專利名稱：一種雞骨草總黃酮的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種從雞骨草中提取、純化總黃酮的方法，具體是ー種利用纖維素酶提取串聯AB-8型大孔吸附樹脂分離純化制備雞骨草總黃酮的方法，屬于藥材加工領域。
背景技術：
雞骨草為《中國藥典》2010年版一部收載的豆科植物廣州相思子(Abruscarltorliensis Hance)的干燥全株,別名紅母雞草、獵腰草、黃食草、土甘草,藥材名雞骨草。主要分布于廣東、廣西，為我國特有。因其最先發(fā)現在廣州白云山，故又稱廣州相思子，以全株入藥(除去豆莢)。雞骨草全草含相思子(L-abrine)、黃酮苷、膽堿、留醇、皂苷、氨基酸、糖類、鞣質、蒽醌類化合物，其性涼，味甘淡，有清熱利濕、解毒、疏肝止痛、活血化瘀等功效，用于治療急、慢性肝炎、肝硬化腹水、膽嚢炎、胃痛、風濕痹痛、打痹痛、毒蛇咬傷、乳腺炎、泌尿系統(tǒng)感染等病癥。但是，目前國內外對雞骨草黃酮類化合物的研究還相當缺乏，而 黃酮類化合物對治療冠心病、老年性癡呆、腦血栓、神經系統(tǒng)疾病和消除自由基、抑菌、抗癌等方面有顯著效果，無副作用，并以此開發(fā)出多種藥品和保健食品。因此，如何高效地對雞骨草黃酮類化合物進行提取與分離純化，也越來越受到國內外學者的重視。常用的總黃酮提取方法有水煎煮法，熱回流提取，超聲波輔助提取，微波輔助提取等。但是水煎煮法提取時間很長，一般4 6小時；熱回流提取，超聲波輔助提取和微波輔助提取總黃酮則需要使用有機溶劑；而酶法提取作為ー種優(yōu)良的提取方法，具有操作簡便快捷、提取時間短、轉移率高以及無溶劑污染等特點，目前己廣泛應用在生物活性物質的提取方面，如山楂葉總黃酮，銀杏葉總黃酮，芹菜黃酮等，而應用于雞骨草總黃酮提取方面至今未見報道。大孔吸附樹脂是ー類不溶于酸、堿及各種有機溶劑且有較好吸附性能的有機高聚物吸附劑，近年來廣泛被應用于醫(yī)藥、環(huán)保和食品等領域，在中草藥研究方面也較廣泛，尤其在黃酮類成分中，如紅樹莓總黃酮，銀杏葉總黃酮和杭白菊總黃酮等及其他各類成分均有采用大孔吸附樹脂法進行分離純化的研究，而應用于雞骨草總黃酮分離純化方面至今未見報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種雞骨草總黃酮的制備方法，即ー種利用纖維素酶提取串聯AB-8型大孔吸附樹脂分離純化雞骨草總黃酮的方法。為實現上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案將干燥的雞骨草粉碎過40目篩，水為提取劑，纖維素酶用量是雞骨草原料質量的O. 3% O. 5%，提取劑水的體積與雞骨草原料質量之比12ml/g 16ml/g，pH值4. 4 5. 2，酶解溫度45°C 55°C，酶解時間80min lOOmin，得提取液，經檢驗總黃酮轉移率大于90% ;將提取液過濾后調整得到總黃酮質量濃度I. 5mg/ml 2. Omg/ml和pH值4. 5 5. 5的上樣液，然后以I. OBV/h 2. 0BV/h的流速，采用AB-8型大孔吸附樹脂吸附，隨后以體積份數60% 75%的こ醇為洗脫劑進行洗脫，洗脫劑液流速O. 5BV/h I. OBV/h,洗脫劑用量2. 3BV 3. OBV,得洗脫液；將洗脫液在真空度O. 08MPa O. IOMPa和溫度50°C 60°C條件下濃縮至初始體積的30%為止，得濃縮液；將濃縮液在冷凍干燥機真空度小于20Pa、冷阱溫度-45°C _60°C條件下干燥殆盡，得雞骨草總黃酮產品，經檢驗純度大于30 %。由于采用了以上技術方案，本發(fā)明具有以下優(yōu)點I、本發(fā)明利用纖維素酶提取串聯AB-8型大孔吸附樹脂分離純化雞骨草總黃酮，其主要優(yōu)點是以水為提取劑，采用纖維素酶提取。與こ醇回流提取、超聲波輔助こ醇提取或微波輔助こ醇提取相比，提取時不使用こ醇等有機溶剤，故無需濃縮除去こ醇，過濾后直接調整PH和質量濃度便可直接進行大孔吸附樹脂分離純化，因此本發(fā)明操作簡便、快捷、廉價、無毒；2、用本發(fā)明方法制備雞骨草總黃酮，其總黃酮轉移率大于90%，純化物中總黃酮的含量大于30%，且重現性好。


圖I是實施例I的AB-8大孔吸附樹脂動態(tài)洗脫曲線。圖2是實施例2的AB-8大孔吸附樹脂動態(tài)洗脫曲線。圖3是實施例3的AB-8大孔吸附樹脂動態(tài)洗脫曲線。
具體實施例方式實施例I纖維素酶提取干燥的雞骨草粉碎過40目篩，纖維素酶用量是雞骨草原料質量的O. 4%，提取劑水的體積與雞骨草原料質量之比14. 5ml/g, pH值4. 8，酶解溫度50°C和酶解時間85min，此時總黃酮轉移率為98. 61% ；AB-8型大孔吸附樹脂分離純化上樣液pH值5. O、上樣液質量濃度L 6mg/ml、上樣液流速2. OBV/h、洗脫劑為體積份數60%的こ醇、洗脫劑流速I. OBV/h和洗脫劑用量2. 3BV ;動態(tài)洗脫曲線見圖I ;在真空度O. IOMPa和溫度60°C條件下濃縮至初始體積的30%為止，得濃縮液，將濃縮液在冷凍干燥機真空度小于20Pa、冷阱溫度_50°C條件下干燥殆盡，得雞骨草總黃酮產品，此產品純度為35. 21%。實施例2纖維素酶提取干燥的雞骨草粉碎過40目篩，纖維素酶用量是雞骨草原料質量的O. 4%，提取劑水的體積與雞骨草原料質量之比14ml/g，pH值4. 7，酶解溫度47°C和酶解時間80min，此時總黃酮轉移率為94. 01% ；AB-8型大孔吸附樹脂分離純化上樣液pH 4. 5、上樣液質量濃度I. 6mg/ml、上樣液流速I. 5BV/h、洗脫劑為體積份數65%的こ醇、洗脫劑流速O. 75BV/h和洗脫劑用量
2.5BV ;動態(tài)洗脫曲線見圖2;在真空度O. lOMPa、溫度60°C條件下濃縮至初始體積的30%為止，得濃縮液，將濃縮液在冷凍干燥機真空度小于20Pa、冷阱溫度_50°C條件下干燥殆盡，得雞骨草總黃酮產品，此產品純度為33. 88%。
實施例3纖維素酶提取干燥的雞骨草粉碎過40目篩，纖維素酶用量是雞骨草原料質量的O. 5%，提取劑水的體積與雞骨草原料質量之比16ml/g，pH值5. O，酶解溫度53°C和酶解時 間lOOmin，此時總黃酮轉移率為90. 11% ;AB-8型大孔吸附樹脂分離純化上樣液pH 5. 5、上樣液質量濃度I. 8mg/ml、上樣液流速I. 5BV/h、洗脫劑為體積份數70%的こ醇、洗脫劑流速O. 75BV/h和洗脫劑用量2. 8BV ;動態(tài)洗脫曲線見圖3 ；在真空度O. lOMPa、溫度60°C條件下濃縮至初始體積的30%為止，得濃縮液，將濃縮液在冷凍干燥機真空度小于20Pa、冷阱溫度_50°C條件下干燥殆盡，得雞骨草總黃酮產品，此產品純度為32. 70%。
權利要求
1.一種雞骨草總黃酮的制備方法，其特征是將干燥的雞骨草粉碎過40目篩，以水為提取劑，采用纖維素酶提取，纖維素酶用量是雞骨草原料質量的O. 3% O. 5%，提取劑水的體積與雞骨草原料質量之比12ml/g 16ml/g，pH值4. 4 5. 2，酶解溫度45°C 55°C，酶解時間80min lOOmin，得提取液；提取液過濾后調整總黃酮質量濃度和pH值得上樣液，然后采用AB-8型大孔吸附樹脂吸附，上樣液流速I. OBV/h 2. OBV/h,上樣液中總黃酮質量濃度I. 5mg/ml 2. Omg/ml,上樣液pH值4. 5 5. 5 ;洗脫劑洗脫,所述的洗脫劑為體積份數60% 75%的乙醇，洗脫劑流速O. 5BV/h I. OBV/h,洗脫劑用量為2. 3BV 3. OBV，得洗脫液；減壓濃縮和冷凍干燥，得雞骨草總黃酮產品。
2.根據權利要求I所述的一種雞骨草總黃酮的制備方法，其特征是所述提取液中總黃酮轉移率大于90%。
3.根據權利要求I所述的一種雞骨草總黃酮的制備方法，其特征是所述減壓濃縮是將洗脫液在真空度O. 08MPa O. lOMPa、溫度50°C 60°C條件下濃縮至初始體積的30%為止，得濃縮液。
4.根據權利要求I或3所述的一種雞骨草總黃酮的制備方法，其特征是所述冷凍干燥是將濃縮液在冷凍干燥機真空度小于20Pa、冷阱溫度-45°C -60°C條件下干燥殆盡，得雞骨草總黃酮產品。
5.根據權利要求I所述的一種雞骨草總黃酮的制備方法，其特征是雞骨草總黃酮產品純度大于30%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種雞骨草總黃酮的制備方法，屬于藥材加工領域。它是將干燥的雞骨草粉碎過篩，以水為提取劑，采用纖維素酶提取，提取液過濾后調整總黃酮質量濃度和pH值得上樣液，然后采用AB-8型大孔吸附樹脂吸附，乙醇洗脫，減壓濃縮和冷凍干燥，得雞骨草總黃酮產品。本發(fā)明的有益效果是操作簡便、快捷、廉價、無毒，是一種綠色生產方法。
文檔編號A61K36/48GK102836201SQ20111017760
公開日2012年12月26日 申請日期2011年6月21日 優(yōu)先權日2011年6月21日
發(fā)明者李超, 耿中華, 商學兵, 趙節(jié)昌, 劉全德, 萬婷婷, 劉軍軍, 李姣姣 申請人:徐州工程學院