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一種具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方及其應(yīng)用的制作方法

文檔序號:1008444閱讀:276來源:國知局
專利名稱:一種具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種中藥復(fù)方,具體涉及一種具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方及其在制備 治療肝癌藥物中的應(yīng)用,本發(fā)明還涉及從中藥復(fù)方中提取得到的多糖及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)
統(tǒng)計(jì)資料表明,發(fā)病率占所有腫瘤疾病5%的肝癌,每年全球約有沈萬 新發(fā)病例,但5年生存率卻不足5 %。作為肝癌高發(fā)國之一的中國,肝癌死亡率近20年來甚 至呈上升趨勢。肝癌具有起病隱匿、進(jìn)展迅速、預(yù)后較差、生存期較短的特點(diǎn),在目前主要治 療手段如手術(shù)切除、放療、化療、介入等方法運(yùn)用下,治療效果十分有限,且費(fèi)用昂貴,病人 經(jīng)濟(jì)承受能力差。此外,放化療所引起副作用,也是臨床治療的瓶頸,作為肝癌綜合治療的 重要手段之一,中醫(yī)藥因其顯著的臨床療效,在肝癌等諸多癌癥的治療中發(fā)揮著無可替代 的作用。因此很有必要在傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下,研究開發(fā)出一種抗肝癌效果好,不良反 應(yīng)低,價(jià)格合理,易推廣應(yīng)用的中藥復(fù)方制劑。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足,提供 一種抗肝癌效果好,副作用小、服用方便的具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方,本發(fā)明的另一個(gè)目 的是提供從該中藥復(fù)方提取得到的多糖及其制備方法和其在制備治療肝癌藥物中的應(yīng)用。技術(shù)方案為了實(shí)現(xiàn)以上目的,本發(fā)明提供的具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方,它是由 下列重量份數(shù)的原料制成澤漆4 12份,漏蘆4 12份,莪術(shù)4 12份,黃芪5 15份, 阿膠4 12份。作為優(yōu)選方案,以上所述的具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方,它是由下列重量份數(shù)的 原料制成澤漆6 10份,漏蘆6 10份,莪術(shù)6 10份,黃芪8 12份,阿膠6 10份。作為優(yōu)選方案,以上所述的具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方,它是由下列重量份數(shù)的 原料制成澤漆6份,漏蘆6份,莪術(shù)6份,黃芪8份,阿膠6份。本發(fā)明在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下,辨證施治,結(jié)合肝癌的發(fā)病機(jī)理和發(fā)病癥狀,以抗 癌解毒、清熱利濕、理氣化瘀、化痰軟堅(jiān)法抗癌,以補(bǔ)益氣血,益氣養(yǎng)陰法扶正的治療法則進(jìn) 行篩選處方,經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)研究和臨床實(shí)踐,精選漏蘆、澤漆、莪術(shù)、黃芪、阿膠五味中藥進(jìn) 行組方,方中澤漆為雙子葉植物大戟科Euphorbiaceae澤漆Euphorbia helioscopia L.的 干燥全草,性微寒,味苦;歸大腸、小腸、肺經(jīng),具有利尿消腫,化痰散結(jié),殺蟲止癢之功效; 方中漏蘆為菊科植物祁州漏蘆.或禹州漏蘆的根,味苦咸,寒,具有清熱解毒,消癰,舒筋通 脈的功效;莪術(shù)味辛、苦,溫,歸肝、脾經(jīng),具有破血行氣止痛、行氣消積止痛、破血祛瘀止痛 的功效;黃芪性味甘,微溫,歸經(jīng)歸肺、脾、肝、腎經(jīng),具有益氣固表、斂汗固脫、托瘡生肌、 利水消腫之功效;阿膠味甘,平,歸肺、肝、腎經(jīng),具有補(bǔ)血,止血,滋陰潤燥之功效。全方中漏 蘆、澤漆、和莪術(shù)具有抗癌解毒、清熱利濕、理氣化瘀、化痰軟堅(jiān)的功效,而方中黃芪和阿膠 又具有補(bǔ)益氣血,益氣養(yǎng)陰之功效,整方對肝癌患者濕濁熱毒痰瘀互結(jié),肝脾兩傷,氣陰兩 虛,氣血雙虧具有很好的療效。
本發(fā)明還對以上所述的中藥復(fù)方進(jìn)行活性成分研究,提供一種具有抗肝癌作用的 多糖提取物,它是通過以下方法制備得到的取以上所述重量份數(shù)組成的中藥復(fù)方,加水煎 煮,過濾,取濾液濃縮,濃縮液加乙醇溶液混勻,放置沉淀、離心,取沉淀,得多糖粗提物,取 多糖粗提物加水加熱溶解,加入等量的氯仿-正丁醇萃取,劇烈振搖,靜置分層后,分離出 水層,去除有機(jī)層中間的凝膠物,如此反復(fù)直到凝膠物除盡為止,最后收集水溶液,濃縮、干 燥,得多糖提取物。以上所述的具有抗肝癌作用的多糖提取物的制備方法,具體包括以下步驟(1) 取以上所述重量份數(shù)組成的中藥復(fù)方,加水煎煮,過濾,取濾液濃縮,濃縮液加乙醇溶液混 勻,放置沉淀、離心,取沉淀,得多糖粗提物,備用;⑵取步驟⑴制備得到的多糖粗提物, 加水加熱溶解,加入等量的氯仿-正丁醇進(jìn)行萃取,劇烈振搖,靜置分層后,分離出水層,去 除有機(jī)層中間的凝膠物,如此反復(fù)直到凝膠物除盡為止,最后收集水溶液,濃縮、干燥,得多 糖提取物。作為優(yōu)選方案,以上所述的具有抗肝癌作用的多糖提取物的制備方法,步驟(1) 中加水量為中藥復(fù)方藥材量的10 15倍,煎煮次數(shù)為1至3次,每次煎煮0. 5 1小時(shí)。作為優(yōu)選方案,以上所述的具有抗肝癌作用的多糖提取物的制備方法,步驟(1) 中加入乙醇,使?jié)饪s液中乙醇的濃度達(dá)到70 85%進(jìn)行沉淀,該方法的操作目的是使多糖 物質(zhì)沉淀下來,從而和其它醇溶性雜質(zhì)相分離。本發(fā)明通過2至3次以上水溶醇沉法可以 有效的去掉醇溶性雜質(zhì),得到純度較高的多糖提取物。作為優(yōu)選方案,以上所述的具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方的制備方法,步驟O)中 采用體積比為5 1的氯仿-正丁醇進(jìn)行萃取,可以有效的將多糖中參雜的蛋白質(zhì)和色素 等雜質(zhì)去掉??梢赃M(jìn)一步提高多糖的純度,保證療效。本發(fā)明提供的具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方在制備治療肝癌藥物中的應(yīng)用,可以將 中藥復(fù)方提取物和藥學(xué)上可接受的載體制成膠囊劑、微囊、片劑、顆粒劑或口服液劑型的藥 物。本發(fā)明提供的具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方制成片劑時(shí)把具有抗肝癌作用的中藥 復(fù)方和載體乳糖或玉米淀粉,需要時(shí)加入潤滑劑硬脂酸鎂,混合均勻,然后壓片制成片劑。 本發(fā)明提供的具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方制成膠囊劑時(shí)把具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方和 載體乳糖或玉米淀粉混合均勻,整粒,然后裝膠囊制成膠囊劑。本發(fā)明提供的具有抗肝癌作 用的中藥復(fù)方制成顆粒劑時(shí),把具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方和稀釋劑乳糖或玉米淀粉混合 均勻,整粒,干燥,制成顆粒劑。本發(fā)明提供的具有抗肝癌作用的多糖提取物在制備治療肝癌藥物中的應(yīng)用,可以 將中藥復(fù)方中多糖提取物和藥學(xué)上可接受的載體制成膠囊劑、微囊、片劑、顆粒劑或口服液 劑型的藥物。有益效果本發(fā)明提供的具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方和現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu) 點(diǎn)(1)本發(fā)明提供的具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方,根據(jù)中醫(yī)藥理論和肝癌的發(fā)病機(jī)制選 取原料配伍組方,各組份配比科學(xué)合理,藥理實(shí)驗(yàn)和臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明提供的中藥 復(fù)方具有很好的抗肝癌的作用,不僅能明顯改善患者的自覺癥狀,提高生存率,改善生化指 標(biāo),縮小病灶范圍,且長期使用無不良反應(yīng),且本發(fā)明提供的具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方可 以方便的和藥學(xué)上可接受的載體制備成各種劑型的藥物,方便臨床服用。
(2)本發(fā)明對中藥復(fù)方活性成分進(jìn)行研究,從中藥復(fù)方中分離得到具有抗肝癌作 用的多糖提取物,本發(fā)明還提供了中藥復(fù)方多糖提取物的制備方法,該方法可操作性強(qiáng),所 制備得到的多糖純度高,能達(dá)90%,且制備方法成本低、環(huán)保、可實(shí)現(xiàn)工業(yè)化大生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式根據(jù)下述實(shí)施例,可以更好地理解本發(fā)明。然而,本領(lǐng)域的技術(shù)人 員容易理解,實(shí)施例所描述的具體的物料配比、工藝條件及其結(jié)果僅用于說明本發(fā)明,而不 應(yīng)當(dāng)也不會限制權(quán)利要求書中所詳細(xì)描述的本發(fā)明。實(shí)施例1具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方,它是由下列重量份數(shù)的原料制成取澤漆 12g,漏蘆12g,莪術(shù)12g,黃芪15g,阿膠12g,加15倍量水煎煮2次,每次1小時(shí),過濾收集提 取液,濃縮到0. 5g生藥/ml,得到中藥復(fù)方水提取物。取中藥復(fù)方水提取物20g加入藥用淀 粉16g,混合均勻,加水制成軟材,過20目篩制粒,干燥,制成顆粒,裝入膠囊,每粒0. 2g,實(shí) 施例2具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方,它是由下列重量份數(shù)的原料制成取澤漆6g,漏蘆6g, 莪術(shù)6g,黃芪8g,阿膠6g,加10倍量水煎煮3次,每次0. 5小時(shí),過濾收集提取液,濃縮到 0.5g生藥/ml,得到中藥復(fù)方水提取物。取中藥復(fù)方水提取物20g加入乳糖IOg或玉米淀 粉IOg混合均勻,整粒,干燥,制成顆粒劑。實(shí)施例3具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方,它是由下列重量份數(shù)的原料制成取澤漆 4g,漏蘆4g,莪術(shù)4g,黃芪5g,阿膠4g,加12倍量水煎煮2次,每次1小時(shí),過濾收集提取 液,濃縮到0. 5g生藥/ml,得到中藥復(fù)方水提取物。取中藥復(fù)方水提取物20g加入玉米淀粉 20g,加入潤滑劑硬脂酸鎂5g,混合均勻,然后壓片制成片劑。實(shí)施例4具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方,它是由下列重量份數(shù)的原料制成取澤漆 IOg,漏蘆10g,莪術(shù)10g,黃芪12g,阿膠10g,加12倍量水煎煮2次,每次1小時(shí),過濾收集 提取液,濃縮到0. 5g生藥/ml,得到中藥復(fù)方水提取物。取中藥復(fù)方水提取物加蒸餾水溶 解,加入糖漿制成口服液。實(shí)施例5具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方多糖提取物的制備(1)取實(shí)施例1制備得到 的中藥復(fù)方水提取物,加入乙醇,混勻,使乙醇的濃度達(dá)80%,放置沉淀12小時(shí)、離心,取沉 淀,然后加水溶解,再重復(fù)以上水溶醇沉3次,得到得多糖粗提物,備用;(2)取步驟⑴制 備得到的多糖粗提物,加水加熱溶解,加入等量的體積比為5 1的氯仿-正丁醇進(jìn)行萃 取,劇烈振搖20分鐘,靜置分層后,分離出水層,去除有機(jī)層中間的凝膠物,如此反復(fù)直到 凝膠物除盡為止,最后收集水溶液,將上層水液濃縮至IOg生藥/ml,60°C真空干燥,得中藥 復(fù)方多糖提取物。實(shí)施例6具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方多糖提取物的制備(1)取實(shí)施例2制備得到 的中藥復(fù)方水提取物,加入乙醇,混勻,使乙醇的濃度達(dá)85 %,放置沉淀12小時(shí)、離心,取沉 淀,然后加水溶解,再重復(fù)以上水溶醇沉4次,得到得多糖粗提物,備用;(2)取步驟⑴制 備得到的多糖粗提物,加水加熱溶解,加入等量的體積比為5 1的氯仿-正丁醇進(jìn)行萃 取,劇烈振搖20分鐘,靜置分層后,分離出水層,去除有機(jī)層中間的凝膠物,如此反復(fù)直到 凝膠物除盡為止,最后收集水溶液,將上層水液濃縮至IOg生藥/ml,60°C真空干燥,得中藥 復(fù)方多糖提取物。實(shí)施例7具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方多糖提取物的制備(1)取實(shí)施例3制備得到 的中藥復(fù)方水提取物,加入乙醇,混勻,使乙醇的濃度達(dá)75%,放置沉淀12小時(shí)、離心,取沉 淀,然后加水溶解,再重復(fù)以上水溶醇沉4次,得到得多糖粗提物,備用;(2)取步驟⑴制備得到的多糖粗提物,加水加熱溶解,加入等量的體積比為5 1的氯仿-正丁醇進(jìn)行萃 取,劇烈振搖20分鐘,靜置分層后,分離出水層,去除有機(jī)層中間的凝膠物,如此反復(fù)直到 凝膠物除盡為止,最后收集水溶液,將上層水液濃縮至IOg生藥/ml,60°C真空干燥,得中藥 復(fù)方多糖提取物。實(shí)施例8抗肝癌實(shí)驗(yàn)研究對人肝癌SMMZ-7721的增殖抑制作用SMMC_7721在含 10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液,37°C,5% CO2條件下培養(yǎng),隔天換培養(yǎng)液。待細(xì)胞單層 鋪滿培養(yǎng)瓶后,用0. 25%胰蛋白酶消化,2 ;3min后,待鏡下細(xì)胞圓縮,細(xì)胞間出現(xiàn)較多縫 隙時(shí),即加入完全RPMI-1640培養(yǎng)液終止消化,并用尖吸管輕輕吹打成單個(gè)細(xì)胞懸液,鏡下 計(jì)數(shù),細(xì)胞約IO7個(gè)/L,按1 2加培養(yǎng)液分瓶,傳代。取對數(shù)生長期SMMC-7721細(xì)胞,消化、重懸,調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為5 X IO4個(gè)/mL,接種 至4個(gè)平行的96孔培養(yǎng)板,每孔0. 2mL,繼續(xù)培養(yǎng)M小時(shí)后,每6孔為一組,吸棄細(xì)胞培養(yǎng) 液,每組添加由細(xì)胞培養(yǎng)液配制成由實(shí)施例1和2制備得到的中藥復(fù)方提取物,和實(shí)施例5 和6制備得到的中藥復(fù)方多糖提取物,每孔0. 2mL,另有6孔對照組,每孔加入0. 2mL細(xì)胞 培養(yǎng)液。分別于培養(yǎng)M小時(shí)后,吸棄培養(yǎng)液,每孔添加新細(xì)胞培養(yǎng)液0. 2mL,并加入20 μ L 5mg/mL的MTT (用PBS配制),繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)后,吸棄培養(yǎng)液,每孔加入0. 15mLDMS0,振搖 30min,充分溶解細(xì)胞內(nèi)生成的紫色甲臜結(jié)晶,于490nm下測定每孔吸光度(0D值)。具體實(shí) 驗(yàn)結(jié)果見表1和表2。表1中藥復(fù)方提取物對SMMC-7721細(xì)胞抑制率(X士SD,η= 6)
加藥組剤空白組中藥夏OT取物(β例 1)中藥M提取物(《例 Ξ)10OD值〇D值抑制率(%)OD值抑制率C%)11.102 士 0.150.431 士 0.0T60.890.438+0.09"60.820.153.790.642±0.1Γ52.830.73^0.04*33.580.738±0.12*33.42
注*與空白對照組相比P < 0. 01由表1的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,本發(fā)明提供的中藥復(fù)方可顯著 抑制人肝癌SMMZ-7721細(xì)胞的增殖,具有很好的抗肝癌作用,有望制備成新的抗肝癌藥物。
表2中藥復(fù)方多糖提取物對人肝癌SMMZ-7721細(xì)胞抑制率(X士 SD,η = 6)
權(quán)利要求
1.一種具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方,其特征在于,它是由下列重量份數(shù)的原料制成澤漆4 12份,漏蘆4 12份,莪術(shù)4 12份,黃芪5 15份,阿膠4 12份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方,其特征在于,它是由下列重量 份數(shù)的原料制成澤漆6 10份,漏蘆6 10份,莪術(shù)6 10份,黃芪8 12份,阿膠6 10份。
3.一種具有抗肝癌作用的多糖提取物,其特征在于,它是通過以下方法制備得到的 取權(quán)利要求1或2所述重量份數(shù)的中藥復(fù)方,加水煎煮,過濾,取濾液濃縮,濃縮液加乙醇溶 液混勻,放置沉淀、離心,取沉淀,得多糖粗提物,取多糖粗提物加水加熱溶解,加入等量的 氯仿-正丁醇萃取,劇烈振搖,靜置分層后,分離出水層,去除有機(jī)層中間的凝膠物,如此反 復(fù)直到凝膠物除盡為止,最后收集水溶液,濃縮、干燥,得多糖提取物。
4.權(quán)利要求3所述的具有抗肝癌作用的多糖提取物的制備方法,其特征在于包括以下 步驟(1)取權(quán)利要求1或2所述重量份數(shù)的中藥復(fù)方,加水煎煮,過濾,取濾液濃縮,濃縮液 加乙醇溶液混勻,放置沉淀、離心,取沉淀,得多糖粗提物,備用;(2)取步驟(1)制備得到的多糖粗提物,加水加熱溶解,加入等量的氯仿-正丁醇進(jìn)行 萃取,劇烈振搖,靜置分層后,分離出水層,去除有機(jī)層中間的凝膠物,如此反復(fù)直到凝膠物 除盡為止,最后收集水溶液,濃縮、干燥,得多糖提取物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的具有抗肝癌作用的多糖提取物的制備方法,其特征在于,步 驟(1)中加水量為中藥復(fù)方藥材量的1(Γ15倍,煎煮次數(shù)為1至3次,每次煎煮0. 5^1小時(shí)。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的具有抗肝癌作用的多糖提取物的制備方法,其特征在于,步 驟(1)中加入乙醇,使?jié)饪s液中乙醇的濃度達(dá)到7(Γ85%進(jìn)行沉淀。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方的制備方法,其特征在于,步驟 (2)中所述的氯仿-正丁醇的體積比為5:1。
8.權(quán)利要求1或2所述的具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方在制備治療肝癌藥物中的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方在制備治療肝癌藥物中的應(yīng)用, 其特征在于把中藥復(fù)方提取物和藥學(xué)上可接受的載體制成膠囊劑、微囊、片劑、顆粒劑或口 服液劑型的藥物。
10.權(quán)利要求3所述的具有抗肝癌作用的多糖提取物在制備治療肝癌藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方及其應(yīng)用,該中藥復(fù)方由4~12份澤漆,4~12份漏蘆,4~12份莪術(shù),5~15份黃芪和4~12份阿膠制成。本發(fā)明提供的具有抗肝癌作用的中藥復(fù)方,根據(jù)中醫(yī)藥理論和肝癌的發(fā)病機(jī)制選取原料配伍組方,各組份配比科學(xué)合理,藥理實(shí)驗(yàn)和臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明提供的中藥復(fù)方具有很好的抗肝癌的作用,不僅能明顯改善患者的自覺癥狀,提高生存率,改善生化指標(biāo),縮小病灶范圍,且臨床服用方便,長期使用無不良反應(yīng),有望開發(fā)成為新一代抗肝癌的藥物。
文檔編號A61K36/9066GK102091302SQ20111006524
公開日2011年6月15日 申請日期2011年3月17日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月17日
發(fā)明者葉麗紅, 張旭, 彭海燕, 皮文霞, 章永紅, 趙冬耕, 駱丹 申請人:南京中醫(yī)藥大學(xué)
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