專(zhuān)利名稱(chēng)：從金銀花葉中提取活性成分的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從中藥材葉中提取活性成分的方法，尤其涉及一種從金銀花葉中提取活性成分的方法。
背景技術(shù)：
金銀花是一種常用中藥材，其主要活性成分為綠原酸和異綠原酸，其他活性成分還有黃酮類(lèi)、揮發(fā)油等，具有抑菌、抗病毒、解熱、抗炎、保肝、止血、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等作用。幾千年傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)及近代藥理實(shí)驗(yàn)和臨床應(yīng)用都證明金銀花對(duì)于多種病菌有較強(qiáng)的抗菌作用和較好的治療效果?，F(xiàn)有技術(shù)中關(guān)于金銀花活性成分和有效部位的提取，僅僅利用金銀花花蕾為原料，以甲醇、乙醚或乙酸乙酯為提取溶劑，主要包括直接煎煮法、浸漬法、熱回流法等，并且各種提取方法仍為傳統(tǒng)的水提醇沉或醇提水沉，在后續(xù)處理中產(chǎn)生大量沉淀，不僅使得綠原酸等活性成分大量損失，還給過(guò)濾等工藝操作帶來(lái)較大的困難，耗時(shí)耗能。另外，這些方法均具有提取周期長(zhǎng)，所用溶劑具有毒性、用量大，要求溫度高致使活性成分降解等諸多缺點(diǎn)，并且最終的目標(biāo)產(chǎn)品提取率和回收率很低。因此傳統(tǒng)的加工工藝沒(méi)有能充分利用金銀花中的活性成分，從而大大降低了其應(yīng)用價(jià)值，造成很大的資源浪費(fèi)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有技術(shù)之缺陷，提供一種從金銀花葉中提取活性成分的方法，該方法具有工藝簡(jiǎn)單、成本低、易操作、提取物中有機(jī)酸含量高、適合工業(yè)化生產(chǎn)等特點(diǎn)。本發(fā)明所述技術(shù)問(wèn)題是由以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的 一種從金銀花葉中提取活性成分的方法，它按如下步驟進(jìn)行
a.鮮金銀花葉預(yù)處理將鮮金銀花的葉片于45-60°C干燥12-17小時(shí)后，粉碎成40-300 目的粉末，冷藏保存，備用；
b.超臨界C02萃取
將步驟a中所得粉末裝入萃取釜中，萃取溫度25 35°C，萃取壓力20 60 MPa, C02 流速10 25 kg/h ；
萃取物在分離釜中進(jìn)行兩級(jí)減壓分離，一級(jí)分離釜的壓力為10 18 MPa,溫度為25 35 0C ；二級(jí)分離釜壓力為5 8 MPa，溫度為25 50°C，收集產(chǎn)物，備用；
c.超聲波強(qiáng)化浸提將步驟b所得產(chǎn)物按重量比加入3 10倍的提取溶劑，超聲波強(qiáng)化浸提溫度為20 50°C，超聲功率為120 250w，超聲時(shí)間為30 60min ；浸提液在_5 0°C、以 5000 r/min 速度離心 10 20 min ；
然后沉淀部分加入3 5倍重量比的提取溶劑，重復(fù)上述步驟；合并所得上清液，備
用；
d.濃縮上清液將步驟c所得上清液在50 60°C，0.OlMPa下減壓蒸發(fā)并真空干燥得
3膏狀物，備用；
e.制得活性成分將步驟d所得膏狀物用蒸餾水進(jìn)行溶解，再用酸調(diào)節(jié)PH值為1 7 (以便使被分離物符合大孔樹(shù)脂分離要求)，上大孔吸附樹(shù)脂分離，依次以0. 5-1. Oml/min的流速用水、乙醇水溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，再用有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取，減壓回收有機(jī)溶劑，最后得到活性成分。上述從金銀花葉中提取活性成分的方法，其中， 步驟a中所述冷藏溫度為0-20°C ；
步驟c中所述提取溶劑為無(wú)水乙醇或丙酮；
步驟e中所述蒸餾水與膏狀物的重量比W浸膏W蒸餾水=1 :10-25 ；所述調(diào)節(jié)pH值用酸為濃鹽酸，其濃度為30%-36. 5% ；所述大孔吸附樹(shù)脂為DlOl大孔吸附樹(shù)脂或AB-8大孔吸附樹(shù)脂；所述乙醇水溶液其體積濃度為50% 90% ；所述有機(jī)溶劑為乙酸乙酯、正丁醇或異戊醇。本發(fā)明首次提出綜合利用的思想，以金銀花葉片作為提取活性成分的原料，利用本發(fā)明技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)金銀花葉中活性成分的綜合利用，拓展金銀花植株的應(yīng)用價(jià)值。使用本發(fā)明提取技術(shù)所得活性成分中含有兩大類(lèi)，一類(lèi)是弱極性的脂溶性物質(zhì)，如芳樟醇、雙花醇、香葉醇等活性揮發(fā)油成分；另一類(lèi)是綠原酸、異綠原酸、黃酮類(lèi)化合物等強(qiáng)極性物質(zhì)。利用超臨界C02萃取技術(shù)既可以使附加值高的脂溶性活性揮發(fā)油成分得到回收利用，又相當(dāng)于為提取金銀花葉中有機(jī)酸等活性部位進(jìn)行脫脂預(yù)處理，不但有助于對(duì)金銀花葉揮發(fā)油的充分利用，更有助于有機(jī)酸的后期純化。首次運(yùn)用大孔吸附樹(shù)脂富集、溶劑萃取相結(jié)合的方法獲得有機(jī)酸含量高于50%的提取物，建立了一套較為科學(xué)合理的金銀花葉有機(jī)酸提取分離工藝流程。該技術(shù)減少了有機(jī)酸常規(guī)提取過(guò)程中因沉淀造成的損失，提高有機(jī)酸的回收率，使有機(jī)酸總提取率達(dá)到1. O 3. 0% ；減少了有機(jī)酸常規(guī)提取液在后期過(guò)濾中的困難； 在不影響有機(jī)酸總量的前提下，增加了金銀花葉中芳樟醇、雙花醇、香葉醇、總黃酮等的利用。該技術(shù)具有工藝簡(jiǎn)單、成本低、易操作、制取成品有機(jī)酸含量高等優(yōu)點(diǎn)，有機(jī)酸含量高達(dá) 68%，適于工業(yè)化生產(chǎn)，所得活性成分可用于保健品或藥品等諸多場(chǎng)合。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明做一步詳細(xì)說(shuō)明。實(shí)施例1
a.鮮金銀花葉預(yù)處理將500g鮮金銀花葉片于45°C干燥14小時(shí)后，粉碎成100目的粉末，于5°C條件下冷藏，備用；
b.超臨界C02萃取
將200g步驟a所得粉末裝入萃取釜中，萃取溫度35°C，萃取壓力55 MPa, C02流速15 kg/h;—級(jí)分離釜的壓力為15 MPa，溫度為35°C，二級(jí)分離釜壓力為5 MPa，溫度為50°C，收集產(chǎn)物，備用；
C.超聲波強(qiáng)化浸提取IOOg步驟b所得產(chǎn)物，加入IOOOg無(wú)水乙醇，溫度為20°C，超聲功率為200 w，超聲浸提30 min ；浸提液在-4"C、以5000 r/min的速度離心20 min ； 然后沉淀部分加入500 g無(wú)水乙醇，重復(fù)上述提取步驟；合并所得上清液，備用； d.濃縮上清液將步驟c所得上清液在50°C，0. OlMPa下經(jīng)過(guò)減壓蒸發(fā)和真空干燥得膏狀物質(zhì)，備用；
e.制得活性成分將步驟d所得膏狀物用50ml蒸餾水溶解，再用30%_36. 5%的濃鹽酸調(diào)節(jié)PH值1后，上DlOl大孔吸附樹(shù)脂，依次以0. 5ml/min的流速用水、90%乙醇進(jìn)行洗脫， 收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，再用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，減壓回收乙酸乙酯，最后得到有機(jī)酸含量約為68%的活性成分。實(shí)施例2
a.鮮金銀花葉預(yù)處理將500g鮮金銀花葉片于60°C干燥12小時(shí)后，粉碎成40目的粉末，于10°C條件下冷藏，備用；
b.超臨界C02萃取
將200g步驟a所得粉末裝入萃取釜中，萃取溫度25°C，萃取壓力20 MPa, C02流速10 kg/h ；一級(jí)分離釜的壓力為18 MPa，溫度為25°C，二級(jí)分離釜壓力為8MPa，溫度為25°C，收集產(chǎn)物，備用；
c.超聲波強(qiáng)化浸提取IOOg步驟b所得產(chǎn)物，加入300g無(wú)水乙醇，溫度為50°C，超聲功率為120w，超聲浸提60min ；浸提液在_5°C、以5000 r/min的速度離心10 min ；
然后沉淀部分加入300g無(wú)水乙醇，重復(fù)上述提取步驟；合并所得上清液，備用；
d.濃縮上清液將步驟c所得上清液在60°C，0.OlMPa下經(jīng)過(guò)減壓蒸發(fā)和真空干燥得膏狀物質(zhì)，備用；
e.制得活性成分將步驟d所得膏狀物用W浸膏W蒸餾水=115的蒸餾水溶解，再用30%-36. 5%的濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值7后，上AB-8大孔吸附樹(shù)脂，依次以1. Oml/min的流速用水、50%乙醇進(jìn)行洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，再用正丁醇進(jìn)行萃取，減壓回收正丁醇，最后得到有機(jī)酸含量約為60%的活性成分。實(shí)施例3
a.鮮金銀花葉預(yù)處理將500g鮮金銀花葉片于50°C干燥17小時(shí)后，粉碎成300目的粉末，于-20°C條件下冷藏，備用；
b.超臨界C02萃取
將200g步驟a所得粉末裝入萃取釜中，萃取溫度30 V，萃取壓力60MPa，C02流速25kg/ h ；一級(jí)分離釜的壓力為lOMPa，溫度為30°C，二級(jí)分離釜壓力為6MPa，溫度為40°C，收集產(chǎn)物，備用；
c.超聲波強(qiáng)化浸提取IOOg步驟b所得產(chǎn)物，加入600g丙酮，溫度為40°C，超聲功率為250w，超聲浸提40min ；浸提液在0°C、以5000 r/min的速度離心15min ；
然后沉淀部分加入400g丙酮，重復(fù)上述提取步驟；合并所得上清液，備用；
d.濃縮上清液將步驟c所得上清液在55°C，0.OlMPa下經(jīng)過(guò)減壓蒸發(fā)和真空干燥得膏狀物質(zhì)，備用；
e.制得活性成分將步驟d所得膏狀物用W浸膏W蒸餾水=120的蒸餾水溶解，再用30%-36. 5%的濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值5后，上AB-8大孔吸附樹(shù)脂，依次以1. Oml/min的流速用水、80%乙醇進(jìn)行洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，再用異戊醇進(jìn)行萃取，減壓回收異戊醇，最后得到有機(jī)酸含量約為62%的活性成分。實(shí)施例4
a.鮮金銀花葉預(yù)處理將500g鮮金銀花葉片于55°C干燥16小時(shí)后，粉碎成200目的
5粉末，于0°C )條件下冷藏，備用；
b.超臨界C02萃取
將200g步驟a所得粉末裝入萃取釜中，萃取溫度32 °C，萃取壓力40MPa，C02流速20kg/ h ；一級(jí)分離釜的壓力為13MPa，溫度為31°C，二級(jí)分離釜壓力為7MPa，溫度為35°C，收集產(chǎn)物，備用；
c.超聲波強(qiáng)化浸提取IOOg步驟b所得產(chǎn)物，加入800g丙酮，溫度為30°C，超聲功率為150w，超聲浸提50min ；浸提液在_3°C、以5000 r/min的速度離心16min ；
然后沉淀部分加入300g丙酮，重復(fù)上述提取步驟；合并所得上清液，備用；
d.濃縮上清液將步驟c所得上清液在60°C，0.OlMPa下經(jīng)過(guò)減壓蒸發(fā)和真空干燥得膏狀物質(zhì)，備用；
e.制得活性成分將步驟d所得膏狀物用W浸膏W蒸餾水=115的蒸餾水溶解，再用30%-36. 5%的濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值3后，上AB-8大孔吸附樹(shù)脂，依次以1. Oml/min的流速用水、60%乙醇進(jìn)行洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，再用異戊醇進(jìn)行萃取，減壓回收異戊醇，最后得到有機(jī)酸含量約為59%的活性成分。 實(shí)施例5
a.鮮金銀花葉預(yù)處理將500g鮮金銀花葉片于55°C干燥14小時(shí)后，粉碎成250目的粉末，于15°C條件下冷藏，備用；
b.超臨界C02萃取
將200g步驟a所得粉末裝入萃取釜中，萃取溫度30 V，萃取壓力45MPa，C02流速25kg/ h ；一級(jí)分離釜的壓力為15MPa，溫度為35°C，二級(jí)分離釜壓力為6MPa，溫度為45°C，收集產(chǎn)物，備用；
c.超聲波強(qiáng)化浸提取IOOg步驟b所得產(chǎn)物，加入700g丙酮，溫度為35°C，超聲功率為250w，超聲浸提45min ；浸提液在_1°C、以5000 r/min的速度離心17min ；
然后沉淀部分加入400g丙酮，重復(fù)上述提取步驟；合并所得上清液，備用；
d.濃縮上清液將步驟c所得上清液在60°C，0.OlMPa下經(jīng)過(guò)減壓蒸發(fā)和真空干燥得膏狀物質(zhì)，備用；
e.制得活性成分將步驟d所得膏狀物用W浸膏W蒸餾水=115的蒸餾水溶解，再用30%-36. 5%的濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值3后，上DlOl大孔吸附樹(shù)脂，依次以1. Oml/min的流速用水、90%乙醇進(jìn)行洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，再用異戊醇進(jìn)行萃取，減壓回收異戊醇，最后得到有機(jī)酸含量約為64%的活性成分。
權(quán)利要求
1.一種從金銀花葉中提取活性成分的方法，其特征在于，它按如下步驟進(jìn)行a.鮮金銀花葉預(yù)處理將鮮金銀花葉片于45-60°C干燥12-17小時(shí)后，粉碎成40-300 目的粉末，冷藏保存，備用；b.超臨界C02萃取將步驟a中所得粉末裝入萃取釜中，萃取溫度25 35°C，萃取壓力20 60 MPa, C02 流速10 25 kg/h ；萃取物在分離釜中進(jìn)行兩級(jí)減壓分離，一級(jí)分離釜的壓力為10 18 MPa，溫度為25 35 0C ；二級(jí)分離釜壓力為5 8 MPa，溫度為25 50°C，收集產(chǎn)物，備用；c.超聲波強(qiáng)化浸提將步驟b所得產(chǎn)物按重量比加入3 10倍的提取溶劑，超聲波強(qiáng)化浸提溫度為20 50°C，超聲功率為120 250w，超聲時(shí)間為30 60min ；浸提液在_5 0°C、以 5000 r/min 速度離心 10 20 min ；然后沉淀部分加入3 5倍重量比的同種溶劑，重復(fù)上述步驟；合并所得上清液，備用；d.濃縮上清液將步驟c所得上清液在50 60°C，0.OlMPa下減壓蒸發(fā)并真空干燥得膏狀物，備用；e.制得活性成分將步驟d所得膏狀物用蒸餾水進(jìn)行溶解，再用酸調(diào)節(jié)pH值1 7后， 上大孔吸附樹(shù)脂，依次以0. 5-1. Oml/min的流速用水、乙醇水溶液洗脫，收集乙醇洗脫液， 減壓回收乙醇，再用有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取，減壓回收有機(jī)溶劑，最后得到活性成分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述從金銀花葉中提取活性成分的方法，其特征在于，所述步驟a中冷藏溫度為0-20°C ；所述步驟c中所述提取溶劑為無(wú)水乙醇或丙酮。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述從金銀花葉中提取活性成分的方法，其特征在于，所述步驟e中所述蒸餾水與膏狀物的重量比W浸膏W蒸餾水=1 :10-25 ；所述調(diào)節(jié)PH值用酸為濃鹽酸，其濃度為30%-36. 5% ；所述乙醇水溶液其體積濃度為50% 90% ；所述有機(jī)溶劑為乙酸乙酯、 正丁醇或異戊醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述從金銀花葉中提取活性成分的方法，其特征在于，步驟e中大孔吸附樹(shù)脂為DlOl大孔吸附樹(shù)脂或AB-8大孔吸附樹(shù)脂。
全文摘要
一種從金銀花葉中提取活性成分的方法，它包括鮮金銀花葉預(yù)處理、超臨界CO2萃取、超聲波強(qiáng)化浸提、濃縮上清液、最后制得活性成分等步驟。應(yīng)用本發(fā)明方法提取金銀花葉片中活性成分，其中有機(jī)物酸可達(dá)到50%以上，大大提高其應(yīng)用價(jià)值，得到的產(chǎn)品可應(yīng)用于制藥、保健品等諸多場(chǎng)合。
文檔編號(hào)A61K127/00GK102166249SQ201110058959
公開(kāi)日2011年8月31日 申請(qǐng)日期2011年3月11日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月11日
發(fā)明者牛志勇, 王志香, 王歡, 田會(huì)彥, 趙素娟, 郭艷玉, 陳淑芳 申請(qǐng)人:河北科星藥業(yè)有限公司