專利名稱：中藥注射劑安全性提高方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥注射劑生產(chǎn)方法領(lǐng)域，應(yīng)用于不以大分子為有效成分的中藥注射 劑生產(chǎn)，以提高其安全性。
背景技術(shù)：
中藥注射劑最早產(chǎn)生于上世紀(jì)四十年代，由錢信忠等學(xué)者開創(chuàng)，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于 臨床。2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》(簡(jiǎn)稱《中國(guó)藥典》)一部就收錄有燈盞細(xì)辛、清開 靈、止喘靈等單方和復(fù)方注射劑。中藥注射劑能提升藥效、使某些中藥的療效得到更好地發(fā) 揮，在推進(jìn)中藥劑型發(fā)展，拓展中藥的應(yīng)用范圍，服務(wù)廣大人民健康等方面的確功不可沒(méi)。 從技術(shù)上來(lái)講，業(yè)界大體上已經(jīng)解決了中藥注射劑的有效性問(wèn)題(盡管作用機(jī)制尚不完全 清除)，安全性依然是業(yè)界難題。隨著中藥注射劑的廣泛應(yīng)用，不良反應(yīng)不斷發(fā)現(xiàn)，甚至致死性不良反應(yīng)也屢有報(bào) 道。近年來(lái)發(fā)生的“清開靈注射液事件”、“雙黃連注射液事件”、“魚腥草注射液事件”等說(shuō) 明中藥注射劑的安全性不容忽視，受到業(yè)界甚至公眾的廣泛關(guān)注。中藥的療效最早來(lái)自口服和外用，沒(méi)有注射給藥方式。大多中藥注射劑的研發(fā)也 源自口服劑的療效，如清開靈注射液、雙黃連注射液、丹參注射液和燈盞細(xì)辛注射液?？诜?能夠吸收的中藥成分基本上都屬于小分子物質(zhì)，因?yàn)榇蠓肿游镔|(zhì)不易吸收。中藥注射劑具有生物提取物的特征，目前的制備流程沒(méi)有大分子物質(zhì)去除工藝。 因此，中藥注射劑包含有小分子物質(zhì)和小量或微量的大分子物質(zhì)。大分子和小分子尚無(wú)統(tǒng) 一的分子量界限，但學(xué)術(shù)界對(duì)于“分子量越大口服越難吸收”的觀點(diǎn)深入人心。以2010年 版《中國(guó)藥典》二部收載的2271個(gè)藥物(品種)為例，在治療全身性疾病的口服化學(xué)藥物 中，分子量大于500的較少見(jiàn)，超過(guò)1000的則罕見(jiàn)(只有環(huán)孢素、維生素B12、腺苷鈷胺、依 托紅霉素4個(gè)，但吸收不太理想)，超過(guò)3000的則沒(méi)有。分子量與吸收的關(guān)系實(shí)際上已經(jīng)在 藥物設(shè)計(jì)方面得到了廣泛應(yīng)用。一般認(rèn)為中藥注射劑中可能含有的蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)(縮合鞣 質(zhì))、多糖、核酸和樹脂均視為大分子物質(zhì)，2000年版《中國(guó)藥典》也對(duì)其中的蛋白質(zhì)、鞣質(zhì) 和樹脂開始進(jìn)行檢查。因此，我們推測(cè)，中藥注射劑的療效來(lái)自所含的小分子物質(zhì)，與分子 量大于3000的物質(zhì)幾乎無(wú)關(guān)。由于中藥注射劑具有生物提取物的特征，因此在提取的過(guò)程中不可避免地帶來(lái)一 些生物大分子，比如植物蛋白質(zhì)、核酸等，還有可能帶入鞣質(zhì)、樹脂、多糖等大分子。這些大 分子口服是不能直接吸收的，必須經(jīng)過(guò)消化道的降解才可能以小分子吸收。蛋白質(zhì)是抗原 性最強(qiáng)的常見(jiàn)物質(zhì)，而且分子量越大抗原性越強(qiáng)，越容易引起過(guò)敏反應(yīng)或類過(guò)敏。據(jù)此推 測(cè)，中藥注射劑含有的微量蛋白質(zhì)是導(dǎo)致過(guò)敏或類過(guò)敏等特有不良反應(yīng)的主要原因，其他 大分子如多糖、核酸、鞣質(zhì)、樹脂等也可能參與了這些不良反應(yīng)。因此中藥注射劑的安全性 很大程度上取決于所含的大分子成分。來(lái)自中藥的大分子化學(xué)成分對(duì)人體影響較大的主要 可分為四類，對(duì)中藥注射劑安全性的主要影響分子如下蛋白質(zhì)多為植物蛋白，部分為動(dòng)物蛋白或微生物蛋白。蛋白質(zhì)類物質(zhì)是抗原性較強(qiáng)的化學(xué)物質(zhì)，能引起各種過(guò)敏反應(yīng)(包括I、II、III、IV型)。由于與人的種屬差異較大， 中藥注射劑含有的蛋白質(zhì)類大分子的抗原性均較強(qiáng)。鞣質(zhì)鞣質(zhì)是引起中藥注射劑注射后疼痛的主要物質(zhì)之一。鞣質(zhì)后蛋白質(zhì)結(jié)合為 更大的分子復(fù)合物后，可增強(qiáng)蛋白質(zhì)的過(guò)敏性。多糖蛋白多糖或糖蛋白本身就具有很強(qiáng)的抗原性，一般高于原有的蛋白質(zhì)。單純 的多糖能夠通過(guò)“免疫佐劑”效應(yīng)增強(qiáng)免疫的作用，即也能增強(qiáng)過(guò)敏反應(yīng)。核酸具有免疫調(diào)節(jié)作用，多通過(guò)“免疫佐劑”效應(yīng)增強(qiáng)過(guò)敏反應(yīng)?，F(xiàn)有中藥注射劑的生產(chǎn)工藝中，一般都采用“醇水法”或“水醇法”制備中藥注射 劑的原料?！按妓ā敝饕遣捎靡掖继崛≈兴幉?，回收溶劑后再加水去除沉淀后制得；而 “水醇法”則主要是采用水提取藥材，適當(dāng)濃縮后然后用80%左右的乙醇沉淀，將上清液制 備成原料。除此之外還有“酸提堿沉法”等。然而，這些方法制得的原料均不同程度地含有 大分子雜質(zhì)，如含有蛋白質(zhì)、多糖、核酸、鞣質(zhì)等。為了去除鞣質(zhì)，傳統(tǒng)工藝?yán)玫鞍踪|(zhì)沉淀 鞣質(zhì)的性質(zhì)采用“皮粉法”去除。在中藥注射劑制備的后期工藝中，為了保障活性成分不被 破壞，幾乎都采用膜過(guò)濾的方法除菌。然而，通過(guò)對(duì)上市中藥注射劑的研究發(fā)現(xiàn)，通過(guò)較靈敏的方法仍能檢測(cè)到大分子 蛋白質(zhì)和鞣質(zhì)的存在，有些注射劑的蛋白質(zhì)含量甚至高達(dá)10yg/ml (此值不能被《中國(guó)藥 典》一部規(guī)定的法定方法檢測(cè)出)，超過(guò)足以引起過(guò)敏反應(yīng)的理論值。在實(shí)驗(yàn)條件下，我們 發(fā)現(xiàn)皮粉等蛋白質(zhì)對(duì)鞣質(zhì)的沉淀能力有限，不能完全去除鞣質(zhì)，在一定條件下，蛋白質(zhì)和鞣 質(zhì)可以共存。在實(shí)驗(yàn)條件下，我們還發(fā)現(xiàn)80%的乙醇至少可以溶解20μ g/ml的蛋白質(zhì)(以 牛血清白蛋白計(jì))。而中藥注射劑的最后一道工藝是超濾除菌，顯然不能去除大分子物質(zhì)。因此，為了提高中藥注射劑的安全性，去除大分子物質(zhì)是必然的選擇。

發(fā)明內(nèi)容
作為用于全身治療的傳統(tǒng)中藥，大分子物質(zhì)很難吸收產(chǎn)生全身作用；相反，如果直 接進(jìn)入機(jī)體反而可能導(dǎo)致安全性問(wèn)題。本發(fā)明利用此原理，在傳統(tǒng)中藥注射劑的生產(chǎn)工藝 中引入一道大分子截留工藝，去除一定分子量以上的大分子物質(zhì)，這樣在保障原有中藥注 射劑活性成分改變不大的情況下，去除中藥注射劑中的大分子物質(zhì)，以提高中藥注射劑的 安全性。本發(fā)明中采用的膜是截留分子量3k 30k的膜，材質(zhì)不限；截留的方式可以采用 正壓，也可以采用負(fù)壓。


圖1為中藥注射液A經(jīng)10、30k截留膜處理后獲得的去大分子注射液指紋圖譜A 為中藥注射液原液指紋圖譜，B為經(jīng)IOk截留膜處理后去大分子中藥注射液指紋圖譜；C為 經(jīng)30k截留膜處理后去大分子中藥注射液指紋圖譜。圖2為中藥注射液B經(jīng)IOk截留膜處理后獲得的去大分子注射液指紋圖譜:A為 中藥注射液原液指紋圖譜，B為經(jīng)IOk截留膜處理后去大分子中藥注射液指紋圖譜。圖3為中藥注射液C經(jīng)30k截留膜處理后獲得的去大分子注射液指紋圖譜:A為 中藥注射液原液指紋圖譜，B為經(jīng)30k截留膜處理后去大分子中藥注射液指紋圖譜。
具體實(shí)施例方式實(shí)施示例1用截留分子量為IOk和30k的截留膜提高某上市中藥注射劑A的安全性中藥注射液A為一復(fù)方制劑(批號(hào)100327. 2)，采用離心方式分別經(jīng)截留分子量 為IOk和30k的膜處理后得到5份樣品，分別為“Q0”、“Q2”、“Q3”、“Q2上”和“Q3上”?！癚0” 為正常的中藥注射液A ；“Q2”為經(jīng)IOk截留膜去大分子后的注射液；“Q3”為經(jīng)30k截留膜 去大分子后的注射液；“Q2上”為IOk截留膜截留獲得的富含大分子注射液，來(lái)自10倍體積 的原注射液；“Q3上”為30k截留膜截留獲得的富含大分子注射液，來(lái)自10倍體積的原注射 液。將“Q0”、“Q2”、“Q3”三個(gè)樣品進(jìn)行HPLC指紋圖譜分析，發(fā)現(xiàn)三個(gè)樣品的指紋圖譜 相似度較高(圖1)。進(jìn)一步定量考察發(fā)現(xiàn)，“Q2”和“Q3”指紋圖譜中的主要指紋峰與“Q0” 相比，改變度< 5% (表1)，表明經(jīng)IOk和30k截留膜去除大分子后，物質(zhì)基礎(chǔ)未發(fā)生明顯 變化，提示療效無(wú)明顯變化。附指紋圖譜色譜條件色譜柱NUDE0SIL-C18，4.6mmX 250mm，5 μ m ；流動(dòng)相:(A)甲醇-(B)O. 5%醋酸，梯度洗脫=Omin 10 %甲醇，50min :100%甲醇， 65min :100% 甲醇；檢測(cè)波長(zhǎng)255nm；流速為 1. OmL/min ；柱溫40°C；進(jìn)樣量20μ L。表1注射液A主要峰相似度
保留時(shí)間 QO面積 Q2面積 Q2/Q0 Q3面積 Q3/Q0
3.073843983983220110.9982373950.985.205363049035846300.9935873380.99
13.813534052552390440.9851755280.97
24.65884731662811695030.96801655810.95參照2010年版《中國(guó)藥典》一部附錄91進(jìn)行異常毒性檢查。按照附錄91要求配 制以上5種來(lái)自中藥注射劑A的樣品，取符合要求的35只小鼠隨機(jī)分為5組，每只小鼠腹 腔注射0. 5ml，觀察20分鐘，結(jié)果發(fā)現(xiàn)注射“Q0”、“Q2”、“Q3”樣品的小鼠未見(jiàn)明顯變化，而 注射了 “Q2上”和“Q3上”樣品的小鼠分別有5、4只發(fā)生扭體反應(yīng)。表明富含大分子組分 中藥注射劑的安全性較低，從而間接表明去除大分子物質(zhì)后的注射劑安全性得到提高。實(shí)施示例2用截留分子量為IOk的截留膜提高某上市中藥注射劑B的安全性中藥注射液B為一復(fù)方制劑(批號(hào)201003 )，采用正壓方式經(jīng)截留分子量為IOk的截留膜處理后得到3份樣品，分別為“S0”、“S2”和“S2上”。SO為正常的中藥注射液 A ;“S2”為經(jīng)IOk截留膜去大分子后的注射液；“S2上”為IOk截留膜截留獲得的富含大分 子注射液，來(lái)自10倍體積的原注射液。 將“S0”、“S2”兩個(gè)樣品進(jìn)行HPLC指紋圖譜分析，發(fā)現(xiàn)兩個(gè)樣品的指紋圖譜相似度 較高(圖2)。進(jìn)一步定量考察發(fā)現(xiàn)，“S2”指紋圖譜中的主要指紋峰與“SO”相比，改變度 < 5% (表幻，表明經(jīng)IOk截留膜去除大分子后，物質(zhì)基礎(chǔ)未發(fā)生明顯變化，提示療效無(wú)明
顯變化。附色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；YMC-Pack ODS (4. 6mmX 150mm)； 流動(dòng)相=A相為0. 25%冰醋酸(V/V)，B相為甲醇； 檢測(cè)波長(zhǎng):350nm 柱溫:30°C ；
流速為lml/min ；洗脫程序見(jiàn)表3。 表2中藥注射液B指紋圖譜洗脫程序表
權(quán)利要求
1.一種提高中藥注射劑安全性的方法，其特征是在中藥注射劑獲得成品前采用特定大 分子截留膜去除分子量大于一定值的大分子物質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所描述的大分子截留膜，其截留分子量為3k 30k。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所描述的大分子截留方法，可以采用正壓方式截留大分子，也可以 采用負(fù)壓截留大分子物質(zhì)。
全文摘要
一種能夠提高中藥注射劑安全性的方法，其特征是在獲得中藥注射劑成品前增加一道大分子截留工藝，去除注射劑成品中的大分子物質(zhì)，從而提高中藥注射劑的安全性。采用本發(fā)明能在不明顯改變?cè)兴幾⑸鋭┋熜У那疤嵯略黾又兴幾⑸鋭┑陌踩?，適用于基于有效成分為非大分子類物質(zhì)的所有中藥注射劑。
文檔編號(hào)A61K36/00GK102133240SQ201110055780
公開日2011年7月27日 申請(qǐng)日期2011年3月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月9日
發(fā)明者呂小滿, 張陸勇, 李奇峰, 柯瑾, 段為鋼, 江振洲 申請(qǐng)人:云南中醫(yī)學(xué)院