專利名稱：一種肝水解肽注射液藥物組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種治療肝炎、肝硬化疾病的藥物組合物，進一步講是提供了一種肝水解肽注射液藥物組合物，屬于生化藥學技術領域。
背景技術：
現(xiàn)有的“肝水解肽注射液”為我國處方類藥物，肌肉注射，用于慢性肝炎、肝硬化等疾病的輔助治療，是由健康牛、豬的肝臟經(jīng)酶水解提取制得的含有多肽類、核酸類、氨基酸類物質(zhì)的無菌水溶液。肝水解肽能促進蛋白質(zhì)合成，減少蛋白質(zhì)分解，促進正常肝細胞的增殖和再生，對四氯化碳誘導的肝細胞損傷有較好的保護作用，降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶，促進病變組織恢復；但該藥物對于肝炎、肝硬化疾病的治療效果還是非常有限，根據(jù)國家藥品標準中促肝細胞生長素活性測定法(MTT法)測定，肝水解肽注射液具有體外促進人肝細胞生長的活力，但活力刺激指數(shù)為僅為2. 9左右。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開一種肝水解肽注射液藥物組合物，克服了“肝水解肽注射液”的活力刺激指數(shù)較低，治療效果有限的缺欠。本發(fā)明還提供了該藥物的制備方法，工藝簡單，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明提供的肝水解肽注射液組合物，其特征在于是由以下原料制成的 濃度為9. 2^12. 2mg/ml的肝水解肽溶液1000ml、維生素C 2飛g、門冬氨酸鉀鎂注射液
20 30ml、聚乙二醇 200 10 20g。所述的門冬氨酸鉀鎂注射液為每Iml含L-門冬氨酸85mg 鉀11. ^ig :4. ^ig。本發(fā)明提供肝水解肽注射液組合物的制備方法，包括如下步驟
1、肝水解肽溶液
?；蜇i的肝臟，去除結締組織后，按0. 83、. 85 1的重量份數(shù)與注射用水混合后，用高速組織搗碎機勻漿，升溫至37 40°C，用HCL調(diào)PH值為2. (Γ2. 5，按3g/升加入胃蛋白酶，水解10 15小時，水解液用NaOH調(diào)節(jié)PH值為6. 2 6. 4，加Ig/升硅藻土，90°C，加熱30分鐘， 小型板框壓濾機壓濾，用0. 45 μ m微孔過濾膜過濾，8000分子量超濾膜超濾得肝水解肽溶液，測定多肽含量，加注射用水調(diào)整溶液多肽濃度為9. 2^12. 2mg/ml ；
2、在步驟1制備的肝水解肽溶液1000ml，加入2 5g的維生素C，加入2(T30ml的門冬氨酸鉀鎂注射液，加入l(T20g的聚乙二醇200，分裝后121°C高壓滅菌20分鐘，經(jīng)檢驗合格得肝水解肽注射液組合物成品藥物制劑。以下實驗表明本發(fā)明藥物體外促進人肝細胞生長活力大為提高
實驗方法促肝細胞生長素溶液國家藥品標準促肝細胞生長素活性測定法(MTT法， 標準編號WS-10001-(HD-0860)-2002)。試驗樣品 1. 1供試品原配方肝水解肽溶液，含多肽11 mg/ml。維生素C:用RPMI-1640培養(yǎng)液制成的每Iml中含維生素C 50 μ g的溶液。門冬氨酸鉀鎂用RPMI-1640培養(yǎng)液制成的每Iml中含L-門冬氨酸25. 5 μ g、鉀 3. 42μ g、鎂 1. ^μ g 的溶液。實施例1制劑； 實施例2制劑； 實施例3制劑； 實施例4制劑；
1.2對照品注射用促肝細胞生長素，規(guī)格為20mg
2.材料
2. 1儀器C02培養(yǎng)箱、水平臺式離心機、酶標儀、甩板機、細胞培養(yǎng)瓶、細胞培養(yǎng)板、一次性針頭濾器。
2.2試劑
氯化鈉、氯化鉀、無水磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、RPMI-1640 MEDIUM、碳酸氫鈉、鹽酸、 氫氧化鈉、小牛血清、胰蛋白酶、EDTA 二鈉、MTT、二甲基亞砜、人肝細胞株。方法
3.1試劑的配制
3. 1. 1 0. 01mol/L磷酸鹽緩沖液(ρΗ7· 3) 取氯化鈉8. 0g、氯化鉀0. 2g、磷酸氫二鈉 (Na2HP04) 1. 15g及磷酸二氫鉀0. 2g，加超純水IOOOml溶解后，高壓滅菌。3. 1. 2 RPMI-1640培養(yǎng)液取碳酸氫鈉2. OOg及RPMI-164010. Og加超純水約 800ml溶解后，用lmol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至6. 9，加超純水稀釋至1000ml，過濾除菌。3. 1. 3 10%小牛血清培養(yǎng)液取上述RPMI-1640培養(yǎng)液900ml，加已滅活的新生小牛血清100ml。0.25%胰蛋白酶-乙二胺四醋酸二鈉消化液取0.25g胰蛋白酶及0.02g 乙二胺四醋酸二鈉，加0. 0lmol/L磷酸鹽緩沖液100ml溶解后，用5. 6%碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH值至7. 2，過濾除菌，一 20°C保存。3. 1. 4噻唑藍(MTT)溶液取MTT50mg，加0. 01mol/L磷酸鹽緩沖液IOml溶解后， 過濾除菌(保存于冷處，使用不超過二周)
3. 2測定方法
3. 2. 1供試品溶液的制備取供試品適量，用RPMI-1640培養(yǎng)液制成每Iml中含多肽 100 μ g的溶液。3. 2. 2測定法用10%小牛血清培養(yǎng)液培養(yǎng)SMMC-7721細胞至對數(shù)增長期，用 0. 25%胰蛋白酶-乙二胺四醋酸二鈉消化液消化，加10%小牛血清培養(yǎng)液稀釋至每Iml中含O.5X10<4>) (5X10<4>)個細胞，將上述細胞懸液在96孔細胞培養(yǎng)板上鋪板，每孔 100 μ 1，其中留3孔加10%小牛血清培養(yǎng)液100 μ 1作為空白對照，置37°C，5%二氧化碳飽和水汽培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3、小時使其貼壁。供試品組，每孔加供試品溶液100 μ 1，每批供試品均做3孔，細胞對照組和空白對照組每孔分別加RPMI-1640培養(yǎng)液100 μ 1，置37°C，5 % 二氧化碳飽和水汽培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時，結束培養(yǎng)前4小時取出培養(yǎng)板，吸去培養(yǎng)液，每孔加入O.Olmol/L磷酸鹽緩沖液(pH7. 3)洗一次，然后再在每孔中加入上述磷酸鹽緩沖液 (pH7. 3) 100 μ 1和MTT溶液20 μ 1，繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)結束后，吸出培養(yǎng)液，每孔加入100 μ 1二甲基亞砜，搖勻，在酶標儀上以550nm的波長處分別測定其吸收度A值。
權利要求
1.一種肝水解肽注射液藥物組合物，其特征在于是由以下原料制成的濃度為9. 2^12. 2mg/ml的肝水解肽溶液1000ml、維生素C 2飛g、門冬氨酸鉀鎂注射液 20 30ml、聚乙二醇 200 10 20g ；所述的門冬氨酸鉀鎂注射液為每Iml含L-門冬氨酸85mg 鉀11. ^ig :4. ang。
2.權利要求1所述肝水解肽注射液組合物的制備方法，包括如下步驟1)肝水解肽溶液?；蜇i的肝臟，去除結締組織后，按0. 83、. 85 1的重量份數(shù)與注射用水混合后，用高速組織搗碎機勻漿，升溫至37 40°C，用HCL調(diào)PH值為2. (Γ2. 5，按3g/升加入胃蛋白酶，水解10 15小時，水解液用NaOH調(diào)節(jié)PH值為6. 2 6. 4，加Ig/升硅藻土，90°C，加熱30分鐘， 小型板框壓濾機壓濾，用0. 45 μ m微孔過濾膜過濾，8000分子量超濾膜超濾得肝水解肽溶液，測定多肽含量，加注射用水調(diào)整溶液多肽濃度為9. 2^12. 2mg/ml ；2)在步驟1制備的肝水解肽溶液IOOOml中加入2 5g的維生素C、加入2(T30ml的門冬氨酸鉀鎂注射液、加入l(T20g的聚乙二醇200，分裝后121°C高壓滅菌20分鐘，得肝水解肽注射液組合物成品藥物制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開一種肝水解肽注射液藥物組合物，由肝水解肽溶液、維生素C、門冬氨酸鉀鎂注射液、聚乙二醇200制成，克服了“肝水解肽注射液”的活力刺激指數(shù)較低，治療效果有限的缺欠。本發(fā)明還提供了該藥物的制備方法，工藝簡單，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號A61K31/198GK102228676SQ20111018976
公開日2011年11月2日 申請日期2011年7月7日 優(yōu)先權日2011年7月7日
發(fā)明者王巍 申請人:白求恩醫(yī)科大學制藥廠