專利名稱：減輕內(nèi)毒素的效應(yīng)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于減輕病原體感染導(dǎo)致的腸毒素的效應(yīng)的營養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
人和動物的胃腸道處于產(chǎn)生多種病癥的危險之中，所述病癥包括衰老、病毒、細菌和/或它們的毒素引起的病癥，或者其它物理或化學物質(zhì)濫用引起的病癥。有幾種因素或者療法能夠減輕多種胃腸道病癥的癥狀。其中土著菌群(稱作小型生物群)在調(diào)節(jié)腸道環(huán)境方面發(fā)揮著重要的作用。這些定居在腸道的非病原性微生物(稱作益生菌)與從所述微生物釋放或作為食物成分攝取的益生分子一起提供了預(yù)防或治療胃腸病癥(包括艱難梭菌(C. difficile)感染)的可能的方法。已經(jīng)證實，人的腸道細菌調(diào)節(jié)腸道中艱難梭菌毒素A的產(chǎn)生，并且比起常規(guī)小鼠，毒素A更容易結(jié)合從無菌小鼠分離的腸膜，這表明土著微生物在艱難梭菌的發(fā)病中起重要作用。用于檢測由艱難梭菌引起的大腸炎和腹瀉的營養(yǎng)方法的臨床研究表明乳桿菌 (Lactobacillus GG)改善了入院的成人和嬰兒的大腸炎的癥狀。類似地，非病原性酵母 (Saccharomyces boulardii)也在防止或治療成人和嬰兒中艱難梭菌引起的大腸炎和腹瀉中起積極作用。另外，RU 2168915公開了一種肉制品作為針對兒童和虛弱人們中胃腸病癥的治療性或預(yù)防性食品的用途，該肉制品包含預(yù)定比例的牛肉、豬肉、漂白的牛肝、南瓜，和奶油。所有以上的觀察都表明，針對艱難梭菌感染的營養(yǎng)介入的領(lǐng)域仍然是開放的。發(fā)明概述本發(fā)明是涉及包含蛋白胨和/或肉膏的口服組合物用于治療病原體感染導(dǎo)致的腸毒素效應(yīng)的用途。此類效應(yīng)包括由于肌動蛋白絲分解引起的腸上皮完整性的破壞和所引起的緊密連接的破壞，以及毒素誘導(dǎo)的腸液分泌導(dǎo)致的腹瀉，和環(huán)加氧酶誘導(dǎo)作用介導(dǎo)的其它過程。發(fā)明詳述在本發(fā)明中，“口服組合物”旨在表示任何可攝取的組合物，并且可以是營養(yǎng)組合物、營養(yǎng)補充物，或者藥物。例如，它也可以是藥物治療的佐劑。該口服組合物旨在應(yīng)用于遭受病原體感染產(chǎn)生的腸毒素效應(yīng)的人，包括嬰兒或早產(chǎn)嬰兒到老年人。它也可以用于遭受病原體感染產(chǎn)生的腸毒素效應(yīng)的動物，如貓、狗、魚、兔、鼠、倉鼠等等，以及更加一般地人類飼養(yǎng)的任意動物，如馬、奶牛、家禽、綿羊等。術(shù)語“肉膏”旨在包括任何肉類的提取物，例如牛肉、豬肉、羊肉、雞肉和/或火雞肉等等的提取物。它也可以來自上面提到的肉類的混合物。無論如何，它都將至少提供氮、氨基酸和碳。用于本發(fā)明的適宜的、通過商業(yè)途徑可獲得的肉膏的實例是由Becton Dickinson and Company i^l^StJ BD Bacto Beef Extract0術(shù)語“酵母提取物”可以包括自溶酵母的水溶性部分，并優(yōu)選地含有維生素B復(fù)合物。它還覆蓋包含自溶的面包酵母的可溶性和不溶性部分，并且在這種情況下，它優(yōu)選還包含核黃素和泛酸。然而，在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，“酵母提取物”并包含該微生物并且不包含該微生物產(chǎn)生的酶。酵母提取物可能是釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) 提取物。用于本發(fā)明的適宜的、通過商業(yè)途徑可獲得的酵母提取物的實例是Becton Dickinsonand Company 公司提供的 BD Bacto Yeast Extract。術(shù)語“蛋白胨”意思是蛋白質(zhì)物質(zhì)的部分酶促或酸水解產(chǎn)物的任何可溶性混合物。蛋白質(zhì)起始材料的選擇并不關(guān)鍵，但是優(yōu)選酪蛋白、乳清蛋白和肉類蛋白質(zhì)。優(yōu)選地， 蛋白胨的分子量小于3kDa。用于本發(fā)明的適宜的、通過商業(yè)途徑可獲得的蛋白胨的實例是 Becton Dickinson and Company 公司提供白勺 BD Bacto Peptone0腸毒素是對腸粘膜起作用的細菌外毒素。它們可以由致病性細菌在腸內(nèi)產(chǎn)生。細菌腸毒素是有效的粘膜免疫原，其激活粘膜和系統(tǒng)免疫反應(yīng)，從而導(dǎo)致多種疾病，包括食物中毒、普通腹瀉、大腸炎、慢性炎癥和痢疾。腸毒素也導(dǎo)致嚴重的粘膜潰瘍、出血性炎性滲出或者血性腹瀉。毒素誘導(dǎo)的疾病通常伴有腹部絞痛和直腸痛。腸毒素為液體分泌和腸炎的主要刺激物。它們在上皮細胞表面的結(jié)合導(dǎo)致絲狀肌動蛋白的解聚和緊密連接滲透性的增加，以及激活胞內(nèi)途徑并隨后合成和釋放液體分泌活化劑。毒素還誘導(dǎo)嚴重的炎癥，通常特征為通過感覺腸神經(jīng)的激活以及感覺神經(jīng)肽的釋放在粘膜內(nèi)嗜中性粒細胞的遷移以及腸細胞壞死，并伴有細胞因子的釋放和上皮細胞破壞。致病性細菌可以是共生的微生物系統(tǒng)的一部分，即它們可以無害地存在于腸道， 除非或者直到這個微生物系統(tǒng)的平衡遭到擾亂，例如，在用抗生素，尤其廣譜抗生素治療期間就可以發(fā)生所述擾亂。在此類情況下，這些“機會病原體”可以迅速生長，占據(jù)腸道微生物系統(tǒng)并產(chǎn)生引起腸炎的毒素。此類細菌的例子包括艱難梭菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens)，并且本發(fā)明的組合物特別適于治療此類細菌產(chǎn)生的毒素效應(yīng)。應(yīng)當理解本發(fā)明尤其適用于治療醫(yī)院感染。其它產(chǎn)生腸毒素的細菌的例子包括大腸桿菌(E. coli)、杜氏利什曼原蟲 (Leishmania donovani)、霍舌匕弧菌(Vibrio cholera)、鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella typhimurium)、志賀氏菌(Shingellae)、嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、或者產(chǎn)腸毒素白勺月危弱擬木干菌(Bacteroides fragilis) (ETBF)。艱難梭菌感染是入院患者大腸炎和腹瀉的主要原因，由于抗生素攝入，這些患者的腸道小型生物群改變。艱難梭菌通過釋放兩種毒素毒素A和毒素B而引起腸炎。兩種毒素在人體都有強烈的細胞毒性作用，但是毒素A是液體分泌(從而導(dǎo)致腹瀉)和腸炎癥的主要刺激物。毒素A結(jié)合于上皮細胞表面，并通過有被小窩內(nèi)化到細胞質(zhì)。內(nèi)化導(dǎo)致肌動蛋白張力絲的解聚、肌動蛋白結(jié)合的黏著斑的破壞、緊密連接的打開、細胞的脫離和液體分泌增加。這些效應(yīng)已經(jīng)在體外在培養(yǎng)的人上皮細胞系(例如T84結(jié)腸細胞系)中得到證明，其中在單細胞層上加入毒素A減小了跨上皮阻力并增加了單細胞層的通透性。艱難梭菌腸毒素在體內(nèi)顯示出誘導(dǎo)嚴重炎癥，其特征是當豚鼠、兔或大鼠回腸暴露于毒素A時，粘膜中嗜中性粒細胞遷移和腸細胞。導(dǎo)致該急性炎癥反應(yīng)的機制似乎是感覺腸神經(jīng)的激活和感覺神經(jīng)肽的釋放。最近的研究還提出毒素A上調(diào)腸內(nèi)C0X-2的表達。胃腸病原體引起的損傷的最常見的后果之一是腹瀉。腹瀉是由致病性細菌(包括產(chǎn)生腸毒素的細菌)、寄生蟲或病毒可以引起的腸道內(nèi)上皮細胞分泌的增加造成的。C0X-2是一種催化由花生四烯酸合成前列腺素的酶。C0X-2的其它已知的催化底物包括二高-Y-亞麻酸OO 3n 6)和二十碳五烯酸(EPA，20 5n_3)，分別產(chǎn)生PGE1 和PGE3。已經(jīng)克隆了人C0X-2基因，并且已經(jīng)描述了它的基因表達對不同元件，如cAMP、 NF- κ B 禾口 TGF- β、IL-I 或 TNF- α 的應(yīng)答。C0X-2與多種炎癥相關(guān)，所述炎癥包括過敏反應(yīng)和腸炎癥。在其中涉及C0X-2活性的腸炎癥腸病癥中，有胃炎、炎性腸病、過敏性腸綜合征或腸癌。優(yōu)選地，蛋白胨以口服組合物的形式給藥，所述組合物按體積計包含0.3%到7% 蛋白胨。蛋白胨的合適來源包括乳清蛋白和充分水解的乳清蛋白，雖然也可以使用水解程度在15%到20%的乳清蛋白，但優(yōu)選平均肽大小不超過5個氨基酸的乳清蛋白。肉類蛋白質(zhì)是蛋白胨的備選來源，并且在肉類蛋白質(zhì)中優(yōu)選牛肉蛋白質(zhì)?？梢约尤肴飧?，優(yōu)選按體積計0.3%到7.0%的量。在優(yōu)選的實施方案中，口服組合物包含(按體積計肉膏和
蛋白胨。另外，該組合物可以包括酵母提取物，優(yōu)選按體積計0. 01%到5%的濃度。本發(fā)明的口服組合物可以采取多種不同的食品形式。例如，當目標群體是嬰兒群體，它可以是嬰兒配方粉劑。它也可以是脫水的食品，例如湯。它還可以是腸組合物或者補充配方。當遭受腸病癥的個體是寵物時，該口服組合物可以是濕的或干的寵物食品。當根據(jù)本發(fā)明的組合物摻入到藥物中時，它可以與任何合適的賦形劑摻和成任意藥用形式。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，對于遭受病原體感染(如通過腸道病癥，腸上皮完整性的破壞和腹瀉證明)的個體攝取肉膏同時攝取或不攝取蛋白胨，或者僅攝取蛋白胨時，與那些患有同樣疾病但是飲食中沒有添加肉膏或者蛋白胨的個體相比，有正?；囊后w分泌，較小的細胞結(jié)構(gòu)破壞，和減輕的炎癥。在本發(fā)明的構(gòu)架中，肉膏和/或蛋白胨也可以與酵母提取物結(jié)合從而對于遭受腸紊亂、損傷和應(yīng)激的患者的腸完整性取得提高的效果。
實施例下面的實施例用來闡明本發(fā)明范圍內(nèi)的一些產(chǎn)品和生產(chǎn)這些產(chǎn)品的方法。不認為它們以任何方式限制本發(fā)明。可以對本發(fā)明進行修改和修飾。也就是說，技術(shù)人員將認識到這些實施例中許多變通方案用以覆蓋寬范圍的配方、成分、加工和混合物用以對于多種應(yīng)用合理地調(diào)節(jié)本發(fā)明化合物的天然發(fā)生的水平。實施例1-組合物對緊密連接和肌動蛋白絲的作用材料和方法人結(jié)腸細胞系T84(ATCC，CCL-M8)在DMEM F12 1 1的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，該培養(yǎng)基補充有20% FBS (胎牛血清)，2mM谷氨酰胺以及100U/ml青霉素-鏈霉素。人原代皮膚成纖維細胞在DMEM中培養(yǎng)，該培養(yǎng)基補充有10% FBS以及100U/ml青霉素-鏈霉素。T84單細胞層以0. 5X IO6個細胞/內(nèi)眼板接種于六孔內(nèi)眼板內(nèi)并培養(yǎng)3周。測量 TEER(跨上皮電阻)的基線值，然后將培養(yǎng)基換成含有20% de Man-Rogosa-Sharpe溶液的生長培養(yǎng)基(在PBS中含有1 %牛肉膏，1 %肉蛋白胨和0. 5 %酵母提取物的溶液，以后將其稱為“MRS”)。37 °C 1小時后，在單細胞層的頂面加入艱難梭菌毒素A，其終濃度為IOOng/ml，接著在37°C下1、2、4、6和對小時后測量TEER。對照單細胞層只暴露于培養(yǎng)基。對于每一種情況使用一式三份的內(nèi)眼板。在每個時間點，收集Iml頂面和Iml底外側(cè)培養(yǎng)基，并根據(jù)廠家說明書利用Cytotoxicity Detection Kit測量LDH釋放來評價細胞生活力。將T84細胞或人原代成纖維細胞O X IO5/室)接種在4室載玻片上，按照前述方法培養(yǎng)，與20%的MRS溶液孵育1小時后加入終濃度為500ng/ml的毒素A。6小時后，用 PBS洗滌細胞，用3. 7%的多聚甲醛固定，用PBS洗滌兩次，在-20°C用丙酮滲透5分鐘，以 PBS-I% BSA(牛血清白蛋白)處理用來降低非特異標記。在用200U/ml的羅丹明標記的毒蕈肽標記細胞后，通過熒光顯微術(shù)評估肌動蛋白解聚和細胞變圓。結(jié)果毒素A影響上皮細胞的緊密連接，該作用通過上皮單細胞層的跨上皮電阻(TEER) 的降低來測量。為了評估MRS是否可以中和毒素A的毒性，在所述組合物存在或不存在的情況下，將T84單細胞層暴露于毒素A，并測量TEER。向T84單細胞層加入lOOng/ml毒素A 并孵育6小時后導(dǎo)致TEER減小到TEER對照值的1/3 (309 士8vs. 985 士49 Ω cm2)。加入20% 的MRS溶液以及毒素A防止了 TEER減小(1403士95vs. 309士8 Ω cm2)，但是并不改變T84細胞的基線TEER值(1217 士 277 Ω Cm2vs. 985 士49 Ω cm2)。沒有觀察到細胞生活力的變化，表明毒素A在6小時期限內(nèi)沒有誘導(dǎo)細胞死亡。以上結(jié)果表明蛋白胨、肉膏和酵母提取物的混合物能夠中和毒素A并保護T84單細胞層免于毒素A誘導(dǎo)的TEER減小。為了確定MRS針對毒素A誘導(dǎo)的TEER減小的保護作用是否與導(dǎo)致細胞變圓的細胞骨架改變有關(guān)，單獨用毒素A或者聯(lián)合20 %的MRS溶液處理T84細胞，并通過免疫細胞化學分析細胞骨架肌動蛋白。加入500ng/ml毒素A誘導(dǎo)T84細胞變圓，其通過單細胞層的蜂窩外觀可以證明，該外觀是由于肌動蛋白解聚和包裝。組合加入20%的MRS溶液和毒素A 部分地防止了由毒素A引起的肌動蛋白解聚和隨后的細胞變圓，但是單獨加入毒素A時不影響細胞的細胞骨架。由于T84單細胞層的空間結(jié)構(gòu)，這些效應(yīng)不容易被觀察到。為了更容易解釋，使用原代人皮膚成纖維細胞重復(fù)實驗，該細胞形成平面單細胞層。在毒素A存在下6小時后，所有成纖維細胞都呈現(xiàn)出圓的外觀，表明細胞骨架的完全破壞。組合加入20% 的MRS溶液和毒素A部分防止了肌動蛋白解聚和細胞變圓。用毒素A和20%組合物處理過的成纖維細胞的形狀與對照成纖維細胞或者僅用所述組合處理的成纖維細胞的形狀相當?shù)遣幌嗤Ｒ虼薓RS可以中和毒素A，部分防止由于肌動蛋白解聚引起的細胞骨架改變及隨后的細胞變圓。用下列溶液代替20% MRS溶液重復(fù)這些實驗牛肉胨溶液的20%溶液牛肉膏溶液的20%溶液0.5%酵母提取物溶液的20%溶液含有充分水解的乳清肽(平均肽大小小于約5個氨基酸)的1 %溶液含有充分水解的乳清肽(平均肽大小不大于5個氨基酸)的10%溶液得到與20% MRS溶液相似的結(jié)果。討論這里觀察到的保護作用的機制并沒有清楚地闡明并且可能是不同的。毒素A誘導(dǎo)肌動蛋白絲聚合，導(dǎo)致細胞骨架肌動蛋白解聚。肌動蛋白破壞是體外觀察到的細胞變圓以及緊密連接通透性增加的原因。毒素A對肌動蛋白的作用是由于它對他0家族蛋白質(zhì)的葡糖轉(zhuǎn)移酶的活性。毒素A能夠酶促轉(zhuǎn)移UDP葡萄糖的葡萄糖殘基至Mio、Rac和Cdc_42的蘇氨酸37，導(dǎo)致肌動蛋白張力絲解聚、肌動蛋白結(jié)合的黏著斑的破壞、緊密連接的開放、細胞脫離以及增加的液體分泌。這些作用已經(jīng)在體外用T84細胞得到證明，其中在單細胞層上加入毒素A減小了跨上皮阻力并增加了單細胞層的通透性，這是由于上皮細胞中他0蛋白質(zhì)的修飾。因此我們認為蛋白胨、酵母提取物和牛肉膏干擾了 Mio蛋白質(zhì)的信號通路，從而抑制了毒素A的作用。不希望被理論束縛，該干擾可以在葡萄糖殘基轉(zhuǎn)移至Mio蛋白質(zhì)的上游或下游。實施例2-組合物對產(chǎn)腸毒素的胃腸病原體引起的損傷的作用材料和方法將六周齡的雄性小鼠無限制地用60mg/L慶大霉素、250mg/L萬古霉素、300mg/L阿莫西林和10mg/L兩性霉素處理一周以便消滅腸道小型生物群。將這些小鼠分成3組1) 對照組；2)無限制地接受飲用水中20% MRS溶液一周的實驗組；3)用管飼法每兩天給予 500 μ 1組合物兩次的實驗組。在處理結(jié)束后，用30mg/kg體重的戊巴比妥鈉將動物麻醉并放在溫暖的毯子(37°C )上，整個手術(shù)持續(xù)時間期間都在0.8-3%的異氟醚(isofluoran) 麻醉下進行。通過正中線切口開腹，暴露遠端空腸。將兩段5厘米長的空腸段用手術(shù)線進行兩端雙結(jié)扎，從而形成間隔2cm的兩個腸袢。在其中一個內(nèi)注射600 μ 1 PBS作為對照， 另一個注射600 μ 1含有20 μ g毒素A的PBS。然后，將腸袢返回腹腔，縫合切口。讓小鼠恢復(fù)并對它們連續(xù)追蹤。4小時后，安樂處死動物，分離腸袢，并記錄它們的重量與長度的比率 (mg/cm)，用來評估液體分泌。接著用冰預(yù)冷的PBS洗滌腸袢兩次，浸入RNAlaterTM中，在液氮中迅速冷凍后保存于-80°C。結(jié)果艱難梭狀芽孢桿菌感染可導(dǎo)致腹瀉和大腸炎，多數(shù)發(fā)生于醫(yī)院和家中的老年人患者，他們因服用抗生素而導(dǎo)致腸道小型生物群改變。為了評估本發(fā)明的組合物和其組分是否可以在體內(nèi)中和毒素A的效應(yīng)，使用了小鼠模型。為了模擬在人體引發(fā)艱難梭狀芽孢桿菌感染的條件，將小鼠用抗生素處理一周，目的是改變它們的腸道小型生物群。在抗生素處理結(jié)束后1天，對一組小鼠無限制地給予20%的MRS溶液一周。在該期限結(jié)束時，形成腸袢并注射PBS或20 μ g毒素A。4小時的孵育后，對照小鼠的腸袢當注射毒素A 時與注射PBS的腸袢相比顯示增加的液體分泌(121. 9士31. 7vs. 64. 6士 13. 5mg/cm)。相比，在接受MRS—周的小鼠中，注射毒素A或PBS的腸袢中沒有觀察到液體分泌的差異 (73. 6士8. 3vs. 66. 8士 10. 8mg/cm)。當用管飼法對小鼠施用2劑500 μ 1的20% MRS溶液時，得到相似的結(jié)果。這些結(jié)果表明，用蛋白胨、肉膏和酵母提取物處理可以防止毒素A在表現(xiàn)出腸道小型生物群受損的受試者中的不利效應(yīng)。為了確定該組合物是否通過直接失活毒素A來發(fā)揮其保護作用，將20% MRS溶液或作為對照的PBS與毒素A混合1小時后將混合物注射到用抗生素處理一周的小鼠的腸袢中。對照(PBQ與MRS注射的腸袢之間在毒素A誘導(dǎo)的液體分泌水平上沒有顯著差異。此結(jié)果表明，所述組合物不是通過直接結(jié)合和失活毒素A來中和毒素A的作用，所述直接結(jié)合和失活可以導(dǎo)致毒素切割或者毒素結(jié)合表位的掩蔽。討論
MRS組合物保護小鼠免于毒素A引起的腸液分泌。雖然不希望被理論束縛，但是我們相信蛋白胨、牛肉膏和酵母提取物的保護作用并不是因為切割毒素A的酶活性，有以下兩個主要原因1)所用的溶液總是高壓滅菌的，它將導(dǎo)致溶液中含有的任何酶(例如蛋白酶)的失活和2、在注射入小鼠的腸袢前與毒素A混合并孵育的該組合物不能抑制腸液分泌。因此，我們相信蛋白胨、酵母提取物和牛肉膏的保護活性是因為該溶液存在游離分子 (例如氨基酸或肽)，這些分子可以結(jié)合腸上皮細胞上的毒素A受體并防止毒素A的結(jié)合和激活相關(guān)的信號通路。 實施例3-組合物對C0X-2表達的影響材料和方法用實施例2中描述的相同方法。從小鼠腸袢提取RNA，并通過RT-PCR 評價 C0X-2mRNA 表達。用 200U Supercript II 酶逆轉(zhuǎn)錄總 RNA (1 μ g)。用 5，-CACAGTACACTACATCCTG ACC-3，作為正義引物，5，-TCCTCGCTTCTGATTCTGTCTTG-3，作為反義引物，擴增小鼠C0X-2的400bp片段。用5，-ATGAGGTAGTCTGTCAGGT-3，作為正義引物， 5’ -ATGGATGACGATATCGCT-3’作為反義引物從相同的RT混合物擴增β -肌動蛋白的700bp 片段作為內(nèi)部對照。為了排除DNA污染，直接對RNA樣品進行PCR。將PCR產(chǎn)物加入瓊脂糖凝膠，照相，相片用于帶強度的光密度定量。對內(nèi)部對照肌動蛋白的表達進行歸一化確定C0X-2和對應(yīng)的β -肌動蛋白mRNA信號的比值，并相對于“未處理樣品”(給予水并注射PBQ的比值表達，對未處理樣品分配分值1。結(jié)果已知C0X-2參與毒素A介導(dǎo)的液體分泌，為了確定C0X-2是否也參與組合物的保護作用，通過RT-PCR評估C0X-2mRNA表達。由于不同的處理導(dǎo)致C0X-2表達的改變相對于 β -肌動蛋白表示。在對照小鼠的腸袢內(nèi)注射20μ g毒素A誘導(dǎo)C0X-2mRNA表達增加3. 6倍。 用該組合物處理小鼠一周導(dǎo)致毒素A引起的C0X-2增加減小了一半。在蛋白胨或牛肉膏處理的情況下，毒素A誘導(dǎo)的腸C0X-2表達完全正常化到基礎(chǔ)水平，而在酵母提取物處理下， 毒素A誘導(dǎo)的腸C0X-2表達減小到1/2. 3。該組合物或其組分都不能顯著改變C0X-2mRNA 表達的基礎(chǔ)水平。當采用管飼法時，該組合物或它的組分也能抵消毒素A誘導(dǎo)的C0X-2mRNA 增加。討論毒素A結(jié)合至上皮細胞后，它表現(xiàn)為引起炎癥，包括嗜中性粒細胞遷移和腸細胞壞死以及絨毛的破壞。這些效應(yīng)是感覺腸神經(jīng)激活后感覺神經(jīng)肽(如物質(zhì)P和降鈣素基因相關(guān)肽)的釋放介導(dǎo)的。除了在NK-IR的腸上皮上表達外，SP的受體在感染艱難梭狀芽孢桿菌的動物和人中顯著增加。近期的研究還提出艱難梭狀芽孢桿菌的毒素A上調(diào)腸內(nèi)C0X-2 的表達。C0X-2是環(huán)加氧酶的可誘導(dǎo)的同種型，它介導(dǎo)前列腺素E2(PGE》(已知增加腸液分泌的物質(zhì))的合成，從而導(dǎo)致腹瀉。盡管不希望被理論束縛，但是我們相信蛋白胨、酵母提取物和牛肉膏抑制了這些途徑的任一種，從而中和毒素A。我們的結(jié)果表明，蛋白胨、酵母提取物或牛肉膏抑制了腸的毒素介導(dǎo)的C0X-2誘導(dǎo)。如果我們的溶液抑制或減少毒素與它的腸細胞受體的結(jié)合，那么所述抑制可以是由于毒素A介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的抑制，其中所述信號轉(zhuǎn)導(dǎo)導(dǎo)致C0X-2激活。
權(quán)利要求
1.蛋白胨或由蛋白胨與肉膏組成的組合作為活性成分在生產(chǎn)治療產(chǎn)腸毒素的病原體的感染效應(yīng)的口服組合物中的用途。
2.權(quán)利要求1的用途，其中所述效應(yīng)包括腸上皮完整性的破壞、腹瀉和其他C0X-2介導(dǎo)的效應(yīng)。
3.權(quán)利要求1或2的用途，其中所述病原體是艱難梭菌。
4.權(quán)利要求1或2的用途，其中所述口服組合物包含按體積計0.3%到7%的蛋白胨或肉膏。
5.權(quán)利要求1或2的用途，其中所述蛋白胨為乳清蛋白質(zhì)的水解產(chǎn)物，其平均肽大小不超過5個氨基酸。
6.權(quán)利要求1或2的用途，其中所述口服組合物包含蛋白胨和肉膏。
7.權(quán)利要求6的用途，其中所述口服組合物包含按體積計0.3%到7%的肉膏和按體積計0.3%到7%的蛋白胨。
8.權(quán)利要求7的用途，其中所述口服組合物還包含酵母提取物。
9.權(quán)利要求8的用途，其中所述口服組合物包含按體積計0.01%到5%的酵母提取物。
10.權(quán)利要求1或2的用途，其中所述口服組合物是藥物治療的佐劑。
11.權(quán)利要求1或2的用途，其中所述口服組合物是嬰兒配方。
全文摘要
本發(fā)明減輕內(nèi)毒素的效應(yīng)涉及包含單獨或者組合的肉膏和蛋白胨的口服組合物的用途，用于生產(chǎn)治療病原細菌(例如艱難梭菌)引起的感染效應(yīng)的口服組合物。此類效應(yīng)可以包括腸上皮完整性的破壞、腹瀉以及其他COX-2介導(dǎo)的效應(yīng)。
文檔編號A61K35/66GK102319417SQ20111020688
公開日2012年1月18日 申請日期2004年10月12日 優(yōu)先權(quán)日2003年10月13日
發(fā)明者G·福特保羅斯, G·貝爾貢澤利, I·科爾蒂希杜拉 申請人:雀巢技術(shù)公司