專利名稱：油酸在制備抗hpv藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了一種油酸在制備治療抗HPV藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
人類乳突病毒(Human Papillomavirus，簡稱HPV)是一種嗜上皮性病毒，有高度的特異性，長期以來，已知HPV可引起人類良性的腫瘤和撫，如生長在生殖器官附近皮膚和粘膜上的人類尋常疣、尖銳濕疣以及生長在粘膜上的乳頭狀瘤。像乙肝病毒一樣，HPV也是一種DNA病毒。它原是多瘤空泡病毒科的一員，1999年國際病毒分類委員會(ICTV)取消多瘤空泡病毒科，代之以乳頭瘤病毒科，因此，HPV便歸屬此門下。人類乳頭狀瘤病毒(HPV)引起的性傳染極為普遍，單是美國就有兩千萬人染得此病。HPV(人乳頭瘤病毒)是繼“世紀絕癥”艾滋病后的一種無藥可救的性病，不論男女都有可能感染HPV，女性染病后甚至可引致子宮頸癌。由于HPV通過皮膚直接傳染，使用安全套也無法預(yù)防。全世界有四億四千萬的人口受到HPV的感染，每年至少有五十萬的婦女被診斷有子宮頸癌，這些大部分發(fā)生在開發(fā)中的國家。HPV是引起子宮頸癌與生殖器疣，俗稱“菜花” 的元兇，在一百多種的HPV類型當中，已經(jīng)知道有37種靠性接觸傳染，能夠?qū)е滦圆?。它們廣泛存在于成年人族群，來無影去無蹤，沒有任何癥狀。第6和第11類型可以引起男女兩性的生殖器疣。這種疣本身并非癌癥，但是它造成的疼痛和心理創(chuàng)傷非言語所能形容。但是，迂回感染了高風險的HPV類型就可以導(dǎo)致子宮頸癌、其它生殖器癌或肛門癌。這些高風險的類型大約有19種之多，其中以造成子宮頸癌的第16和第18類型最為常見。子宮頸癌是一個感染性疾病，它是可以預(yù)防，可以治療、治愈和消滅的。子宮頸癌是由于人乳頭瘤病毒感染引起的。如果能夠預(yù)防HPV感染，就可以說能夠預(yù)防子宮頸癌；如果沒有HPV感染，可以說不會得宮頸癌。這是已有定論的，這是在會上得到公認的。這里講的宮頸癌，就是指子宮頸的浸潤癌，簡稱CC。一般來講，宮頸癌就是浸潤癌；其他的癌前病變，就叫CIN，包括宮頸的原位癌，把它歸在CIN3里面。如果是浸潤癌，就叫子宮頸癌了。油酸(oleic acid)，學(xué)名(Z)-9_十八烯酸；順-9-十八烯酸；十八烯酸；順式-9-十八烯酸；順式十八碳-9-烯酸。分子式C18H34O2,結(jié)構(gòu)簡式CH3 (CH2) 7CH = CH(CH2)7COOH15純油酸為無色油狀液體，有動物油或植物油氣味，久置空氣中顏色逐漸變深， 工業(yè)品為黃色到紅色油狀液體，有豬油氣味。油酸主要用作工業(yè)原料，也可用作農(nóng)藥乳化劑、印染助劑、工業(yè)溶劑、金屬礦物浮選劑、脫模劑、油脂水解劑等。目前油酸抗HPV的用途未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本申請的發(fā)明人意外發(fā)現(xiàn)，油酸具有抗HPV的作用。因此，本發(fā)明提供油酸在制備抗HPV藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明還提供油酸在制備預(yù)防或治療HPV相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明中，油酸是通過抑制角質(zhì)形成細胞增殖來預(yù)防或治療HPV相關(guān)疾病的。本發(fā)明中，油酸是通過抑制成纖維細胞增殖來預(yù)防或治療HPV相關(guān)疾病的本發(fā)明所述的HPV相關(guān)疾病包括但不限于子宮頸癌、其它生殖器癌或肛門癌或生殖器疣。本發(fā)明所述的油酸優(yōu)選是藥學(xué)上可接受的純油酸，也可以是重量百分含量為 5% 99. 9%的油酸溶液。本發(fā)明的油酸可以從市場購置，也可以按照現(xiàn)有技術(shù)的方法獲得，例如以棉籽油或菜籽油為原料，采用“皂化酸化法”或“高壓水解法”獲得。例如，本發(fā)明的油酸可以按照如下方法獲得將棉籽油適量投入高壓水解釜內(nèi)，加入6倍于油脂的水，以及油量5%的氧化鋅， 用蒸氣升溫加壓，待壓力升至m^g/cm2時，停止蒸氣通入，并開少放空閥，保溫保壓進行水解反應(yīng)。當壓力變化時，則需升壓。如此保溫保壓反應(yīng)10小時后，停止加壓升溫，逐漸加大放空量，直到壓力為常壓時，靜置1小時從水解釜底部開始出料。首先放入甘油貯罐，并觀察當有油酸出現(xiàn)時，即將料放入油酸貯罐。兩貯罐靜置一小時后，將甘油罐上層油酸放入油酸罐，將油酸罐下層甘油水抽入甘油罐內(nèi)。待油酸冷卻至常溫時，抽入冷凍室進行冷凍壓榨或冷凍溶劑法分離，從而得到高純度油酸和被分離出的硬脂酸等。本發(fā)明的油酸溶液可以是用油酸配置的溶液，也可以是從天然植物中提取出來的提取物，例如可以是從鴉膽子提取出來的含油酸的鴉膽子脂溶性成分(鴉膽子油)。含油酸的鴉膽子油可以按照任何現(xiàn)有技術(shù)的方法獲得，優(yōu)選地，可以按照如下方法獲得(1)鴉膽子油的提取鴉膽子破碎果殼后，用體積為鴉膽子重量5倍量的石油醚提取2次，每次1小時，以70°C水浴加熱揮盡石油醚至恒重；(2)鴉膽子油的純化取步驟(1)的鴉膽子油加入石油醚稀釋，再加入活性炭，水浴回流，濾過，回收石油醚得無色鴉膽子油，以95%乙醇萃取3 5次，得95%乙醇萃取物。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)油酸對Hacat細胞增殖有抑制作用的趨勢，且隨藥物的作用時間延長，抑制的趨勢增大，表明油酸可以通過對人角質(zhì)形成細胞的增殖抑制作用而抑制HPV-DNA 的復(fù)制，從而起到治療CA的作用。


圖1藥理學(xué)PCR實驗工藝流程2HPV-DNA定量回歸直線圖3HPV-DNA擴增陽性標本結(jié)果4HPV-DNA擴增陰性標本結(jié)果5油酸回歸曲線圖6MTT法油酸對成纖維細胞的增殖影響作用圖7MTT法油酸對Hacat細胞的增殖影響作用圖8MTT法油酸對Hacat細胞的不同時間作用增殖影響圖A-以不同濃度為橫坐標，每一組柱圖從左向右分別是培養(yǎng)M小時、48小時和 72小時的A值；
圖B-以不同作用時間為橫坐標1-1% DMS0, 2-0. 00156g/ml 油酸，3-0. 00312g/ml 油酸，4-0. 00625g/ml 油酸，5-0. 0125g/ml 油酸，6-0. 025g/ml 油酸，7-0. 05g/ml 油酸
具體實施例方式為了說明本發(fā)明的油酸的抗HPV和相關(guān)疾病的作用，本發(fā)明提供了以下實驗含油酸的鴉膽子的抗HPV作用本實驗研究的油酸來源于苦木科植物鴉膽子Brucea jaVaniCa(L. )Merr的干燥成熟果實的提取物，具體研究內(nèi)容如下藥材鑒定鴉膽子的鑒定基于歷代“本草”對中藥形態(tài)特征的記述往往不十分詳盡和準確，致使中藥的品種混亂現(xiàn)象相當突出，同名異物，同物異名等始終未能澄清。這對中藥的生產(chǎn)、科研均有妨礙。 此外，中藥市場以次充好、以假亂真現(xiàn)象也較普遍，為了控制中藥質(zhì)量、保證中藥研究的可信度，中藥材的鑒別有著十分重要的意義，為此，我們根據(jù)《中國藥典2005年版第一部中鴉膽子的相關(guān)內(nèi)容，對本課題研究中所用的鴉膽子進行品種鑒定。1實驗藥材鴉膽子Q0080410)廣東康美藥業(yè)股份有限公司2實驗方法2. 1鑒定方法根據(jù)《中國藥典》2005年版第一部中鴉膽子的相關(guān)內(nèi)容規(guī)定，鴉膽子的品種鑒定主要是從性狀和與其它物質(zhì)鑒別兩方面。具體的標準、方法和結(jié)果見表1。表1鴉膽子的鑒定
權(quán)利要求
1.油酸在制備抗HPV藥物中的應(yīng)用。
2.油酸在制備預(yù)防或治療HPV相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。
3.如權(quán)利要求2的應(yīng)用，其中油酸是通過抑制角質(zhì)形成細胞增殖來預(yù)防或治療HPV相關(guān)疾病的。
4.如權(quán)利要求2的應(yīng)用，其中油酸是通過抑制成纖維細胞增殖來預(yù)防或治療HPV相關(guān)疾病的。
5.如權(quán)利要求2的應(yīng)用，其中所述的HPV相關(guān)疾病是子宮頸癌。
6.如權(quán)利要求2的應(yīng)用，其中所述的HPV相關(guān)疾病是子宮頸癌意外的其它生殖器癌。
7.如權(quán)利要求2的應(yīng)用，其中所述的HPV相關(guān)疾病是肛門癌。
8.如權(quán)利要求2的應(yīng)用，其中所述的HPV相關(guān)疾病是生殖器疣。
9.如權(quán)利要求1-8的應(yīng)用，其中所述的油酸是重量百分含量為5% 99.9%的油酸溶液。
10.如權(quán)利要求9的應(yīng)用，其中所述的油酸溶液是含油酸的鴉膽子油。
11.如權(quán)利要求10的應(yīng)用，其中所述的鴉膽子油是按照下述方法獲得的(1)鴉膽子油的提取鴉膽子破碎果殼后，用體積為鴉膽子重量5倍量的石油醚回流提取2次，每次1小時，以70°C水浴加熱揮盡石油醚至恒重；(2)鴉膽子油的純化取步驟(1)的鴉膽子油加入石油醚稀釋，再加入活性炭，水浴回流，濾過，回收石油醚得無色鴉膽子油，以95%乙醇萃取3 5次，得95%乙醇萃取物。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種油酸在制備治療抗HPV藥物中的應(yīng)用。
文檔編號A61P31/20GK102178669SQ20111007036
公開日2011年9月14日 申請日期2011年3月23日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月23日
發(fā)明者馮怡, 朱艷紅, 楊柳, 鄧遠輝, 陳秀朵, 韓凌 申請人:廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院