專(zhuān)利名稱：黃荊子提取物及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及是黃荊子提取物及其在預(yù)防或治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物或食品中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是當(dāng)前危害人類(lèi)健康的最重要疾病之一，被稱為“不死的癌癥”。RA是一種以多關(guān)節(jié)受累、滑膜炎癥、骨與軟骨破壞等為主要特征的慢性全身性自身免疫炎性疾病，其發(fā)病機(jī)理至今尚未完全闡明，普遍認(rèn)為與遺傳、感染和免疫調(diào)節(jié)等因素紊亂密切相關(guān)(Imboden JB. The immunopathogenesis of rheumatoid arthritis. Annu Rev Pathol Mech Dis 2009.4:417-434.)。我國(guó) RA 的患病率約 0. 3%-0. 4%，約有 400 萬(wàn)患者，病程5-10年致殘率為60%，晚期90%患者喪失社會(huì)勞動(dòng)力和生活自理能力，是成人勞動(dòng)力喪生的主要原因之一(Dai SM, Han XH，Zhao DB, Shi YQ, Liu Y, Meng JM. Prevalence of rheumatic symptoms,rheumatoid arthritis,ankylosing spondylitis,and gout in Shanghai，China :a C0PC0RD study. J Rheumatol 2003，30 :2245-2251.)，因此造成了很多家庭問(wèn)題以及巨大的社會(huì)負(fù)擔(dān)?，F(xiàn)行治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法主要有手術(shù)治療、化學(xué)藥物治療和細(xì)胞因子類(lèi)生物制劑的治療。一般認(rèn)為外科手術(shù)只適用于晚期畸形病例，且費(fèi)用昂貴，對(duì)機(jī)體創(chuàng)傷較大；化學(xué)藥物如非留體抗炎藥、抗風(fēng)濕藥和糖皮質(zhì)激素等的長(zhǎng)期應(yīng)用會(huì)引起胃腸道不適、骨髓抑制、肝損傷、高血壓等嚴(yán)重的不良反應(yīng)；生物制劑在干預(yù)病變細(xì)胞的同時(shí)，對(duì)正常細(xì)胞也同樣會(huì)產(chǎn)生一定的作用，干擾機(jī)體的固有免疫和適應(yīng)性免疫，從而產(chǎn)生較大的毒性和破壞機(jī)體防御作用的風(fēng)險(xiǎn)(1.張義浜，劉志敏，熊凌霜.類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制及其治療方法研究進(jìn)展.細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2005，21 (增刊)88-94. 2. Doan T， Massarotti E. Rheumatoid Arthritis :An Overview of New and Emerging Therapies. J Clin Pharmacol 2005，45 :751-762.)。因此，尋求高效低毒的防治RA的藥物仍是世界醫(yī)學(xué)界面臨的一項(xiàng)艱巨任務(wù)和難題。黃荊子為馬鞭草科牡荊屬植物黃荊Vitex negundo L.的干燥成熟果實(shí)，產(chǎn)于我國(guó)20余省市，資源極為豐富。性溫，味辛、苦；歸肺、胃、肝經(jīng)；具有祛風(fēng)除濕和行氣止痛的功效，用于治療風(fēng)痹、哮喘等(江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典.上海科學(xué)技術(shù)出版社，1986: 2057.)。清代《草木便方》亦記載(劉善述(清代)原著，趙素云整理.草木便方(精裝本).重慶出版社，1988.)黃荊子可用于“養(yǎng)肝劇竅，堅(jiān)齒，療風(fēng)痹”。在我國(guó)少數(shù)民族的瑤族醫(yī)藥中，黃荊子又名五指風(fēng)，分屬瑤醫(yī)“老班藥”下的“七十二風(fēng)”藥，具祛風(fēng)止痛，散寒除濕，通經(jīng)活絡(luò)之功效(戴斌，丘翠嫦，李劍東，周麗娜，陳少峰.瑤醫(yī)用藥品種調(diào)查報(bào)告.中草藥，1997，(12) :746-749.),常與楓荷葉、解毒藤等“風(fēng)藥”組成瑤浴藥方，用于風(fēng)濕骨痛等 (王政，龍運(yùn)光，袁濤忠，徐德群，袁永沛.瑤族藥浴治療風(fēng)濕痹病臨床觀察.中國(guó)民族醫(yī)藥雜志，2000,6(2) :13-14.)。黃荊子的化學(xué)成分主要含有木脂素類(lèi)、萜類(lèi)、黃酮類(lèi)以及留體類(lèi) (李春正，蘇艷芳，靳先軍.牡荊屬植物化學(xué)成分及生物活性研究進(jìn)展.中草藥[J]，2005， 36(6) :930-938.)。目前，對(duì)于黃荊子的藥理學(xué)研究多數(shù)集中于鎮(zhèn)痛(Zheng CJ, Tang WZ,Huang BK, Han T, Zhang QY, Zhang H, Qin LP.Bioactivity-guided fractionation for analgesic properties and constituents of Vitex negundo L. seeds. Phytomedicine 2009，16:560-567.)、抗氧化(鄭公銘，羅宗銘，陳達(dá)美.黃荊籽抗氧化成分研究.廣東工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1999，16 ) :41-46.)、調(diào)節(jié)激素水平(Bhargava SK，et al. Antifertility effects of the f lavonoids (VI-VII) of Vitex negundo Lseeds in dogs. Plant Med Phytother,1986,20(2) :188-198.)、抗腫瘤(Zhou Y，Liu YE, Cao J，Zeng G，Shen C， Li Y，Zhou M，Chen Y，Pu W, Potters L，Shi YE. Vitexins, nature-derived lignan compounds, induce apoptosis and suppress tumor growth.Clin Cancer Res 2009， 15(16) :5161-5169.)、保月干(Avadhoot Y，Rana AC. Hepatoprotective effect of Vitex negundo agamst carbon tetrachloride-induced liver damage. Arch Phar Res 1991， 14(1) :96-98.)等生物活性，但至今未見(jiàn)有關(guān)黃荊子及其提取物用于抗類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎方面的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供黃荊子及其提取物新的醫(yī)藥用途。本發(fā)明提供了一種黃荊子提取物該提取物是將黃荊子原料粉碎，用含水乙醇提取，減壓濃縮至干，得黃荊子提取物。本發(fā)明還提供了上述黃荊子提取物在抗類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物或食品中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的一種黃荊子提取物，其制備方法為將黃荊子粉碎后，投入提取罐，用40 90%的乙醇熱提2 3次，每次溶媒用量約為生藥量的8 10倍，每次提取時(shí)間為1 2小時(shí)，合并提取液后濃縮至干，得黃荊子總浸膏，將總浸膏溶于水后上樣大孔吸附樹(shù)脂，收集60 80%乙醇洗脫部分，濃縮干燥得黃荊子提取物。所述的大孔吸附樹(shù)脂是AB-8、D-IOl、ZTC-I、HPD-100 或 DA201。原料也可選用黃荊子的莖、葉等。本發(fā)明還提供了上述黃荊子提取物在預(yù)防或治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物或食品中的應(yīng)用。本發(fā)明采用類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型("Trentham DE, Townes AS, Kang AH.Autoimmunity to type II collagen an experimental model of arthritis. J Exp Med 1977,146 :857-868 ；Viji V, Kavitha SK, Helen A. Bacopa monniera(L. )Wettst inhibits type II collagen-induced arthritis in rats. Phytother Res 2010,24 1377-1383)，觀察本發(fā)明提供的黃荊子提取物灌胃給藥的治療作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，黃荊子提取物5g/kg(生藥量)灌胃給藥后，對(duì)大鼠正常生理情況基本沒(méi)影響，從而保證了用藥安全；空白組大鼠左后足趾無(wú)改變，模型組有明顯的腫大，與空白組存在顯著性差異，造模成功；而黃荊子組大鼠左后足趾未見(jiàn)明顯的腫大，與模型組相比存在顯著性差異，表明黃荊子提取物對(duì)類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型有較好的治療作用；黃荊子提取物還能顯著降低類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型血清中TNF-α和IL-I的含量，說(shuō)明黃荊子提取物具有很好的防治類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎效果。本發(fā)明尋找到了高效低毒的防治RA的藥物。


圖1是動(dòng)物體重隨時(shí)間變化2是黃荊子提取物對(duì)C II誘導(dǎo)RA模型大鼠足腫脹的抑制作用(mean士SD，η = 8)，其中*vs模型組，P <0. 05圖3是黃荊子提取物對(duì)C II誘導(dǎo)RA模型大鼠血清中TNF-α水平的影響 (mean士SD，η = 8)，其中 *vs 模型組，P < 0. 05圖4是黃荊子提取物對(duì)C II誘導(dǎo)RA模型大鼠血清中IL-I水平的影響(mean士SD， 11 = 8)，其中*化模型組，？<0. 0具體實(shí)施例方式現(xiàn)結(jié)合實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)描述，但本發(fā)明的實(shí)施不僅限于此。實(shí)施例1 黃荊子提取物的制備將黃荊子全草粉碎后，投入提取罐，用80%的乙醇熱提3次，每次溶媒用量約為生藥量的10倍，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，合并提取液后濃縮至干，并進(jìn)一步干燥，得黃荊子總浸膏，將總浸膏溶于水后上樣AB-8大孔吸附樹(shù)脂，收集60 80%乙醇洗脫部分，濃縮干燥得本發(fā)明的黃荊子提取物。實(shí)施例2 黃荊子提取物的抗類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)2.1實(shí)驗(yàn)材料成年雄性180 220g Wistar大鼠(第二軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)24只， 大鼠血清TNF-α、IL-I的ELISA試劑盒(美國(guó)Sigma公司)。主要儀器足趾容積測(cè)量?jī)x(YLS-7A，山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站)、酶標(biāo)儀(BI0-RAD 550)、離心機(jī)(Labofuge 400R, Heraeus公司)、電子天平(FA IlOA型，上海精密科學(xué)儀器有限公司)。2. 2實(shí)驗(yàn)造模及給藥實(shí)驗(yàn)前將M只大鼠稱重，按體質(zhì)量隨機(jī)分為3組，每組8只，自由飲食、進(jìn)水。分為空白組、模型組、黃荊子組三組?？瞻捉M不予任何處理；模型組將牛II型膠原蛋白醋酸溶液與等容量的弗氏不完全佐劑混合，充分乳化。第O天，SD大鼠尾根進(jìn)行皮內(nèi)注射(lmg/ ml)，每只0. Iml ；7日后，加強(qiáng)免疫，大鼠尾根用0. Iml/只溶液注射作為激發(fā)注射，第15日左右造成RA動(dòng)物模型；黃荊子組自造模成功之日起，給予大鼠黃荊子提取物，灌胃給藥， 每日一次，劑量為5g/kg (生藥量)，連續(xù)給藥20d。2. 3觀察指標(biāo)(1)記錄各組大鼠體質(zhì)量變化情況，每5天稱重一次。(2)用足趾容積測(cè)量?jī)x測(cè)量實(shí)驗(yàn)開(kāi)始和實(shí)驗(yàn)結(jié)束次日各組大鼠雙足趾腫脹程度。(3)在實(shí)驗(yàn)結(jié)束次日，大鼠尾部靜脈取血，置冰浴30min后，以2000r/min離心 15min，取上清，用ELISA法測(cè)定兩組大鼠血清中TNF-α和IL-I水平，按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。2. 4實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS13. 0對(duì)兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行兩樣本t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P < 0. 05時(shí)認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
(1)通過(guò)對(duì)大鼠體質(zhì)量的觀察，空白組大鼠體重逐漸升高；在造模期間，模型組大鼠體重下降明顯，與空白組大鼠比較，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0. 05)。黃荊子組大鼠體重基本平穩(wěn)，和空白組比較有所下降，但沒(méi)顯著性差異，說(shuō)明黃荊子提取物對(duì)大鼠正常生理情況基本沒(méi)影響，從而保證了用藥安全，如圖1所示。(2)大鼠足趾腫脹率如圖2所示，空白組大鼠左后足趾無(wú)明顯改變，模型組有明顯的腫脹，與空白組存在顯著性差異，提示造模成功；黃荊子組大鼠左后足趾腫脹程度較輕，與模型組相比存在顯著性差異，表明黃荊子提取物對(duì)大鼠類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型有較好的抗炎作用。(3)血清學(xué)指標(biāo)如圖3、圖4所示，黃荊子組與模型組相比P < 0. 05，黃荊子組能顯著降低血清中 TNF-α和IL-I的含量，與空白組相比，無(wú)顯著性差異，說(shuō)明黃荊子提取物5g/kg(生藥量) 灌胃給藥能顯著降低類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型血清中的關(guān)鍵促炎細(xì)胞因子水平。鑒于上述藥效實(shí)驗(yàn)結(jié)果，本發(fā)明的黃荊子提取物具有顯著抗類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎活性，因此可用于制備抗類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物或食品。
權(quán)利要求
1.一種黃荊子提取物，其制備方法為將黃荊子粉碎后，投入提取罐，用40 90%的乙醇熱提2 3次，每次溶媒用量約為生藥量的8 10倍，每次提取時(shí)間為1 2小時(shí)，合并提取液后濃縮至干，得黃荊子總浸膏， 將總浸膏溶于水后上樣大孔吸附樹(shù)脂，收集60 80%乙醇洗脫部分，濃縮干燥得黃荊子提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃荊子提取物的制備方法，其特征在于所述的大孔吸附樹(shù)脂是 AB-8、D-101、ZTC-I、HPD-100 或 DA201。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃荊子提取物在預(yù)防或治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物或食品中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是當(dāng)前危害人類(lèi)健康的最重要疾病之一，尋求高效低毒的防治RA的藥物仍是世界醫(yī)學(xué)界面臨的一項(xiàng)艱巨任務(wù)和難題。本發(fā)明提供一種黃荊子提取物，是將黃荊子用含水乙醇熱提，提取液濃縮后上樣大孔吸附樹(shù)脂，經(jīng)含水乙醇洗脫，洗脫液濃縮、干燥得黃荊子提取物。經(jīng)藥效學(xué)研究表明，本發(fā)明的黃荊子提取物可用于制備抗類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物或食品。本發(fā)明為尋求新的抗類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物提供了一種新的來(lái)源。
文檔編號(hào)A61P29/00GK102258633SQ20111018642
公開(kāi)日2011年11月30日 申請(qǐng)日期2011年7月5日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月5日
發(fā)明者張宏, 秦路平, 鄭承劍, 韓婷 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)