專利名稱：油茶蒲提取物的用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及油茶蒲提取物的新用途，具體涉及油茶蒲提取物用于制備藥品、保健 品和日化用品，治療5 α -還原酶相關疾病的應用。
背景技術：
5α-還原酶(5 α -reductase, 5AR)是依賴NADPH的酶，在體內能催化睪酮⑴生 成活性更強的二氫睪酮(DHT)。抑制該酶的活性，可減少DHT的生成，進而影響與DHT相關 的疾病，如前列腺增生、前列腺癌、痤瘡、男性脫發(fā)等。5α-還原酶有三種同工酶，5 α-還原 酶I和5 α -還原酶II和5 α -還原酶III。其中I型酶主要在非生殖性的組織中表達，如 肝臟和非生殖器皮膚；II型酶主要在生殖性的組織中表達，如前列腺、生殖器皮膚、附睪、 精囊、睪丸等；III型酶具體的特征和功能還需進一步確定。研究表明，5 α-還原酶在體內的表達與前列腺增生、前列腺癌、痤瘡等疾病密切相 關，并且5 α -還原酶抑制劑可很好地治療上述疾病。在增生的前列腺中，I型5 α -還原酶 和II型5 α -還原酶mRNA的表達明顯比正常前列腺組織中高，且II型5 α -還原酶的表達 占主導。在前列腺癌組織中，無論是mRNA水平，還是蛋白質水平，I型5α-還原酶的表達 增強，而II型5 α -還原酶的表達減弱或不改變。另外，I型和II型5 α -還原酶在高等級 的前列腺癌組織中的表達均高于低等級的前列腺癌組織。而III型酶在良性前列腺組織中 呈低表達，在前列腺癌組織中呈高表達?？梢? α -還原酶的表達與前列腺增生及前列腺癌 的產生和惡化密切相關，抑制該酶的活性可明顯改善前列腺增生的癥狀，減輕前列腺癌的 癥狀并減小患病幾率。多次實驗證明，5 α-還原酶的抑制劑如度他雄胺和非那雄胺均能顯 著的減小前列腺的體積，減少前列腺增生癥的評分，增加最大尿流量，降低患者患急性尿潴 留和進行外科手術的風險。且上述兩種抑制劑可明顯的降低患者患前列腺癌的風險，減小 并抑制癌組織的生長。另外，5 α-還原酶在皮膚中廣泛分布并參與皮膚的類固醇激素代謝， 其活性表達異常可以引起男性脫發(fā)、女性多毛及痤瘡等病，在臨床上應用5 α -還原酶抑制 劑也取得很好的療效。油茶(Camelliaoleifera Abel)，屬于茶科(Theacae)、山茶屬(Camellia Linn) 多年生木本油料植物，為常綠灌木或小喬木，高3 細，有時可達Sm。其品種繁多，主要包 括普通油茶、浙江紅花油茶、廣寧紅花油茶、小葉油茶和華南油茶等。我國油茶資源豐富且 分布廣泛。全國油茶林約有4，000，OOOhm2，主要分布在西南和東南部各省。油茶果是油茶 的果實，為卵圓形，表面有長絨毛，由油茶蒲(也稱油茶果殼、油茶果皮和茶包)和油茶籽 (也稱茶子心)構成。其中油茶蒲的含量占油茶果的60%左右。油茶蒲中含有豐富的木質 素、多縮戊糖、鞣質和茶皂素等，作為油茶加工的副產物，通常作為燃料使用或被廢棄。有報 道指出將油茶蒲用于生產糠醛、木糖醇、活性炭、碳酸鉀和焦磷酸鉀等化工原料和栽培食用 菌，但對其生物活性和藥用價值的研究仍十分缺乏。所以加深對油茶蒲的開發(fā)和利用對振 興油茶產業(yè)、增加油茶的附加值、實現油茶副產物的綜合利用，具有深遠意義。油茶蒲提取物的制備已經屬于公知技術，例如可按照在專利《一種油茶蒲提取物及其制備方法和用途》中公開的方法進行制備相應的水提物或醇提物。

發(fā)明內容
本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種油茶蒲提取物的新用途，作為5α_還原酶 抑制劑，能用于治療因5 α -還原酶所導致的一系列疾病。為了解決上述技術問題，本發(fā)明提供一種油茶蒲提取物的用途，作為5 α-還原酶 抑制劑。作為本發(fā)明的油茶蒲提取物的用途的改進用于制備治療前列腺炎的藥物，用于 制備治療前列腺增生的藥物，用于制備治療前列腺癌的藥物，用于制備治療痤瘡的藥物或 日化產品，用于制備治療雄激素依賴性脫發(fā)的藥物或日化產品。作為本發(fā)明的油茶蒲提取物的用途的進一步改進油茶蒲提取物為油茶蒲水提取 物、油茶蒲醇提取物、油茶蒲水提取物的分離純化產物、或者油茶蒲醇提取物的分離純化產 物。本發(fā)明的發(fā)明人在研究過程中發(fā)現油茶蒲提取物具有抑制5α-還原酶的能力， 并能減輕大鼠前列腺增生癥狀，抑制前列腺癌細胞的生長，治療座瘡等功能，上述內容在本 發(fā)明之前從未被報道過。本發(fā)明所述的油茶蒲提取物(包括其分離純化產物)能應用于防治與5α-還原 酶相關疾病的保健食品、藥品和日化用品等領域。本發(fā)明提供了一種來源廣泛、安全有效、經濟適用的植物提取物——油茶蒲提 取物，對其在防治5α_還原酶相關疾病的作用進行了系統(tǒng)的研究，表明具有顯著的抑制 5 α-還原酶活性、抗前列腺增生、抗前列腺癌、抑制痤瘡的作用。先前大量的研究已表明油 茶蒲提取物具有顯著的抗自由基、抗氧化、抗輻射、保護心腦血管等生理和藥理活性，因此 其具有安全、無毒、性能穩(wěn)定、長期食用無副作用等優(yōu)點。綜合上述研究，可將其單獨或與其 它輔料復配制成保健食品、藥品或日化用品，用于5 α -還原酶相關疾病的防治。本發(fā)明的主要優(yōu)點在于1、確定了油茶蒲提取物抑制5 α-還原酶的活性，確定了油茶蒲提取物在防治與 5 α-還原酶相關疾病上的作用，如前列腺炎、前列腺增生、前列腺癌、座瘡等，拓展了其在保 健品、藥品和日化用品中的應用。2、利用了被廢棄的油茶蒲，有利于減少資源浪費和環(huán)境污染，有利于農民的增收。本發(fā)明的油茶蒲提取物作為5α_還原酶抑制劑，實際使用方法為口服或外敷，具 體使用劑量如下當用于治療前列腺炎時，每天口服用量為5 50mg/kg(體重)。當用于治療前列腺增生時，每天口服用量為5 50mg/kg(體重)。當用于治療前列腺癌時，每天口服用量為5 50mg/kg(體重)。當用于治療痤瘡時，在日化用品中的重量含量為十萬分之一到萬分之五。當用于治療雄激素依賴性脫發(fā)藥物時，在日化用品中的重量含量為十萬分之一到 萬分之五。


下面結合附圖對本發(fā)明的具體實施方式
作進一步詳細說明。圖1是丙酸睪酮致大鼠前列腺增生各組的病理學切片圖(X40)；注放大40倍前列腺組織切片圖A為正常組，B為模型組，C為油茶蒲低劑量組， D為油茶蒲高劑量組，E為非那雄胺組；圖2是不同濃度油茶蒲50%乙醇提取物及三個分級相對PC-3細胞生長的抑制作 用圖；圖3是正丁醇相及其大孔樹脂洗脫物對PC-3細胞生長的抑制作用圖；圖4是60AL分別在M、48、72h對PC-3細胞的抑制作用圖；圖5是80AL分別在M、48、72h對PC-3細胞的抑制作用圖。
具體實施例方式下面通過實例對本發(fā)明作進一步闡述。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而 不用于限制本發(fā)明的范圍。除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學用語與本領域熟 練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內容相似或均等的方法及材料皆可應用于 本發(fā)明方法中。文中所述的較佳的實施方法與材料僅作示范之用。1、油茶蒲提取物對5 α -還原酶的抑制作用1.15 α-還原酶的制備取清潔級雌性SD大鼠3只，禁食不禁水過夜后脫頸椎處死，取出肝臟冰臺上剪碎。 用預冷的緩沖液1 5(肝臟質量g 緩沖液體積mL)勻漿，在4°C下，10，000g~|l5min， 取胞漿部分做100，OOOg離心lh，沉淀即為粗微粒提取物，加入緩沖液(體積為前次緩沖液 加入量的1/10)，勻漿，作為酶提取液?？捡R斯亮藍法測定蛋白質的含量作為5 α -還原酶的 量。分裝，-80°C冰箱保存。提酶緩沖液0. 32M蔗糖，0. ImM DTT, ImM EDTA，20mM磷酸鈉，其余為去離子水，pH6. 5。1.25 α-還原酶活性測定方法在每anL緩沖溶液中含有睪酮T 20 μ M, NADPH 40 μ Μ,酶提取液216mg，DTT ImM、 磷酸鈉40mM、其余為去離子水、pH 6. 5中，在37°C的溫度下，反應％iin。以NADPH在340nm 處吸光值下降速率為酶的活性。1. 3油茶蒲提取物的制備油茶果殼經挑選后熱風干燥，粉碎過60目篩子，按體積比1 10加入50%乙醇溶 液，40°C 60°C超聲30min，過濾，濾液50°C減壓濃縮至干粉，制備得油茶蒲醇提取物。稱取一定量10. Og的油茶蒲提取物，用IOOOmL水配制成懸浮液，依次用與水量相 等體積的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇各萃取3次(先用石油醚萃取3次，再用乙酸乙酯萃取 3次，最后用正丁醇萃取3次；每種萃取液每次的用量=水的體積)。各不同極性的萃取液合 并后用旋轉蒸發(fā)儀濃縮至干粉，即得石油醚相、乙酸乙酯相，正丁醇相和剩余的水分級相。稱取一定量5. Og的正丁醇相，用水5mL配制成懸浮液，過DlOl大孔吸附樹脂，分 別用2倍柱體積的水、20% (體積濃度)乙醇、40%乙醇、60%乙醇、80%乙醇、100%乙醇梯 度洗脫，各洗脫相用旋轉蒸發(fā)儀濃縮至干粉。1. 4實驗結果
取油茶蒲提取物及其分離純化產物，濃度為10 μ g/mL時(以1. 2中所述的緩沖溶 液作為溶劑)測定其對5α_還原酶的抑制活性，結果見表1?？梢?0%醇提取物經分級萃 取后，正丁醇相活性最高，剩余活性僅有20. 71 %。正丁醇相過大孔樹脂乙醇洗脫，40%乙醇 洗脫物活性最高，剩余活性僅有3. 18%。實驗方法按照1. 2。表1油茶蒲提取物及其分離純化部分對5 α -還原酶的抑制活性油茶蒲提取物剩余活性
50%醇提物54.92%
乙酸乙酯相30.58%
正丁醇相20.71%
水相96.60%
20AL77.65%
40AL3.18%
60AL66.21%
80AL84.40%注“20AL”代表20%乙醇洗脫而得，其余類同。2、油茶蒲提取物對丙酸睪酮致大鼠前列腺增生的作用2. 1實驗方法取雄性SD大鼠50只，每只體重220 250g，隨機取出10只為空白組。另40只用 2%戊巴比妥鈉麻醉后，常規(guī)消毒皮膚，經陰囊摘除雙側睪丸，殘端處結扎，以確保止血，縫 合皮膚，肌肉注射青霉素20萬U/只，連續(xù)3天。1周后，將去睪丸大鼠隨機分為4組，每組10 只，分別為模型組、非那雄胺陽性對照組、油茶蒲提取物高劑量組、油茶蒲提取物低劑量組， 分籠飼養(yǎng)。除空白組外，其余大鼠每天皮下注射丙酸睪丸酮Smg^kg-1O). lml/100g體重)。 并同時分別灌胃給藥，模型組以生理鹽水0. 4ml/100g體重灌胃，樣品高劑量組給予水提液 500mg · kg—1 · cT1 (0. 4ml/100g 體重)，樣品劑量組給予水提液 200mg · kg—1 · cf1 (0. 4ml/100g 體重)，非那雄胺組灌胃非那雄胺Img · kg-1 · cf1 (0. 4ml/100g體重)，連續(xù)用藥30天。2. 2檢測指標在給藥期間第22d，用代謝籠收集大鼠24h代謝尿量。于末次給藥24h后，稱取各組大鼠重量，解剖分離出大鼠前列腺用分析天平稱重， 計算前列腺指數(前列腺濕重mg/體重g)。前列腺組織立即用10%甲醛固定，取腹葉，HE染色，光鏡觀察下觀察各前列腺組 織的細胞學形態(tài)。大鼠肝臟冰臺上剪碎。用預冷的緩沖液1 5(肝臟質量g 緩沖液體積mL)勻 漿，在4°C下，10，OOOg勻漿15min，取上清液作為5α-還原酶粗酶。在含睪酮T 20 μ Μ, NADPH40 μ Μ, DTT ImM,磷酸鈉40mM，pH 6. 5的緩沖溶液中，加入此酶提取液40 μ L，在37°C 的溫度下，反應細in，測定反應速率，作為大鼠肝臟5 α -還原酶的活力。2. 3實驗結果
從前列腺指數結果表明，大鼠良性前列腺增生模型造模成功，P < 0.01o陽性對 照，試樣低劑量，高劑量均可減少增生前列腺的重量，但未達到顯著性差異。具體如表2所 表2油茶蒲提取物對大鼠前列腺指數的影響
權利要求
1.油茶蒲提取物的用途，其特征是作為5α -還原酶抑制劑。
2.根據權利要求1所述的油茶蒲提取物的用途，其特征是在制備治療前列腺炎藥物 中的應用。
3.根據權利要求1所述的油茶蒲提取物的用途，其特征是在制備治療前列腺增生藥 物中的應用。
4.根據權利要求1所述的油茶蒲提取物的用途，其特征是在制備治療前列腺癌藥物 中的應用。
5.根據權利要求1所述的油茶蒲提取物的用途，其特征是在制備治療痤瘡藥物或日 化產品中的應用。
6.根據權利要求1所述的油茶蒲提取物的用途，其特征是在制備治療雄激素依賴性 脫發(fā)藥物或日化產品中的應用。
7.根據權利要求廣6中任意一種油茶蒲提取物的用途，其特征是所述油茶蒲提取物 為油茶蒲水提取物、油茶蒲醇提取物、油茶蒲水提取物的分離純化產物、或者油茶蒲醇提取 物的分離純化產物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種油茶蒲提取物的用途，作為5α-還原酶抑制劑。油茶蒲提取物可用于制備治療前列腺炎的藥物，用于制備治療前列腺增生的藥物，用于制備治療前列腺癌的藥物，用于制備治療痤瘡的藥物或日化產品，或者用于制備治療雄激素依賴性脫發(fā)的藥物或日化產品。
文檔編號A61P17/14GK102139019SQ20111007433
公開日2011年8月3日 申請日期2011年3月26日 優(yōu)先權日2011年3月26日
發(fā)明者吳曉琴, 李利勉, 沈建福, 羅曉偉, 肖仁顯, 車璐, 陳忠海, 陳秋平 申請人:浙江大學