專利名稱：一種分離和富集蓮子心總黃酮和總生物堿的方法
技術領域：
本發(fā)明屬于從蓮子心中分離純化有效部位的技術，具體涉及一種分離和富集蓮子心總黃酮和總生物堿的方法。
背景技術：
蓮子心為睡蓮科植物蓮(Nelumbo nucifera Gaertn.)成熟種子的綠色胚芽及胚根，古名薏，味苦、性寒，主要產(chǎn)于我國湖南、湖北、浙江、福建和江西等地。據(jù)《本草綱目》記載，它能“清心去熱”，而《隨息居飲食譜》則記載它味“苦涼”，能“斂液、止汗、消熱、養(yǎng)神、止血、固精”，現(xiàn)代藥理分析證明它有強心降壓、逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥之功效。研究發(fā)現(xiàn)，蓮子心中含有多種化學成分，其中主要為生物堿、黃酮類、多糖及揮發(fā)油等物質(zhì)。其中蓮子心中生物堿主要為蓮心堿(liensinine)、異蓮心堿(isoliensinine)、 甲基蓮心堿(neferine)、荷葉堿(nuciferine)、前荷葉堿(pronuciferine)、蓮心季按堿 (Lotusine)等，具有降血壓、抗心律失常、抗血小板聚集、降血糖、抗腫瘤、化療增敏等藥理作用。蓮子心中也含有含量較高的黃酮類物質(zhì)，其主要成分為木犀草素(galuteoline)、蘆丁(rutin)、金絲桃甙(hyperin)等，藥理實驗結(jié)果說明，其具有抗氧化、清除自由基、抑制腫瘤細胞等藥理作用。歐陽明安等對蓮子心的高極性的水溶性次生代謝產(chǎn)物的種類進行了初步研究，分離純化得到了 14個化合物，其主要為黃酮和黃酮甙類化合物。潘揚等分別對蓮子心70%乙醇提取物、總生物堿類成分及總黃酮類成分3個部位進行降血糖活性研究， 發(fā)現(xiàn)蓮子心中降血糖的活性部位為生物堿類成分而非黃酮成分。這充分表明，蓮子心生物堿與黃酮類物質(zhì)可能具有不同的生物活性。蓮心生物堿常用的純化方法為先用酸溶堿沉法、有機溶劑萃取法等獲得脂溶性總堿，再用硅膠柱層析法獲得有效部位，此類方法工藝復雜，使用較多有毒的有機溶劑，成品后處理繁瑣，對環(huán)境及人身危害較大，不適合大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)應用。公開號為CN1117735C 的中國專利公開了從蓮子心中提取純化異蓮心堿和蓮心堿的制備方法，但該方法采用有機溶劑萃取法，使用了大量氯仿、苯、乙醚等有毒有機溶劑，對環(huán)境和人身危害較大。公開號為 CN1670026A的中國專利公開了蓮子心生物堿提取物的制備方法，該方法應用非極性大孔樹脂和大孔強酸聚苯乙烯系陽離子交換樹脂，工藝步驟復雜，而且，目標只是蓮子心總生物堿，沒有將生物堿和黃酮類組分綜合利用，導致藥材的綜合利用率較低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服已有的蓮心生物堿和黃酮類物質(zhì)分離純化方法毒性大、純化步驟繁瑣、藥材綜合利用率低的缺點，提供了一種快速簡便、環(huán)境友好、藥材綜合利用率高的從蓮子心中分離、富集生物堿和黃酮類物質(zhì)的技術方案。本發(fā)明采用陽離子交換樹脂分離和富集蓮心生物堿和黃酮類物質(zhì)，改進之處為 1.將蓮心生物堿和黃酮類物質(zhì)集中到同一分離單元進行分離，提高了設備和材料的利用率，降低分離成本；2.根據(jù)蓮心生物堿和黃酮類物質(zhì)的結(jié)構特點，用不同洗脫劑對其分別洗脫，分布分離和富集有效成分，提高蓮子心藥材的綜合利用率。本發(fā)明的目的是通過如下技術方案實現(xiàn)的一種分離和富集蓮子心總生物堿和總黃酮的方法，具體包括以下步驟(1)將蓮子心用質(zhì)量百分濃度50% 80%乙醇于提取設備中加熱回流提取，每次所用溶劑為生藥質(zhì)量的6 12倍，提取1 3次，經(jīng)過濾得到蓮子心提取液，減壓濃縮至生藥質(zhì)量的3 5倍；(2)將步驟(1)所得到的提取液經(jīng)澄清劑吸附澄清處理，除雜過濾，即為除雜液；(3)將步驟( 所得的除雜液經(jīng)大孔弱酸型陽離子交換樹脂，先用純化水洗脫雜質(zhì)，后用質(zhì)量百分濃度50% -95%乙醇作為洗脫劑分離總黃酮，洗脫液濃縮干燥后即得總黃酮組分富集物；(4)再用含NaCl的質(zhì)量百分濃度50%-95%乙醇作為生物堿洗脫劑分離總生物堿，洗脫液濃縮至干，熱乙醇少量多次洗滌，除去NaCl，合并洗滌液，冷藏，過濾，回收乙醇干燥即得總生物堿組分富集物。所述的步驟O)中，澄清劑為殼聚糖及ZTC1+1-II型天然澄清劑；所述的步驟(3)中，所用乙醇的質(zhì)量百分濃度優(yōu)選為70%。所述的步驟⑷中，所述的生物堿洗脫劑為NaCl含量為0. 01 0. 04g/mL的70% 乙醇溶液；所述的步驟(3)和(4)中，所述的洗脫劑用量分別為5 10倍柱體積。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的優(yōu)勢在于1、本發(fā)明采用大孔弱酸型陽離子交換樹脂在同一分離單元對蓮子心總生物堿和總黃酮進行分離富集，選用不同的洗脫液洗脫，分步分離富集，提高了設備和材料利用率， 降低了分離成本，提高了藥材的綜合利用率。2、本發(fā)明工藝簡單快捷，生物堿和黃酮類物質(zhì)得率高，蓮子心藥材綜合利用率高， 設備及材料廉價易得，適合工業(yè)生產(chǎn)。
具體實施例方式下面結(jié)合實例對本發(fā)明進行詳細描述，但是它并不僅限于實施例或類似實例。實施例1 取蓮子心藥材100g，用8倍于藥材質(zhì)量的70% (質(zhì)量百分濃度)乙醇回流提取 60min，過濾。藥渣再用10倍于藥材質(zhì)量的70% (質(zhì)量百分濃度)乙醇回流提取45min，過濾，合并濾液，減壓濃縮至生藥質(zhì)量的5倍，用殼聚糖除雜處理，過濾，得除雜液。將已預處理好的D152樹脂30mL裝入內(nèi)徑15mm，高40mm的玻璃柱內(nèi)，加入上述制備所得的蓮子心除雜液，以約5倍柱體積純化水，2BV/h的流速洗去水溶性雜質(zhì)。然后用 IOBV 70%乙醇以2BV/h的流速洗脫，收集洗脫液I。再用5BV NaCl含量為0. 02g/mL的70% (質(zhì)量百分濃度)乙醇溶液以2 BV/h的流速洗脫，收集洗脫液II。洗脫液I干燥后得蓮子心總黃酮粗品，總黃酮含量為87. 8% ；洗脫液II干燥后得總生物堿，其甲基蓮心堿含量為 38. 85%，異蓮心堿含量為16. 21%，蓮心堿含量為12. 35%。實施例2 取蓮子心藥材lOOOg，用10倍于藥材質(zhì)量的60% (質(zhì)量百分濃度)乙醇回流提取兩次，合并提取液，回收乙醇至完全，加純化水定容至生藥質(zhì)量的3倍，用ZTC1+1-II型澄清劑除雜處理，過濾，得除雜液。將已預處理好的D152樹脂300mL裝入內(nèi)徑15mm，高40mm的玻璃柱內(nèi)，加入上述制備所得的，蓮子心除雜液。以約5倍柱體積純化水，2BV/h的流速洗去水溶性雜質(zhì)。IOBV 70%乙醇以2BV/h的流速洗脫，收集洗脫液I。再用7BV NaCl含量為0. 01g/mL的70%乙醇溶液以2BV/h的流速洗脫，收集洗脫液II。洗脫液I干燥后得蓮子心總黃酮粗品，總黃酮含量為84. 2%;洗脫液II干燥后得總生物堿，其甲基蓮心堿含量為36. 36%，異蓮心堿含量為15. 34%，蓮心堿含量為12. 21%。實施例3 取蓮子心藥材lOOOg，用12倍于藥材質(zhì)量的70% (質(zhì)量百分濃度)乙醇回流提取兩次，合并提取液，回收乙醇至完全，加純化水定容生藥質(zhì)量的5倍。用ZTC1+1-II型澄清劑除雜處理，過濾，得除雜液。將已預處理好的D001-CC型陽離子樹脂300mL裝入內(nèi)徑15mm，高40mm的玻璃柱內(nèi)。加入上述制備所得的蓮子心除雜液。以約5倍柱體積純化水，2BV/h的流速洗去水溶性雜質(zhì)。5BV 50%乙醇以2BV/h的流速洗脫，收集洗脫液I。再用IOBV NaCl含量為0. 05g/ mL的50% (質(zhì)量百分濃度)乙醇溶液以2BV/h的流速洗脫，收集洗脫液II。洗脫液I干燥后得蓮子心總黃酮粗品，總黃酮含量為76. 2% ；洗脫液II干燥后得總生物堿，其甲基蓮心堿含量為35. 72%，異蓮心堿含量為14. 78%，蓮心堿含量為11.87%。實施例4 取蓮子心藥材lOOOg，用8倍于藥材質(zhì)量的50% (質(zhì)量百分濃度)乙醇回流提取三次，合并提取液，回收乙醇至完全，加純化水定容至生藥質(zhì)量的5倍。用ZTC1+1-II型澄清劑除雜處理，過濾，得除雜液。將已預處理好的D113型陽離子樹脂300mL裝入內(nèi)徑15mm，高40mm的玻璃柱內(nèi)。 加入上述制備所得的蓮子心除雜液。以約5倍柱體積純化水，2BV/h的流速洗去水溶性雜質(zhì)。10BV 95% (質(zhì)量百分濃度)乙醇以2BV/h的流速洗脫，收集洗脫液I。再用7BV NaCl 含量為0. 02g/mL的95% (質(zhì)量百分濃度)乙醇溶液以2BV/h的流速洗脫，收集洗脫液II。 洗脫液I干燥后得蓮子心總黃酮粗品，總黃酮含量為84. 6%;洗脫液II干燥后得總生物堿， 其甲基蓮心堿含量為37.沈％，異蓮心堿含量為16. 13%，蓮心堿含量為12. 58%。
權利要求
1.一種分離和富集蓮子心總生物堿和總黃酮的方法，其特征在于，具體包括以下步驟(1)將蓮子心用質(zhì)量百分濃度50% 80%乙醇加熱回流提取，每次所用溶劑為生藥質(zhì)量的6 12倍，提取1 3次，經(jīng)過濾得到蓮子心提取液，減壓濃縮至生藥質(zhì)量的3 5倍；(2)將步驟(1)所得到的提取液經(jīng)澄清劑吸附澄清處理，除雜過濾，即為除雜液；(3)將步驟( 所得的除雜液經(jīng)大孔弱酸型陽離子交換樹脂，先用純化水洗脫雜質(zhì)，后用質(zhì)量百分濃度50% -95%乙醇作為洗脫劑分離總黃酮，洗脫液濃縮干燥后即得總黃酮組分富集物；(4)再用含NaCl的質(zhì)量百分濃度50%-95%乙醇作為生物堿洗脫劑分離總生物堿，洗脫液濃縮至干，熱乙醇少量多次洗滌，除去NaCl，合并洗滌液，冷藏，過濾，回收乙醇干燥即得總生物堿組分富集物。
2.根據(jù)權利要求1所述的分離和富集蓮子心總生物堿和總黃酮的方法，其特征在于， 在所述的步驟O)中，澄清劑為殼聚糖及ZTC1+1II型天然澄清劑。
3.根據(jù)權利要求1所述的分離和富集蓮子心總生物堿和總黃酮的方法，其特征在于， 在所述的步驟(3)中，所用乙醇的質(zhì)量百分濃度為70%。
4.根據(jù)權利要求1所述的分離和富集蓮子心總生物堿和總黃酮的方法，其特征在于， 在所述的步驟(4)中，所述的生物堿洗脫劑為NaCl含量為0. 01 0. 04g/mL70%乙醇溶液。
5.根據(jù)權利要求1或4所述的分離和富集蓮子心總生物堿和總黃酮的方法，其特征在于，在所述的步驟C3)和中，所述的洗脫劑用量分別為5 10倍柱體積。
全文摘要
本發(fā)明涉及從蓮子心中分離純化有效部位的技術，具體公開了一種分離和富集蓮子心總黃酮和生物堿的方法，是將蓮心生物堿和黃酮類物質(zhì)集中到同一分離單元進行分離，再用不同洗脫劑對其分別洗脫和富集。具體步驟為以蓮子心為原料，用乙醇/水提取，并用澄清劑進行除雜處理。將除雜液通過大孔弱酸型陽離子交換樹脂富集分離，用乙醇/水洗脫得到總黃酮，洗脫液濃縮至干，經(jīng)干燥即得蓮子心總黃酮；再用含NaCl的乙醇/水洗脫得到總生物堿，洗脫液濃縮至干，除鹽，經(jīng)干燥即得蓮子心總生物堿。本發(fā)明所述的方法具有簡便易行，成本低廉和環(huán)境友好等特點，蓮子心總黃酮和總生物堿得率高，大大節(jié)約了蓮子心資源，提高了蓮子心的藥用利用率。
文檔編號A61P9/06GK102228515SQ20111017085
公開日2011年11月2日 申請日期2011年6月23日 優(yōu)先權日2011年6月23日
發(fā)明者劉韶, 尹桃, 李新中, 雷鵬 申請人:中南大學