專利名稱：新型調節(jié)劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及胰島素-胰島素受體信號轉導復合體的新型調節(jié)劑和/或激動劑和篩選這種調節(jié)劑和/或激動劑的方法。這種調節(jié)劑和/或激動劑可(例如)用于治療患有2型糖尿病、肥胖、高血糖癥、高胰島素血癥、胰島素過量、慢性腎病、I型糖尿病、胰島素抵抗和特征在于胰島素抵抗的疾病狀態(tài)和病狀的哺乳動物受試者或預防其在危險受試者中出現。
背景技術：
本發(fā)明涉及胰島素-胰島素受體信號轉導復合體的新型調節(jié)劑和/或激動劑，篩選這種調節(jié)劑和/或激動劑的方法和這種調節(jié)劑和/或激動劑在治療或預防特征在于胰島素的異常生成和/或利用的疾病狀態(tài)和病狀中的用途。肽類激素胰島素是葡萄糖穩(wěn)態(tài)和細胞生長的主要調控劑。胰島素作用中的第一步是激素與胰島素受體(INSR)的結合，胰島素受體是一種完整的膜糖蛋白，也稱為CD220或HHF5JNSR屬于酪氨酸激酶生長因子受體超家族并且由2個結合胰島素的細胞外α亞基和2個具有內在酪氨酸激酶活性的跨膜β亞基。US 4，761，371中描述了 INSR的氨基酸序列并且如NCBI參考序列ΝΡ_000199. 2所述。INSR表達為2種同種型INSR-A和INSR-B。已使用X射線結晶學闡明了人INSR的完整同型二聚體胞外域片段的三維結構(W007/147213)。INSR同種型還形成異型二聚體INSR-A/INSR-B和雜交INSR/IGF-1R受體，其在生理學上的作用和疾病仍未完全了解(Belfiore 等，Endocrine Rev.，30(6) :586-623, 2009)。當胰島素結合INSR時，通過酪氨酸自體磷酸化激活受體并且INSR酪氨酸激酶磷酸化包括胰島素受體底物-I(IRS-I)在內的各種效應分子，從而導致激素作用(Ullrich等，Nature 313:756-761，1985 ；Goldfine 等，Endocrine Reviews 8:235-255，1987 ；White和Kahn，Journal Biol. Chem. 269:1-4, 1994)。IRS-1結合和磷酸化最終導致胰島素-反應組織(包括肌細胞)和脂肪組織外膜上的高親和力葡萄糖轉運子(Glut4)分子增多，并且因此導致葡萄糖從血液至這些組織中的攝取增多。Glut4從細胞囊泡轉運至細胞表面，然后Glut4可在此介導葡萄糖向細胞內的轉運。INSR信號轉導減少導致細胞對葡萄糖的攝取減少、高血糖癥(循環(huán)葡萄糖增多)和由此引起的所有后遺癥。葡萄糖攝取減少可引起胰島素抵抗，這描述了胰島素的生理量不足以由細胞或組織產生正常胰島素反應的病狀。嚴重的胰島素抵抗與糖尿病相關，而較低嚴重性的胰島素抵抗也與約30-40%非糖尿病個體的許多疾病狀態(tài)和病狀相關(Woods等，End, Metab&Immune Disorders - Drug Targets 9:187-198，2009 中有評論)。
目前對糖尿病和胰島素抵抗的治療旨在增加胰島素分泌，減少葡萄糖生成和增強胰島素作用。當前，有治療2型糖尿病的各種藥理學方法(Scheen等，DiabetesCare, 22(9):1568-1577, 1999 ；Zangeneh 等，Mayo Clin.Proc. 78:471-479, 2003 ；Mohler等，Med Res Rev 29 (I) : 125-195，2009)。它們通過不同作用方式起作用1)磺酰脲(例如，格列美脲、格列生脲、磺酰脲、AY31637)主要刺激胰島素分泌；2)雙胍(例如，二甲雙胍)通過促進葡萄糖利用，減少肝葡萄糖生成并減少腸葡萄糖排出作用；3) α葡糖苷酶抑制劑(例如，阿卡波糖、米格列醇)減緩碳水化合物消化并因此減緩從腸道的吸收和減輕餐后高血糖癥；4)噻唑烷二酮(例如，曲格列酮、吡格列酮、羅格列酮、格列吡嗪、巴格列酮、利格列酮、萘格列酮、曲格列酮、恩格列酮、AD5075、Τ174、ΥΜ268、R102380、NC2100、ΝΙΡ223、ΝΙΡ221、ΜΚ0767、環(huán)格列酮、adaglitazone、CLX0921、達格列酮、CP92768、BM152054)增強胰島素作用，從而促進外周組織中葡萄糖利用；5)胰高糖素樣肽和激動劑(例如毒蜥外泌肽) 或其穩(wěn)定劑(例如DPP4抑制劑(例如西他列汀))加強葡萄糖刺激的胰島素分泌和6)胰島素或其類似物(例如L.ANTUS )刺激組織葡萄糖利用并抑制肝葡萄糖排出。以上提及的藥理學方法可單獨利用或在組合療法中利用。然而，每種方法均有其局限性和不良作用。隨時間推移,很大比例的2型糖尿病受試者失去他們對這些試劑的反應。63%的2型糖尿病患者不能達到如美國糖尿病協會建議的〈7%的整體HbA1。水平，并因此處于發(fā)展并發(fā)癥的高危險中。而且，患者幾乎總是進展通過降低胰腺功能的階段。通常將胰島素治療制定在飲食、運動之后，并且口服藥物未能充分控制血糖。胰島素治療的缺點是需要藥物注射、低血糖癥的可能和增重。因此仍急切需要新型抗糖尿病試劑。Soos 等，Biochem. J. 235:199-208，1986 ； Tay I or 等，Biochem.J. 242 : 123-129, 1987 ；Prigent 等，J. Biol. Chem. 265 (17) : 9970-9977，1990 ；Brindle 等，Biochem.J. 268:615-620，1990 ;Steele_Perkins 和 Roth,J.Biol.Chem. 265 (16) :9458-9463, 1990 ；McKern 等，Nature 443(14) :218-221 ；Boado 等，Biotech and BioEng. 96 (2) : 381-391 ；W004/050016 ；Roth 等，Proc. Natl. Acad. Sci.USA 79:7312-7316, 1982 ；Morgan 等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83:328-332, 1986 ；Lebrun 等，J. BI. Chem. 268 (15) : 11272-11277，1993 ；Forsayeth 等，Proc. Natl. Acad. Sci.USA 84:3448-3451, 1987 ；Forsayeth 等，J. Biol. Chem. 262(9) :4134-4140, Goodman 等，J. Receptor Res. 14(6-8)，381-398，1994 ；Ganderton 等，Biochem J. 288:195-205, 1992 ；Spasov等，Bull, of Exp. Biol, and Med. 144(1) :46-48, 2007 ；EP 2 036 574 Al 中已經報道了結合人INSR的抗體。

發(fā)明內容
本發(fā)明涉及多肽結合劑，例如通過結合與胰島素未復合的INSR的胞外區(qū)、與胰島素復合的INSR或兩者來調節(jié)和/或激動化胰島素-INSR信號轉導復合體的抗體或其片段。INSR是膜結合的細胞表面受體。一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，所述抗體以IO-5M或更低的平衡解離常數Kd結合胰島素受體和/或包含胰島素和胰島素受體的復合體，所述抗體能夠增強胰島素和胰島素受體(INSR)之間的結合親和力或結合率參數約5倍至200倍。在一個實施方案中，所述抗體能夠增強胰島素和胰島素受體之間的結合親和力或結合率參數約I. 5倍至約100倍，或約2倍至25倍。進一步預期調節(jié)為約2倍至約50倍，或約I. 5倍至約25倍，或約I. 5倍至約50倍，例如，至少I. 5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、16倍、17倍、18倍、19或20倍，或高達100倍，或高達90倍，或高達80倍，或高達70倍，或高達60倍，或高達50倍，或高達40倍，或高達30倍，或高達20倍，或高達10倍。在另一實施方案中，所述抗體增強結合親和力或結合率參數I. 5、2、3、4、5、
6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100倍或更多倍，或任何這些值之間的任何范圍。在一些實施方案中，結合親和力為結合率除以解離率的比值或解離率除以結合率的比值的KA、Kd的任一個。在特定示例性實施方案中，所述抗體使Ka增大所需倍數或使Kd減小所需倍數，或使結合率與解離率之比增大所需倍數，或使解離率與結合率之比減小所需倍數。在一些實施方案中，結合率參數為結合率或解離率。在特定示例性實施方案中，抗體增大結合率或減小解離率?？蛇x地,在結合親和力不以可檢測的程度或顯著地變化的一些實施方案中,增大結合率和增大解離率可能使信號轉導途徑從促有絲分裂信號轉導向代謝信號轉導(葡萄糖攝取) 轉移。在一些實施方案中，增強胰島素和INSR之間的結合親和力的抗體為正調節(jié)劑。另一方面，所述抗體為激動劑。在相關方面，不依賴于胰島素而激活INSR的抗體為變構激動劑。在某些實施方案中，本發(fā)明提供了一種變構激動劑抗體，所述抗體以至少10_5、lO'lO'lO'lOl的親和力結合胰島素受體并且(a)當在pAKT檢測中測量時表現出為胰島素最高激動劑活性的20%-80%的最高激動劑活性，(b)當存在時改變胰島素對INSR的EC50不超過2倍，并且(c)當存在時改變胰島素對INSR的Kd不超過2倍。在相關實施方案中,變構激動劑表現出為胰島素的最大激動劑反應的80%或更低的最大激動劑反應，例如15%-80%、20-60%、20%-40%或15%-30%。在某些實施方案中，抗體以胰島素的最大激動劑反應的至少約15%、20%、25%、30%、35%、40%和高達45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%或80%的最大激動劑反應組成型激活INSR。應了解，包括任何這些范圍端點的任何組合，無需敘述每種可能的組合。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，所述抗體以KT5M或更低的平衡解離常數Kd結合胰島素受體和/或包含胰島素和胰島素受體的復合體，所述抗體能夠削弱胰島素和胰島素受體之間的結合親和力或結合率參數約I. 5倍至100倍。在一個實施方案中，所述抗體能夠削弱胰島素和胰島素受體之間的結合親和力或結合率參數約2倍至25倍，或I. 5倍至25倍，或2倍至50倍。進一步預期調節(jié)為約2倍至約50倍，或約I. 5倍至約25倍，或約
I.5倍至約50倍，例如，至少I. 5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、16倍、17倍、18倍、19或20倍，或高達100倍，或高達90倍，或高達80倍，或高達70倍，或高達60倍，或高達50倍，或高達40倍，或高達30倍，或高達20倍，或高達10倍。在另一實施方案中，所述抗體削弱結合親和力或結合率參數1.5、2、3、4、
5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、 45、50、55、
60、65、70、75、80、85、90、95或100倍或更多倍，或任何這些值之間的任何范圍。在一些實施方案中，結合親和力為結合率除以解離率的比值或解離率除以結合率的比值的KA、Kd的任一個。在特定示例性實施方案中，所述抗體使Ka減小所需倍數或使Kd增大所需倍數，或使結合率與解離率之比減小所需倍數，或使解離率與結合率之比增大所需倍數。在一些實施方案中，結合率參數為結合率或解離率。在特定示例性實施方案中，抗體減小結合率或增大解離率。在一個實施方案中，削弱胰島素和INSR之間的結合親和力的抗體為負調節(jié)劑。在一些特定實施方案中，削弱胰島素和INSR之間的結合親和力的抗體為拮抗劑。在又一實施方案中，增強或削弱胰島素和胰島素受體之間的結合親和力或結合率參數的抗體包含SEQ ID NO: 151-303中所列的至少一個重鏈⑶R(HCDR1、HCDR2和HCDR3)。在相關實施方案中，抗體包含SEQ ID NO: 151-303的成熟重鏈可變區(qū)。預期任何以上抗體 進一步包含適合的人或人共有或人源性恒定區(qū)，例如IgGl、IgG2、IgG3或IgG4或其雜種。在另一實施方案中，增強或削弱胰島素和胰島素受體之間的結合親和力或結合率參數的抗體包含SEQ ID N0:l-150中所列的至少一個輕鏈⑶R(IXDR1、IXDR2或IXDR3)。在又一實施方案中，抗體包含SEQ ID NO: 1-150的成熟輕鏈可變區(qū)。預期任何以上抗體進一步包含人K或λ輕鏈恒定區(qū)。在一個實施方案中，抗體結合胰島素受體。在相關實施方案中，抗體結合INSR的α亞基。在另一實施方案中，抗體結合INSR的β亞基。在又一實施方案中，抗體結合受體的α和β亞基。在相關實施方案中，抗體結合胰島素/胰島素受體復合體。在另一實施方案中，結合胰島素/INSR復合體的抗體(例如)在不存在胰島素時不可檢測地結合單獨的胰島素受體或單獨的胰島素。另一方面，本發(fā)明提供了一種以IO-5M或更低的平衡解離常數Kd特異性結合胰島素受體和/或包含胰島素和胰島素受體的復合體的抗體，所述抗體包含SEQ ID NO: 151-303的至少一個重鏈⑶R(HCDR1、HCDR2和HCDR3)。在相關實施方案中，抗體包含SEQ IDNO: 151-303的重鏈可變區(qū)。預期任何以上抗體進一步包含適合的人或人共有或人源性恒定區(qū)，例如IgGU IgG2、IgG3或IgG4或其雜種。在另一實施方案中，以IO-5M或更低的平衡解離常數Kd特異性結合胰島素受體和/或包含胰島素和胰島素受體的復合體的抗體包含SEQ ID NO: 1-150中所列的至少一個輕鏈⑶ROXDRl、IXDR2或IXDR3)。在另一實施方案中，抗體包含SEQ ID NO: 1-150的輕鏈可變區(qū)。預期任何以上抗體進一步包含人K或λ輕鏈恒定區(qū)。進一步預期，任何以上所述抗體包含1、2、3、4、5或6個⑶R。在一個實施方案中，抗體包含SEQ ID NO: 151-303中所列的1、2或3個重鏈⑶R。在另一實施方案中，抗體包含SEQ ID NO: 1-150中所列的1、2或3個輕鏈CDR0在一個實施方案中，抗體結合胰島素受體。在相關實施方案中，抗體結合胰島素/INSR復合體。在另一實施方案中，結合胰島素/INSR復合體的抗體不以可檢測的程度單獨結合胰島素受體或單獨結合胰島素。進一步預期，任選地在磷酸化AKT檢測中，增強胰島素和胰島素受體的結合親和力或結合率參數的抗體通過至少10%的胰島素最大信號激活胰島素受體。在相關實施方案中，通過至少 11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、25%、30%、40%、50%、60%、70% 或
80%的胰島素最大信號激活INSR。在另一實施方案,任選地在磷酸化AKT檢測中，增強胰島素/INSR的結合親和力或結合率參數的抗體激活低于10%的胰島素最大信號。在相關實施方案中，通過低于9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%的胰島素最大信號激活INSR。在一些實施方案中，INSR未被抗體可檢測地激活。進一步預期，抗體使患有血糖升聞、聞血糖癥或與膜島素抵抗相關的病癥的受試者的空腹血糖水平向正常葡萄糖水平范圍降低。在一個實施方案中，正調節(jié)抗體或激動劑使受試者的空腹血糖水平下降約15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%或更多。

在一個實施方案中，抗體指一種抗體或其片段或包含抗體的抗原結合結構域的多肽。示例性抗體或抗體片段包括多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體、人源化抗體、人抗體、多特異性抗體、Fab、Fab'、F(ab' )2、Fv、結構域抗體(dAb)、互補決定區(qū)(CDR)片段、CDR移植抗體、單鏈抗體(scFv)、單鏈抗體片段、嵌合抗體、雙鏈抗體、三鏈抗體、四鏈抗體、微型抗體、線性抗體；螯合重組抗體、三抗體或雙抗體、細胞內抗體、納米抗體、小模塊化免疫藥物(SMIP)、抗原結合結構域免疫球蛋白融合蛋白、駱駝化抗體、含有VHH的抗體或其變異體或衍生物和含有至少一部分足以賦予多肽特異性抗原結合的免疫球蛋白的多肽，例如1、2、
3、4、5或6個CDR序列。在一個實施方案中，抗體為單克隆抗體。在相關實施方案中，抗體為人抗體。在一些特定實施方案中，本發(fā)明排除了嚙齒動物抗體，即由嚙齒動物(例如鼠科動物大鼠)細胞的雜交瘤生成的抗體。這種抗體，不論是由雜交瘤生成還是重組生成，應具有嚙齒動物框架氨基酸序列并且如果施用給人應具免疫原性。在一些特定實施方案中，本發(fā)明排除了以下以引用方式以其整體并入的任一參考文獻中公開的嚙齒動物抗體=Soos等，Biochem. J. 235:199-208，1986 ；Taylor 等，Biochem. J. 242:123-129，1987 ；Prigent等，J. Biol. Chem. 265(17) :9970-9977, 1990 ；Brindle 等，Biochem. J. 268:615-620，1990 ；Steele-Perkins 和 Roth, J. Biol. Chem. 265(16) :9458-9463，1990 ;McKern 等，Nature443(14) :218-221 ；Boado 等，Biotech and BioEng. 96(2) :381-391 ；W004/050016 ；Roth 等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 79:7312-7316, 1982 ；Morgan 等，Proc. Natl. Acad.Sci. USA 83:328-332，1986 ；Lebrun 等，J. BI. Chem. 268 (15) : 11272-11277，1993 ；Forsayeth 等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:3448-3451, 1987 ；Forsayeth 等，J. Biol.Chem. 262 (9) :4134-4140, Goodman 等，J. Receptor Res. 14(6-8)，381-398，1994 ；Ganderton 等，Biochem J. 288:195-205，1992 ;Spasov 等，Bull, of Exp. Biol, andMed. 144(1) :46-48, 2007 ；EP 2 036 574 Al。然而，本發(fā)明可包括這種嚙齒動物抗體的人源化形式，使用這種人源化抗體的治療方法和包含這種人源化抗體的無菌藥物組合物。在一些特定實施方案中，本發(fā)明排除了 Boado等，Biotech and BioEng. 96 (2) : 381-391或W004/050016中報道的人源化抗體83-14。在示例性實施方案中，本發(fā)明包括分別保留了SEQ ID NO: 151-303 和 SEQ ID NO: 1-150 的任一個的 HCDR1、HCDR2、HCDR3、IXDR1、IXDR2或IXDR3的任何1、2、3、4、5或6個的單克隆抗體，所述抗體任選地在這種CDR中包括I或2個突變，例如保守性或非保守性取代，并且任選地如表3所示配對；保留了 SEQ ID NO: 151-303的任一個的所有HCDR1、HCDR2、HCDR3或重鏈可變區(qū)的單克隆抗體，所述抗體任選地在任何這種⑶R中包括I或2個突變，任選地進一步包含任何適合的重鏈恒定區(qū)，例如IgGU IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgAU IgA2或IgE或其雜種；保留了 SEQ ID NO: 1_150的任一個的所有LCDR1、LCDR2、LCDR3或輕鏈可變區(qū)的單克隆抗體，任選地在任何這種CDR中包括I或2個突變，任選地進一步包含任何適合的輕鏈恒定區(qū)，例如K或λ輕鏈恒定區(qū)；單克隆抗體的純化制劑，包含如SEQ ID NO: 1_303所示且如表3所示配對的輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)；如通過X射線結晶學或其它生物物理或生物化學技術，例如氘交換質譜法、丙氨酸掃描和肽片段ELISA確定，與包含SEQ ID NO: 1-303中所列的可變區(qū)的抗體的相同的INSR線性或三維表位結合的單克隆抗體；與包含SEQ ID NO: 1-303中所列的任選地如表3配對的可變區(qū)的抗體競爭結合人 INSR 多約 75%，多約 80% 或多約 81%、82%、83% 、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%,94%或95%的單克隆抗體。在一些實施方案中，抗體包含含SEQ ID NO: 1_303中所列的可變區(qū)的抗體的所有3個輕鏈⑶R、3個重鏈⑶R或所有6個⑶R。在一些示例性實施方案中，來自抗體的2個輕鏈CDR可與來自不同抗體的第3個輕鏈CDR結合?；蛘撸绕洚擟DR高度同源時，來自一個抗體的LCDRl可與來自不同抗體的LCDR2和來自另一抗體的LCDR3結合。類似地，來自抗體的2個重鏈CDR可與來自不同抗體的第3個重鏈CDR結合；或尤其當CDR高度同源時，來自一個抗體的HCDRl可與來自不同抗體的HCDR2和來自另一抗體的HCDR3結合。也可使用共有CDR。源自本文的共有CDR的任一個可與來自本文所述任何抗體的相同鏈(例如，重鏈或輕鏈)的其它兩個CDR組合，(例如)以形成適合的重鏈或輕鏈可變區(qū)。另一方面，本發(fā)明提供了本文所述抗體的變異體或衍生物。例如，在一個實施方案中，用如本文所述的可檢測部分標記抗體。在另一實施方案中，抗體與本文所述的疏水部分偶聯?？贵w的變異體包括在本文提供的氨基酸序列中具有突變或改變的抗體，所述突變或改變包括氨基酸插入、缺失或取代，例如保守性或非保守性取代。在一些實施方案中，提供了包含與SEQ ID NO: 151-303中所列的重鏈可變區(qū)具有至少約 65%、70%、75%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列和/或與SEQ ID NO: 1-150中所列的輕鏈可變區(qū)具有至少約 65%、70%、75%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列的多肽的抗體，所述抗體進一步包含 CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2 或 CDRL3 的至少 1、2、3、4、5 個或全部。在一些實施方案中，與輕鏈可變區(qū)具有百分比同一性的氨基酸序列可包含1、2或3個輕鏈CDR。在其它實施方案中，與重鏈可變區(qū)具有百分比同一性的氨基酸序列可包含1、2或3個重鏈⑶R。預期本發(fā)明的抗體可能在抗體的CDR區(qū)有I或2個或更多個氨基酸取代，例如保守性取代。在相關實施方案中，改變了框架的殘基?？杀桓淖兊闹劓溈蚣軈^(qū)位于圍繞重鏈CDR殘基的指定區(qū)域H-FR1、H-FR2、H-FR3和H-FR4內，并且可被改變的輕鏈框架區(qū)的殘基位于圍繞輕鏈⑶R殘基的指定區(qū)域L-FRl、L-FR2、L-FR3和L-FR4內?？蚣軈^(qū)內的氨基酸可被例如在人框架或人共有框架中鑒定的任何適合氨基酸置換。
進一步預期，本發(fā)明提供了一種純化多肽，所述多肽包含與SEQ ID NO: 151-303的任一氨基酸序列融合，任選地如表3所示重鏈/輕鏈可變區(qū)配對的SEQID NO: 1-150的任一氨基酸序列，或包括SEQ ID NO: 1-150和SEQ ID NO: 151-303的至少一部分，任選地如表示3所示配對的多肽片段，其中所述多肽結合胰島素受體、胰島素或胰島素/胰島素受體復合體。預期，例如用Kd測量，包括包含SEQ ID NO: 1_303中的任一個的全部或部分抗原結合片段的多肽的抗體保持對胰島素受體、胰島素或胰島素/INSR的復合體的結合親和力為10_5、10_6、10_7、10_8、10_9M或更低(其中值較小表示結合親和力較高)，任選地如通過表面等離子體共振測量。在一些前述實施方案中，本發(fā)明包括以10_5M或更低的平衡解離常數Kd結合胰島素受體和/或包含胰島素和胰島素受體的復合體的抗體，所述抗體能夠增強胰島素和胰島素受體之間的結合親和力約5倍至500倍。在一個實施方案中，抗體的特征在于以下平衡解離常數Kd結合性質(i)所述抗體以約ΚΠ Ο'ΙΟ'ΙΟ'ΙΟ Ο'Κ^Μ或更低的平 衡解離常數Kd結合包含胰島素(Cl)和胰島素受體(C2)的復合體；并且(ii)Ktoe2]A、K[AC2]a或K[Aa]e2的任一個比KAe2或ΚΑα的任一個低至少約5倍。在相關實施方案中，
K[C1C2]A、K[AC2]
Cl或K[Aa]C2的任一個比Kac2或ΚΑα的任一個低約5倍至200倍。在一些實施方案中，抗體結合胰島素/胰島素受體復合體。在另一實施方案中，抗體結合呈未復合形式的單獨的胰島素受體。在相關實施方案中，例如在不存在胰島素時，抗體不以可檢測的程度單獨結合胰島素受體。在某些實施方案中，抗體能夠增強胰島素和胰島素受體之間的結合親和力至少約5倍，任選地達約200倍，任選地達約100倍。進一步提供了，在一些實施方案中，結合親和力為結合率與解離率之比或解離率與結合率之比KA、Kd的任一個。在一些實施方案中，對于本文所述的任何抗體而言，結合親和力或結合率參數的差異范圍從約I. 5倍至約1000倍，或約I. 5倍至約500倍，約I. 5倍至約100倍，或約2倍至25倍，或約2倍至約50倍，或約I. 5倍至約25倍，或約I. 5倍至約50倍，約5倍至約500倍，或約5倍至約200倍，例如至少約I. 5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、16倍、17倍、18倍、19倍或20倍，或高達500倍，或高達200倍，或高達150倍，或高達100倍，或高達90倍，或高達80倍，或高達70倍，或高達60倍，或高達50倍，或高達40倍，高達30倍，高達20倍，或高達10倍或高達5倍或高達3倍。在一些實施方案中，本發(fā)明提供了一種激動劑抗體，所述激動劑抗體以例如Kd為10_5、10_6、10' 10_8、10_9、10,、IO-11M或更低的親和力結合胰島素受體，任選地當在pAKT檢測中測量時表現出為胰島素最高激動劑活性的20%-100%的最高激動劑活性。在相關方面，本發(fā)明包括一種變構激動劑抗體，所述變構激動劑抗體以例如Kd為10_5、10_6、10_7、10_8、10_9、10_1(l、10_nM或更低的親和力結合胰島素受體并且(a)當在pAKT檢測中測量時表現出為胰島素最高激動劑活性的20%-80%的最高激動劑活性，(b)當存在時改變胰島素對INSR的EC50不超過2倍或3倍，并且(c)當存在時改變胰島素對INSR的Kd不超過2倍或3倍。進一步提供了在一些實施方案中，結合親和力為結合率與解離率之比或解離率與結合率之比Ka、Kd的任一個。
預期在某些實施方案中，以上任何抗體還可能表現出弱激動劑活性，例如任選地在磷酸化AKT檢測中通過至少10%的胰島素最大信號激活胰島素受體。在另一實施方案中，任選地在磷酸化AKT檢測中通過低于10%的胰島素最大信號激活胰島素受體。在一些實施方案中，抗體包含任選地如表3所示配對的選自SEQ ID N0:281、278、277、209、275、223、284、276和236中所示成熟重鏈可變區(qū)序列的重鏈可變區(qū)和選自SEQ IDN0:141、138、137、35、135、57、144、136和98中所示成熟輕鏈可變序列的輕鏈可變區(qū)。在另一實施方案中，抗體包含(a)任選地如表3所示配對的任何Ab006、Ab030、Ab004、Ab013、Ab009、Ab007、AbOlU AbOOU Ab012、AbOlO、Ab003、Ab008、Ab002、Ab005、Ab076、Ab077、Ab079、Ab080、Ab083、Ab059、Ab078、Ab085 的或 SEQ ID NO:291、196、239、267 和 271 中所列的重鏈可變區(qū)和任何 Ab006、Ab030、Ab004、AbO13、Ab009、Ab007、AbOlUAbOOU Ab012、AbOlO、Ab003、Ab008、Ab002、Ab005、Ab076、Ab077、Ab079、Ab080、Ab083、Ab059、Ab078、Ab085的或SEQ ID NO:76、80、101、128和132中所列的輕鏈可變區(qū)，并且優(yōu) 選其成熟部分，或(b)任選地如表3所示配對的任何Ab006、Ab030、Ab004、Ab013、Ab009、Ab007、AbOlU AbOOU Ab012、AbOlO、Ab003、Ab008、Ab002、Ab005、Ab076、Ab077、Ab079、Ab080、Ab083、Ab059、Ab078、Ab085 的或SEQ ID NO:291、196、239、267和 271 中所列的 I、2或3 個重鏈 CDR 和 / 或任何 Ab006、Ab030、Ab004、Ab013、Ab009、Ab007、AbOlI、AbOOl、Ab012、Ab010、Ab003、Ab008、Ab002、Ab005、Ab076、Ab077、Ab079、Ab080、Ab083、Ab059、Ab078、Ab085的或SEQ ID N0:76、80、101、128和132中所列的I、2或3個輕鏈CDR，任選地在這種重鏈或輕鏈CDR的任何1、2或3個中包括I或2個突變，例如保守性或非保守性取代；或(c)任選地如表 3 所示配對，任何 Ab006、Ab030、Ab004、Ab013、Ab009、Ab007、AbOll、AbOOl、Ab012、Ab010、Ab003、Ab008、Ab002、Ab005、Ab076、Ab077、Ab079、Ab080、Ab083、Ab059、Ab078、Ab085或具有SEQ ID N0:76、80、101、128、132、291、196、239、267和271中所列的可變區(qū)的抗體的所有6個CDR。在其它實施方案中，本發(fā)明提供了與本文所述任何抗體競爭(例如)至少70%、75%或80%的抗體。在某些實施方案中，抗體表現出與選自Ab079、Ab076、Ab083、Ab080、Ab062和Ab020、Ab019、Ab088和Ab089的任何1、2、3個或所有抗體高于或等于70%的競爭，例如至少75%或至少80%的競爭，并且任選地表現出與選自Ab086、Ab064、AbOOl和Ab018的任何1、2、3個或所有抗體高于或等于30%的競爭。任選地，抗體不與Ab062和Ab086的一個或多個競爭并且可任選地結合人和鼠胰島素受體或復合體。在相關實施方案中，抗體表現出與選自Ab040、Ab062、Ab030、Ab001和Ab018的任何1、2、3個或所有抗體高于或等于70%的競爭，例如至少75%或至少80%的競爭，并且任選地表現出與選自Ab037、Ab078、Ab083、Ab080和Ab085的任何I、2、3個或所有抗體高于或等于30%的競爭。在相關實施方案中，抗體不與選自Ab053、Ab064、83-7、Ab019、Ab088和Ab089的任何1、2、3個或更多個抗體競爭。任選地，抗體結合人和鼠胰島素受體或復合體。在另一實施方案中，抗體表現出與選自Ab064、Ab062、Ab085和Ab078的任何1、2、3個或所有抗體高于或等于70%的競爭，例如至少75%或至少80%的競爭。任選地，抗體未表現出與選自 Ab077、AbOO I、AbO 18、Ab030、Ab037、Ab079、Ab076、Ab083、AbO 19、Ab088、Ab089 和Ab040的任何1、2、3個或更多個抗體競爭。任選地，抗體結合人和鼠胰島素受體或復合體。又一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，所述抗體以KT5M或更低的平衡解離常數Kd結合胰島素受體和/或包含胰島素和胰島素受體的復合體，所述抗體能夠削弱胰島素和胰島素受體之間的結合親和力至少約3倍，任選地高達1000倍。在某些實施方案中，抗體削弱所述胰島素和胰島素受體之間的親和力約3倍至500倍。在一些實施方案中，結合親和力為結合率與解離率之比或解離率與結合率之比KA、KD的任一個。在一些實施方案中，對于本文所述的抗體而言，結合親和力或結合率參數的差異范圍從約I. 5倍至約1000倍，或約I. 5倍至約500倍，約I. 5倍至約100倍，或約2倍至25倍，或約2倍至約50倍，或約I. 5倍至約25倍，或約I. 5倍至約50倍，約5倍至約500倍，或約5倍至約200倍，例如至少約I. 5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、16倍、17倍、18倍、19倍或20倍，或高達500倍，或高達200倍，或高達150倍，或高達100倍，或高達90倍，或高達80倍，或高達70倍，或高達60倍，或高達50倍，或高達40倍，高達30倍，高達20倍，或高達10倍或高達5倍或高達3倍。 在相關實施方案中，任選地在pAKT檢測中，抗體使胰島素信號轉導活性的EC50增大約2倍至1000倍。在某些實施方案中，抗體使EC50增大至少約5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、150、200、250、 300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950 或 1000 倍。在某些實施方案中，抗體包含任選地如表3所示配對的選自SEQ ID N0:241、279、258、155和228中所示成熟重鏈可變區(qū)序列的重鏈可變區(qū)和選自SEQID NO: 103、139、119、8和89中所示成熟輕鏈可變區(qū)序列的輕鏈可變區(qū)。在另一實施方案中，抗體包含(a)任何Ab087、Ab019、Ab088、Ab089、Ab020、Ab050、Ab052、Ab055、Ab057、Ab061、Ab063、Ab065、Ab070、Ab072、Ab074、Ab081 的重鏈可變區(qū)和任何 Ab087、AbO 19、Ab088、Ab089、Ab020、Ab050、Ab052、Ab055、Ab057、Ab061、Ab063、Ab065、Ab070、Ab072、Ab074、Ab081的輕鏈可變區(qū)，優(yōu)選其成熟部分，或(b)任何Ab087、Ab019、Ab088、Ab089、Ab020、Ab050、Ab052、Ab055、Ab057、Ab061、Ab063、Ab065、Ab070、Ab072、Ab074、Ab081 的 1、2 或 3 個重鏈 CDR 和 / 或任何 Ab087、Ab019、Ab088、Ab089、Ab020、Ab050、Ab052、Ab055、Ab057、Ab061、Ab063、Ab065、Ab070、Ab072、Ab074、Ab081 的 1、2 或 3 個輕鏈⑶R，任選地在這種重鏈或輕鏈⑶R的任何1、2或3個中包括I或2個突變，例如保守性或非保守性取代；或(c)任何 Ab087、Ab019、Ab088、Ab089、Ab020、Ab050、Ab052、Ab055、Ab057、Ab061、Ab063、Ab065、Ab070、Ab072、Ab074、Ab081 的所有 6 個 CDR。在又一實施方案中，本發(fā)明提供了與以上抗體競爭的抗體，其中所述抗體表現出與選自 Ab079、Ab076、Ab083、Ab080、Ab062 和 Ab020、Ab019、Ab088、Ab089 的任何 I、2、3 個或所有抗體高于或等于70%的競爭，例如至少75%或至少80%的競爭。任選地，抗體未表現出與選自 Ab062、Ab086、Ab001、Ab018、Ab030、Ab037、Ab064 的任何 I、2、3 個或更多個抗體競爭；并且任選地，抗體僅具有人反應性并不結合鼠胰島素受體或復合體。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了抗體，所述抗體為激動劑，其中所述抗體包含任選地如表3所示配對的選自SEQ ID N0:195、220、303、197、208、243、245和251中所示成熟重鏈可變區(qū)序列的重鏈可變區(qū)和選自SEQ ID N0:77、50、90、84、34、104、106和112中所示成熟輕鏈可變區(qū)序列的輕鏈可變區(qū)。在相關實施方案中，抗體包含(a)任選地如表3所示配對的任何Ab021、Ab029、Ab022、Ab017、Ab023、Ab024、Ab025、Ab026、Ab031、Ab035、Ab027、Ab036、Ab037、Ab028、Ab038、Ab039、Ab040、Ab041、Ab042、Ab032、Ab043、Ab044、Ab045、Ab046、Ab047、Ab018、Ab033、Ab048、Ab014、Ab015、Ab049、Ab034、Ab051、Ab053、Ab054、Ab056、Ab058、Ab062、Ab064、Ab066、Ab067、Ab068、Ab086、Ab069、Ab071、Ab073、Ab075、Ab082、Ab084 的或 SEQIDN0:252、253、263、265 和 269 中所列的重鏈可變區(qū)和任何 Ab021、Ab029、Ab022、Ab017、Ab023、Ab024、Ab025、Ab026、Ab031、Ab035、Ab027、Ab036、Ab037、Ab028、Ab038、Ab039、Ab040、Ab041、Ab042、Ab032、Ab043、Ab044、Ab045、Ab046、Ab047、Ab018、Ab033、Ab048、Ab014、Ab015、Ab049、Ab034、Ab051、Ab053、Ab054、Ab056、Ab058、Ab062、Ab064、Ab066、Ab067、Ab068、Ab086、Ab069、Ab071、Ab073、Ab075、Ab082、Ab084 或 SEQ ID NO:7、113、114、124、126和130中所列的輕鏈可變區(qū)并且優(yōu)選其成熟部分，或(b)任選地如表3所示配對的任何 Ab021、Ab029、Ab022、Ab017、Ab023、Ab024、Ab025、Ab026、Ab031、Ab035、Ab027、Ab036、Ab037、Ab028、Ab038、Ab039、Ab040、Ab041、Ab042、Ab032、Ab043、Ab044、Ab045、Ab046、Ab047、Ab018、Ab033、Ab048、Ab014、Ab015、Ab049、Ab034、Ab051、Ab053、Ab054、Ab056、Ab058、Ab062、Ab064、Ab066、Ab067、Ab068、Ab086、Ab069、Ab071、Ab073、Ab075、Ab082、Ab084 的或 SEQ ID NO: 252、253、263、265 和 269 中所列的 I、2 或 3 個重鏈 CDR 和 / 或 Ab021、Ab029、Ab022、Ab017、Ab023、Ab024、Ab025、Ab026、Ab031、Ab035、Ab027、Ab036、Ab037、Ab028、Ab038、Ab039、Ab040、Ab041、Ab042、Ab032、Ab043、Ab044、Ab045、Ab046、Ab047、Ab018、Ab033、Ab048、Ab014、Ab015、Ab049、Ab034、Ab051、Ab053、Ab054、Ab056、Ab058、Ab062、Ab064、Ab066、Ab067、Ab068、Ab086、Ab069、Ab071、Ab073、Ab075、Ab082、Ab084的或SEQ ID NO: 7、113、114、124、126和130中所列的1、2或3個輕鏈CDR，任選地在這種重鏈或輕鏈CDR的任何1、2或3個中包括I或2個突變，例如保守性或非保守性取代；或(c)任選地如表 3 所示配對的任何 Ab021、Ab029、Ab022、AbO 17、Ab023、Ab024、Ab025、Ab026、Ab031、Ab035、Ab027、Ab036、Ab037、Ab028、Ab038、Ab039、Ab040、Ab041、Ab042、Ab032、Ab043、Ab044、Ab045、Ab046、Ab047、Ab018、Ab033、Ab048、Ab014、Ab015、Ab049、Ab034、Ab051、Ab053、Ab054、Ab056、Ab058、Ab062、Ab064、Ab066、Ab067、Ab068、Ab086、Ab069、Ab071、Ab073、Ab075、Ab082、Ab084 的或SEQ ID NO: 7、113、114、124、126、130、252、253、263、265和269中所列的所有6個⑶R。在相關實施方案中，本發(fā)明提供了與以上抗體競爭結合靶標的抗體，其中所述抗體表現出與選自 Ab030、Ab037、Ab053、AbOOl、Ab018、Ab064、Ab040 的任何 1、2、3 個或所有抗體高于或等于70%的競爭，例如至少75%或至少80%的競爭，并且任選地表現出與選自Ab085和Ab086的任何1、2、3個或所有抗體高于或等于30%的競爭。任選地，抗體未表現出與選自Ab079、Ab076和Ab088的任何I、2、3個或更多個抗體競爭；并且任選地結合人和鼠胰島素受體或復合體。另一方面，本發(fā)明提供了編碼本發(fā)明的抗體和多肽的多核苷酸，包含這種多核苷酸的載體，包含這種多核苷酸或載體的宿主細胞和生成本發(fā)明的抗體和多肽的方法，所述方法包括在適合條件下于培養(yǎng)基中孵育宿主細胞和任選地從宿主細胞或培養(yǎng)基分離編碼的抗體或多肽，任選地隨后進一步純化抗體或多肽，例如如本文所述。可使用篩選法分離有本文所述性質的抗體以確定與INSR的結合和胰島素/INSR復合體的調節(jié)。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了增強信號轉導復合體的第一組分(Cl)與第二組分(C2)的結合的正調節(jié)抗體，所述抗體特征在于以下平衡解離常數Kd結合性質(i)所述抗體以10_5M更低，例如10_6M或更低，或10_7M或更低，或10_8M或更低的平衡解離常數Kd結合Cl、C2或包含Cl和C2的復合體(C1C2)的任一個；和(ii)K[C1C2]A, K[AC2]C1或K_C2的任一個比Kac2或ΚΑα的任一個低至少約50%(1. 5倍)。在一些實施方案中，KA、K[AC2]C1 BK
K[AC1]C2的任一個比Kac2或ΚΑα的任一個低約I. 5倍至約100倍；或約2倍至25倍，或約2倍至約50倍，或約I. 5倍至約25倍，或約I. 5倍至約50倍，例如至少約I. 5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、16倍、17倍、18倍、19或20倍，或高達約100倍，或高達約90倍，或高達約80倍，或高達約70倍，或高達約60倍，或高達約50倍，或高達約40倍，或高達約30倍，或高達約20倍，或高達約10倍。在一些實施方案中，Κ_]Α、Κ_α或K_C2的任一個比Kac2或ΚΑα低至少約I. 5倍；或低I. 5倍至約100倍，或約2倍至25倍，或約2倍至約50倍，或約I. 5倍至約25倍，或約I. 5倍至約50倍，例如至少約I. 5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、16倍、17倍、18倍、19或20倍，或高達約100倍，或高達約90倍，或高達 約80倍，或高達約70倍，或高達約60倍，或高達約50倍，或高達約40倍，或高達約30倍，或高達約20倍，或高達約10倍。在一些實施方案中，本發(fā)明提供了削弱信號轉導復合體的第一組分(Cl)與第二組分(C2)的結合的負調節(jié)抗體，所述抗體特征在于以下平衡解離常數Kd結合性質(i)所述抗體以10_5M或更低，例如10_6M或更低，或10_7M或更低，或10_8M或更低的平衡解離常數Kd結合Cl、C2或包含Cl和C2的復合體(C1C2)的任一個；和(ii)KAC2或Kaci的任一個比K[C1C2]A、K[AC2]C1 或K[Aa]C2的任一個低至少約50%(I. 5倍)。在一些實施方案中，KAe2或Kaci的任一個比
K[C1C2]A、K[AC2]C1 或Ktol]e2的任一個低至少約I. 5倍至約100倍；或約2倍至25倍，或約2倍至約50倍，或約I. 5倍至約25倍，或約I. 5倍至約50倍，例如至少約I. 5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、16倍、17倍、18倍、19或20倍，或高達約100倍，或高達約90倍，或高達約80倍，或高達約70倍，或高達約60倍，或高達約50倍，或高達約40倍，或高達約30倍，或高達約20倍，或高達約10倍。在一些實施方案中，Kac2或Kaq的任一個比K
[C1C2]A、K[AC2]C1
或KC2 全部低至少約I. 5倍；或
低I. 5倍至約100倍，或約2倍至25倍，或約2倍至約50倍，或約I. 5倍至約25倍，或約I. 5倍至約50倍，例如至少約I. 5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、16倍、17倍、18倍、19或20倍，或高達約100倍，或高達約90倍，或高達約80倍，或高達約70倍，或高達約60倍，或高達約50倍，或高達約40倍，或高達約30倍，或高達約20倍，或高達約10倍。在特定實施方案中，Cl和C2選自胰島素和胰島素受體。另一方面，本發(fā)明包括一種制備無菌藥物組合物的方法，所述方法包括將藥學上可接受的無菌稀釋劑加入本發(fā)明的抗體中。任選地，在組合物中還包括少量的防腐劑，例如殺菌劑或抑菌劑。還包括包含本發(fā)明的抗體和藥學上可接受的無菌稀釋劑的無菌組合物。本發(fā)明進一步預期，本發(fā)明的抗體調節(jié)INSR和胰島素或胰島素類似物或胰島素模擬物之間的結合。本發(fā)明的抗體還優(yōu)選表現出期望的生物學性質，包括但不限于加強動物模式中的體外或體內的葡萄糖攝取，并且優(yōu)選由外源胰島素誘導葡萄糖攝取。在一些實施方案中，抗體能夠提高葡萄糖攝取的速率或總量或兩者。又一方面，本發(fā)明包括一種治療與胰島素抵抗相關的病癥的方法，所述方法包括按治療胰島素抵抗有效的量向需要的受試者施用本發(fā)明的正調節(jié)抗體或激動劑抗體。在相關實施方案中，治療增強葡萄糖攝取。在另一實施方案中，增強的葡萄糖攝取選自葡萄糖攝取速率增加、葡萄糖攝取總量增加或兩者。進一步預期治療使患有血糖升高、高血糖癥或與胰島素抵抗相關的病癥的受試者的空腹血糖水平降低至空腹血糖水平的正常范圍。在相關實施方案中，與未治療的受試者相比，空腹血糖降低約15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%或更多。在相關方面，治療降低升高的HbAlc水平，這是在前幾個月期間葡萄糖水平升高的標志，并且表示糖尿病。在更多實施方案中，治療改善了糖耐量減低。在一個實施方案中，通過葡萄糖耐量試驗(GTT)測量葡萄糖耐量。 在其它實施方案中，治療減緩、減少或標準化受試者的增重。在一個實施方案中，與未治療的受試者相比，治療減少或減緩增重至少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%或50%。在一些實施方案中，治療減緩、減少或標準化受試者的失重。在一個實施方案中，與未治療的受試者相比，治療減少或減緩失重至少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%或 50%ο在相關方面，預期本文所述抗體或多肽促進或誘導受試者的失重。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了通過施用如本文所述的調節(jié)抗體、其片段或多肽促進或誘導失重的方法。在一個實施方案中，調節(jié)抗體為正調節(jié)劑或部分激動劑。在相關實施方案中，調節(jié)抗體為負調節(jié)劑。在某些實施方案中，治療進一步引起選自血脂異常、血漿甘油三酯升高、HOMA-IR升高、血漿未酯化膽固醇升高、血漿總膽固醇升高、血漿胰島素(表示胰島素抵抗)、非HDL/HDL膽固醇比例低(或總膽固醇/HDL膽固醇比例低)和血漿瘦素水平升高(表示瘦素抗性)的糖尿病或胰島素抵抗的1、2、3種或更多種癥狀改善。進一步假設，還使用如詳述中所述的因子進行體外和體內分析測量治療的效果。在一個實施方案中，與胰島素抵抗相關的病癥選自高血糖癥、前期糖尿病、代謝綜合征(也稱為胰島素抵抗綜合征)、2型糖尿病、多囊卵巢病(PCOS)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、脂肪變性、肥胖、血脂異常、Rabson-Mendenhall綜合征、多諾霍綜合征(Donohue syndrome)或矮怪病。另一方面，本發(fā)明提供了一種治療與高胰島素血癥、異常生成和/或對胰島素的敏感性相關，表現為胰島素信號過多的病狀或病癥的方法，所述方法包括按治療胰島素生產過剩和/或敏感性有效的量向需要的受試者施用本發(fā)明的負調節(jié)抗體或拮抗劑抗體。在一些實施方案中，與胰島素敏感性相關的病癥選自癌癥、卡波西氏肉瘤、胰島素瘤、糖尿病腎病、低血糖癥、胰島母細胞增生癥(KATP-H1彌漫性疾病、KATP-Hl病灶性疾病或“PHHI”)、GDH-Hl (高胰島素血癥/高氨血癥綜合征(HI/HA)、亮氨酸敏感性低血糖癥或二氮嗪敏感性低血糖癥)、胰島細胞失調綜合征、嬰兒先天性低血糖癥、嬰兒持續(xù)性高胰島素性低血糖癥(PHHI)和先天性高胰島素血癥、胰島素過量、歸因于腎衰竭(急性或慢性)和歸因于慢性腎病的低血糖癥，例如III、IV或V型。還預期在用于治療本文所述任何病癥的藥物制劑中，本發(fā)明的上述任何抗體或多肽調節(jié)胰島素-INSR信號轉導相互作用的用途。還包括注射器(例如，一次性或預充注射器)、無菌密封容器，例如，包含上述抗體或多肽的小瓶、瓶子、管和/或試劑盒或包裝，任選地包括適合的使用說明。本發(fā)明的任何上述抗體或多肽可作為輔助療法與本領域已知或本文所述的抗糖尿病試劑同時施用。還包括包含本發(fā)明的任何上述抗體或多肽和其它抗糖尿病試劑的組合物。本領域中已知許多抗糖尿病試劑，包括但不限于I)磺酰脲(例如，格列美脲、格列生脲、磺酰脲、AY31637) ；2)雙胍(例如，二甲雙胍)；3) α-葡糖苷酶抑制劑(例如，阿卡波糖、米格列醇)；4)噻唑烷二酮(例如，曲格列酮、吡格列酮、羅格列酮、格列吡嗪、巴格列酮、利格列酮、萘格列酮、曲格列酮、恩格列酮、AD5075、Τ174、ΥΜ268、R102380、NC2100、ΝΙΡ223、ΝΙΡ221、ΜΚ0767、環(huán)格列酮、adaglitazone、CLX0921、達格列酮、CP9276 8、BM152054) ；5)胰高糖素樣肽(GLP)和GLP類似物或GLP-I受體的激動劑(例如毒蜥外泌肽)或其穩(wěn)定劑(例如，DPP4抑制劑(例如西他列汀))；和6)胰島素或其類似物或模擬物(例如L.ANTUS
)o在相關方面，本發(fā)明提供了一種使用如本文所述的抗體診斷胰島素抵抗或胰島素敏感性的方法。在一個實施方案中，所述方法包括使用本文所述的胰島素受體抗體測量來自受試者的樣品中胰島素或胰島素受體的水平，其中胰島素或游離胰島素受體水平上升或膜結合胰島素受體水平降低表示受試者患有或處于糖尿病或胰島素抵抗危險，和任選地向患有或處于糖尿病或胰島素抵抗危險的所述受試者施用糖尿病治療劑。在另一實施方案中，所述方法包括使用本文所述的胰島素受體抗體測量來自受試者的樣品中胰島素受體的水平，其中游離胰島素受體的水平上升或膜結合胰島素受體的水平下降表示受試者患有或處于癌癥危險，以及任選地向所述受試者使用癌癥治療劑。另一方面，本發(fā)明提供了鑒定調節(jié)如本文所述的胰島素與胰島素受體的結合的抗體的方法。應了解，本文所述的每個特征或實施方案或組合是本發(fā)明各方面的非限制性、說明性實例，同樣意味著可與本文所述的任何其它特征或實施方案或組合結合。例如，使用例如“一個實施方案”、“一些實施方案”、“又一實施方案”、“特定示例性實施方案”和/或“另一實施方案”等語言描述特征時，這些類型的實施方案的每一個均為旨在與本文所述任何其它特征或特征的組合結合的特征的非限制性實例，而無需列出每種可能的組合。這種特征或特征組合應用于本發(fā)明的任何方面。類似地，一種方法描述了鑒定多肽結合劑，例如特征在于某些特征的抗體時，本發(fā)明還包括特征在于那些特征的多肽結合劑。公開了屬于范圍中的值的實例，將任何這些實例考慮為范圍的可能端點時，包括這些端點之間的任何和所有數值，并且預見了上下端點的任何和所有組合。


圖I描述了來自INSR受體占用篩選，顯示在胰島素存在和不存在時試驗抗體結合表達INSR的頂-9細胞的代表性結果。圖2示出了來自生物素化配體篩選，顯示試驗抗體對胰島素與胰島素受體結合的影響的代表性結果。
圖3示出了測量試驗抗體調節(jié)胰島素依賴性pIRS-1磷酸化的能力的檢測的結果。圖4示出了來自pIRS-1活性檢測，顯示代表性抗體與來自不同功能類別的INSR的結合的結果。A)正調節(jié)劑；B)具有顯著激動性的正調節(jié)劑；C)非調節(jié)劑；D)激動劑抗體；E)負調節(jié)劑。圖5為顯示來自根據EC50比值+Ab/_Ab歸類的pIRS_l檢測的代表性抗體的胰島素EC50值的表。圖6示出了代表性抗體的pAKT檢測的結果A)具有極低激動性的正調節(jié)劑；B)具有激動性的正調節(jié)劑；C)激動劑抗體；D)83-7 ；E)不存在抗體時的胰島素和本底反應。圖7為顯示了代表性試驗抗體的激動性和鼠交叉反應性的表。(nd=不確定)
圖8示出了顯示受4個不同濃度的正調節(jié)劑INSR影響,胰島素劑量反應的敏感性(EC50, EC50的倍數變化)和協同性(Hill斜率)的變化的pAKT檢測結果。圖8A用圖表示出了結果，而圖SB以表的形式示出了結果。圖9說明正調節(jié)劑抗體增強了胰島素依賴性葡萄糖攝取。在lOug/ml試驗抗體AbOOl或抗KLH同種型對照存在下用O. 8nM胰島素誘導3T3-L1細胞中的3H_2_脫氧葡萄糖攝取。圖10示出了飼喂高脂食物并且用部分激動劑抗INSR抗體處理的20周齡DIO小鼠的血糖水平A.葡萄糖水平的線圖。B.血糖水平的條形圖，顯示在注射部分激動劑抗INSR抗體之后血糖在統計上顯著降低。圖11說明施用部分激動劑抗INSR抗體改善了 DIO小鼠的血糖控制A.葡萄糖耐量試驗時間過程；B.空腹血糖水平；C.葡萄糖耐量試驗；曲線下面積(AUC)。圖12顯示正調節(jié)劑抗INSR抗體改善了 DIO小鼠的胰島素敏感性A.葡萄糖耐量試驗時間過程；B.空腹血糖水平；C.葡萄糖耐量試驗；曲線下面積(AUC)。圖13顯示負調節(jié)劑抗INSR抗體改善了 DIO小鼠的血糖控制A.葡萄糖耐量試驗時間過程；B.空腹血糖水平；C.葡萄糖耐量試驗；曲線下面積(AUC)。圖14證明正調節(jié)劑和部分激動劑抗INSR抗體改善了 DIO小鼠的甘油三酯和膽固醇水平。測量經腹膜內(IP)注射了 Ab001、Ab037或同種型對照(10mg/g ;相對于同種型對照/HFD，*p<0. 05)的30周齡DIO小鼠的血漿甘油三酯和膽固醇水平A.血漿甘油三酯水平；B.血漿膽固醇水平。圖15說明了施用正調節(jié)劑和部分激動劑抗INSR抗體之后DIO小鼠的血糖控制改善。在經腹膜內(IP)注射了 Ab001、Ab037、Ab083、Ab085或同種型對照(10mg/kg ;相對于同種型對照/HFD，*p〈0.05)的DIO小鼠中觀察到血糖控制測量:A.葡萄糖耐量試驗時間過程；B.葡萄糖耐量試驗；曲線下面積(AUC) ；C.空腹血糖水平。圖16顯示正調節(jié)劑和部分激動劑抗INSR抗體改善了用mAb處理4周的18周齡DIO小鼠的血糖參數、胰島素抵抗和/或血脂異常。對來自經腹膜內(IP)注射了 AbOOl、Ab037、Ab083、Ab085或同種型對照4周(10mg/kg ;相對于同種型對照/HFD, *ρ〈0· 05)的DIO小鼠的血漿進行了分析。Α.血漿葡萄糖水平；Β.血漿胰島素水平；C. HOMA-IR ;D.血漿甘油三酯水平；E.血漿未酯化膽固醇水平；F.血漿總膽固醇水平；G.血漿非HDL膽固醇水平；H.血漿非HDL/HDL膽固醇比例。圖17證明，如通過對經腹膜內(IP)注射了 Ab001、Ab037、Ab083、Ab085或同種型對照3周(10mg/kg ;相對于同種型對照/HFD，*p〈0. 05)的18周齡DIO小鼠的體重測量評估，正調節(jié)劑和部分激動劑抗INSR抗體減少了 DIO小鼠的增重A.相對于前劑量重量的體重百分比變化；B.相對于前劑量重量的體重百分比變化曲線下面積。圖18描述了通過對經腹膜內(IP)注射了 AbOOl (lmg/kg或10mg/kg)、Ab037 (10mg/kg)或同種型對照(lmg/kg或10mg/kg) 14周(相對于同種型對照，*ρ〈0· 05)的5周齡db/db小鼠的體重測量分析，正調節(jié)劑和部分激動劑抗INSR抗體誘導db/db小鼠的增重標準化A.至研究第35天之前，相對于前劑量重量的體重百分比變化；B.相對于研究第35天時的重量的體重百分比變化；C.至研究第35天之前，相對于前劑量重量的體重百分比變化曲線下面積；D.相對于研究第35天時的重量的體重百分比變化曲線下面積。圖19顯示如使用對經腹膜內(IP)注射了 AbOOl (lmg/kg或10mg/kg)、Ab037 (10mg/kg)或同種型對照(lmg/kg或10mg/kg) 14周(相對于相同劑量的同種型對照，*p〈0. 05)的5周齡db/db小鼠的血糖控制測量評估,正調節(jié)劑抗體降低了 db/db小鼠 的空腹血糖和HbAlc A.空腹血糖水平；B. %HbAlc水平。圖20說明施用正調節(jié)劑抗體改善了 db/db小鼠的血脂異常。對來自經腹膜內(IP)注射了 AbOOl (lmg/kg 或 10mg/kg)、Ab037 (10mg/kg)或同種型對照(lmg/kg 或 IOmg/kg) 14周(相對于相同劑量的同種型對照，*p〈0. 05)的5周齡db/db小鼠的血衆(zhòng)進行了分析。A.血漿胰島素水平；B.血漿甘油三酯水平；C.血漿未酯化膽固醇水平；D.血漿總膽固醇水平；E.血漿非HDL膽固醇水平；F.血漿非HDL/HDL膽固醇比例。圖21顯示施用正調節(jié)劑抗體降低了 db/db小鼠的空腹血糖。對經腹膜內(IP)注射了 AbOOl (lmg/kg 或 10mg/kg)、Ab037 (10mg/kg)或同種型對照(lmg/kg 或 10mg/kg) 14 周(Ab085相對于相同劑量的同種型對照，*p〈0. 05)的5周齡db/db小鼠的每周空腹血糖評估。圖22說明如通過分析來自經腹膜內(IP)注射了 AbOOl、Ab037、Ab083、Ab085或同種型對照4周(10mg/kg,相對于相同劑量的同種型對照，*p〈0. 05)的5周齡db/db小鼠的血漿評估，正調節(jié)劑抗體改善了 db/db小鼠的胰島素抵抗，并且示出了施用4周劑量之后胰島素抵抗(HOMA-IR)的穩(wěn)態(tài)模型評估。圖23說明正調節(jié)劑和部分激動劑抗INSR抗體改善了 MLDS/HFD小鼠的血糖控制。從經腹膜內(IP)注射了 AbOOl、Ab037或同種型對照(10mg/kg ;相對于同種型對照，*p〈0. 05)的10周齡MLDS/HFD小鼠獲得血糖控制測量A.葡萄糖耐量試驗時間過程；B.葡萄糖耐量試驗；曲線下面積(AUC) ；C.空腹血糖水平。圖24顯示施用部分激動劑抗體降低了 MLDS/HFD小鼠的飼喂血糖和HbAlc。對經腹膜內(IP)注射了 Ab001、Ab037或同種型對照6周(10mg/kg ;相對于同種型對照,*ρ〈0· 05)的10周齡MLDS/HFD小鼠進行血糖控制測量Α.飼喂血糖水平；B. %HbAlc水平。圖25顯示正調節(jié)劑和/或部分激動劑抗INSR抗體部分修正了 MLDS/HFD小鼠的胰島素、瘦素和非HDL/HDL膽固醇水平。對經腹膜內(IP)注射了 AbOOl、Ab037或同種型對照6周(10mg/kg ;相對于同種型對照，*p〈0. 05)的10周齡MLDS/HFD小鼠測量血漿膽固醇、胰島素和瘦素水平A.血漿非HDL/HDL膽固醇比例；B.血漿胰島素水平；C.血漿瘦素水平。圖26說明正調節(jié)劑和部分激動劑抗INSR抗體不影響MLDS/HFD小鼠的體重。對經腹膜內(IP)注射了 AbOOl、Ab037或同種型對照6周(10mg/kg)的10周齡MLDS/HFD小鼠進行體重測量并且結果表示為相對于前劑量重量的體重百分比變化。圖27說明正調節(jié)劑和部分激動劑抗INSR抗體改善了 MLDS/HFD小鼠的血糖控制。對經腹膜內(IP)注射了 AbOOl、Ab037或同種型對照6周(10mg/kg ;相對于同種型對照，*p〈0. 05)的10周齡MLDS/HFD小鼠進行葡萄糖耐量試驗(GTT)。A.葡萄糖耐量試驗時間過長B.葡萄糖耐量試驗；曲線下面積(AUC)。圖28顯示如通過對經腹膜內(IP)注射了 AbOOl、Ab083、Ab085、Ab037或同種型對照6周(10mg/kg ；Ab083和Ab037相對于同種型對照，*ρ〈0· 05)的10周齡MLDS/HFD小鼠進行每周空腹血糖評估確定，正調節(jié)劑和部分激動劑抗INSR抗體改善了 MLDS/HFD小鼠的血糖控制。
圖29說明正調節(jié)劑和部分激動劑抗INSR抗體改善了 MLDS/HFD小鼠的血脂異常。對來自經腹膜內(IP)注射了 Ab001、Ab083、Ab085、Ab037或同種型對照6周(10mg/kg ;相對于同種型對照，*P〈0. 05)的10周齡MLDS/HFD小鼠的血漿進行了分析。A.血漿甘油三酯水平；B.血漿游離脂肪酸水平；C.血漿未酯化膽固醇水平；D.血漿總膽固醇水平；E.血漿非HDL膽固醇水平；F.血漿非HDL/HDL膽固醇比例。圖30顯示如通過對經腹膜內(IP)注射了 AbOOl、Ab083、Ab085、Ab037或同種型對照6周(10mg/kg ；Ab083和Ab037相對于同種型對照，*ρ〈0· 05)的10周齡MLDS/HFD小鼠的血液HbAlc估計來確定，正調節(jié)劑和部分激動劑抗INSR抗體改善了 MLDS/HFD小鼠的血糖控制(HbAlc)。圖31顯示如使用對經腹膜內(IP)注射了 AbOOl、Ab083、Ab085、Ab037或同種型對照6周(10mg/kg)的10周齡MLDS/HFD小鼠的體重測量確定，正調節(jié)劑和部分激動劑抗INSR抗體通常不影響MLDS/HFD小鼠的體重。圖32顯示正調節(jié)劑和部分激動劑抗INSR抗體增大體內胰島素信號轉導。為10周齡C56BL/6雄性小鼠注射Ab083、Ab085、Ab037或同種型對照(10mg/kg)24小時，并且在胰島素藥丸后通過ELISA確定對肝臟(A)和肌肉(B) INSR酪氨酸磷酸化的影響。圖33為顯示與IgG2恒定區(qū)重排的INSR特異性抗體的結合特征的表。圖34說明了與對內源性配體的劑量反應相比，部分變構激動劑抗INSR抗體的劑量反應(A)或在變構激動劑抗體存在或不存在時配體的激活(B)。圖35顯示與對內源性配體的劑量反應相比，正調節(jié)劑抗體的劑量反應⑷或在正調節(jié)劑抗體存在和不存在時內源性配體的劑量反應(B)。圖36說明了相對于內源性配體胰島素，一組單獨的部分變構激動劑的激活參數。由測量在Ser473處的Akt磷酸化百分比獲得數據。圖37說明相對于在負對照抗體存在時對內源性配體的最大反應，在lOug/ml部分變構激動劑抗體存在時胰島素的激活性質。由測量在Ser473處的Akt磷酸化百分比獲得數據。圖38-40描述了對于親本CH0-K1細胞、表達人胰島素受體的CH0-K1細胞和表達小鼠胰島素受體的CH0-K1細胞，在胰島素不存在時或次最大濃度的胰島素存在時抗體激活pAkt。圖38A-C示出了具有少許或無pAkt激動活性(在胰島素不存在時,用50ug/ml抗體激活〈10%的pAkt)的敏化劑Ab (Ab077、Ab078、Ab085)的作用。圖39A-C示出了具有弱或中等pAkt激動活性(在胰島素不存在時，用50ug/ml抗體激活10-20%的pAkt)的敏化劑Ab(Ab001、Ab079、Ab083)的作用。圖40說明了具有中等pAkt激動活性(在胰島素不存在時，用50ug/ml抗體激活>20%的pAkt)的敏化劑Ab (Ab080)的作用。圖41顯示了在固定濃度的敏化抗INSR抗體存在時，在表達人(A和C)或小鼠INSR(B)的CHO細胞中的胰島素依賴性pAkt激活。圖42證明了與單獨的胰島素相比，在不存在胰島素時，在表達人⑷或小鼠INSR(B)的CHO細胞中由部分變構激動劑抗體激活pAkt。圖43描述了在固定濃度的部分變構激動劑抗體存在下，在表達人INSR的CHO細胞中胰島素依賴性PAkt激活的結果。圖44顯示了在表達⑷人INSR或⑶小鼠INSR的CHOKl細胞上的抗體83_7和AbOOl的pAKT檢測結果。 圖45示出了按估計的胰島素受體濃度繪制的游離胰島素百分比。對于所有克隆而言，胰島素水平固定為50pM并且抗體濃度為10ug/ml (67nM)，除Ab078在25ug/ml (167nM)下試驗外。所示曲線為用于計算EC50的非線性回歸Prism擬合。圖46示出了按估計胰島素受體濃度繪制的游離胰島素百分比。對于所有克隆而言，胰島素水平固定為50pM并且抗體濃度為10ug/ml (67nM)。所示曲線為用于計算EC50的非線性回歸Prism擬合。圖47顯示在抗INSR抗體Ab085存在下，TNFa誘導3T3-L1脂肪細胞中胰島素介導的脂肪酸攝取的脫敏。圖48和圖49說明了如pAKT檢測中測量，純化正調節(jié)劑抗INSR抗體AbOOl、Ab037、Ab077、Ab079、AB080、Ab083 對人 INSR (圖 48)和小鼠 INSR (圖 49)的影響。圖50和圖51證明純化激動劑抗體Ab037、Ab030、Ab053和Ab062對人INSR (圖50)和小鼠INSR(圖51)的相對％pAKT。圖52證明在激活猴INSR之后，純化的抗INSR抗體Ab030、Ab037、Ab053、AbOOl、Ab079、AB080和Ab083能夠誘導AKT磷酸化(相對％pAKT)。圖53示出了在表達人INSR的CHOKl細胞中測量的負調節(jié)劑抗體Ab061、Ab070和Ab081 的相對 ％pAKT。圖54為顯示胰島素受體抗體的交叉反應性的表，并且說明結合人胰島素受體的某些抗體也結合兔和獼猴胰島素受體并且這種結合受胰島素的存在所調節(jié)
具體實施例方式本發(fā)明提供了對胰島素受體或胰島素受體-胰島素復合體有特異性的抗體及其在治療與葡萄糖水平異常有關的病癥中的用途，所述與葡萄糖水平異常有關的病癥例如高血糖癥或低血糖癥、胰島素水平異?；蛞葝u素敏感性異常有關的病癥，例如胰島素抵抗病癥或胰島素敏感性病癥。這些抗體可通過改變INSR-INS信號轉導復合體組分組裝和解離的動力學速率常數或通過其它機制(包括改變信號轉導復合體的結構狀態(tài)，例如通過結合過渡態(tài)和加速信號轉導的激活)來誘導INSR中對細胞反應的正或負影響。調節(jié)信號轉導復合體可引起對信號輸入的敏感性增強或減弱并伴隨信號轉導的增加或減少。施用調節(jié)劑抗體使細胞途徑的敏感性和/或細胞反應的絕對水平上升或下降。本發(fā)明的調節(jié)劑，根據它們的性質，可起調節(jié)劑、增效劑、調控劑、效應子或敏化劑的作用。許多抗體藥物通過結合細胞表面受體或其同源配體并消除配體結合和激活受體的能力起作用以阻斷信號轉導途徑。這種阻斷藥物通過防止受體-配體復合體的形成而在化學計量上介導其作用。這些疾病的成功治療可能需要減少而非完全抑制信號轉導途徑以恢復具有可接受副作用特征的正常生理狀態(tài)。預計本發(fā)明提供的抗體提供這種優(yōu)點。其它治療藥物通過結合細胞表面受體并改變受體的活性而影響細胞的信號轉導途徑。這種直接激動劑藥物可通過模擬配體的天然活性介導其作用并且因此具有固有活 性，即，它們不需要配體存在以介導其作用。更多治療藥物通過結合配體影響細胞的信號轉導途徑。這種間接激動劑藥物可通過改變配體穩(wěn)定性或化合價介導其作用。通常以連續(xù)方式而非以二元方式調節(jié)生物過程，并且因此在許多情況下調節(jié)途徑活性可能是比完全途徑阻斷或刺激更適合的治療策略。對途徑活性的調節(jié)而非完全途徑阻斷或刺激來進行基于細胞的功能性篩選很費力，并且可能不易于按高通量方式進行，因為這種篩選通常需要已知濃度的試驗化合物并且可能對試驗化合物制劑中的任何雜質敏感。尤其，對于不能進入細胞內環(huán)境的細胞不可滲透性分子而言，并且特別是對在所用生產系統中表達水平、純度和穩(wěn)定性可能不同的重組生物分子而言，對途徑活性的調節(jié)進行基于細胞的高通量功能性篩選受到限制。另外，在功能性篩選中一些結合相互作用可能沒有信號轉導輸出測量(例如在誘餌受體、誘餌底物或失活形式的靶標情況下)，使得難以鑒定擾動這些相互作用的試劑。本發(fā)明克服了這些缺點并提供了一種以高通量方式鑒定INSR活性和所需藥物效力的正和負調節(jié)劑的方法。本發(fā)明還提供了具有所需范圍的活性調節(jié)的INSR活性的正和負調節(jié)劑，并且提供了顯示這些調節(jié)劑表現出改變葡萄糖攝取的所需生物效應的數據。定義術語“化合物”指任何有機或無機、內源性或外源性化合物，包括但不限于多肽、蛋白質、肽、小分子、核酸(例如DNA和RNA)、碳水化物、脂類、脂肪酸、類固醇、嘌呤、嘧唆、模擬肽、聚酮及其衍生物、結構類似物或組合?！皟仍葱浴敝覆溉閯游矬w內天然存在，而“外源性”指哺乳動物體內非天然存在，例如施用的外來化合物。術語“多肽結合劑”指能夠特異性結合抗原(例如靶標或其信號轉導伴侶)或能夠以可測量的結合親和力結合抗原的多肽。多肽結合劑的實例包括與其它肽部分或非肽部分任選地偶聯的抗體、肽體、多肽和肽?？膳c多肽結合劑結合的抗原包括能夠引起抗體反應或能夠以高于非特異性結合的可檢測結合親和力與多肽結合劑結合的任何蛋白質或非蛋白質分子。與調節(jié)多肽結合劑結合的抗原可包括靶標、靶標的信號轉導伴侶和/或包含靶標及其信號轉導伴侶的復合體。在廣義上使用術語“抗體”并且包括全組裝式抗體、四聚體抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)、可結合抗原的抗體片段(例如Fab’、F’(ab)2、Fv、單鏈抗體、雙鏈抗體)和包含上述的重組肽，只要它們表現出所需的生物活性?！懊庖咔虻鞍住被颉八木垠w抗體”是由2條重鏈和2條輕鏈組成的四聚體糖蛋白，每條鏈包含可變區(qū)和恒定區(qū)?？赏ㄟ^重組DNA技術或酶促或化學裂解完整抗體生成抗原結合部分。除其它外，抗體片段或抗原結合部分包括Fab、Fab'、F(ab' ) 2、Fv、結構域抗體(dAb)、互補決定區(qū)(CDR)片段、CDR移植抗體、單鏈抗體(scFv)、單鏈抗體片段、嵌合抗體、雙鏈抗體、三鏈抗體、四鏈抗體、微型抗體、線性抗體；螯合重組抗體、三抗體或雙抗體、細胞內抗體、納米抗體、小模塊化免疫藥物(SMIP)、抗原結合結構域免疫球蛋白融合蛋白、駱駝化抗體、含有VHH的抗體或其變異體或衍生物和含有至少一部分足以賦予多肽特異性抗原結合的免疫球蛋白的多肽，例如1、2、3、4、5或6個CDR序列，只要抗體保持所需生物活性。“單克隆抗體”指從大體上同源的抗體群體獲得的抗體，S卩，包含該群體的單個抗體除可能存在少量的可能性天然突變外相同。如本文所使用的“抗體變異體”指在天然抗體可變區(qū)結構域的可變區(qū)中含有至少一個氨基酸取代、缺失或插入的抗體多肽序列。變異體可能大體上同源或與未修飾抗體大體上相同。本文所使用的“嵌合抗體”指含有源自通常起源于兩個不同物種的兩種不同抗體(參見，例如，美國專利No. 4，816，567)的序列的抗體。最典型地，嵌合抗體包含人和嚙齒動 物抗體片段，通常為人恒定區(qū)和小鼠可變區(qū)?！爸泻涂贵w”為能夠消除或顯著降低與之結合的抗原的生物功能的抗體分子。因此，“中和”抗體能夠消除或顯著降低生物功能，例如酶活性、配體結合或細胞內信號轉導?！胺蛛x的”抗體是已經鑒定并從其自然環(huán)境的組分中分離和回收的抗體。其自然環(huán)境的污染物組分是干擾抗體的診斷或治療用途的物質，并且可能包括酶、激素和其它蛋白質或非蛋白質溶質。在優(yōu)選的實施方案中，將抗體純化為(I)如通過羅氏法確定按抗體重量計高于95%，并且最優(yōu)選按重量計高于99%，(2)足以通過利用旋杯式序列分析儀獲得N端或內部氨基酸序列的至少15個殘基的程度，或(3)通過在還原或非還原條件下使用考馬斯藍或優(yōu)選銀染色法進行SDS-PAGE純化至均質。由于抗體自然環(huán)境的至少一種組分將不存在，分離的抗體包括重組細胞內的原位抗體。然而一般地，可通過至少一個純化步驟制備分離的抗體。本文所使用的“重鏈可變區(qū)”指抗體分子包含所述抗體重鏈可變結構域的至少一個互補決定區(qū)(OTR)的區(qū)域。重鏈可變區(qū)可含有所述抗體重鏈的1、2或3個⑶R。本文所使用的“輕鏈可變區(qū)”指抗體分子包含所述抗體輕鏈可變結構域的至少一個互補決定區(qū)(CDR)的區(qū)域。輕鏈可變區(qū)可含有所述抗體輕鏈的1、2或3個CDR，根據抗體的不同，可為K或λ輕鏈。如本文所使用，“特異性結合”，具有“抗原特異性”，對抗原靶標“有特異性”或與抗原“起免疫反應”的抗體指以高于類似序列的其它抗原的親和力結合抗原的本發(fā)明抗體或多肽結合劑。一方面，本發(fā)明的多肽結合劑或其片段、變異體或衍生物將以比與其它，即非人物種的類似抗原的結合親和力高的親和力結合人抗原，但是識別并結合靶標同源物的多肽結合劑在本發(fā)明范圍內。例如，為對其同源抗原“有特異性”的抗體或其片段的多肽結合劑指抗體的可變區(qū)以可檢測優(yōu)先識別并結合所需抗原(例如，所需抗原為多肽時，抗體的可變區(qū)能夠依靠結合親和力的可測量差異區(qū)別抗原多肽和相同家族的其它已知多肽，盡管家族成員之間可能存在局部序列同一性、同源性或相似性)。應了解，特異性抗體還可通過與抗體可變區(qū)外和尤其在分子恒定區(qū)內的序列相互作用而與其它蛋白質相互作用(例如，金黃色葡萄球菌(S. aureus)蛋白A或ELISA技術中的其它抗體)。眾所周知用于本發(fā)明中確定多肽結合劑(例如抗體)的結合特異性的篩選檢測，并且在本領域中經常實踐。這種檢測的綜合討論，參見 Harlow 等(編)，Antibodies A Laboratory Manual ; Co Id Spring HarborLaboratory ; Co Id Spring Harbor, NY (1988),第6章?？墒褂帽绢I域中已知的任何方法生產用于本發(fā)明的抗體。術語“表位”指任何分子能夠被選擇性結合劑在一個或多個抗原結合區(qū)識別并結合的部分。表位通常由分子的化學活性表面群組組成，例如氨基酸或碳水化合物側鏈，并且具有特定三維結構特征以及特定電荷特征。本文所使用的表位為鄰接或非鄰接。當連同本發(fā)明的多肽結合劑和多肽使用時，術語“衍生物”指通過如泛素化、與治療或診斷劑偶聯、標記(例如用放射性核素或各種酶)、共價聚合物連接(例如聚乙二醇化)(用聚乙二醇衍生化)和通過化學合成在人蛋白質中不常出現的氨基酸(例如鳥氨酸)進行插入或取代等技術在化學上修飾的多肽。衍生物保留了本發(fā)明未衍生化分子的結合性質。 “可檢測部分”或“標記”指可通過分光鏡、光化學、生物化學、免疫化學或化學方式檢測的組合物。例如，有用的標記包括32P、35S、熒光染料、電子致密試劑、酶(例如，通常用于ELISA中的酶)、生物素-鏈酶親和素、異羥基洋地黃毒苷(dioxigenin)、可用抗血清或單克隆抗體的半抗原和蛋白質或具有與另一標記核酸分子互補的序列的核酸分子。可檢測部分通常產生可測量信號，例如放射性、產色或熒光信號，這些信號可用于量化樣品中結合的可檢測部分的量。“肽”或“寡肽”是長度通常為3至100個氨基酸殘基之間的短氨基酸序列，并且涵蓋天然氨基酸殘基和殘基的非天然類似物，可單獨使用或與天然氨基酸殘基結合使用以賦予肽特定的構象特異性或特定的生物活性，例如對蛋白質水解的抗性。肽包括肽序列的重復并且可包括2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多份頭尾或頭頭排列的氨基酸序列。肽可與非肽部分偶聯，例如[擴增]。肽包括例如通過與其它聚合或非聚合部分例如PEG偶聯形成的二聚體、三聚體或高階多聚體?！岸嚯摹笔情L度通常為100個或更多個氨基酸殘基的較長氨基酸序列，并且涵蓋天然氨基酸殘基和殘基的非天然類似物，可單獨使用或與天然氨基酸殘基結合使用以賦予肽特定的構象特異性或特定的生物活性，例如對蛋白質水解的抗性。如本文所使用的“肽體”是包含一個或多個與整個或部分免疫球蛋白(Ig)恒定區(qū)融合的肽的融合多肽。參見，例如，美國專利No. 6，660，843。肽可為與抗原結合的任何天然或重組制備或化學合成肽?？芍貜碗牟⑶铱砂?、3、4、5、6、7、8、9、10或更多份頭尾或頭頭排列的氨基酸序列。所述部分的Ig恒定區(qū)可包括至少一個恒定區(qū)結構域(例如，CH1、CH2、CH3和/或CH4)、多個結構域(例如，CH2和CH3)、多份結構域(例如，CH2-CH2)、保留了所需活性的恒定結構域的任何片段，例如負責循環(huán)免疫球蛋白的半衰期延長的補救受體表位，或其組合。本文將“小分子”或有機“小”分子定義為分子量為約1000道爾頓或更低的非聚
合有機化合物。如本文所使用的“信號轉導復合體”是一組介導細胞信號轉導的蛋白質和/或內源或外源化合物。信號轉導復合體的實例包括但不限于與膜結合受體結合的配體、與底物結合的酶或締合以傳播信號級聯放大中涉及的生物化學反應的任何細胞分子。信號轉導復合體還可包括輔助受體、輔因子、支架蛋白、變構調節(jié)劑和細胞信號轉導中涉及的大量其它類型的蛋白質和分子。信號轉導復合體可瞬時形成或長期存在。信號轉導復合體的分子組成或組分可隨時間變化并且可取決于每種組分的激活狀態(tài)和細胞環(huán)境。信號轉導復合體可經受化學修飾和調節(jié)，這可誘導對復合體的一系列影響，包括轉導活性的輕微變化、完全失活和組成型激活或正和負調節(jié)。術語“治療有效量”在本文中用于指改善或減輕與信號轉導復合體的信號轉導異常(異常高或異常低)相關的疾病的癥狀或病征有效的本發(fā)明靶標特異性組合物的量。如本文所使用的“結合”是由一個或多個弱作用力，包括氫鍵、范德華力、離子偶極和疏水相互作用與強力離子鍵組成的非共價相互作用的特定網絡產生的兩個或更多個不同分子實體之間的物理締合?？筛鶕H和力測量結合的水平或程度。親和力是對兩個或更 多個不同分子實體之間的結合相互作用強度的測量，可通過平衡結合常數或動力學結合率參數定義。本領域中眾所周知適合常數或參數及其測量單位的實例，包括但不限于平衡締合常數(Ka)，例如約IO5IT1或更高，約IO6IT1或更高，約IO7IT1或更高，約IO8IT1或更高，約IO9M4或更高，約IOkT1或更高，約IO11M-1或更高或約IOi2M4或更高；平衡解離常數(Kd)，例如約10_5M或更低，約10_6M或更低，約10_7M或更低，約10_8M或更低，約10_9M或更低，約ΙΟ,Μ或更低，約10_ηΜ或更低或約10_12Μ或更低；結合率(例如，sec—1，moΓ1)和解離率(例如，sec—1)。在Ka的情況下，值越低指結合親和力“越強”或“增強”。如本文所使用的結合率參數“增強”指滯留時間增加、締合更強或解離更弱。如本文所使用的結合率參數“削弱”指滯留時間減少、締合更弱或解離更強。在結合率的情況下，值越大指締合更快活更頻繁并且因此常引起結合親和力增強。在解離率的情況下，值越小通常指締合更緩慢并且因此常引起結合親和力更強。然而，結合率和解離率的比值指結合親和力，如隨后更詳細解釋。可直接或間接測量兩種化合物，例如抗體和抗原或信號轉導復合體的第一和第二組分之間的親和力。可使用表示親和力和/或與親和力成比例的替代性質進行親和力的間接測量。這種替代性質包括信號轉導復合體的第一組分與第二組分結合的量或水平，或預測或與第一組分對第二組分的表觀結合親和力相關的第一組分或第二組分的生物物理特征。特定實例包括在第一或第二組分的亞飽和濃度下測量第一組分與第二組分結合的量或水平?？蓽y量的其它生物物理特征包括但不限于第一和第二組分之一或兩者的凈分子電荷、旋光性、擴散率、解鏈溫度、靜電轉向或構象?？蓽y量的更多其它生物物理特征包括確定結合相互作用對不同溫度、PH或離子強度影響的穩(wěn)定性。測量親和力取決于用于進行測量的確切條件，在許多其它因素中包括結合組分的濃度、檢測設置、結合組分的化合價、緩沖液組成、pH、離子強度和溫度以及加入結合反應的另外的組分，例如變構調節(jié)劑和調控劑?？墒褂枚亢投ㄐ苑椒y量結合相互作用的絕對和相對強度。表觀親和力是在親和力受結合反應中的條件或組分，例如變構調節(jié)劑、抑制劑、結合組分化合價等改變的條件下對兩個或更多個不同分子實體之間的結合相互作用強度的測量。如本文所使用的“亞飽和濃度”是在結合反應中一種或多種組分明顯低于結合親和力Kd的濃度和/或在結合反應中一種組分低于占有其它組分的所有結合位點所需濃度的濃度。在亞飽和條件下，結合反應中很大比例的一種結合組分具有可用結合位點。如本文所使用的“生物物理檢測”是以絕對或相對形式測量至少兩種化合物之間的締合、解離、結合親和力、結合水平或結合率參數的任何方法。通常在體外進行生物物理檢測并且可用純化結合組分、未純化組分、細胞締合組分以及純化和細胞締合組分的組合進行?！凹觿笔怯糜诿枋鼋Y合并激活受體信號的一類配體或藥物的術語。改變受體活性的能力，稱為激動劑的效力是將激動劑與拮抗劑區(qū)別開來的性質，拮抗劑是也結合受體但不激活受體信號轉導的一類受體配體。激動劑的效力可為正效力，引起受體的活性升高，或為負效力，引起受體的活性降低。完全激動劑結合并激活受體，在該受體上表現出完全效力。部分激動劑也結合并激活指定受體,但相對于完全激動劑在受體上僅有部分效力。反向激動劑是結合與該受體的激動劑相同的受體結合位點并且逆轉受體的組成活性的試劑。反向激動劑施加受體激動劑的相反藥理作用。協同激動劑與其它協同激動劑一起起作用以 一起產生預期作用。競爭性或正構激動劑在與配體相同的結合位點(活性位點)可逆性結合受體，從而與配體競爭受體上的相同結合位點。在不同方面，本文公開的抗體作為變構激動劑起作用。它們結合不同于活性胰島素結合位點的INSR部分，并略微改變胰島素和INSR的結合親和力不超過2倍。它們還略微影響INSR的胰島素激活的EC50，例如改變EC50低于2倍。這種抗體組成型激活INSR，最大激動劑反應為胰島素最大激動劑反應的80%或更低，例如15%-80%、20-60%、20%-40%或15%-30%。在某些實施方案中，抗體組成型激活INSR，最大激動劑反應為胰島素最大激動劑反應的至少約 15%、20%、25%、30%、35%、40%;并且高達 45%、50%、55%、60%、65%、70%、75% 或80%ο應了解,包括任何這些范圍端點的任何組合,無需敘述每種可能的組合。在一些實施方案中，通過Akt檢測測量最大激動劑反應。在更多實施方案中，本發(fā)明提供了結合胰島素受體的變構激動劑抗體，親和力為10_5、10_6、10'10_8、IO-9UO-ltlUO-11M或更低。不受本發(fā)明的理論限制，變構激動劑的弱激動劑活性用于模擬天然基底胰島素分泌水平的作用，同時使外源施用的胰島素具有正常的降糖作用。在某些實施方案中，變構激動劑為部分變構激動劑。拮抗劑阻斷受體被激動劑激活。選擇性激動劑對某一類型的受體有選擇性。另外，可能是前述任何類型。通常用EC50值的倒數定義激動劑的效能?？赏ㄟ^確定引起激動劑的最大生物反應的一半所需的激動劑濃度為指定激動劑計算效能。EC50越小，激動劑的效能越高。受體“拮抗劑”是結合受體時不引起自身生物反應，但阻斷或抑制激動劑介導的反應的一類受體配體或藥物。拮抗劑對它們的同源受體有親和力，但無效力，并且結合將擾亂相互作用并抑制受體上的激動劑或反向激動劑的功能。拮抗劑通過與受體上的活性位點或變構位點結合介導其作用，或拮抗劑可能在受體活性的生物調節(jié)中不常涉及的獨特結合位點相互作用。根據拮抗劑-受體復合體的壽命不同，拮抗劑活性可能可逆或不可逆，壽命依次取決于拮抗劑受體結合的特性。大部分的拮抗劑通過在受體上結構限定的結合位點處與內源性配體或底物競爭實現其效能。拮抗劑未表現出激活其結合的受體的效力。然而，一旦結合，拮抗劑就可抑制激動齊U、反向激動劑和部分激動劑的功能。在功能性拮抗劑檢測中，劑量反應曲線測量了一系列濃度的拮抗劑逆轉激動劑活性的能力的作用。通常用IC50值定義拮抗劑的效能?？赏ㄟ^確定引起激動劑最大生物反應的一半抑制所需的拮抗劑濃度為指定拮抗劑計算效能。IC50越低，拮抗劑的效能越高。競爭性或正構拮抗劑在與配體或激動劑相同的結合位點(活性位點)可逆性結合受體，但不激活受體，從而與激動劑競爭受體上的相同結合位點。非競爭性或變構拮抗劑結合與激動劑分離的結合位點，通過該分離的結合位點將其作用施加給該受體。因此，非競爭性或變構拮抗劑不與激動劑競爭結合。無競爭力拮抗劑與非競爭性拮抗劑的不同之處在于無競爭力拮抗劑可與單獨的變構結合位點結合之前需要激動劑激活受體。“胰島素抵抗”描述了胰島素的生理量不足以由細胞或組織產生正常胰島素反應的條件?！耙葝u素敏化劑”是增強細胞或組織對胰島素的敏感性，對于指定亞飽和濃度的胰島素而言，引起更高水平的葡萄糖攝取的化合物或藥物。 優(yōu)點本發(fā)明涉及發(fā)現可能研發(fā)通過結合INSR的胞外區(qū)介導胰島素-INSR信號轉導復合體的治療劑。采用新的選擇和篩選方法鑒定(例如)靶向INSR的胞外區(qū)并加強胰島素作用的胰島素敏化劑。尤其，本文鑒定的一些抗體為結合INSR的胞外區(qū)并正或負調節(jié)胰島素-INSR信號轉導復合體的非激動性抗體。本發(fā)明涵蓋了提供較現有療法有獨特優(yōu)勢的胰島素-INSR信號轉導復合體調節(jié)齊U。調節(jié)劑在允許誘導整個范圍的胰島素作用的INSR水平下作用，同時將不良副作用降到最低。避免INSR激動性應降低功能性低血糖癥的危險。另外，可實現對葡萄糖水平更精確的控制。因此，當血糖水平升高，導致胰島素水平升高時，這種調節(jié)劑具有更強作用。靶向INSR的胞外區(qū)使生物分子用作調節(jié)內源性或外源性胰島素、胰島素類似物或胰島素模擬物的作用的胰島素-INSR信號轉導復合體調節(jié)劑；這些調節(jié)劑可能具有如半衰期延長、劑量或劑量次數減少、毒性降低和更易于生產等優(yōu)點。本發(fā)明涵蓋預計降低外周胰島素抵抗并改善血糖控制的胰島素-INSR信號轉導復合體調節(jié)劑。在不存在外源性胰島素療法時，調節(jié)劑的敏化作用使得胰島素水平不夠高以刺激足夠葡萄糖攝取的患者的外周組織的葡萄糖攝取水平提高。因此，可在胰島素抵抗的早期施用本發(fā)明的抗體，代替其它藥物或作為其它抗糖尿病試劑的輔助療法。當作為其它抗糖尿病試劑的輔助療法施用時，本發(fā)明的抗體可減少保持血糖水平接近正常范圍所需的抗糖尿病試劑日總量，或可減少抗糖尿病試劑的劑量次數，或可以相同劑量和/或次數實現血糖控制改善，例如高血糖癥更少發(fā)作或最大高血糖水平降低(觀察到最高異常葡萄糖水平降低)。胰島素受體(INSR)INSR是在與刺胞動物和昆蟲一樣原始的生物中發(fā)現的酪氨酸激酶受體。在高等生物中，對于葡萄糖穩(wěn)態(tài)而言是不可或缺的。小鼠敲除研究還證實INSR在脂肪形成、新血管形成和調節(jié)肝臟葡萄糖合成和葡萄糖誘導的胰腺胰島素分泌中很重要(Kitamura等，Ann.Rev. Physiol. ,65:313-3322003)。在腦部中INSR信號轉導也很重要，其中INSR信號涉及食物攝取的調節(jié)、夕卜周脂肪沉積和生殖內分泌軸以及學習和記憶(Wada等，J. Pharmacol.Sci. 99:128-143, 2005)。在包括I型和II型糖尿病、癡呆和癌癥的疾病中牽涉到INSR信號轉導功能障礙。
密切相關的胰島素樣生長因子受體(IGFR-I)的結構域表現出與INSR的高度(47-67%)氨基酸同一性。雖然結構相似，但IGF-IR和INSR起不同的生理功能。IGF-IR在幾乎所有正常成人組織(除肝臟以外)中表達，肝臟本身是IGF-I生成的主要部位。INSR主要涉及代謝功能，而IGF-IR介導生長和分化(Adams等，Cell. Mol. LifeSci.57:1050-1093, 2000)。INSR以兩種剪接變異體同種型INSR-A和INSR-B存在，分別缺乏或含有由外顯子11編碼的12個氨基酸。較長變異體INSR-B是負責信號轉導代謝反應的同種型。相反，INSR-A主要發(fā)出促有絲分裂反應的信號，在若干種癌癥中是優(yōu)選表達的同種型(Denley等，Horm. Metab. Res. 35:778-785，2003)并且能夠以高親和力結合胰島素樣生長因子
2(IGF-II) (Denley 等，Mol. Endocrinol. 18:2502-2512，2004)成熟的人INSR是包含2個α亞基和2個β亞基(鏈)的同型二聚體。α和β鏈由單個基因編碼并且由位于殘基720-723處弗林蛋白酶裂解位點上的1370個氨基酸 的前體翻譯后裂解所產生。α鏈和β鏈的194個殘基包含INSR的細胞外部分。存在單個跨膜序列和含有酪氨酸激酶的403個殘基的細胞質結構域。每個胞外域單體的N端半由2個約150個氨基酸的富含亮氨酸的同源重復結構域(LI和L2)組成，所述同源重復結構域被大小也為約150個氨基酸的富含半胱氨酸的區(qū)域(CR)分開。每個胞外域單體的C端半(約460個殘基)由3個纖連蛋白III型結構域(FnIII-1、FnIII-2和FnIII-3)組成。FnIII-2結構域含有約120個殘基的插入結構域(ID)，其中有產生成熟受體的α和β鏈的弗林蛋白酶裂解位點。在細胞內，每個單體含有酪氨酸激酶催化結構域，兩側為2個含有信號轉導分子的磷酸酪氨酸結合位點的調控區(qū)(近膜區(qū)和C尾)(Ward等，ActaPhysiol. 192:3—9，2008)。胰島素結合的當前模型提出，在基底狀態(tài)下，INSR同型二聚體在每個單體上含有兩對相同的結合位點(稱為位點I和位點2) (De Meyts, Bioessays, 26:1351-1362，2004)。胰島素與α亞基上的低親和力位點(位點I)結合之后是結合胰島素和第二 INSR α亞基的不同區(qū)域(位點2)之間的第二次結合事件。這種兩個α亞基之間配體介導的橋接產生引起信號轉導的高親和力狀態(tài)。相反，未固定在C端的可溶性INSR胞外域不能產生高親和力受體-配體復合體?？扇苄訧NSR胞外域可在兩個位點I同時結合兩個胰島素分子，但僅以低親和力結合(Adams等，Cell. Mol. Life Sci. 57:1050-1093，2000)。位點I被認為是由來自LI結構域的中央β折疊的元件和α鏈的最末16個殘基(稱為CT肽)組成。位點2最有可能包括位于FnIII-I和FnIII-2接點處的環(huán)。人們認為胰島素結合涉及胰島素及其受體的結構變化(Ward 和 Lawrence, BioEssays 31:422-434，2009)。一旦胰島素分子停靠到受體上并實現其作用，就可能被釋放回細胞外環(huán)境中或可能被細胞降解。降解通常涉及胰島素-INSR復合體的胞吞作用，然后是胰島素降解酶的作用。多數胰島素分子被肝細胞降解。已估計在最初釋放至循環(huán)后約71分鐘，典型胰島素分子被最終降解(Duckworth 等，Endocr. Rev. 19(5) : 608 - 24, 1998)。胰島素信號轉導胰島素誘導分子的信號轉導網絡將信息從INSR攜帶到代謝和生長中涉及的效應蛋白。胰島素結合INSR誘導促進激活固有酪氨酸激酶活性的構象變化，從而導致INSRβ亞基自體磷酸化。通過與磷酸化INSR相互作用，將胰島素受體底物(IRS)蛋白募集到質膜上，并且這些蛋白在酪氨酸殘基上變?yōu)榱姿峄?，促進另外的信號轉導蛋白募集到復合體上，通過兩條主要途徑產生信號轉導，所述兩條主要途徑為(I)主要調節(jié)代謝，對生長有一些影響的PI3激酶/PDK1/PKB途徑和(2)主要調節(jié)細胞生長的Ras/ERK促有絲分裂途徑。已報道某些市售的胰島素類似物在培養(yǎng)的癌細胞內顯示出IGF-I樣促有絲分裂和抗凋亡活性，對它們在人體內的長期安全性提出了疑問(Weinstein等，Diabetes MetabRes Rev 25:41_49，2009)。因此，需要獲得不改變代謝和促有絲分裂INSR信號轉導的平衡或促使代謝信號轉導優(yōu)先于促有絲分裂INSR信號轉導的INSR激動劑。鑒定調節(jié)劑抗體的方法本發(fā)明提供了鑒定調節(jié)信號轉導復合體的第一和第二組分(例如受體(例如胰島素受體)及其配體胰島素)之間結合的候選多肽結合劑的方法。 不受本發(fā)明的理論限制，本發(fā)明提供了用調節(jié)劑(M)對信號轉導復合體的兩個組分(第一組分Cl和第二組分C2)之間相互作用的動力學擾動，在數學上可描述為
K，C1C2 = KdC2 ( +Μ/Κμπ)(1 +Μ/Κμγ )
(I + M/K [cic2]m)其中組分之間的結合平衡常數的變化(K' C1C2)為組分之間的平衡常數(U、調節(jié)劑濃度(M)、復合體的調節(jié)劑親和力(KK1C；2]M)和第一組分(Kici)或第二組分(Kic2)的調節(jié)劑親和力的函數。在信號轉導復合體為受體-配體復合體，并且調節(jié)劑為抗體的情況下，抗體對受體-配體相互作用的動力學擾動在數學上可描述為
ι+— ι+^-|K1ri = Ksi 1 fiRl{ '卜)
1 +丄
I其中受體-配體結合平衡常數的變化(K’ EL)為受體-配體平衡常數OV)、抗體濃度(A)、復合體的抗體親和力(Kma)和受體(Kak)或配體(KAL)的抗體親和力的函數。調節(jié)劑以削弱或增強靶標對其信號伴侶的結合親和力或結合率參數的方式結合靶標或其信號伴侶或靶標與信號伴侶的復合體。例如，靶標為受體或配體時，在調節(jié)劑存在下配體對其受體的結合親和力或結合率參數被削弱或增強。由于當κΚικ]Μ足夠高時，K' C1C2趨于無窮大，在該項分析中具有完全阻斷活性的調節(jié)劑代表邊界條件。這種模型暗示，當調節(jié)劑濃度([M])充分地高于調節(jié)劑/抗原相互作用的平衡解離常數(Kd)以對于結合配體而言飽和時，信號調節(jié)的程度不依賴于調節(jié)劑濃度。因此，相互作用的調節(jié)與復合體與組分的親和力的比值有關，其中對于調節(jié)劑及其抗原而言，[M]>Kd。本發(fā)明提供，調節(jié)劑與靶標和/或其信號轉導伴侶的相互作用的生物物理性質可用于預測調節(jié)劑對靶標信號轉導途徑的功能效應。因此，可根據它們對復合和非復合形式的靶標(和/或其信號轉導伴侶)的相對親和力鑒定改變信號轉導途徑的調節(jié)劑。本發(fā)明預期，可按以下方式預測調節(jié)劑(M)對信號轉導復合體的兩個組分(第一組分Cl和第二組分C2)之間的相互作用的動力學擾動K[C1C2]M 或 K[MC2]C1 或 K[MC1]C2〈KMC2 或 Kmci 導致正調T1K[C1C2]M 或 K[MC2]C1 或 K[MC1]C2-KMC2 或 Kmci 導致不調T1K[C1C2]M 或 K[MC2]C1 或 K[MC1]C2>KMC2 或 Kmci 導致負調T1
在信號轉導復合體為受體(R)-配體(L)復合體，并且動力學調節(jié)劑為抗體(A)的情況下，可按以下方式預測動力學擾動K[EL]A或K[AL]K或K賺<KAL或Kak導致正動力學調節(jié)K[EL]A或K[AL]K或K賺=Kal或Kak導致無動力學調節(jié)K[EL]A或K[AL]K或K賺〉Kal或Kak導致負動力學調節(jié)在一些實施方案中，可在第一或第二組分的任何指定亞飽和濃度(例如配體(L)濃度)下用其改變結合相互作用，例如受體(R)-配體(L)相互作用的能力鑒定調節(jié)劑，例如抗體(A)。調節(jié)劑抗體或多肽可有效轉換所述500pM相互作用至10pM(正調節(jié)劑)或IOnM(負調節(jié)劑)的受體配體相互作用的親和力和相應劑量反應。在一些實施方案中，在指定配體濃度下調節(jié)劑將產生更高的R-L結合水平，使檢測曲線左移(正調節(jié))。在其它實施方案中，在指定配體濃度下調節(jié)劑將產生更低的R-L結合水平，使檢測曲線右移(負調節(jié))。在一些實施方案中，轉變一致。在其它實施方案中，轉變不一致，反應了包含其它因子，例如 復合體中的輔助蛋白、受體內化等。調節(jié)劑和靶標、其信號轉導伴侶和/或包含靶標及其信號轉導伴侶的復合體之間相互作用的結合性質通?？深A測動力學調節(jié)劑對靶標信號轉導途徑的功能效應。依據研究的靶標，可能需要考慮某些其它因素。這些因素包括(1)動力學調節(jié)劑的濃度、靶標的濃度及其信號轉導伴侶的濃度(例如，如果調節(jié)劑濃度([M])顯著高于調節(jié)劑及其抗原之間結合的KD，則使得預測最優(yōu)化)；(2)所用調節(jié)劑的結構形式，例如單價對二價或雙價；(3)可能限制靶標的構象和/或引起靶標激活的靶標間/靶標內交聯；(4)調節(jié)劑通過空間或變構機制改變組裝或?？炕蚋淖冃盘栟D導復合體的另外的組分的能力；(5)信號轉導途徑特定性質，例如由于誘導“瓶頸”的疾病，信號轉導途徑改變；(6)信號轉導途徑的負/正反饋調控；(7)信號轉導復合體組分的清除/內化率改變；(8)解偶聯或差異性改變配體結合和激活的靶標改變，例如調節(jié)劑增強配體結合，但使其受體陷于脫敏狀態(tài)，或調節(jié)劑削弱配體結合，但誘導激活受體的構象變化。在一些方面，本發(fā)明提供了測量在試驗多肽試劑存在或不存在時，信號轉導復合體的第一組分對信號轉導復合體的第二組分的差異結合的方法。在這些方面，優(yōu)選在第一或第二組分的亞飽和濃度時觀察到差異結合。在一些優(yōu)選的實施方案中，可降低第一或第二組分的濃度以提供亞飽和條件。在一些方面，本發(fā)明提供了測量實驗多肽結合劑(例如抗體)對復合和非復合形式的靶標和/或其信號轉導伴侶的差異結合的方法。在這些方面，優(yōu)選在試驗多肽結合劑的亞飽和濃度時觀察到差異結合。在一些優(yōu)選的實施方案中，可降低試驗多肽結合劑的濃度以提供亞飽和條件。在一些實施方案中，在不存在試驗多肽試劑的情況下使用對照化合物進行試驗，所述對照化合物優(yōu)選為屬于與試驗多肽試劑相似的結構類別，但結合對試驗信號轉導復合體無影響的不同抗原的化合物。例如，試驗抗體的對照可為與無關抗原結合的同種型匹配的抗體，例如鑰孔血藍蛋白(KLH)。對于正調節(jié)劑而言，在指定的Cl亞飽和濃度下，在正調節(jié)劑存在下Cl結合C2的信號越強，反應Cl親和力越高。與單獨的Cl或單獨的C2的信號相比，包含Cl和C2的復合體的信號越強反應調節(jié)劑的結合優(yōu)先。在一些方面，可能存在調節(jié)劑與Cl和C2的復合體結合，但與單獨的Cl或單獨的C2的結合不可測量。對于負調節(jié)劑而言，在指定的Cl亞飽和濃度下，在調節(jié)劑存在下Cl結合C2的信號越弱，反應Cl親和力越低。與調節(jié)劑與相比Cl和C2的復合體的結合相比，調節(jié)劑與單獨的Cl或單獨的C2的結合的信號越強，反應調節(jié)劑的結合優(yōu)先。本發(fā)明提供了調節(jié)信號轉導復合體的第一和第二組分之間的結合的候選多肽結合劑(例如抗體)的方法。在一些實施方案中，第一和第二組分為多肽。在示例性特定實施方案中，第一和第二組分為內源性。一方面，鑒定候選調節(jié)抗體的方法包括(a)測量在試驗多肽結合劑(例如抗體)存在下所述第一組分對所述第二組分的結合親和力或結合率參數；(b)測量在所述試驗多肽結合劑不存在時所述第一組分對所述第二組分的結合親和力或結合率參數；和(C)當所述試驗多肽結合劑表現出步驟(a)和(b)中測量的結合親和力或結合率參數至少I. 5倍差 異時，所述試驗多肽結合劑被鑒定為候選調節(jié)藥物。在一些實施方案中，結合親和力或結合率參數的差異范圍為約I. 5倍(即，50%)至約1000倍，或約I. 5倍至約100倍，或約2倍至25倍，或約2倍至約50倍，或約I. 5倍至約25倍，或約I. 5倍至約50倍。在一些實施方案中，如果試驗多肽試劑增大所述第一組分和所述第二組分之間的結合率參數，則試驗多肽結合劑被鑒定為候選正調節(jié)劑。在其它實施方案中，如果試驗多肽試劑減小所述第一組分和所述第二組分之間的結合親和力或結合率參數，則試驗多肽試劑被鑒定為候選負調節(jié)劑。不管特定結合親和力值或結合率參數值的變化(增大或減小)表示“增強”(或更強)還是“削弱”(或更弱)，結合親和力或結合率參數取決于參數的值及其單位，并且在本領域中眾所周知。例如，在參數Ka的情況下，值越大指結合親和力“增強”，使得約IO6M-1的Ka高于約IO5M-1的KA。如另一實例，在參數Kd的情況下，值越小指結合親和力“增強”，使得約10_6M的Kd高于約10_5M的KD。相反，在Ka的情況下，值越小指結合親和力“削弱”，使得與IO6M-1的Ka相比，約IO5M4的Ka為削弱的結合親和力。如另一實例，在參數Kd的情況下，值越大指結合親和力“削弱”，使得與10_6M的Kd相比，約10_5M的Kd為削弱的結合親和力。如本文所使用的結合率參數“增強”指滯留時間增加、締合更強或解離更弱。如本文所使用的結合率參數“削弱”指滯留時間減少、締合更弱或解離更強。也可通過結合率和解離率的比值(結合率參數)確定結合親和力。通常，在結合率的情況下，值越大指締合越快或越強或滯留時間增加，并且通常產生更強的結合親和力。相反，結合率的值越小指締合越慢或越弱或滯留時間減少，并且通常產生更弱的結合親和力。通常，在解離率的情況下，值越大指解離越快或滯留時間減少，并且通常產生更弱的結合親和力。相反，解離率的值越小指解離越慢或滯留時間增加，并且通常產生更強的結合親和力。這是因為解離率與結合率之比或結合率或解離率之比表示如以下方程式所示的結合親和力。
權利要求
1.一種抗體，所述抗體以IO-5M或更低的平衡解離常數Kd結合(i)胰島素受體或(ii)包含胰島素和胰島素受體的復合體或(i)和(ii)兩者，所述抗體能夠增強胰島素和胰島素受體之間的結合親和力約5倍至200倍。
2.一種變構激動劑抗體，所述抗體以10_5、10_6、10' 10_8、10_9、10_1(1、IO-11M或更低的親和力結合胰島素受體并且(a)當在pAKT檢測中測量時表現出為胰島素最高激動劑活性的20%-80%的最高激動劑活性，(b)當存在時改變胰島素對INSR的EC50不超過2倍，并且(c)當存在時改變胰島素對INSR的Kd不超過2倍。
3.一種激動劑抗體，所述抗體以10_5、10' 10' 10_8、10_9、10,、IO-11M或更低的親和力結合胰島素受體，任選地當在PAKT檢測中測量時表現出為胰島素最高激動劑活性的20%-100%的最高激動劑活性。
4.一種抗體，所述抗體以KT5M或更低的平衡解離常數Kd結合(i)胰島素受體或(ii)包含胰島素和胰島素受體的復合體或(i)和(ii)兩者，所述抗體能夠削弱胰島素和胰島素受體之間的結合親和力至少約3倍，任選地多達1000倍。
5.根據權利要求I所述的抗體，所述抗體的特征在于以下平衡解離常數Kd結合性質 (i)所述抗體以約1(Γ5Μ、10'10' 10' 10' 10,、1(ΓηΜ或更低的平衡解離常數Kd結合包含胰島素(Cl)和胰島素受體(C2)的復合體；并且 (ii)K[C1C2]A> K[AC2]C1 或K [ACl ]C2 的任一個比Kac2或ΚΑα的任一個低至少約5倍。
6.根據權利要求5所述的抗體，其中 K[C1C2]A、K[AC2]C1或K[AC1]C2的任一個比Kac2或Kaci的任一個低約5倍至200倍。
7.根據權利要求I和5至6中任一項所述的抗體，其中所述抗體結合胰島素受體。
8.根據權利要求I和5至6中任一項所述的抗體，其中所述抗體結合胰島素/胰島素受體復合體。
9.根據權利要求I、權利要求5至6和權利要求8中任一項所述的抗體，其中所述抗體不以可檢測的程度單獨結合胰島素受體。
10.根據權利要求I和5至9中任一項所述的抗體，其中所述抗體能夠增強胰島素和胰島素受體之間的結合親和力約5倍至25倍。
11.根據權利要求10所述的抗體，其中所述結合親和力為結合率與解離率之比或解離率與結合率之比KA、KD的任一個。
12.根據權利要求I至8和10至11中任一項所述的抗體，任選地在磷酸化AKT檢測中，所述抗體通過至少10%的胰島素最大信號激活胰島素受體。
13.根據權利要求I至8和10至11中任一項所述的抗體，任選地在磷酸化AKT檢測中，所述抗體通過低于10%的胰島素最大信號激活胰島素受體。
14.根據權利要求1、3或5至13中任一項所述的抗體，其中所述抗體包含選自SEQIDN0:281、278、277、209、275、223、284、276 和 236 的重鏈可變區(qū)和選自 SEQ ID NO:141、138、137、35、135、57、144、136 和 98 的輕鏈可變區(qū)。
15.根據權利要求1、3或5至14中任一項所述的抗體，其中所述抗體包含 (a)任何 Ab006、Ab030、Ab004、Ab013、Ab009、Ab007、AbOlI、AbOOl、Ab012、AbOlO、Ab003、Ab008、Ab002、Ab005、Ab076、Ab077、Ab079、Ab080、Ab083、Ab059、Ab078、Ab085 的或SEQ ID N0:291、196、239、267和271中所列的所述重鏈可變區(qū)和任何Ab006、Ab030、Ab004、Ab013、Ab009、Ab007、AbOlU AbOOU Ab012、AbOlO、Ab003、Ab008、Ab002、Ab005、Ab076、Ab077、Ab079、Ab080、Ab083、Ab059、Ab078、Ab085 的或 SEQ ID NO:76、80、101、128 和 132中所列的所述輕鏈可變區(qū)，或 (b)任何Ab006、Ab030、Ab004、Ab013、Ab009、Ab007、AbOlI、AbOOl、Ab012、AbOlO、Ab003、Ab008、Ab002、Ab005、Ab076、Ab077、Ab079、Ab080、Ab083、Ab059、Ab078、Ab085 的或SEQ ID NO: 291、196、239、267 和 271 中所列的 1、2 或 3 個重鏈 CDR 和 / 或 Ab006、Ab030、Ab004、Ab013、Ab009、Ab007、AbOlU AbOOU Ab012、AbOlO、Ab003、Ab008、Ab002、Ab005、Ab076、Ab077、Ab079、Ab080、Ab083、Ab059、Ab078、Ab085 的或 SEQ ID NO: 76、80、101、128和132中所列的1、2或3個輕鏈⑶R，任選地在這種重鏈或輕鏈⑶R的任何1、2或3個中包括I或2個突變，例如保守性或非保守性取代；或 (c)任何Ab006、Ab030、Ab004、Ab013、Ab009、Ab007、AbOlI、AbOOl、Ab012、AbOlO、Ab003、Ab008、Ab002、Ab005、Ab076、Ab077、Ab079、Ab080、Ab083、Ab059、Ab078、Ab085 的或 SEQ ID N0:76、80、101、128、132、291、196、239、267 和 271 中所列的所有 6 個 CDR。
16.根據權利要求1、2、3和5至15中任一項所述的抗體，所述抗體與選自Ab079、Ab076、Ab083、Ab080、Ab062 和 Ab020、AbO 19、Ab088 和 Ab089 的任何 I、2、3 個或所有抗體表現出高于或等于70%的競爭，并且任選地 與選自Ab086、Ab064、AbOOl和Ab018的任何1、2、3個或所有抗體表現出高于或等于30%的競爭。
17.根據權利要求1、2、3和5至15中任一項所述的抗體，所述抗體與選自Ab040、Ab062、Ab030、AbOOl和Ab018的任何1、2、3個或所有抗體表現出高于或等于70%的競爭，并且任選地 與選自Ab037、Ab078、Ab083、Ab080和Ab085的任何I、2、3個或所有抗體表現出高于或等于30%的競爭。
18.根據權利要求1、3、5至6和8至9中任一項所述的抗體,所述抗體與選自Ab064、Ab062、Ab085和Ab078的任何1、2、3個或所有抗體表現出高于或等于70%的競爭。
19.根據權利要求4所述的抗體，其中所述抗體能夠削弱所述胰島素和胰島素受體之間的結合親和力約3倍至500倍。
20.根據權利要求4所述的抗體，其中所述結合親和力為結合率與解離率之比或解離率與結合率之比KA、KD的任一個。
21.根據權利要求4所述的抗體，其中任選地在pAKT檢測中所述抗體提高胰島素信號轉導活性的EC50約2倍至1000倍。
22.根據權利要求4或19至21中任一項所述的抗體，其中所述抗體包含選自SEQIDN0:241、279、258、155 和 228 的重鏈可變區(qū)和選自 SEQ ID NO: 103、139、119、8 和 89 的輕鏈可變區(qū)。
23.根據權利要求4或19至22中任一項所述的抗體，其中所述抗體包含(a)任何 Ab087、AbO 19、Ab088、Ab089、Ab020、Ab050、Ab052、Ab055、Ab057、Ab061、Ab063、Ab065、Ab070、Ab072、Ab074、Ab081 的所述重鏈可變區(qū)和任何 Ab087、AbO 19、Ab088、Ab089、Ab020、Ab050、Ab052、Ab055、Ab057、Ab061、Ab063、Ab065、Ab070、Ab072、Ab074、Ab081的所述重鏈可變區(qū)，或(b)任何Ab087、AbO 19、Ab088、Ab089、Ab020、Ab050、Ab052、Ab055、Ab057、Ab061、Ab063、Ab065、Ab070、Ab072、Ab074、Ab081 的 1、2 或 3 個重鏈 CDR 和 / 或任何 Ab087、Ab019、Ab088、Ab089、Ab020、Ab050、Ab052、Ab055、Ab057、Ab061、Ab063、Ab065、Ab070、Ab072、Ab074、Ab081的1、2或3個重鏈⑶R，任選地在這種重鏈或輕鏈⑶R的任何1、2或3個中包括I或2個突變，例如保守性或非保守性取代；或(c)任何Ab087、AbO 19、Ab088、Ab089、Ab020、Ab050、Ab052、Ab055、Ab057、Ab061、Ab063、Ab065、Ab070、Ab072、Ab074、Ab081 的所有 6 個 CDR。
24.根據權利要求4和19至23中任一項所述的抗體，所述抗體表現出與選自Ab079、Ab076、Ab083、Ab080、Ab062 和 Ab020、AbO 19、Ab088、Ab089 的任何 I、2、3 個或所有抗體高于或等于70%的競爭，任選地其中所述抗體結合人受體或復合體而非鼠受體或復合體。
25.根據權利要求2或3所述的抗體，其中所述抗體包含選自SEQID NO: 195、220、303、197、208、243、245 和 251 的重鏈可變區(qū)和選自 SEQ ID NO: 77、50、90、84、34、104、106 和 112 的輕鏈可變區(qū)。
26.根據權利要求2或3中任一項所述的抗體，其中所述抗體包含 (a)任何Ab021、Ab029、Ab022、Ab017、Ab023、Ab024、Ab025、Ab026、Ab031、Ab035、Ab027、Ab036、Ab037、Ab028、Ab038、Ab039、Ab040、Ab041、Ab042、Ab032、Ab043、Ab044、Ab045、Ab046、Ab047、Ab018、Ab033、Ab048、Ab014、Ab015、Ab049、Ab034、Ab051、Ab053、Ab054、Ab056、Ab058、Ab062、Ab064、Ab066、Ab067、Ab068、Ab086、Ab069、Ab071、Ab073、Ab075、Ab082、Ab084的或SEQ ID NO:252、253、263、265和269中所列的所述重鏈可變區(qū)和ftMAb021、Ab029、Ab022、Ab017、Ab023、Ab024、Ab025、Ab026、Ab031、Ab035、Ab027、Ab036、Ab037、Ab028、Ab038、Ab039、Ab040、Ab041、Ab042、Ab032、Ab043、Ab044、Ab045、Ab046、Ab047、Ab018、Ab033、Ab048、Ab014、Ab015、Ab049、Ab034、Ab051、Ab053、Ab054、Ab056、Ab058、Ab062、Ab064、Ab066、Ab067、Ab068、Ab086、Ab069、Ab071、Ab073、Ab075、Ab082、Ab084或SEQ ID NO:7、113、114、124、126和130中所列的所述輕鏈可變區(qū)，或 (b)任何Ab021、Ab029、Ab022、Ab017、Ab023、Ab024、Ab025、Ab026、Ab031、Ab035、Ab027、Ab036、Ab037、Ab028、Ab038、Ab039、Ab040、Ab041、Ab042、Ab032、Ab043、Ab044、Ab045、Ab046、Ab047、Ab018、Ab033、Ab048、Ab014、Ab015、Ab049、Ab034、Ab051、Ab053、Ab054、Ab056、Ab058、Ab062、Ab064、Ab066、Ab067、Ab068、Ab086、Ab069、Ab071、Ab073、Ab075、Ab082、Ab084 的或 SEQ ID NO:252、253、263、265 和 269 中所列的 1、2 或 3 個重鏈CDR和 / 或 Ab021、Ab029、Ab022、AbO17、Ab023、Ab024、Ab025、Ab026、Ab031、Ab035、Ab027、Ab036、Ab037、Ab028、Ab038、Ab039、Ab040、Ab041、Ab042、Ab032、Ab043、Ab044、Ab045、Ab046、Ab047、Ab018、Ab033、Ab048、Ab014、Ab015、Ab049、Ab034、Ab051、Ab053、Ab054、Ab056、Ab058、Ab062、Ab064、Ab066、Ab067、Ab068、Ab086、Ab069、Ab071、Ab073、Ab075、Ab082、Ab084 的或 SEQ ID NO: 7、113、114、124、126 和 130 中所列的 1、2 或 3 個輕鏈 CDR，任選地在這種重鏈或輕鏈CDR的任何1、2或3個中包括I或2個突變，例如保守性或非保守性取代；或 (c)任何Ab021、Ab029、Ab022、Ab017、Ab023、Ab024、Ab025、Ab026、Ab031、Ab035、Ab027、Ab036、Ab037、Ab028、Ab038、Ab039、Ab040、Ab041、Ab042、Ab032、Ab043、Ab044、Ab045、Ab046、Ab047、Ab018、Ab033、Ab048、Ab014、Ab015、Ab049、Ab034、Ab051、Ab053、Ab054、Ab056、Ab058、Ab062、Ab064、Ab066、Ab067、Ab068、Ab086、Ab069、Ab071、Ab073、Ab075、Ab082、Ab084 的或 SEQ ID NO:7、113、114、124、126、130、252、253、263、265 和 269 中所列的所有6個CDR。
27.根據權利要求2、3、25和26中任一項所述的抗體，所述抗體表現出與選自Ab030、Ab037、Ab053、Ab001、Ab018、Ab064、Ab040 的任何 1、2、3 個或所有抗體高于或等于 70%、75%或80%的競爭，并且任選地 表現出與選自Ab085和Ab086的任何1、2、3個或所有抗體高于或等于30%的競爭。
28.根據權利要求I至27中任一項所述的抗體，所述抗體包含SEQID NO: 151-303中所列的至少一個重鏈CDR HCDRl、HCDR2和HCDR3。
29.根據權利要求I至28中任一項所述的抗體，所述抗體包含SEQID NO: 151-303的重鏈可變區(qū)。
30.根據權利要求I至29中任一項所述的抗體，所述抗體包含SEQID NO: 1-150中所列的至少一個輕鏈⑶R IXDRl、IXDR2或IXDR3。
31.根據權利要求I至30中任一項所述的抗體，所述抗體包含SEQID NO: 1-150的輕鏈可變區(qū)。
32.根據權利要求I至31中任一項所述的抗體，所述抗體進一步包含人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4重鏈恒定區(qū)。
33.根據權利要求32所述的抗體，所述抗體進一步包含人輕鏈恒定區(qū)。
34.一種特異性結合(i)胰島素受體或(ii)包含胰島素和胰島素受體的復合體或(i)和Qi)兩者的抗體，所述抗體包含SEQ ID N0:151-303的HCDR1、HCDR2和HCDR3的至少一個并且平衡解離常數Kd為10_5M或更低。
35.根據權利要求34所述的抗體，所述抗體包含SEQID NO: 151-303的重鏈可變區(qū)。
36.根據權利要求34所述的抗體，所述抗體進一步包含SEQID NO: 1-150的IXDRl、LCDR2或LCDR3的至少一個。
37.根據權利要求34至36中任一項所述的抗體，其中所述抗體包含1、2、3、4、5或6個CDR。
38.根據權利要求34至37中任一項所述的抗體，其中所述抗體包含SEQIDNO:151-303中所列的1、2或3個重鏈⑶R。
39.根據權利要求37至38中任一項所述的抗體，其中所述抗體包含SEQIDNO: 1-150中所列的1、2或3個輕鏈⑶R。
40.根據權利要求34所述的抗體，所述抗體包含SEQID NO: 1-150的輕鏈可變區(qū)。
41.根據權利要求34至40中任一項所述的抗體，所述抗體進一步包含人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4恒定區(qū)。
42.根據權利要求34至41中任一項所述的抗體，其中所述抗體結合胰島素受體。
43.根據權利要求34至41中任一項所述的抗體，其中所述抗體結合胰島素/胰島素受體復合體。
44.根據權利要求43所述的抗體，其中所述抗體不以可檢測的程度單獨結合胰島素受體。
45.根據權利要求I至3、5至18和25至44中任一項所述的抗體，其中所述抗體使血糖升高的受試者的空腹血糖水平向正常葡萄糖水平降低。
46.根據權利要求34至44中任一項所述的抗體，任選地在磷酸化AKT檢測中，所述抗體通過至少10%的胰島素最大信號激活胰島素受體。
47.根據權利要求34至44中任一項所述的抗體，任選地在磷酸化AKT檢測中，所述抗體通過低于10%的胰島素最大信號激活胰島素受體。
48.根據前述權利要求中任一項所述的抗體，其中所述抗體為單克隆抗體。
49.根據前述權利要求中任一項所述的抗體，其中所述抗體為人抗體。
50.根據權利要求I至49中任一項所述的抗體，其中所述抗體與疏水部分偶聯。
51.一種制備無菌藥物組合物的方法，所述方法包括將藥學上可接受的無菌稀釋劑加 入根據權利要求I至50中任一項所述的抗體。
52.一種無菌組合物，其包含根據權利要求I至50中任一項所述的抗體和藥學上可接受的無菌稀釋劑。
53.一種治療與胰島素抵抗相關的病癥的方法，所述方法包括按治療胰島素抵抗有效的劑量施用根據權利要求1、2、3、5至18和25至50中任一項所述的抗體。
54.根據權利要求53所述的方法，其中所述病癥選自高血糖癥、前期糖尿病、代謝綜合征(也稱為胰島素抵抗綜合征)、2型糖尿病、多囊卵巢病(PCOS)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、脂肪變性、肥胖、血脂異常、Rabson-Mendenhall綜合征、多諾霍綜合征或矮怪病。
55.根據權利要求54所述的方法，其中所述治療增強葡萄糖攝取。
56.根據權利要求55所述的方法，其中所述增強的葡萄糖攝取選自葡萄糖攝取速率增力口、葡萄糖攝取總量增加或兩者。
57.根據權利要求56所述的方法，其中與未受治療的受試者相比，所述治療減緩或減少受試者的增重。
58.根據權利要求53所述的方法，其中與未受治療的受試者相比，所述治療引起HbAlc水平降低。
59.根據權利要求53所述的方法，其中在葡萄糖耐量試驗期間，所述治療引起葡萄糖耐量提高或2小時葡萄糖水平降低。
60.根據權利要求53所述的方法，其中所述治療引起與選自血脂異常、血漿甘油三酯、H0MA-IR、血漿未酯化膽固醇、血漿總膽固醇、血漿胰島素、非HDL/HDL膽固醇比例、總/HDL膽固醇比例、β細胞功能和血漿瘦素水平的胰島素抵抗相關的癥狀改善。
61.一種治療與高胰島素血癥或胰島素信號轉導過量相關的病狀的方法，所述方法包括按治療低血糖癥或胰島素敏感有效的量施用根據權利要求4和19至24中任一項所述的抗體。
62.根據權利要求61所述的方法，其中所述病狀選自癌癥、胰島素瘤、卡波西氏肉瘤、胰島素過量、低血糖癥、胰島母細胞增生癥(ΚΑΤΡ-Η1彌漫性疾病、KATP-Hl病灶性疾病或“ΡΗΗΙ”)、⑶H-Hl (高胰島素血癥/高氨血癥綜合征(ΗΙ/ΗΑ)、亮氨酸敏感性低血糖癥或二氮嗪敏感性低血糖癥)、胰島細胞失調綜合征、嬰兒先天性低血糖癥、嬰兒持續(xù)性高胰島素性低血糖癥(PHHI)、先天性高胰島素血癥、歸因于腎衰竭(急性或慢性)的低血糖癥和歸因于慢性腎病的低血糖癥。
全文摘要
本發(fā)明提供了調節(jié)胰島素受體信號轉導的抗體。
文檔編號A61K39/395GK102985110SQ201080053159
公開日2013年3月20日 申請日期2010年9月25日 優(yōu)先權日2009年9月25日
發(fā)明者約翰·科爾賓, 馬克·萊斯利·懷特, 蘇珊·R·沃森, 維納伊·巴斯卡爾 申請人:佐馬技術有限公司