專利名稱：下肢缺血血運重建生物可降解性中藥緩釋置入物及制備的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及一種下肢缺血血運重建生物可降解性中藥緩釋置入物及制備。
背景技術(shù)：
下肢缺血性疾病是嚴重危害人類健康的疾病之一，其多由動脈粥樣硬化所致的動脈狹窄或閉塞引起，其最早及最常見的癥狀為間歇性跛行，嚴重者會出現(xiàn)缺血性靜息痛、足趾缺肢。隨著生活水平的日益提高，下肢缺血性疾病的發(fā)病率亦呈逐年升高的趨勢。在發(fā)展中國家，50歲以上人群中下肢缺血性疾病的患病率高達5%，嚴重危害人類健康，國家每年花費巨額醫(yī)療費用來醫(yī)護這類疾病，威脅著國民經(jīng)濟的迅速發(fā)展。通過細胞生長因子，如血管內(nèi)皮細胞生長因子VEGF、堿性成纖維生長因子bFGF、 β型轉(zhuǎn)化生長因子TGF-β等，能夠刺激血管再生，改善組織血液灌流。但是生長因子在血液循環(huán)中的半衰期很短，僅為數(shù)十分鐘，而且靶向定位差，難以發(fā)揮長久的、持續(xù)的促血管生成作用，全身性大量應用又會引起血壓下降和潛在的促腫瘤誘變等不良副作用。此外，生長因子價格昂貴，限制了其在下肢缺血性疾病中的普遍應用。中藥的發(fā)展具有悠久的歷史，早在三千年前的《詩經(jīng)》和《爾雅》中就分別記載有 200和300多種植物，其中有不少是藥用植物。通過幾千年傳承積累，人們對中藥材的功用、 療效及副作用有了一定的認識和了解，但是，中藥的藥理作用還沒有得到充分全面的挖掘。 例如葛根素(Puerarin，C21H20O9)是從豆科植物野葛或甘葛藤根中提取的一種異黃酮類化合物，其主要成分為4，7-二羥基-8-β-D葡萄糖異黃酮。自1992年批準上市以來，人們對葛根素的研究一直比較活躍，藥典中將其列為一種血管擴張藥，臨床應用于冠心病、心絞痛、心肌梗死、心律失常、高血壓、視網(wǎng)膜動脈靜脈阻塞、突發(fā)性耳聾、高血脂和高血糖等，療效顯著。臨床上葛根素一般為靜脈滴注給藥，文獻動物實驗中葛根素的給藥方式為靜脈給藥、灌胃或口服給藥等，經(jīng)過血液循環(huán)的作用，只有有限的藥物劑量到達靶部位，且靜脈給藥易引發(fā)急性血管內(nèi)溶血等不良反應。生物可降解性聚合物支架能夠在一定時間內(nèi)維持支架的支撐性能，保證腔道通暢，最后降解為無毒物質(zhì)排除體外。當它們完成其支撐作用后，可以被組織完全吸收，副作用較少。同時其力學性能和降解時間可以通過聚合度和制備過程來控制，制備工藝簡單， 可以通過熔融擠出法、溶劑揮發(fā)法、靜電紡絲法等制備，因此它們在臨床應用上有較大的潛力。CN200710057459. 5公開了一種用于心肌血運重建的可生物降解性藥物緩釋支架及制備方法，用于心肌血運重建的可生物降解性藥物緩釋支架，即用可生物降解聚合物制成的空心內(nèi)管，在空心內(nèi)管的外表面設置有載藥可生物降解聚合物薄膜層，在空心內(nèi)管和載藥可生物降解聚合物薄膜層上貫穿設置有直徑為0. 2mm-lmm的孔，藥為細胞生長因子或/和肝素，用于心肌血運重建的可生物降解性藥物緩釋支架，能緩慢釋放生長因子或/和肝素，能阻止心肌自行閉合和防止血栓形成以及促進孔壁生成血管內(nèi)皮，其中生物降解聚合物為聚己內(nèi)酯或聚乳酸或聚乙醇酸或聚乳酸-聚乙醇酸共聚物或聚己內(nèi)酯-聚乳酸共聚物或聚二氧六環(huán)。CN200910068305. 5也公開了一種透室壁性心肌血運重建生物可降解性藥物緩釋支架。CN 200810053747. 8公開了一種用于心肌血運重建的可生物降解性藥物緩釋支架及制備方法，支架材料為鎂或鎂合金。目前尚無葛根素或其它中藥用于治療下肢缺血性疾病的報道，特別是葛根素或其它中藥用作血運重建生物可降解性藥物緩釋置入物中的藥物還沒有無此類報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種下肢缺血血運重建生物可降解性中藥緩釋置入物及制備方法。下肢缺血血運重建生物可降解性中藥緩釋置入物能夠促進缺血下肢新生血管的生成，改善下肢血流灌注。本發(fā)明制備方法簡單，易于操作。本發(fā)明提供的一種下肢缺血血運重建生物可降解性中藥緩釋置入物包括空心管， 管的內(nèi)徑為lmm-6mm，壁厚為0. 5mm-4mm，長度為0. 5mm-200mm，所述管的材質(zhì)為負載有促進血管新生的中藥的可生物降解聚合物，所述管是單層或雙層管。所述的中藥和可生物降解聚合物的質(zhì)量比為0. l-500mg 5_1000mg。所述的聚合物為聚己內(nèi)酯、普魯蘭多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸-聚乙醇酸共聚物、聚己內(nèi)酯-聚乳酸共聚物、聚二氧六環(huán)、羥丙基甲基纖維素、膠原蛋白、海藻酸或殼聚糖及其衍生物。所述的中藥為葛根素、紅景天苷、淫羊藿苷、芍藥苷、丹參素、丹參酮、黃檀根水提取物或栝樓果實水提取物。本發(fā)明提供的一種下肢缺血血運重建生物可降解性中藥緩釋置入物的制備方法包括的步驟如下按比例將可生物降解聚合物溶解到有機溶劑中，制成可生物降解聚合物溶液，將中藥均勻分散在所述可生物降解聚合物溶液中，轉(zhuǎn)移到模具中，在溶劑揮發(fā)完全后形成薄膜，剪成條形，再卷成管，切成一定長度，即制成一種下肢缺血血運重建生物可降解性中藥緩釋置入物。有機溶劑為二氯甲烷、三氯甲烷、四氫呋喃或丙酮。或按比例將可生物降解聚合物溶解到有機溶劑中，制成可生物降解聚合物溶液，將中藥均勻分散在所述可生物降解聚合物溶液中，加入到注射器中，通過靜電紡絲設備制成納米纖維，采用金屬管狀接收器卷繞收集成管，切成一定長度，即制成一種下肢缺血血運重建生物可降解性中藥緩釋置入物。有機溶劑為二氯甲烷、三氯甲烷、四氫呋喃或丙酮?；虬幢壤龑⒖缮锝到饩酆衔锶芙獾接袡C溶劑中，制成可生物降解聚合物溶液，轉(zhuǎn)移到模具中，在溶劑揮發(fā)完全后形成薄膜，剪成條形，將中藥均勻分散在兩片薄膜之間，通過有機溶劑進行溶劑固定，再卷成管，切成一定長度，即制成一種下肢缺血血運重建生物可降解性中藥緩釋置入物。有機溶劑為二氯甲烷、三氯甲烷、四氫呋喃或丙酮。本發(fā)明下肢缺血血運重建生物可降解性中藥緩釋置入物能夠促進缺血下肢新生血管的生成，改善下肢血流灌注。本發(fā)明制備方法簡單，易于操作。


圖1為本發(fā)明的一種下肢缺血血運重建生物可降解性中藥緩釋置入物制備示意圖。圖2為本發(fā)明的一種下肢缺血血運重建生物可降解性中藥緩釋置入物體外藥物釋放行為。圖3為本發(fā)明的一種下肢缺血血運重建生物可降解性中藥緩釋置入物促進下肢血管再生效果(置入物作用后長收肌組織HE染色圖片)。圖4為本發(fā)明一種下肢缺血血運重建生物可降解性中藥緩釋置入物促進下肢血流灌注效果(置入物作用后激光多普勒血流成像圖，圖片上側(cè)為置入物置入組下肢，下側(cè)為正常下肢)。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明。本發(fā)明的試劑均為市售。實施例1一種下肢缺血血運重建生物可降解性中藥緩釋置入物的制備方法包括下述步驟按0.5g 20ml的比例，將聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(摩爾比75Λ5，MnlOOOO， no. 43，中國科學院成都有機化學有限公司)溶解到二氯甲烷(天津江天化工有限公司) 中，制成可生物降解聚合物溶液，轉(zhuǎn)移到四氟乙烯的模具中，在溶劑揮發(fā)完全后形成薄膜， 剪成條形，將IOmg葛根素(Puerarin，C21H20O9,99. 5%，上海邁瑞爾化學技術(shù)有限公司)均勻分散在兩片薄膜之間，通過二氯甲烷進行溶劑固定后，卷成內(nèi)徑為2mm，壁厚為2mm的管， 切成長度10mm，即制成一種下肢缺血血運重建生物可降解性中藥緩釋置入物。同樣，葛根素用紅景天苷(&ilidroside，C14H20O7)、淫羊藿苷(Icariin，C33H40O15)、 芍藥苷(Paeoniflorin, Q3H28O11)、丹參素(Danshensu Salvianic acid A, C9H10O5)、丹參酮 (C18H12O3) >Htt (Dalbergia hupeana) WK^M^^Ji^ (Trichosanthes cucumerina L.) 果實水提取物替代，可以組成新的實施例，得到可降解性中藥緩釋置入物。聚乳酸-聚乙醇酸共聚物用聚己內(nèi)酯、普魯蘭多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚己內(nèi)酯-聚乳酸共聚物、聚二氧六環(huán)、羥丙基甲基纖維素、膠原蛋白、海藻酸或殼聚糖及其衍生物替代，可以組成新的實施例，得到可降解性中藥緩釋置入物。溶劑二氯甲烷用三氯甲烷、四氫呋喃或丙酮替代，可以組成新的實施例，得到可降解性中藥緩釋置入物。實施例2置入物的體外釋放實驗葛根素的含量采用高效液相色譜法進行測定。色譜柱C18柱Q00mmX4. 6mm, 5ym, Kromasil)；流動相甲醇-水05 75)；流速為lml/min，檢測波長250nm，柱溫 30°C，進樣量20yL。在上述高效液相色譜條件下，按葛根素峰計算理論塔板數(shù)不低于 3000。精密稱取葛根素對照品適量，加流動相溶解。并制成1. 57,3. 14,7. 85、15. 7,62. 8、 94. 2、125. 6,157 μ g/ml的溶液，分別在上述色譜條件下測定，記錄其峰面積。以峰面積對濃度進行回歸分析，得回歸方程。將置入物放于含有5ml PBS緩沖液(pH7. 4)的樣品管中，置于37°C的氣浴恒溫振蕩器中，轉(zhuǎn)速為lOOr/min。定時取樣，并補充同體積的PBS緩沖液。通過線性回歸方程計算葛根素的含量，并求得累積釋藥百分率。每次樣品重復測試三次。實施例3
動物實驗(一 )大鼠急性下肢缺血模型的建立SPF級wistar大鼠，雄性，體重220_250g，由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供，許可證號為SCXK(京)2009-0004。飼養(yǎng)條件室溫23-25度，置大鼠不銹鋼籠具中飼養(yǎng)，自由攝水攝食。大鼠術(shù)前1 禁食，自由飲水。10%水合氯醛溶液0. :3ml/100g腹腔注射麻醉，仰臥固定，左下肢常規(guī)備皮消毒，縱行切開左下肢正中的皮膚，從腹股溝至膝關(guān)節(jié)處。 于腹股溝下分離出股動脈，范圍從腹股溝韌帶直至膝關(guān)節(jié)，結(jié)扎股動脈于股部的所有分支， 并將股動脈于腹股溝韌帶下切斷。術(shù)畢，縫合切口。通過激光多普勒血流成像確定下肢缺血模型制備成功。( 二)肌肉打孔與置入物的置入造模成功大鼠隨機分為空白置入物組和葛根素置入物組，6只/每組。大鼠下肢缺血長收肌采用高速鉆孔器(13000r/min)打孔，每個孔道內(nèi)置入一枚置入物(實施例3)，隨即縫合傷口。(三)激光多普勒血流成像分析分別于術(shù)后1天、2周、4周、6周，將大鼠10 %水合氯醛溶液0. 3ml/100g腹腔注射麻醉，37°C恒溫加熱使其雙下肢溫度相對恒定后。動物取仰臥體位，行激光多普勒血流檢測。(四)組織學分析于術(shù)后6周處死動物，取下肢缺血區(qū)組織，40g/L甲醛固定Mh，脫水、浸蠟、包埋， 切片5 μ m，常規(guī)行蘇木精-伊紅(HE)染色，具體過程為①蘇木精染色lOmin，自來水洗； ②的鹽酸酒精分色，邊分色邊鏡檢，至核呈紅紫色，自來水洗至細胞核變藍，蒸餾水洗凈堿性物質(zhì)；③0. 5-1%伊紅水溶液洗10-20秒，自來水洗，蒸餾水洗；④95%酒精分色，涮洗 15秒；⑤95%、100%酒精梯度脫水lOmin，二甲苯脫水Hmin ；⑥中性樹脂封片，高倍顯微鏡觀察。試驗結(jié)果(一 )體外藥物釋放行為葛根素標準品以峰面積對進樣量做線性回歸，回歸方程為y = 0. 0569x+0. 0458 (r = 0. 9999)，可知葛根素在0. 0314-3. 14 μ g范圍內(nèi)進樣量與峰面積有良好的線性關(guān)系。置入物中葛根素體外釋放研究在37°C氣浴恒溫振蕩器中進行。圖2為藥物的釋放曲線，從圖中可以看出，葛根素緩慢穩(wěn)定持續(xù)釋放，隨著置入物外層材料的降解，25 天后釋放的葛根素接近70%。說明該藥物置入物能達到藥物緩釋的目的，藥物釋放持續(xù)時間長，直至外層載藥層完全降解。( 二)新生血管密度量化分析置入物置入2、4、6周，通過組織化學檢查形態(tài)學評估新生血管密度。在各個時間點，葛根素置入物置入組的血管密度均明顯高于空白置入物置入組。在空白置入物置入組， 血管密度隨著時間的延長而逐漸降低。對于葛根素置入物置入組，置入4周時，血管密度達到最高峰(189. 56士8. 23/mm2)；置入六周時，血管密度降低(102. 45士 10. 46/mm2)，但血管管腔變粗管壁變厚(圖3)。(三)激光多普勒下肢血流檢測
12只大鼠成功造成左下肢缺血模型，手術(shù)后第一天，血流均呈明顯降低趨勢。隨后，在葛根素置入物置入組，血流逐漸恢復，呈上升趨勢，定量分析結(jié)果顯示術(shù)后第六周，血流灌注達到85. 46士3. 59%，血流灌注明顯改善。而在空白置入物置入組，缺血左下肢血流灌注量基本無變化，血流灌注沒有得到改善(圖4)。
權(quán)利要求
1.一種下肢缺血血運重建生物可降解性中藥緩釋置入物，其特征在于它包括空心管， 管的內(nèi)徑為lmm-6mm，壁厚為0. 5mm-4mm，長度為0. 5mm-200mm，所述管的材質(zhì)為負載有促進血管新生的中藥的可生物降解聚合物，所述管是單層管或雙層管。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的置入物，其特征在于所述的中藥和可生物降解聚合物的質(zhì)量比為 0. l-500mg 5-1000mg。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的置入物，其特征在于所述的中藥和可生物降解聚合物的質(zhì)量比為 0. l-50mg 5-100mg。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的置入物，其特征在于所述的管的內(nèi)徑為2mm，壁厚為2mm的管，長度10mm。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的置入物，其特征在于所述的可生物降解聚合物為聚己內(nèi)酯、 普魯蘭多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸-聚乙醇酸共聚物、聚己內(nèi)酯-聚乳酸共聚物、聚二氧六環(huán)、羥丙基甲基纖維素、膠原蛋白、海藻酸或殼聚糖及其衍生物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的置入物，其特征在于所述的中藥為葛根素、紅景天苷、淫羊藿苷、芍藥苷、丹參素、丹參酮、黃檀根水提取物或栝樓果實水提取物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的置入物，其特征在于所述的中藥為葛根素。
8.—種權(quán)利要求1所述的下肢缺血血運重建生物可降解性中藥緩釋置入物的制備方法，其特征在于包括的步驟如下按比例將可生物降解聚合物溶解到有機溶劑中，制成可生物降解聚合物溶液，將中藥均勻分散在所述可生物降解聚合物溶液中，轉(zhuǎn)移到模具中，在溶劑揮發(fā)完全后形成薄膜，剪成條形，再卷成管，切成一定長度，即制成一種下肢缺血血運重建生物可降解性中藥緩釋置入物；或按比例將可生物降解聚合物溶解到有機溶劑中，制成可生物降解聚合物溶液，將中藥均勻分散在所述可生物降解聚合物溶液中，加入到注射器中，通過靜電紡絲設備制成納米纖維，采用金屬管狀接收器卷繞收集成管，切成一定長度，即制成一種下肢缺血血運重建生物可降解性中藥緩釋置入物；或按比例將可生物降解聚合物溶解到有機溶劑中，制成可生物降解聚合物溶液，轉(zhuǎn)移到模具中，在溶劑揮發(fā)完全后形成薄膜，剪成條形，將中藥均勻分散在兩片薄膜之間，通過有機溶劑進行溶劑固定，再卷成管，切成一定長度，即可。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于所述的有機溶劑為二氯甲烷、三氯甲烷、四氫呋喃或丙酮。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種下肢缺血血運重建生物可降解性中藥緩釋置入物及制備。它包括空心管，所述管是單層管或雙層管。所述管的材質(zhì)為負載有促進血管新生的中藥的可生物降解聚合物，所述可生物降解聚合物為聚己內(nèi)酯、普魯蘭多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸-聚乙醇酸共聚物、聚己內(nèi)酯-聚乳酸共聚物、聚二氧六環(huán)、羥丙基甲基纖維素、膠原蛋白、海藻酸或殼聚糖及其衍生物。所述的中藥和可生物降解聚合物的質(zhì)量比為0.1-500mg∶5-1000mg。為葛根素、紅景天苷、淫羊藿苷、芍藥苷、丹參素、丹參酮、黃檀根水提取物或栝樓果實水提取物。本發(fā)明能夠促進缺血下肢新生血管的生成，改善下肢血流灌注。本發(fā)明制備方法簡單，易于操作。
文檔編號A61M31/00GK102294076SQ20111014750
公開日2011年12月28日 申請日期2011年6月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月2日
發(fā)明者劉天軍, 包漢梅, 呂豐, 武莉 申請人:中國醫(yī)學科學院生物醫(yī)學工程研究所