專利名稱：一種山萸肉中藥飲片的炮制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥飲片的炮制新方法，具體涉及一種山萸肉中藥飲片的炮制方 法，屬于中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
中藥山萸肉為山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis Sieb. et Zucc.的干燥 成熟果肉。本品味酸、濯，性微溫，歸肝、腎經(jīng)，功用補(bǔ)益肝腎、澀精縮尿、斂汗止崩，主治肝腎 虧虛、頭暈?zāi)垦?、耳鳴耳聾、腰膝酸軟、陽(yáng)痿早泄、遺精遺尿、虛汗不止、月經(jīng)過(guò)多、崩漏帶下、 內(nèi)熱消渴等證，生品以斂汗固脫為主，制品補(bǔ)益作用增強(qiáng)，為中醫(yī)臨床極為常用的名貴中藥 之一。山萸肉主要含環(huán)烯醚萜苷、多糖、有機(jī)酸、鞣質(zhì)等成分，其中環(huán)烯醚萜苷、多糖為其公 認(rèn)的重要活性物質(zhì)，而莫諾苷、馬錢(qián)苷為山萸肉環(huán)烯醚萜苷的主要物質(zhì)，目前研究證實(shí)，其 具有免疫抑制、多方面的腎保護(hù)、神經(jīng)保護(hù)等作用，山萸肉中多糖有顯著的免疫調(diào)節(jié)、抗衰 老和抗氧化作用。目前山萸肉臨床大量用于治療糖尿病、冠心病、高血壓和肝腎陰虧等疾 病。山萸肉現(xiàn)代炮制的方法有去核、酒蒸、清蒸，也有醋蒸、醋拌、鹽制、蜜拌、蜜蒸等方 法，《中國(guó)藥典》、《全國(guó)中藥炮制規(guī)范》及各省市炮制規(guī)范規(guī)定的炮制方法多為去核、酒燉、 酒蒸、清蒸，目前山萸肉的炮制方法以酒制最為常用，但是現(xiàn)有的炮制方法，在炮制過(guò)程中 山萸肉所含有的部分重要活性成分，如環(huán)烯醚萜苷類的莫諾苷含量減少，導(dǎo)致山萸肉的臨 床療效降低。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種能提高山萸肉中 活性成分，環(huán)烯醚萜苷、多糖含量的炮制新方法，炮制后的山萸肉活性成分提高，臨床療效 更好。技術(shù)方案為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為 一種山萸肉中藥飲片的炮制方法，其包括如下步驟
(1)取山萸肉生品，加0.2至4倍量的水，先悶潤(rùn)1至3小時(shí)，再加熱煮30分鐘至6小 時(shí)，煮后放冷，待藥液吸干后取出備用；
(2)取步驟(1)得到的煮制山萸肉，加入煮制山萸肉重量20%至30%的黃酒，攪拌均勻， 隔水加熱蒸0. 5至4小時(shí)，干燥，即得。作為優(yōu)選方案，以上所述的山萸肉中藥飲片的炮制方法，步驟(1)煮法炮制山萸 肉過(guò)程中，加水量為山萸肉生品重量的2倍，悶潤(rùn)時(shí)間為2小時(shí)，煮的溫度為80至100°C，煮 制時(shí)間為6小時(shí)。作為優(yōu)選方案，以上所述的山萸肉中藥飲片的炮制方法，步驟( 酒蒸炮制山萸肉過(guò)程中，黃酒加入量為煮制山萸肉重量的20%，加熱蒸制溫度為100至120°C，加熱蒸制時(shí) 間為2小時(shí)，蒸后于60°C烘干即得。作為優(yōu)選方案，本發(fā)明提供的山萸肉中藥飲片的炮制方法，步驟(1)煮法炮制山 萸肉過(guò)程中，調(diào)節(jié)水溶液的PH值為1至6 ；作為更優(yōu)選的技術(shù)方法，步驟(1)煮法炮制山萸 肉過(guò)程中，調(diào)節(jié)水溶液的PH值為1至2。一、山萸肉中藥飲片炮制工藝的優(yōu)選
1、儀器與試藥
Waters-e2695型高效液相色譜儀、2998 PDA檢測(cè)器(美國(guó)Waters公司)；BP-211D型電 子分析天平(德國(guó)賽多利斯公司);DW調(diào)溫電熱器(上海平環(huán)燃燒設(shè)備工程有限公司);101-1A 型數(shù)顯電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海滬南科學(xué)儀器聯(lián)營(yíng)廠)；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋(國(guó)華電器有限 公司)。馬錢(qián)苷對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所(批號(hào)111640-200604，含量測(cè)定 用)，莫諾苷對(duì)照品購(gòu)自上海億欣生物科技有限公司(批號(hào)091018，含量測(cè)定用)。2、方法與結(jié)果
2.1莫諾苷、馬錢(qián)苷含量測(cè)定
2.1.1色譜條件色譜柱Waters-Cw色譜柱(4. 6 mm X 250 mm, 5 μπι)，流動(dòng)相甲 醇-水(30 70)，流速 0. 8 mL · miiT1，檢測(cè)波長(zhǎng) MO nm,柱溫 30 °C。2. 1. 2對(duì)照品溶液的制備精密稱取莫諾苷對(duì)照品、馬錢(qián)苷對(duì)照品適量，分別加80% 甲醇制成每1 mL含莫諾苷460 μ g、馬錢(qián)苷416 μ g的貯備液。2. 1. 3供試品溶液的制備分別取山萸肉，按正交設(shè)計(jì)表規(guī)定條件用水煮制，待藥 液吸干后取出，按照10版藥典對(duì)其進(jìn)行酒蒸，烘干后取各炮制品，打粉，過(guò)60目篩。分別各 取0. Ig,精密稱定，加25 ml 80%甲醇，稱定重量，加熱回流lh，放冷后補(bǔ)足失重，0. 45 μ m 微孔濾膜過(guò)濾。2.1.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取莫諾苷、馬錢(qián)苷對(duì)照品貯備液，加80%甲醇稀釋成取馬 錢(qián)苷(16. 64 μ g/mL)、莫諾苷(36. 8 μ g/mL)的混合對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣3、5、10、15、20、 25 μ L，以測(cè)得的峰面積為縱坐標(biāo)，馬錢(qián)苷、莫諾苷進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得馬錢(qián) 苷回歸方程Y = 1Ε+06 X - 16584, r =1. 0000，莫諾苷回歸方程Y = 2E+06 X - 10873, r =1.0000。表明馬錢(qián)苷在0.04992 0.416 μ g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，莫諾苷在0. 1104 0. 92 μ g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.1.5精密度試驗(yàn)取同一混合對(duì)照品溶液(馬錢(qián)苷16.64 μ g/mL、莫諾苷36. 8 μ g/mL)，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算莫諾苷和馬錢(qián)苷峰面積的RSD值分別為1.24%和1.61%。2. 1.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，分別于0，2，4，8，12，24 h測(cè)定莫諾苷和馬 錢(qián)苷的峰面積，結(jié)果莫諾苷和馬錢(qián)苷峰面積RSD值分別為1. 78%和0. 99%，表明供試品溶液 在24 h內(nèi)穩(wěn)定。2. 1. 7重復(fù)性試驗(yàn)按供試品制備項(xiàng)下供試品制備方法，平行制備5份樣品液，微 孔濾膜濾過(guò)，測(cè)定，莫諾苷、馬錢(qián)苷含量的RSD分別為2. 15%、1. 88%。2. 1. 8加樣回收率試驗(yàn)精密稱取已知含量的樣品0. 05g (莫諾苷7. 53 mg/g ；馬 錢(qián)苷5.47mg/g)6份，置25 mL容量瓶中，精密加入莫諾苷對(duì)照品溶液060. 00 yg- mL-1) 1 mL、馬錢(qián)苷對(duì)照品溶液016 yg- ml/1) 0.5 mL，加80%甲醇至刻度，搖勻，0. 45 ym微孔濾膜過(guò)濾，按“2. 1. 1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果莫諾苷和馬錢(qián)苷平均回收率分別為 99. 76% 和 98. 96%, RSD 值分別為 1. 98% 和 1. 61%。2.2多糖的含量測(cè)定
2.2.1對(duì)照品溶液的制備取105°C干燥至恒重的葡萄糖對(duì)照品適量，精密稱定，制成 制成每1 mL含144. 3 μ g葡萄糖的對(duì)照品溶液，即得。2. 2. 2供試液的制備分別取按2. 1. 3方法制備得到炮制山萸肉3 g，置于具塞錐 形瓶中，加30 mL 80%乙醇超聲30 min，離心分離(3 000 r/min, 15 min)，殘?jiān)鼡]干乙醇后 置具塞錐形瓶中加30 mL水，置恒溫水浴振蕩器中，80°C振蕩2 h，離心分離，并用乙醇洗滌 殘?jiān)?次，合并洗液與上清液，將其濃縮后，加乙醇至乙醇濃度為80%，放置冰箱M h后離心 分離，用乙醇與乙醚洗滌沉淀數(shù)次，揮干乙醚后用水溶解定容至50 mL后再取1 mL至25mL，2. 2. 3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制準(zhǔn)確移取144. 3 μ g/mL葡萄糖對(duì)照品溶液0. 1、0.2、 0.3、0.4,0.5 ,0.6 mL于10 mL刻度試管中，加水至1 mL，加5%苯酚溶液1 mL，搖勻后再 加濃硫酸7 mL，搖勻，100°C沸水浴中加熱30 min中，冰水浴中冷卻至室溫，在480 nm波 長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以對(duì)照品微克數(shù)為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，回歸方程為7= 0.00631 -0. 0004，r=0. 9995，表示在，14. 43 86. 58 μ g范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。2. 2. 4精密度試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品稀釋液0. 5 mL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制項(xiàng)下的測(cè)定 方法進(jìn)行測(cè)定，RSD=O. 65% (n=5)
2.2.5重復(fù)性試驗(yàn)取同一山萸肉粉末，5份，按供試品制備項(xiàng)下方法制備供試品溶液， 測(cè)定，RSD 為 1. 90%ο2. 2. 6穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一份多糖供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，1 h內(nèi)每隔IOmin測(cè)定一 次，1 h后每20 min測(cè)定一次，2 h內(nèi)吸光度基本恒定，RSD為2. 17%(n=9)。2.2.7加樣回收率試驗(yàn)在0. 5 mL已知含量的各多糖供試液中加0. 5 mL(72. 15 μ g/mL)的對(duì)照品溶液，測(cè)得多糖的平均回收率為101.69 %，RSD=2. 87%。2. 3煮制工藝正交實(shí)驗(yàn)考察
選擇水的用量(A)、煮制時(shí)間(B)、悶潤(rùn)時(shí)間(C)作為主要考察因素，每一影響因素各選 3個(gè)水平進(jìn)行試驗(yàn)，采用L9(34)正交表，以莫諾苷、馬錢(qián)苷、多糖含量為考察指標(biāo)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)， 設(shè)計(jì)因素和水平見(jiàn)表1，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析見(jiàn)表3 5。表1因素水平表
權(quán)利要求
1.一種山萸肉中藥飲片的炮制方法，其特征在于，包括如下步驟(1)取山萸肉生品，加0.2至4倍量的水，先悶潤(rùn)1至3小時(shí)，再加熱煮30分鐘至6小 時(shí)，煮后放冷，待藥液吸干后取出備用；(2)取步驟(1)得到的煮制山萸肉，加入煮制山萸肉重量20%至30%的黃酒，攪拌均勻， 隔水加熱蒸0. 5至4小時(shí)，干燥，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山萸肉中藥飲片的炮制方法，其特征在于，步驟(1)煮法炮 制山萸肉過(guò)程中，加水量為山萸肉生品重量的2倍，悶潤(rùn)時(shí)間為2小時(shí)，煮的溫度為80至 100°C，煮制時(shí)間為6小時(shí)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山萸肉中藥飲片的炮制方法，其特征在于，步驟( 酒蒸炮制 山萸肉過(guò)程中，黃酒加入量為煮制山萸肉重量的20%，加熱蒸制溫度為100至120°C，加熱蒸 制時(shí)間為2小時(shí)，蒸后于60°C烘干。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的山萸肉中藥飲片的炮制方法，其特征在于，步驟 (1)煮法炮制山萸肉過(guò)程中，調(diào)節(jié)水溶液的PH值為1至6。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的山萸肉中藥飲片的炮制方法，其特征在于，步驟(1)煮法炮制 山萸肉過(guò)程中，調(diào)節(jié)水溶液的PH值為1至2。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種山萸肉中藥飲片的炮制方法，該方法先取山萸肉生品，加0.2至4倍量的水，悶潤(rùn)1至3小時(shí)，再加熱80至100℃煮30分鐘至6小時(shí)，煮后放冷，待藥液吸干后取出備用；然后再加入煮制山萸肉重量20%至30%的黃酒，攪拌均勻，隔水加熱蒸0.5至4小時(shí)，干燥，即得。本發(fā)明提供的山萸肉中藥飲片的炮制方法，在山萸肉傳統(tǒng)炮制方法的基礎(chǔ)上通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)研究，采用先煮后蒸的工藝，該炮制方法能提高山萸肉中環(huán)烯醚萜苷、多糖等活性成分的含量，使炮制后的山萸肉制品具有更好的臨床療效，為建立山萸肉中藥飲片新的炮制方法提供較強(qiáng)的科學(xué)依據(jù)，具有廣闊的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)A61K36/40GK102106892SQ20111004582
公開(kāi)日2011年6月29日 申請(qǐng)日期2011年2月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年2月25日
發(fā)明者劉志輝, 周洪亮, 常星潔, 陳武 申請(qǐng)人:江蘇省中醫(yī)院