專利名稱：丹參酮iia在制備抑制角質(zhì)形成細(xì)胞增殖疾病藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及丹參酮IIA在制藥領(lǐng)域中的新用途，具體地說(shuō)，涉及丹參酮IIA在制備抑制角質(zhì)形成細(xì)胞增殖疾病藥中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
丹參是活血化瘀藥物的代表藥物之一，最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為上品。記載有“養(yǎng)血，去新股痼疾，結(jié)氣”、“一味丹參散，功同四物湯”的說(shuō)法，常用于治療淤血癥。近年來(lái)臨床研究發(fā)現(xiàn)，丹參能明顯改善微循環(huán)，擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，調(diào)整心律，降低血脂，促進(jìn)組織修復(fù)與再生。丹參中含有許多有效成分，其中，丹參酮IIA (Tanshinone IIA)是丹參中研究最為深入的有效成分之一，其結(jié)構(gòu)式為
、又廣
H3C CH3
該化合物的分子式是=C19H18O3，分子量294. 33，為紅褐色粉末或紅色晶體粉末，在甲醇、乙醇、氯仿、丙酮中溶解。該化合物可由唇形科植物丹參的干燥根中提取制得，也可直接從生產(chǎn)廠家購(gòu)買，如上海中國(guó)藥品生物制品鑒定所。已知丹參酮IIA具有促進(jìn)多種腫瘤細(xì)胞凋亡的作用，可用作多種腫瘤藥物的活性組分。人體的皮膚是由表皮、真皮及皮下組織三部分組成。角質(zhì)形成細(xì)胞是表皮的一種角質(zhì)蛋白細(xì)胞，是構(gòu)成表皮的重要組成部分。正常情況下，人體表皮細(xì)胞有規(guī)律地進(jìn)行增殖、分化和脫落，維持著皮膚糖、蛋白質(zhì)、脂肪、水和電解質(zhì)的平衡，具有保護(hù)自身、調(diào)節(jié)體溫、排泄廢物和免疫調(diào)節(jié)等功能。正常人的皮膚看上去自然、平滑、滋潤(rùn)、有光澤、且富有彈性。但當(dāng)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖異常時(shí)，則會(huì)引發(fā)一些疾病。目前臨床上常見(jiàn)的多種皮膚病癥，如銀屑病、魚鱗病以及角質(zhì)形成細(xì)胞腫瘤等，都和角質(zhì)形成細(xì)胞的過(guò)度增殖有關(guān)。這類皮膚病的主要特征之一為角化度高。例如銀屑病，該病是一種常見(jiàn)的復(fù)發(fā)性炎癥性皮膚病，俗稱牛皮癬，皮損為對(duì)稱性泛發(fā)的上覆銀白鱗屑的斑丘疹、斑塊，與正常人的角質(zhì)形成細(xì)胞相t匕，銀屑病的角質(zhì)形成細(xì)胞增殖、分化、調(diào)節(jié)及代謝異常，表皮細(xì)胞過(guò)度增殖，表皮細(xì)胞核分裂速度及表皮細(xì)胞的更新較正常人明顯加快，表現(xiàn)為表皮增厚和有明顯的銀白色鱗屑，從而引起皮膚的免疫、分泌等多方面功能障礙，且該病的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，至今尚未完全闡明。這類皮膚病癥還表現(xiàn)出難于徹底根治和易復(fù)發(fā)的特點(diǎn)，嚴(yán)重影響著患者的生活和工作，對(duì)他們的身心健康更是造成嚴(yán)重的傷害。因此，亟需一種可抑制角質(zhì)形成細(xì)胞增殖，進(jìn)而減少鱗屑產(chǎn)生的藥物，以緩解或根治銀屑病、魚鱗病和角質(zhì)形成細(xì)胞腫瘤。但是目前關(guān)于丹參酮IIA在抑制角質(zhì)形成細(xì)胞增殖中的用途還未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種丹參酮IIA在制藥中的新用
途。 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是
丹參酮IIA在制備抑制角質(zhì)形成細(xì)胞過(guò)度增殖疾病藥中的應(yīng)用。所述細(xì)胞過(guò)度增殖疾病為銀屑?。?br> 所述細(xì)胞過(guò)度增殖疾病為魚鱗??；
所述細(xì)胞過(guò)度增殖疾病為角質(zhì)形成細(xì)胞腫瘤。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于
I、本發(fā)明發(fā)掘了丹參酮IIA在制藥上的新用途，開拓了一個(gè)新的應(yīng)用領(lǐng)域。2、丹參酮IIA可顯著抑制角質(zhì)形成細(xì)胞增殖，對(duì)由角質(zhì)形成細(xì)胞過(guò)度增殖引起的，或以角質(zhì)形成細(xì)胞過(guò)度增殖為特征的皮膚病癥，如銀屑病、魚鱗病和角質(zhì)形成細(xì)胞腫瘤，具有良好的治療效果。3、丹參酮IIA已經(jīng)在臨床的其他藥物中使用，證明其毒副作用極小，因此，對(duì)于應(yīng)用在治療角質(zhì)形成細(xì)胞過(guò)度增殖疾病，治療銀屑病、魚鱗病和角質(zhì)形成細(xì)胞腫瘤方面，可放心使用。4、丹參酮IIA物質(zhì)原料來(lái)源豐富、價(jià)格低廉、制備工藝簡(jiǎn)單，具有廣闊的產(chǎn)業(yè)化前景，適于廣泛推廣使用。


附圖I是丹參酮IIA對(duì)小鼠角質(zhì)形成細(xì)胞增殖的影響。附圖2是丹參酮IIA抑制小鼠角質(zhì)形成細(xì)胞集落形成圖。附圖3是丹參酮IIA處理的小鼠角質(zhì)形成細(xì)胞BrDU染色圖。附圖4是丹參酮IIA處理的小鼠角質(zhì)形成細(xì)胞臺(tái)酚藍(lán)染色圖。附圖5是丹參酮IIA誘導(dǎo)小鼠角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡調(diào)控圖。附圖6是Caspase-3抑制劑AC-DVED-CH0對(duì)丹參酮IIA處理的小鼠角質(zhì)形成細(xì)胞的影響。附圖7是丹參酮IIA誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡不通過(guò)凋亡誘導(dǎo)因子的核移位介導(dǎo)的分析圖。附圖8是丹參酮IIA對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞細(xì)胞周期的影響。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。實(shí)施例I
丹參酮IIA抑制質(zhì)形成細(xì)胞增殖試驗(yàn)
本實(shí)驗(yàn)所用丹參酮IIA購(gòu)自上海中國(guó)藥品生物制品鑒定所。取4mg丹參酮IIA溶于Iml 二甲基亞砜(購(gòu)于美國(guó)Sigma公司),配成濃度為4mg/ml的儲(chǔ)存液,4°C冰箱備用。臨用時(shí)，用Cnt-07培養(yǎng)液(購(gòu)于瑞士 CELLnTEC公司)配比稀釋，使其最終濃度分別為2. 5μ g/ml，
5.O μ g/ml, 10. 0 μ g/ml和20. 0 μ g/ml。所用小鼠角質(zhì)形成細(xì)胞是通過(guò)培養(yǎng)美國(guó)癌癥研究會(huì)小鼠原代角質(zhì)形成細(xì)胞制得。I、MTS/PMS法檢測(cè)丹參酮IIA對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖的影響
通過(guò)MTS/PMS法檢測(cè)丹參酮IIA對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖的抑制作用，結(jié)果顯示對(duì)于不同 濃度的丹參酮IIA藥物處理組，處理時(shí)間分別24h、48h和72h，丹參酮II A對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖都表現(xiàn)出抑制作用，且抑制作用具有時(shí)間和濃度依賴性。隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)和藥物濃度的增加，細(xì)胞抑制效果越明顯，丹參酮II A對(duì)小鼠角質(zhì)形成細(xì)胞的生長(zhǎng)具有量-效、時(shí)-效關(guān)系(見(jiàn)圖I)。計(jì)算得到丹參酮II A對(duì)小鼠角質(zhì)形成細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度IC50在24h、48h 和 72h 分別為 4. 33±1· 35，I. 89±0· 65，I. 14±0· 87 μ g/ml。2、細(xì)胞集落形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)丹參酮IIA對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖的影響
單個(gè)細(xì)胞在體外增殖6代以上，其后代所組成的細(xì)胞群體，稱為集落或克隆。每個(gè)克隆含有50個(gè)以上的細(xì)胞，大小在O. 3-1. Omm之間。集落形成率表示細(xì)胞獨(dú)立生存能力。為觀察丹參酮IIA對(duì)單個(gè)細(xì)胞增殖形成細(xì)胞集落能力的影響，我們采用細(xì)胞集落形成實(shí)驗(yàn)，連續(xù)觀察7d丹參酮IIA對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞集落形成(細(xì)胞數(shù)目> 50個(gè)/集落)的干預(yù)情況。研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)良好，細(xì)胞集落數(shù)量不斷增加，在第7d時(shí)，細(xì)胞幾乎長(zhǎng)滿整個(gè)培養(yǎng)皿，而不同濃度丹參酮IIA干預(yù)的各組均出現(xiàn)不同程度的細(xì)胞集落形成數(shù)量的降低。同樣發(fā)現(xiàn)，隨著濃度和時(shí)間的增加，角質(zhì)形成細(xì)胞集落形成的數(shù)量在不斷的減少，提示丹參酮IIA對(duì)細(xì)胞集落形成能力的抑制也存在時(shí)間和劑量的雙重影響。在2. 5 μ g/ml濃度下，前3d與對(duì)照組相比并沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，細(xì)胞集落形成較密集。而在5 μ g/ml與10 μ g/ml濃度，則顯著抑制了細(xì)胞集落的形成。特別是在10 μ g/ml濃度下，從種植細(xì)胞第Id開始，就已經(jīng)幾乎沒(méi)有觀察到細(xì)胞集落形成(見(jiàn)圖2)。3、5_溴脫氧尿嘧啶核苷(BrDU)摻合法檢測(cè)丹參酮IIA對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖的影響
BrDU染色的原理是在細(xì)胞周期的S期，和細(xì)胞一起孵育的BrdU能滲入DNA分子中，再結(jié)合BrdU抗體與滲入DNA的BrdU特異性結(jié)合，就能夠檢測(cè)到DNA復(fù)制活躍的細(xì)胞。因此，利用BrDU在特定時(shí)間內(nèi)摻入細(xì)胞的多少就可以反應(yīng)出細(xì)胞增殖的狀態(tài)。我們采用BrDU摻合法進(jìn)一步觀察丹參酮IIA對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖的影響。BrDU在對(duì)數(shù)增殖期4h內(nèi)摻合進(jìn)入細(xì)胞核的多少，反應(yīng)了細(xì)胞在該時(shí)期增殖的活躍程度。如圖3A、圖3B所示，對(duì)照組細(xì)胞增殖活躍，在BrDU干預(yù)4h內(nèi)，BrDU進(jìn)入到絕大多數(shù)的細(xì)胞核內(nèi)，提示對(duì)照組細(xì)胞增殖活躍。而采用丹參酮IIA干預(yù)后，BrDU進(jìn)入細(xì)胞核使得細(xì)胞呈現(xiàn)核表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目不斷降低，呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系。同時(shí)，免疫熒光及Western blot分析細(xì)胞增殖相關(guān)抗原PCNA的表達(dá)，顯示PCNA蛋白降低，進(jìn)一步佐證細(xì)胞增殖水平的降低(見(jiàn)圖3C)。4、臺(tái)酚藍(lán)染色觀察丹參酮IIA處理下的細(xì)胞存活率通常認(rèn)為細(xì)胞膜喪失完整性，細(xì)胞即可被認(rèn)為已經(jīng)死亡。臺(tái)盼藍(lán)是檢測(cè)細(xì)胞膜完整性最常用的生物染色試劑。健康的正常細(xì)胞能夠排斥臺(tái)盼藍(lán)，而死亡的細(xì)胞，膜的完整性喪失，通透性增加，細(xì)胞可被臺(tái)盼藍(lán)染成藍(lán)色。依據(jù)此原理，細(xì)胞經(jīng)臺(tái)盼藍(lán)染色后，可通過(guò)顯微鏡，直接鏡下計(jì)數(shù)或拍照后計(jì)數(shù)，實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞存活率比較精確的定量分析。我們采用臺(tái)酚蘭染色觀察丹參酮IIA對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞細(xì)胞的影響，結(jié)果顯示隨著丹參酮IIA濃度的增加，臺(tái)酚蘭陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目亦增加，表明較多細(xì)胞出現(xiàn)死亡。而空白對(duì)照組臺(tái)酚蘭染色陽(yáng)性率低，大部分細(xì)胞為正常存活細(xì)胞(見(jiàn)圖4)。由此可見(jiàn)，丹參酮IIA可誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞的死亡。5、丹參酮IIA抑制角質(zhì)形成細(xì)胞增殖的機(jī)理研究
5.I丹參酮IIA誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡伴隨Caspase-3蛋白的激活為研究丹參酮IIA誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的可能機(jī)制，我們采用Western blot檢測(cè)了凋亡相關(guān)指標(biāo)DNA修復(fù)酶PARP，Caspase-3蛋白的變化，通過(guò)免疫組化檢測(cè)Caspase-3特異性 抑制劑干預(yù)下的Caspase-3的變化，并通過(guò)ELISA方法檢測(cè)了干預(yù)上清液中Caspase-3,Caspase-8的活性。結(jié)果顯示，不同濃度的丹參酮IIA處理細(xì)胞后，出現(xiàn)PARP和Caspase-3的活化，依賴丹參酮IIA濃度的增加而表達(dá)增強(qiáng)(見(jiàn)圖5A)。加入Cas印ase-3特異性抑制劑AC-DVED-CH0干預(yù)后，免疫組化檢測(cè)顯示，Caspase-3表達(dá)降低(見(jiàn)圖5B)。上清液ELISA檢測(cè)顯示，Caspase-3表達(dá)增強(qiáng),而Caspase-8活性沒(méi)有變化。5.2丹參酮IIA誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡依賴Caspase-3蛋白的表達(dá)
前述免疫組化結(jié)果提示Caspase-3在丹參酮IIA誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡活動(dòng)中占有關(guān)鍵作用。為進(jìn)一步明確該誘導(dǎo)的凋亡效應(yīng)是否屬于Caspase-3依賴效應(yīng),我們采用Caspase-3抑制劑Ac-DEVD-CHO干預(yù)后行流式細(xì)胞檢測(cè)凋亡數(shù)量的定量分析，結(jié)果如圖6A所示，在10 μ /ml條件下，丹參酮IIA誘導(dǎo)角質(zhì)形成凋亡數(shù)目為21. 2%，而采用40 μ M Ac-DEVD-CHO干預(yù)后，凋亡百分比降低至4. 2%(見(jiàn)圖6B)，兩者具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Caspase-3特異性抑制劑能明顯降低丹參酮IIA誘導(dǎo)的凋亡百分比，提示其誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡是通過(guò)Caspase-3信號(hào)途徑發(fā)揮作用。5.3丹參酮IIA誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡不通過(guò)凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)的核移位介導(dǎo)
采用熒光免疫檢測(cè)AIF的核移位與凋亡的關(guān)系(見(jiàn)圖7A)。其中紅色熒光為AIF，主要分布在胞漿，藍(lán)色熒光為熒光染料DAPI，染細(xì)胞核。若發(fā)生AIF核移位現(xiàn)象，則兩者的重疊圖上應(yīng)表現(xiàn)為粉紅色。在對(duì)照組，AIF全部定位在線粒體，呈環(huán)形分布，胞漿結(jié)構(gòu)清晰。丹參酮IIA不同治療濃度下，AIF并沒(méi)有出現(xiàn)明顯核移位。如圖7B，Western blot顯示，細(xì)胞核中的AIF也沒(méi)有隨著干預(yù)藥物濃度和時(shí)間的增加而明顯增加。提示丹參酮IIA誘導(dǎo)的角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡，并不依賴于凋亡誘導(dǎo)因子的核移位來(lái)介導(dǎo)。5.4丹參酮IIA誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞細(xì)胞周期的阻滯
細(xì)胞增殖另一個(gè)重要的因素即是細(xì)胞周期的改變。為觀察丹參酮IIA對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞細(xì)胞周期的影響，我們采用Krishan stain染色結(jié)合流式細(xì)胞儀進(jìn)行了檢測(cè)。研究發(fā)現(xiàn)，在10 μ g/ml干預(yù)濃度下，G0/G1期細(xì)胞百分比在24h，48h和72h分別為55. 5%, 51. 9% and39. 2%。而對(duì)照組則高達(dá)69. 20% (見(jiàn)圖8A)。連續(xù)多次實(shí)驗(yàn)顯示，隨著丹參酮IIA濃度的增力口，S期，G2/M期分布的百分比數(shù)目亦不斷增加(見(jiàn)圖SB)。同時(shí)，Western blot檢測(cè)S期周期相關(guān)蛋白發(fā)現(xiàn)，PCDK2和CyclinA蛋白表達(dá)下降(見(jiàn)圖SC)。提示細(xì)胞周期阻滯伴隨相關(guān)蛋白水平的降低。綜上所述，丹參酮IIA可抑制角質(zhì)形成細(xì)胞增殖，其作用機(jī)制與誘導(dǎo)細(xì)胞S期阻滯、激活Caspase凋亡信號(hào)通路相關(guān)，且不依賴AIF的核轉(zhuǎn)移。實(shí)施例2
稱取30mg丹參酮IIA粉末(購(gòu)自上海中國(guó)藥品生物制品鑒定所)，加入IOOOml 70%的乙醇溶液，攪拌，充分溶解混勻后，分裝到無(wú)菌藥瓶中密封，消毒制成產(chǎn)品，陰涼干燥處保存。療效試驗(yàn)I :針對(duì)60例病齡3年以上，病情相似的銀屑病患者，設(shè)治療組20例，擦涂本實(shí)施例的丹參酮IIA溶液；對(duì)照組20例，擦涂西藏紅花露(購(gòu)于西藏紅花路藏秘堂)；空白組20例，擦涂生理鹽水。三組的治療方法均為用消毒棉簽蘸取涂抹物,直接涂到銀屑病皮損處，早晚各一次，一個(gè)療程30天，連續(xù)使用6個(gè)療程。觀察每位患者的皮損角化程 度和皮損炎癥程度，計(jì)算每組患者上述兩個(gè)指標(biāo)的平均值，結(jié)果對(duì)比見(jiàn)表I。表I
I治療組I對(duì)照組I空gir 皮損角化程度(％) 10% 38% 57%
皮損炎癥程度(％) |21% 130% 146%
從表I中可以看出，本實(shí)施例的丹參酮IIA溶液對(duì)銀屑病治療效果明顯，尤其是針對(duì)皮
膚角化的病征，效果顯著。療效試驗(yàn)2 :針對(duì)45例病齡2年以上，病情相似的魚鱗病患者，設(shè)治療組15例，擦涂本實(shí)施例的丹參酮IIA溶液；對(duì)照組15例，擦涂美國(guó)癬清(購(gòu)于西安榮源生物藥業(yè)有限公司)；空白組15例，擦涂生理鹽水。三組的治療方法均為用消毒棉簽蘸取涂抹物，直接涂到魚鱗病病灶處，每日2次，一個(gè)療程30天，連續(xù)使用4個(gè)療程。觀察每位患者的皮損角化程度，結(jié)果表明，治療組有9例痊愈，4例皮膚角化程度減輕75%，2例皮膚角化程度減輕50% ;對(duì)照組有4例痊愈，7例皮膚角化程度減輕60%，4例皮膚角化程度減輕30% ;空白組3例皮膚角化程度減輕25%，7例無(wú)明顯變化，剩余5例角化程度加重。說(shuō)明本實(shí)施例的丹參酮IIA溶液對(duì)治療魚鱗病效果比較明顯，證實(shí)了丹參酮IIA能有效抑制角質(zhì)形成細(xì)胞增殖。
以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和補(bǔ)充，這些改進(jìn)和補(bǔ)充也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.丹參酮IIA在制備抑制角質(zhì)形成細(xì)胞過(guò)度增殖疾病藥中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的細(xì)胞過(guò)度增殖疾病為銀屑病。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的細(xì)胞過(guò)度增殖疾病為魚鱗病。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的細(xì)胞過(guò)度增殖疾病為角質(zhì)形成細(xì)胞腫瘤。
全文摘要
本發(fā)明涉及丹參酮IIA在制備抑制角質(zhì)形成細(xì)胞過(guò)度增殖疾病藥中的應(yīng)用，所述角質(zhì)形成細(xì)胞過(guò)度增殖疾病包括銀屑病、魚鱗病和角質(zhì)形成細(xì)胞腫瘤。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于發(fā)掘了丹參酮IIA在制藥上的新用途，開拓了一個(gè)新的應(yīng)用領(lǐng)域；對(duì)由角質(zhì)形成細(xì)胞過(guò)度增殖引起的，或以角質(zhì)形成細(xì)胞過(guò)度增殖為特征的皮膚病癥，如銀屑病、魚鱗病和角質(zhì)形成細(xì)胞腫瘤，具有良好的治療效果；丹參酮IIA已經(jīng)在臨床的其他藥物中使用，證明其毒副作用極小，可放心使用；物質(zhì)原料來(lái)源豐富、價(jià)格低廉、制備工藝簡(jiǎn)單，具有廣闊的產(chǎn)業(yè)化前景，適于廣泛推廣使用。
文檔編號(hào)A61P17/00GK102949399SQ20111024215
公開日2013年3月6日 申請(qǐng)日期2011年8月23日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月23日
發(fā)明者李福倫, 李斌, 李欣, 王一飛, 范斌, 徐蓉, 陳潔 申請(qǐng)人:上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽(yáng)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院