專利名稱：一種從海紅果中提取多酚的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種從海紅果中提取多酚的方法。
背景技術(shù)：
海紅果(Malus micromalus makino)是薔薇科梨亞科蘋(píng)果屬楸子的果實(shí),主要分布在黃河中游晉、陜、蒙接壤的黃土丘陵溝壑地區(qū)，包括山西的河曲、保德、偏關(guān)；陜西的府谷、神木；內(nèi)蒙古的清水河、準(zhǔn)格爾旗、和林格爾、涼城等旗縣。海紅果樹(shù)具有極強(qiáng)的抗旱、抗寒、抗風(fēng)、抗病蟲(chóng)害能力，且盛果期長(zhǎng)，在該地區(qū)大量栽種，資源豐富，是當(dāng)?shù)刂匾慕?jīng)濟(jì)林木，對(duì)當(dāng)?shù)氐乃帘３忠灿兄匾饬x。關(guān)于海紅果的專利僅有2項(xiàng)。CN1120892報(bào)道了ー種海紅果的保鮮技木，CN101195798報(bào)道了ー種海紅果酒的生產(chǎn)方法。目前，海紅果年產(chǎn)量約I萬(wàn)噸，但對(duì)海紅果進(jìn)行開(kāi)發(fā)利用的文獻(xiàn)很少。海紅果中富含多酚類物質(zhì)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)海紅果多酚具有較強(qiáng)的抗氧化能力。目前， 關(guān)于海紅果多酚還未見(jiàn)報(bào)道。植物多酚是ー類多羥基化合物，是良好的天然抗氧化劑，已廣泛應(yīng)用于食品、藥品和日用品。因此，對(duì)海紅果中的多酚進(jìn)行制備，將其添加到食品、藥品和日用品中發(fā)揮其活性，將具有廣闊的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供ー種從海紅果中提取多酚的方法。本發(fā)明的發(fā)明人利用現(xiàn)有的幾種多酚類物質(zhì)的提取方法從海紅果中提取多酚，結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)溶劑提取的多酚含有較多的雜質(zhì)，純度不高，活性弱；超臨界CO2萃取法提取得到的多酚雖然純度高，但エ藝復(fù)雜，操作不便，成本很高；重金屬鹽離子沉淀法會(huì)有重金屬殘留，安全性差；樹(shù)脂吸附分離法操作簡(jiǎn)單，成本較低，安全性好；將溶劑提取法和樹(shù)脂吸附分離法結(jié)合(即，采用溶劑法提取，大孔吸附樹(shù)脂柱分離富集)，制備的多酚純度較高，而且エ藝簡(jiǎn)單，易于エ業(yè)化生產(chǎn)。由此完成了本發(fā)明。本發(fā)明提供了ー種從海紅果中提取多酚的方法，包括以下步驟(I)將海紅果的果漿與こ醇水溶液混合，然后置于水浴中提取，得到提取液；(2)將所述提取液過(guò)濾，從得到的濾液中除去こ醇，得到濃縮的多酚粗提液；(3)將所述多酚粗提液加入已平衡好的大孔吸附樹(shù)脂柱，先用蒸餾水沖洗柱子，再用50-70體積％的こ醇水溶液洗脫，收集こ醇水溶液的洗脫液；(4)從所述洗脫液中除去こ醇，得到濃縮的洗脫液；(5)將所述濃縮的洗脫液干燥，得到海紅果多酚粉末。實(shí)施結(jié)果證明，利用本發(fā)明所提取的海紅果多酚產(chǎn)品純度可達(dá)70%以上，其抗氧化活性明顯增強(qiáng)，而且本發(fā)明的方法エ藝簡(jiǎn)單，易于エ業(yè)化生產(chǎn)。


圖I為用沒(méi)食子酸工作液的吸光度對(duì)濃度作圖而制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖2為用吸光度對(duì)FeSO4當(dāng)量作圖而制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供的從海紅果中提取多酚的方法包括以下步驟(I)將海紅果的果漿與乙醇水溶液混合，然后置于水浴中提取，得到提取液；(2)將所述提取液過(guò)濾，從得到的濾液中除去乙醇，得到濃縮的多酚粗提液；(3)將所述多酚粗提液加入已平衡好的大孔吸附樹(shù)脂柱，先用蒸餾水沖洗柱子，再用50-70體積％的乙醇水溶液洗脫，收集乙醇水溶液的洗脫液；(4)從所述洗脫液中除去乙醇，得到濃縮的洗脫液； (5)將所述濃縮的洗脫液干燥，得到海紅果多酚粉末。其中，所述海紅果的果漿可以通過(guò)現(xiàn)有的各種打漿方法由海紅果制得，優(yōu)選地，所述海紅果的果漿是通過(guò)將海紅果去核并且不加水直接打漿而制得的。在步驟(I)中，所述乙醇水溶液的濃度可以為50-70體積％，海紅果的果漿與乙醇水溶液的重量比為可以為I : 8至I : 20、優(yōu)選為I : 10至I : 15，所述水浴的溫度可以為60-90°C、優(yōu)選為75-85°C，提取的時(shí)間可以為1_10小時(shí)、優(yōu)選為2_6小時(shí)。步驟(I)可以只進(jìn)行一次提取，也可以進(jìn)行多次提取。在步驟(2)中，可以通過(guò)現(xiàn)有的各種過(guò)濾方法進(jìn)行過(guò)濾。從得到的濾液中除去乙醇的方法可以采用現(xiàn)有的各種蒸發(fā)濃縮方法，優(yōu)選減壓濃縮，以降低蒸發(fā)的溫度，從而提高多酚的活性。所述減壓濃縮的溫度可以為40-55°C、真空度可以為0.05-0. IMPa0所述減壓濃縮可以使得濃縮液的體積為初始液的體積的1/2至1/4。所述真空度用實(shí)際壓力與I個(gè)標(biāo)準(zhǔn)大氣壓的差值表示。在步驟⑶中，所述大孔吸附樹(shù)脂柱可以為能夠吸附多酚的樹(shù)脂柱，優(yōu)選為NKA-9柱，上樣前先用蒸餾水平衡2-6倍柱體積(優(yōu)選3倍柱體積)。上樣過(guò)程中當(dāng)流出液中多酚濃度為上樣液多酚濃度的1/10時(shí)，停止上樣，然后用3-5倍柱體積的蒸餾水沖洗柱子，再用
2-6倍柱體積(優(yōu)選3倍柱體積)的所述乙醇水溶液洗脫。在步驟⑷中，從得到的洗脫液中除去乙醇的方法可以采用現(xiàn)有的各種蒸發(fā)濃縮方法，優(yōu)選減壓濃縮，以降低蒸發(fā)的溫度，從而提高多酚的活性。所述減壓濃縮的溫度可以為40-55°C、真空度可以為0. 05-0. IMPa0所述減壓濃縮的時(shí)間可以使得濃縮液的體積為初始液體積的1/8至1/20。在步驟(5)中，可以采用常規(guī)的各種干燥方法，例如自然干燥、減壓干燥、真空冷凍干燥等。優(yōu)選地，所述干燥為真空冷凍干燥，以更有利地保持多酚的活性。真空冷凍干燥的溫度可以為_(kāi)50°C至_60°C、壓力可以為20-100Pa。以下結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明提取海紅果多酚的方法做進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。在以下實(shí)施例中，海紅果多酚粉末中多酚純度和抗氧化活性分別采用以下方法測(cè)定多酚純度的測(cè)定配制IOOOii g/mL的沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用移液管分別移取I. 0,2. 0,3. 0,4. 0，5. OmL沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液于IOOmL容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，搖勻，得到濃度分別為10、20、30、40、50 ii g/mL沒(méi)食子酸工作液。
用移液管分別移取沒(méi)食子酸工作液、蒸餾水(作空白對(duì)照用)I. OmL于IOmL容量瓶中，分別加入0. 50mL福林酹試劑,搖勻，反應(yīng)3min-8min,加入4. OmL 7. 5%的碳酸鈉溶液，加蒸餾水定容至刻度，搖勻，室溫下放置60min，用分光光度計(jì)測(cè)定765nm波長(zhǎng)處的吸光值。用沒(méi)食子酸工作液的吸光度對(duì)濃度作圖，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)附圖I。用移液管分別移取多酚樣品液、蒸餾水(作空白對(duì)照用)各I. OmL于IOmL容量瓶中，分別加入0. 50mL福林酹試劑,搖勻，反應(yīng)3min-8min,加入4. 0mL7. 5%的碳酸鈉溶液,加蒸餾水定容至刻度，搖勻，室溫下放置60min，用分光光度計(jì)測(cè)定765nm波長(zhǎng)條件下的吸光值。將吸光值帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算所測(cè)樣品液中多酚的濃度。多酚濃度乘以樣品液的稀釋倍數(shù)，除以測(cè)定時(shí)稱取的多酚固體重量，乘以100%即為多酚純度?？寡趸钚詼y(cè)定——總還原能力(Frap法)溶液配制
IOmmoI/L三吡啶三吖嗪(TPTZ)溶液稱取TPTZ固體0. 3123g，用10mmol/L鹽酸溶液溶解并定容至100mL。TPTZ 工作液pH3. 6 的醋酸鹽緩沖液(0. 3mol/L)，IOmmoI/L TPTZ 溶液，20mmol/LFeCl3溶液按10 I I比例混合。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制I. 8mL三吡啶三吖嗪(TPTZ)溶液加0. 2mL不同濃度的FeSO4溶液，用分光光度計(jì)測(cè)定593nm波長(zhǎng)處的吸光度。FeSO4濃度分別為0. 05,0. 2,0. 5、I、I. 5、2mmol/L，則FeSO4當(dāng)量分別為0. 01、0. 04,0. 10,0. 20,0. 30,0. 40 y mol，用吸光度對(duì)FeSO4當(dāng)量作圖，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)附圖2。海紅果多酚抗氧化活性測(cè)定總還原能力即FRAP值，以每克樣品相當(dāng)于FeSO4的ii mo I數(shù)表示。海紅果多酚溶液稀釋相應(yīng)倍數(shù)后，取稀釋液0. 2mL加I. 8mL TPTZ工作液，于37°C反應(yīng)lOmin，593nm處測(cè)定吸光值。將吸光值帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得到FeSO4當(dāng)量，然后除以0. 2mL稀釋液中多酚的質(zhì)量，即得到海紅果多酚的FRAP值。實(shí)施例I將海紅果去核、打漿，稱取40g海紅果漿，加入400mL的60%こ醇水溶液，混合，于80°C水浴中密閉浸提3h后，冷卻至室溫，過(guò)濾，殘?jiān)貜?fù)上述步驟浸提I次。將兩次浸提液合并，于45°C、真空度0. IMPa下濃縮至原體積的1/4。將濃縮液以lmL/min的流速泵入已平衡好的NKA-9大孔樹(shù)脂柱(北京科百奧生物科技有限公司生產(chǎn))。先用5倍柱體積的蒸餾水沖洗柱子，再用3倍柱體積的60%こ醇水溶液以2mL/min的流速洗脫，收集60%こ醇水溶液的洗脫液，在45°C、0. IMPa下減壓濃縮。濃縮液在_60°C、20Pa下經(jīng)冷凍干燥，得到0. 35g粉紅色的海紅果多酚粉末，其中多酚純度為77%，F(xiàn)RAP值為19. 75。對(duì)比例I將海紅果去核、打漿，稱取40g海紅果漿，加入400mL的60%こ醇水溶液，混合，于80°C水浴中密閉浸提3h后，冷卻至室溫，過(guò)濾，殘?jiān)貜?fù)上述步驟浸提I次。將兩次浸提液合并，于45°C、真空度0. IMPa下濃縮至原體積的1/4。濃縮液在-60°C、20Pa下經(jīng)冷凍干燥，得到紅色的海紅果多酚浸膏3. 06g，其中多酚純度為3. 2%, FRAP值為2. 13。對(duì)比例2
采用專利CN200710066785. 2公開(kāi)的方法從海紅果中提取多酚。采用微波2450MHz, 300w處理10秒后，用50%乙醇溶液進(jìn)行2次浸提，海紅果漿和溶劑的重量比為I : 10，每次浸提時(shí)間2小時(shí)，收集浸出液體，減壓濃縮得到的多酚浸膏中多酚純度為3. 5%，F(xiàn)RAP 值為 2. 36。實(shí)施例2將海紅果去核、打漿，稱取40g海紅果漿，加入500mL的50%乙醇水溶液，混合，于75°C水浴中密閉浸提5h后，冷卻至室溫，過(guò)濾，殘?jiān)貜?fù)上述步驟浸提I次。將兩次浸提液合并，于45°C、真空度0. IMPa下濃縮除去乙醇，將多酚水溶液以2mL/min的流速泵入已平衡好的NKA-9大孔樹(shù)脂柱。先用5倍柱體積的蒸餾水沖洗柱子，再用3倍柱體積60%乙醇水溶液以2mL/min的流速洗脫，收集60%乙醇洗脫液，在45°C、0. IMPa下減壓濃縮，濃縮液經(jīng)
冷凍干燥，得到0. 33g粉紅色的海紅果多酚粉末，其中多酚純度為78%，F(xiàn)RAP值為20. 03。實(shí)施例3將海紅果去核、打漿，稱取40g海紅果漿，加入600mL的50%乙醇水溶液，混合，于85°C水浴中密閉浸提2h后，冷卻至室溫，過(guò)濾，殘?jiān)貜?fù)上述步驟浸提I次。將兩次浸提液合并，于45°C、真空度0. IMPa下濃縮除去乙醇，將多酚水溶液以2mL/min的流速泵入已平衡好的NKA-9大孔樹(shù)脂柱。先用5倍柱體積的蒸餾水沖洗柱子，再用2倍柱體積50%乙醇水溶液以2mL/min的流速洗脫，收集50%乙醇洗脫液，在45°C、0. IMPa下減壓濃縮，濃縮液經(jīng)冷凍干燥，得到0. 30g粉紅色的海紅果多酚粉末，其中多酚純度為80%，F(xiàn)RAP值為20. 51。
權(quán)利要求
1.一種從海紅果中提取多酚的方法，包括以下步驟 (1)將海紅果的果漿與乙醇水溶液混合，然后置于水浴中提取，得到提取液； (2)將所述提取液過(guò)濾，從得到的濾液中除去乙醇，得到濃縮的多酚粗提液； (3)將所述多酚粗提液加入已平衡好的大孔吸附樹(shù)脂柱，先用蒸餾水沖洗柱子，再用50-70體積％的乙醇水溶液洗脫，收集乙醇水溶液的洗脫液； (4)從所述洗脫液中除去乙醇，得到濃縮的洗脫液； (5)將所述濃縮的洗脫液干燥，得到海紅果多酚粉末。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述海紅果的果漿是通過(guò)將海紅果去核并且不加水直接打漿而制得的。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于在步驟(I)中，所述乙醇水溶液的濃度為50-70體積％，海紅果的果漿與乙醇水溶液的重量比為I : 8至I : 20，所述水浴的溫度為60-90°C，提取的時(shí)間為1-10小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于在步驟(2)中，通過(guò)減壓濃縮從所述濾液中除去乙醇，所述減壓濃縮的溫度為40-55°C、真空度為0. 05-0. IMPa0
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于在步驟(3)中，所述大孔吸附樹(shù)脂柱為NKA-9柱，當(dāng)流出液中多酚濃度為上樣液中濃度的1/10時(shí)，停止上樣，然后用3-5倍柱體積的蒸餾水沖洗柱子，再用2-6倍柱體積的所述乙醇水溶液洗脫。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于在步驟(4)中，通過(guò)減壓濃縮從所述洗脫液中除去乙醇，所述減壓濃縮的溫度為40-55°C、真空度為0. 05-0. IMPa0
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于在步驟(5)中，所述干燥為真空冷凍干燥，真空冷凍干燥的溫度為_(kāi)50°C至_60°C、壓力為20-100Pa。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種從海紅果中提取多酚的方法，包括以下步驟(1)將海紅果的果漿與乙醇水溶液混合，然后置于水浴中提取，得到提取液；(2)將所述提取液過(guò)濾，從得到的濾液中除去乙醇，得到濃縮的多酚粗提液；(3)將所述多酚粗提液加入已平衡好的大孔吸附樹(shù)脂柱，先用蒸餾水沖洗柱子，再用50-70體積％的乙醇水溶液洗脫，收集乙醇水溶液的洗脫液；(4)從所述洗脫液中除去乙醇，得到濃縮的洗脫液；(5)將所述濃縮的洗脫液干燥，得到海紅果多酚粉末。利用本發(fā)明所提取的海紅果多酚產(chǎn)品純度可達(dá)70％以上，其抗氧化活性明顯增強(qiáng)，而且本發(fā)明的方法工藝簡(jiǎn)單，易于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A61K131/00GK102764316SQ20111011727
公開(kāi)日2012年11月7日 申請(qǐng)日期2011年5月6日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月6日
發(fā)明者丁慶波, 任發(fā)政, 楊海鶯, 王冶, 程正濤, 郭慧媛 申請(qǐng)人:中糧集團(tuán)有限公司