥苷、脫氧胞苷、胸苷中的一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的脫氧核苷與核苷組合在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的脫氧核苷為脫氧腺苷和脫氧鳥苷，所述的核苷為一種核糖核苷。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任意一項所述的脫氧核苷與核苷組合在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的每種脫氧核苷與核苷的摩爾數(shù)相同。
8.根據(jù)權(quán)利要求7中任意一項所述的脫氧核苷與核苷組合在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的腫瘤包括胃癌、肺癌、肝癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、白血病、生殖系統(tǒng)腫瘤。
全文摘要
本發(fā)明公開了脫氧核苷與核苷組合在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，所述的脫氧核苷包括脫氧腺苷、脫氧鳥苷、脫氧胞苷、胸苷；所述的核苷包括腺苷、鳥苷、胞苷、尿苷、脫氧腺苷、脫氧鳥苷、脫氧胞苷、胸苷；本發(fā)明的優(yōu)點在于脫氧核苷與其它核苷組合用于制備治療胃癌、肺癌、肝癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、生殖系統(tǒng)腫瘤等多種常見惡性腫瘤的藥物，抗腫瘤效果明顯，具有高效、廣譜、低毒的特點；且組合用藥比單一用藥血液中的單一藥物濃度降低，從而毒副作用降低；同時可延緩腫瘤耐藥性的發(fā)生。
文檔編號A61K31/7068GK102499937SQ201110314309
公開日2012年6月20日 申請日期2011年10月17日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月2日
發(fā)明者張始狀, 程鑫, 趙瑤, 趙榮榮, 韓明, 高志琴 申請人:張始狀