專利名稱：含有栗子皮提取物的化妝料組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有栗子皮提取物的化妝料組合物。
背景技術(shù)：
瘙癢被定義為誘發(fā)想搔抓的欲望的不愉快的皮膚感覺，作為疼痛、觸覺、冷或熱之類的生理性自我防御機(jī)制，在皮膚被暴露于來自外部的有害刺激中時(shí)，對其進(jìn)行認(rèn)知而起到保護(hù)皮膚的作用。瘙癢癥是在多種皮膚疾病或全身疾病中經(jīng)常表現(xiàn)的共同癥狀中的一種，實(shí)際情況是，蕁麻疹、各種藥物的副作用所致的急性瘙癢癥能夠容易地被治愈，但是膽道閉鎖、腎臟疾病或特應(yīng)性疾病之類的重癥慢性瘙癢癥的治療非常困難。瘙癢由炎癥、癌、代謝性疾病、感染、精神科疾病、藥物給藥或壓力等多種原因誘發(fā)，在最近的若干研究結(jié)果中，明確了皮膚與末梢神經(jīng)系統(tǒng)及中樞神經(jīng)系統(tǒng)的有機(jī)連接與針對誘發(fā)瘙癢的刺激的反應(yīng)、調(diào)節(jié)密切相關(guān)。最近，明確了特定的感覺神經(jīng)細(xì)胞及其受體對瘙癢特異性地反應(yīng)，已經(jīng)接受了瘙癢不是疼痛的下位狀態(tài)，而是作為感覺神經(jīng)系統(tǒng)的個(gè)別感覺，認(rèn)為互不相同的瘙癢介質(zhì)及其受體與多種誘發(fā)瘙癢的疾病相關(guān)(Steinhoff et al.，Journal of Investigative Dermatology, 126，ppl705_1718，2006)。在迄今為止的用于瘙癢癥研究的實(shí)驗(yàn)中，主要使用組胺，但是提出以下主張，即特應(yīng)性之類的慢性瘙癢癥與其說是由組胺依賴性通路(pathway)導(dǎo)致，不如說是由神經(jīng)性原因?qū)е?，這說明為什么抗組胺對特應(yīng)性疾病的瘙癢癥不起效(Stander et al., Experimental Dermatology, 11，ppl2~24,2002)。另外，已知第1代抗組胺劑主要用于全身給藥，具有抗副交感作用而顯示鎮(zhèn)靜作用，作為第1代抗組胺劑的撲爾敏在局部給藥時(shí)，無法抑制特應(yīng)性皮炎患者的瘙癢(Munday et al.，Dermatology, 205, pp40_45，2002)，由于存在皮膚過敏反應(yīng)的危險(xiǎn)，因此不鼓勵(lì)對特應(yīng)性皮炎使用局部抗組胺劑。作為沒有鎮(zhèn)靜作用的第2代抗組胺劑的依巴斯汀、特非那定與阻礙細(xì)胞色素(cytochrome)P450活性的藥物(酮康唑、紅霉素)一起服用時(shí)，有時(shí)引起心律不齊(Hey et al.，Arzneimittelforschung，46，ppl59_163，1996)，而引起與其相關(guān)的副作用。因此，目前迫切需要開發(fā)在有效的同時(shí)副作用小且安全的瘙癢癥緩和劑，特別是對特應(yīng)性之類的慢性瘙癢癥有效的緩和劑。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的目的是解決一直以來所要解決的技術(shù)課題。具體而言，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例的目的是提供含有栗子皮提取物的用于緩和或抑制瘙癢癥的化妝料組合物、以及用于抑制免疫的化妝料組合物。根據(jù)這樣的目的，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例涉及含有栗子皮提取物作為有效成分的用于緩和或抑制瘙癢癥的化妝料組合物，其既減少以往的瘙癢癥治療劑具有的副作用、又具有優(yōu)異的抑制或緩和瘙癢癥的效果。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例涉及含有栗子皮提取物作為有效成分的用于改善皮膚屏障功能的化妝料組合物。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例涉及含有栗子皮提取物作為有效成分的用于抑制免疫的化妝料組合物。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例涉及含有栗子皮提取物作為有效成分的用于改善或治療特應(yīng)性皮炎的化妝料組合物。本發(fā)明的化妝料組合物含有栗子皮提取物作為有效成分，從而可通過抑制作為瘙癢刺激源的蛋白分解酶活性受體-2 (Proteinase-Activated Rec印tor_2 :PAR_2)的活性而發(fā)揮優(yōu)異的瘙癢癥抑制或緩和效果，還可以通過栗子皮提取物的免疫抑制活性而根本性地治療能夠成為誘發(fā)瘙癢癥的原因的免疫過敏性反應(yīng)。


圖1是示出本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例的栗子皮提取物的PAR-2活性抑制效果(胰蛋白酶處理)的測定結(jié)果的圖表。圖2是示出本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例的栗子皮提取物的PAR-2活性抑制效果(SLIGKV 處理)的測定結(jié)果的圖表。圖3是示出本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例的栗子皮1，3_ 丁二醇(BG)提取物的PAR-2活性抑制效果(胰蛋白酶、SLIGKV處理)的測定結(jié)果的圖表。圖4是示出本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例的栗子皮提取物減少TNF-α分泌的效果的圖表。圖5是示出本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例的栗子皮提取物減少IL-6分泌的效果的圖表。圖6是示出本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例的栗子皮提取物減少IL-I α分泌的效果的圖表。圖7是示出本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例的栗子皮提取物減少IL-8分泌的效果的圖表。圖8是示出本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例的栗子皮提取物減少GM-CSF分泌的效果的圖表。圖9是示出本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例的栗子皮提取物減少胰蛋白酶與活性肽 (SLIGKV)所致IL-6分泌的效果的圖表。圖10是示出本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例的栗子皮提取物減少胰蛋白酶與活性肽 (SLIGKV)所致IL-8分泌的效果的圖表。圖11是示出本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例的栗子皮提取物減少胰蛋白酶與活性肽 (SLIGKV)所致GM-CSF分泌的效果的圖表。圖12是示出本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例的栗子皮提取物對特應(yīng)性皮炎患者的瘙癢癥抑制效果的圖表。圖13是示出本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例的栗子的內(nèi)皮(內(nèi)殼)和外皮(外殼)提取物導(dǎo)致的PAR-2活性抑制效果的測定結(jié)果的圖表。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明涉及含有栗子皮提取物作為有效成分的用于緩和或抑制瘙癢癥的化妝料組合物。本申請的發(fā)明人將蛋白分解酶活性受體_2 (Proteinase-Activated Rec印tor_2 PAR-2)作為瘙癢癥治療的目標(biāo)，測定栗子皮提取物導(dǎo)致的PAR-2活性抑制的程度，結(jié)果如后述實(shí)施例中所證實(shí)的那樣，確認(rèn)了在試管內(nèi)顯示出優(yōu)異的PAR-2拮抗作用，另外確認(rèn)了對患有特應(yīng)性皮炎的患者們顯示瘙癢抑制效果。上述瘙癢癥也被稱為搔癢癥，這種瘙癢癥的誘發(fā)原因或形態(tài)沒有特別限制，例如， 由包括炎癥性皮炎、特應(yīng)性皮炎、肌膚皸裂所致的皮炎、痱子、潰瘍、凍傷、接觸性皮炎、脂溢性皮炎、銀屑病及副銀屑病的皮炎中的一種以上誘發(fā)。另外，本發(fā)明含有栗子皮提取物作為有效成分，顯示出改善皮膚屏障功能的效果。 由此，可以有效地預(yù)防或治療因皮膚屏障功能降低而發(fā)生的疾病或由瘙癢誘發(fā)的二次性皮膚損傷。上述組合物對例如由來自特應(yīng)性皮炎的瘙癢而發(fā)生的2次性皮膚損傷在緩和皮膚屏障損傷或改善皮膚屏障恢復(fù)力方面顯示出顯著的效果，由此，可以顯著地改善皮膚屏障。特別是，上述組合物可以通過增進(jìn)皮膚保濕、防止皮膚角化過度而改善皮膚屏障， 如通過后述實(shí)施例而證實(shí)的那樣，本申請的發(fā)明人等利用對無毛小鼠(Hairless mice)用 ρ惡唑酮(oxazolon)進(jìn)行處理的過敏模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，測定經(jīng)表皮水分損失(trans印idermal water loss，TEWL)和皮膚厚度(skin thickness)，結(jié)果確認(rèn)了栗子皮提取物顯示出有效的增進(jìn)皮膚保濕或防止角化過度的效果。進(jìn)而，本發(fā)明涉及含有栗子皮提取物作為有效成分的用于抑制免疫的化妝料組合物。上述組合物可以是用于治療例如特應(yīng)性、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis)或克羅恩病(Crohn's disease)的組合物，其中，可以是用于預(yù)防或治療作為免疫過敏性反應(yīng)的特應(yīng)性疾病的組合物。在特應(yīng)性疾病從皮膚損傷等引起的急性階段向慢性疾病階段發(fā)展時(shí)，觀察到免疫介質(zhì)的多種分泌狀態(tài)的變化，但在患有特應(yīng)性疾病的患者的損傷皮膚中，多數(shù)白細(xì)胞介素 (Interleukin)的濃度變得增加。另外，粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)已知在特應(yīng)性皮膚疾病患者的損傷皮膚中，其分泌量增加，引起慢性炎癥反應(yīng)，而會(huì)引起特應(yīng)性患者免疫體系的不均衡(Matsubara et al.，F(xiàn)EBS Letters, 566，ppl95_200，2004)。與此相關(guān)，本申請的發(fā)明人等確認(rèn)了栗子皮提取物可以顯著減少與免疫過敏性反應(yīng)相關(guān)的腫瘤壞死因子-a (Tumor Necrosis Factor- α :TNF_ α )、白細(xì)胞介素-6 (IL-6)、 白細(xì)胞介素-Ια (IL-la)、白細(xì)胞介素-8(IL_8)或粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子 (Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor =GM-CSF)的表達(dá)，結(jié)果栗子皮提取物適于作為用于抑制免疫的化妝料組合物的有效成分。特別是本發(fā)明含有栗子皮提取物作為有效成分，適合用于改善或治療特應(yīng)性皮炎的化妝料組合物的有效成分。另外，上述白細(xì)胞介素-6(IL_6)和白細(xì)胞介素-8(IL_8)還被已知是在特應(yīng)性疾病中誘發(fā)瘙癢的因子，栗子皮提取物可以有效地用于預(yù)防和治療來自特應(yīng)性疾病的瘙癢癥。上述栗子皮是指覆蓋栗子樹果實(shí)的深褐色皮，本說明書中使用的栗子皮提取物是指選自栗子的內(nèi)皮(嫩皮)、外皮及其混合物中的一種以上的提取物。作為栗子皮，可以使用栗子的內(nèi)皮(嫩皮)，也可以使用栗子的外皮(外殼)，但特別確認(rèn)了在經(jīng)栗子的外皮(外殼)提取物處理的組中可呈現(xiàn)優(yōu)異的PAR-2拮抗作用。上述栗子皮可以是來自任一種類的栗子的皮，沒有特別限制，可以是選自例如 ^ (Castanea crenata S. et Z.，Castanea mollissima Bi.，Castanea bulgaris) (Castanea Bungeana Bi.)禾口卓月鮮栗(Castanea crenata for. multicarpa (Uyeki) Chung) 中的一種以上的栗子的皮。上述栗子皮提取物的提取方法沒有特別限制，例如可以通過選自水、碳原子數(shù)為 1 4的低級醇、1，3- 丁二醇及其混合溶劑中的一種以上的溶劑而進(jìn)行提取，上述溶劑可以是例如選自水、甲醇、乙醇、1，3-丁二醇、丁醇及其混合物中的一種以上，優(yōu)選地，上述栗子皮提取物可以由10 100%的醇水溶液或10 100%的1，3-丁二醇提取，具體而言，可以是栗子皮的20 90%乙醇水溶液提取物或10 70%的1，3- 丁二醇提取物，更具體而言， 可以是栗子皮的40 90%乙醇水溶液提取物或10 50%的1，3-丁二醇提取物，進(jìn)一步具體而言，可以是栗子皮的60 90%乙醇水溶液提取物或20 40%的1，3- 丁二醇提取物。上述組合物中所含的栗子皮提取物的含量沒有特別限制，以組合物的總重量為基準(zhǔn)，能以0. 005 80重量％的含量含有，優(yōu)選能以0. 01 30重量％含有。若上述栗子皮提取物的含量過少，則效果變得甚微，若過多，則劑型的穩(wěn)定度會(huì)變低。根據(jù)情況，為了緩和或抑制瘙癢癥、以及抑制免疫，栗子皮提取物也可以與抗組胺齊U、類固醇劑、局部麻醉劑、免疫抑制劑中的一種或一種以上的物質(zhì)并用。以往，用于緩和特應(yīng)性皮炎和瘙癢癥的技術(shù)是服用抗組胺劑、將類固醇制劑作為外用劑進(jìn)行涂布，但這些制劑具有即使呈現(xiàn)暫時(shí)性的治療效果也很快復(fù)發(fā)這樣的缺點(diǎn)，進(jìn)而，報(bào)告了服用這些藥物時(shí)的中樞神經(jīng)障礙、消化器官障礙等副作用。作為腎上腺皮質(zhì)激素的類固醇制劑由于高效的消炎作用和免疫抑制作用而效果優(yōu)異，但副作用也嚴(yán)重，報(bào)告了作為免疫抑制劑的他克莫司水合物軟膏對特應(yīng)性皮炎的治療有效，但可能誘發(fā)皮膚癌，或者在皮膚損傷部位大量吸收到體內(nèi)時(shí)誘發(fā)腎臟障礙，實(shí)際情況是在安全性方面考慮，難以長期使用。因此，將含有栗子皮提取物作為有效成分的組合物與抗組胺劑、類固醇劑、局部麻醉劑、免疫抑制劑中的一種或一種以上適當(dāng)?shù)夭⒂脮r(shí)，能夠?qū)︷W癥的緩和或抑制、以及免疫抑制等不伴有副作用而安全地顯示顯著的效果。上述化妝料組合物沒有特別限定劑型，可以根據(jù)目的而適當(dāng)選擇化妝品的劑型。 例如可以制成選自柔膚水(潤膚液和乳液)、營養(yǎng)化妝水、精華、營養(yǎng)霜、按摩霜、面膜、凝膠、眼霜、眼部精華、潔膚霜、潔膚泡沫、潔膚水、粉、潤體液、潤體霜、潤體油、以及潤體精華中的一種以上的劑型，但不一定限于這些。上述有效成分的施用量的確定在本領(lǐng)域技術(shù)人員的水準(zhǔn)內(nèi)，組合物的1日施用用量根據(jù)要施用的對象的進(jìn)展程度、發(fā)病時(shí)期、年齡、健康狀態(tài)、合并癥等多種因素不同而異， 若以成人為標(biāo)準(zhǔn)，則一般可以將上述組合物1 500mg/kg、優(yōu)選為30 200mg/kg按照1日分成1 2次進(jìn)行給藥，上述施用量無論用任何方法也不限定本發(fā)明的范圍。以下，通過實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明，但下述實(shí)施例是用于例示本發(fā)明，本發(fā)明的范圍不被它們所限定。[實(shí)施例1]栗子皮提取物的制備
1-1)栗子皮1，3- 丁二醇提取物的制備利用30%的1，3_ 丁二醇(l，3-buthylene glycol)，使果子皮在室溫下浸出3天。 接著，用250目、34!11、14111、0.54111大小的過濾器依次進(jìn)行過濾。然后，在0 4°C下放置 (Standing) 3天后，用0. 5 μ m、0. 3 μ m、0. 2 μ m大小的過濾器依次進(jìn)行過濾，得到栗子皮的 1，3-丁二醇提取物。1-2)栗子皮乙醇提取物的制備利用70%乙醇，使栗子皮在室溫下浸出3天。接著，用250目、3 μ m、1 μ m、0. 5 μ m、 0. 3μπι、0. 2μπι大小的過濾器依次進(jìn)行過濾。然后，在60°C下濃縮溶液后，在30°C下實(shí)施 18小時(shí)的真空干燥，得到粉末形態(tài)的栗子皮乙醇提取物。[試驗(yàn)例1]栗子皮乙醇提取物的PAR-2活性抑制效果(體外，胰蛋白酶處理，HEK 人表皮角質(zhì)細(xì)胞)實(shí)驗(yàn)前一天，將角質(zhì)形成細(xì)胞(細(xì)胞株名HaCaT，獲取地點(diǎn)ATCC)在96孔(well) 板中以成為4X IO4細(xì)胞/孔的方式進(jìn)行分株，，然后在37°C、5% CO2的培養(yǎng)箱(incubator) 中培養(yǎng)24小時(shí)。24小時(shí)后，將96孔板用HBSS(Hanks，Balanced Salt solution)緩沖液清洗(washing) 2 次后，將反應(yīng)緩沖液(reaction buffer :2uM Fluo-4-AM, 20 % pluronic 酸，2. 5mM丙磺舒)加入細(xì)胞中。在37°C、5% CO2的培養(yǎng)箱(incubator)中反應(yīng)30分鐘， 在室溫下反應(yīng)30分鐘后，用HBSS緩沖液清洗(washing) 2次，將栗子皮乙醇提取物分別以 lppm、2ppm、5ppm、10ppm、20ppm、30ppm和50ppm的濃度對細(xì)胞進(jìn)行處理。反應(yīng)10分鐘后， 用2U/ml胰蛋白酶(Trypsin)進(jìn)行處理，測定80秒鐘的細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度變化。細(xì)胞內(nèi)Ca2+ 濃度變化的測定利用FlexStation 3(分子器件，美國)。在栗子皮乙醇提取物與胰蛋白酶 (Trypsin)處理后，求出測定80秒鐘的屈曲(flex)而得到的值中的最小值與最大值之差， 然后將該值與胰蛋白酶(Trypsin)處理時(shí)的最小值與最大值之差進(jìn)行比較而求出抑制率。參照圖1，可以確認(rèn)利用胰蛋白酶在PAR-2的N-末端剪切絲氨酸序列(sequence) 而使PAR-2活化的情況下，鈣離子流入細(xì)胞內(nèi)，但經(jīng)栗子皮提取物處理的組的情況下， PAR-2活化被抑制，鈣離子的流入顯著減少。[試驗(yàn)例2]栗子皮乙醇提取物的PAR-2活性抑制效果(體外，SLIGKV處理，HEK 人表皮角質(zhì)細(xì)胞)實(shí)驗(yàn)前一天，將角質(zhì)形成細(xì)胞(細(xì)胞株名HaCaT，獲取地點(diǎn)ATCC)在96孔(well) 板中以成為4X IO4細(xì)胞/孔的方式進(jìn)行分株，然后在37°C、5% CO2的培養(yǎng)箱(incubator) 中培養(yǎng)24小時(shí)。24小時(shí)后，將96孔板用HBSS (Hanks'Balanced Salt solution)緩沖液清洗(washing) 2 次后，將反應(yīng)緩沖液(reaction buffer :2uM Fluo_4_AM，20% pluronic 酸， 2. 5mM丙磺舒)加入細(xì)胞中。在37°C、5% CO2的培養(yǎng)箱(incubator)中反應(yīng)30分鐘，在室溫下反應(yīng)30分鐘后，用HBSS緩沖液清洗(washing) 2次，將栗子皮乙醇提取物分別以lppm、 2ppm、5ppm、10ppm、20ppm、30ppm和50ppm的濃度對細(xì)胞進(jìn)行處理。反應(yīng)10分鐘后，用5uM PAR-AP(SLIGKV)進(jìn)行處理，測定80秒鐘的細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度變化。細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度變化的測定利用FlexStation 3 (分子器件，美國)。在栗子皮乙醇提取物與5uM PAR-AP (SLIGKV) 處理后，求出測定80秒鐘的屈曲(flex)而得到的值中的最小值與最大值之差，然后將該值與5uM PAR-AP(SLIGKV)處理時(shí)的最小值與最大值之差進(jìn)行比較而求出抑制率。參照圖2，可以確認(rèn)如果作為活化肽的SLIGKV(人)作為直接配體發(fā)揮作用而使
7PAR-2活化，則鈣離子流入細(xì)胞內(nèi)，但經(jīng)栗子皮提取物處理的組的情況下，PAR-2活化被抑制，鈣離子的流入顯著減少。[試驗(yàn)例3]栗子皮1，3-丁二醇(BG)提取物的PAR-2活性抑制效果(體外，SLIGKV 處理，HEK:人表皮角質(zhì)細(xì)胞)實(shí)驗(yàn)前一天，將角質(zhì)形成細(xì)胞(細(xì)胞株名HaCaT，獲取地點(diǎn)ATCC)在96孔(well) 板中以成為4X IO4細(xì)胞/孔的方式進(jìn)行分株，然后在37°C、5% CO2的培養(yǎng)箱(incubator) 中培養(yǎng)24小時(shí)。24小時(shí)后，將96孔板用HBSS(Hanks，Balanced Salt solution)緩沖液清洗(washing) 2 次后，將反應(yīng)緩沖液(reaction buffer :2uM Fluo-4-AM, 20 % pluronic 酸，2. 5mM丙磺舒)加入細(xì)胞中。在37°0、5%0)2的培養(yǎng)箱(incubator)中反應(yīng)30分鐘，在室溫下反應(yīng)30分鐘后，用HBSS緩沖液清洗(washing) 2次，將栗子皮1，3-丁二醇(BG)提取物分別以0. lw/v%,0. 5 八％和的濃度對細(xì)胞進(jìn)行處理。反應(yīng)10分鐘后，用2U/ ml胰蛋白酶(Trypsin)或5uM PAR-AP(SLIGKV)進(jìn)行處理，測定80秒鐘的細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度變化。細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度變化的測定利用FlexStation 3(分子器件，美國)。經(jīng)過栗子皮1， 3_ 丁二醇(BG)提取物與2U/ml胰蛋白酶(Trypsin)或5uM PAR-AP(SLIGKV)處理后，求出測定80秒鐘的屈曲(flex)而得到的值中的最小值與最大值之差后，將該值與經(jīng)2U/ml胰蛋白酶或5uM PAR-AP(SLIGKV)處理時(shí)的最小值與最大值之差進(jìn)行比較而求出抑制率。參照圖3，可以確認(rèn)胰蛋白酶或PAR-2活性肽(SLIGKV)導(dǎo)致的細(xì)胞內(nèi)鈣離子的流入隨著栗子皮提取物的濃度變高而顯著減少。[試驗(yàn)例4]栗子皮提取物導(dǎo)致TNF-α的分泌減少實(shí)驗(yàn)前一天，將皮膚角化上皮細(xì)胞(Normal human skin keratinocyte，NHEK，獲取地點(diǎn)L0nza)在96孔(well)板中以成為5 X IO4細(xì)胞/孔的方式進(jìn)行分株，然后在37°C、 5% CO2的培養(yǎng)箱(incubator)中培養(yǎng)24小時(shí)。24小時(shí)后，用PBS清洗2次細(xì)胞，換成無血清 KBM(serum free KBM(角質(zhì)形成細(xì)胞基底介質(zhì)))。用栗子皮對各個(gè)孔(well)按濃度進(jìn)行處理(10、25、50 111)，反應(yīng)30分鐘后，分別用？654(10、50 111)、1^5(1 111)處理。在 37°C、5% CO2的培養(yǎng)箱(incubator)中培養(yǎng)24小時(shí)后，取出培養(yǎng)液，進(jìn)行對TNF-α的ELISA。ELISA 利用制造公司(BD science)的實(shí)驗(yàn)方法。參照圖4，可以觀察到栗子皮使因PGSA和LPS而增加的TNF- α分泌顯著減少。[試驗(yàn)例5]栗子皮提取物導(dǎo)致IL-6的分泌減少進(jìn)行對IL-6的ELISA，除此以外，利用與試驗(yàn)例4實(shí)質(zhì)上相同的方法。參照圖5，可以觀察到栗子皮使因PGSA和LPS而增加的IL_6分泌得到不尋常的抑制。[試驗(yàn)例6]栗子皮提取物導(dǎo)致IL-Iα的分泌減少進(jìn)行對IL-I α的ELISA，除此以外，利用與試驗(yàn)例4實(shí)質(zhì)上相同的方法。參照圖6，可以觀察到栗子皮使因PGSA和LPS而增加的IL-I α分泌量隨濃度增加而減少。[試驗(yàn)例7]栗子皮提取物導(dǎo)致IL-8的分泌減少進(jìn)行對IL-8的ELISA，除此以外，利用與試驗(yàn)例4實(shí)質(zhì)上相同的方法。參照圖7，可以觀察到栗子皮使因PGSA和LPS而增加的IL_8分泌顯著地減少。[試驗(yàn)例8]栗子皮提取物導(dǎo)致GM-CSF的分泌減少
進(jìn)行對GM-CSF的ELISA，除此以外，利用與試驗(yàn)例4實(shí)質(zhì)上相同的方法。參照圖8，可以觀察到隨著栗子皮的濃度增加，因PGSA和LPS而分泌的GM-CSF的量減少。[試驗(yàn)例9]栗子皮提取物對胰蛋白酶和活性肽(SLIGKV)導(dǎo)致的IL_6分泌的抑制效果實(shí)驗(yàn)前一天，將皮膚角化上皮細(xì)胞(Normal human skin keratinocyte，NHEK，獲取地點(diǎn)L0nza)在96孔(well)板中以成為5 X IO4細(xì)胞/孔的方式進(jìn)行分株，然后在37°C、 5% CO2的培養(yǎng)箱(incubator)中培養(yǎng)24小時(shí)。24小時(shí)后，用PBS清洗2次細(xì)胞，換成無血清KBM(serum free KBM(角質(zhì)形成細(xì)胞基底介質(zhì)))。用栗子皮對各個(gè)孔(well)按濃度進(jìn)行處理(10、50ppm)，反應(yīng)30分鐘后，分別用胰蛋白酶(IOnM)或PAR-2活化肽(SLIGKV， 50uM)進(jìn)行處理。在37°C、5% CO2的培養(yǎng)箱(incubator)中培養(yǎng)24小時(shí)后，取出培養(yǎng)液， 進(jìn)行對IL-6的ELISA。ELISA利用制造公司(BD science)的實(shí)驗(yàn)方法。參照圖9，可以觀察到栗子皮提取物濃度依賴性地抑制胰蛋白酶和活性肽 (SLIGKV)導(dǎo)致的IL-6分泌。[試驗(yàn)例10]栗子皮提取物對胰蛋白酶和活性肽(SLIGKV)導(dǎo)致的IL_8分泌的抑制效果進(jìn)行對IL-8的ELISA，除此以外，利用與試驗(yàn)例9實(shí)質(zhì)上相同的方法。參照圖10，可以觀察到栗子皮提取物濃度依賴性地抑制胰蛋白酶和活性肽 (SLIGKV)導(dǎo)致的IL-8分泌。[試驗(yàn)例11]栗子皮提取物對胰蛋白酶和活性肽(SLIGKV)導(dǎo)致的GM-CSF分泌的抑制效果進(jìn)行對GM-CSF的ELISA，除此以外，利用與試驗(yàn)例9實(shí)質(zhì)上相同的方法。參照圖11，可以觀察到栗子皮提取物濃度依賴性地抑制胰蛋白酶和活性肽 (SLIGKV)導(dǎo)致的GM-CSF分泌。[試驗(yàn)例12]栗子皮提取物對特應(yīng)性皮炎患者的瘙癢癥抑制效果以10名特應(yīng)性皮炎患者為對象，將栗子皮提取物(0. 3%固體成分濃度)在瘙癢部位集中使用約2周后，將使用前和使用后的瘙癢程度用7點(diǎn)量表的調(diào)查問卷進(jìn)行測定，確認(rèn)瘙癢緩和效果。參照圖12，可以觀察到使用2周栗子皮提取物后，瘙癢程度變得各降低1點(diǎn)。[試驗(yàn)例13]栗子皮乙醇提取物的皮膚保濕效果測定以10名特應(yīng)性皮炎患者為對象，將栗子皮提取物(0. 3%固體成分濃度)在瘙癢部位集中使用約2周后，將使用前和使用后的皮膚濕潤程度用7點(diǎn)量表的調(diào)查問卷進(jìn)行測定， 確認(rèn)瘙癢緩和效果。確認(rèn)10人的點(diǎn)數(shù)，結(jié)果平均為6點(diǎn)，回答在涂布提取物后皮膚濕潤，可以觀察到顯示優(yōu)異的皮膚保濕效果。[試驗(yàn)例14]栗子外皮乙醇提取物與栗子內(nèi)皮乙醇提取物的PAR-2活性抑制效果的比較(體外，SLIGKV處理，HEK 人表皮角質(zhì)細(xì)胞)將栗子的外皮和內(nèi)皮進(jìn)行分離而干燥后，按照與實(shí)施例1-2)相同的方法制備栗子外皮提取物，栗子內(nèi)皮提取物也按照與實(shí)施例1-2)相同的方法制備。使用與試驗(yàn)例2相同的方法測定栗子外皮乙醇提取物與栗子內(nèi)皮乙醇提取物的PAR-2活性抑制效果，并示于
9下述表6和圖13中。表 61%100
權(quán)利要求
1.一種用于緩和或抑制瘙癢癥的化妝料組合物，其中，含有栗子皮提取物作為有效成分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于緩和或抑制瘙癢癥的化妝料組合物，其中，所述組合物緩和或抑制由包括炎癥性皮炎、特應(yīng)性皮炎、肌膚皸裂所致的皮炎、痱子、潰瘍、凍傷、接觸性皮炎、脂溢性皮炎、銀屑病及副銀屑病的皮炎中的任一種以上誘發(fā)的瘙癢癥。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于緩和或抑制瘙癢癥的化妝料組合物，其中，所述組合物緩和或抑制由特應(yīng)性皮炎誘發(fā)的瘙癢癥。
4.一種用于改善皮膚屏障功能的化妝料組合物，其中，含有栗子皮提取物作為有效成分。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用于改善皮膚屏障的化妝料組合物，其中，所述組合物用于緩和來自特應(yīng)性皮炎的皮膚屏障損傷或者改善皮膚屏障的恢復(fù)力。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用于改善皮膚屏障的化妝料組合物，其中，所述組合物用于增進(jìn)皮膚保濕或防止皮膚角化過度。
7.一種用于抑制免疫的化妝料組合物，其中，含有栗子皮提取物作為有效成分。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用于抑制免疫的化妝料組合物，其中，所述組合物用于特應(yīng)性疾病的預(yù)防或治療。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用于抑制免疫的化妝料組合物，其中，所述組合物用于特應(yīng)性的治療。
10.一種用于改善或治療特應(yīng)性皮炎的化妝料組合物，其中，含有栗子皮提取物作為有效成分。
11.根據(jù)權(quán)利要求1 10中任一項(xiàng)所述的化妝料組合物，其中，以組合物的總重量為基準(zhǔn)，以0. 005 80重量％的含量含有所述栗子皮提取物。
12.根據(jù)權(quán)利要求1 10中任一項(xiàng)所述的化妝料組合物，其中，所述栗子皮是選自栗子的內(nèi)皮、外皮及它們的混合物中的一種以上。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的化妝料組合物，其中，所述栗子皮是栗子的外皮，S卩外殼。
14.根據(jù)權(quán)利要求1 10中任一項(xiàng)所述的化妝料組合物，其中，所述栗子皮提取物是通過選自水、碳原子數(shù)為1 4的低級醇、1，3_丁二醇及它們的混合溶劑中的一種以上的溶劑進(jìn)行提取的。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的化妝料組合物，其中，所述栗子皮提取物是通過選自水、甲醇、乙醇、丁醇、1，3_ 丁二醇及它們的混合物中的溶劑進(jìn)行提取的。
全文摘要
本發(fā)明涉及含有栗子皮提取物作為有效成分的用于緩和或抑制瘙癢癥的化妝料組合物。本發(fā)明的化妝料組合物中所含的栗子皮提取物在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中被確認(rèn)通過抑制作為瘙癢刺激源的蛋白分解酶活性受體-2(Proteinase-Activated Receptor-2PAR-2)的活性，從而可以發(fā)揮優(yōu)異的緩和或抑制瘙癢癥的效果，結(jié)果可以適合用作用于緩和或抑制瘙癢癥的化妝料組合物的有效成分。
文檔編號A61K8/97GK102458356SQ201080035879
公開日2012年5月16日 申請日期2010年6月18日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月18日
發(fā)明者尹偵訓(xùn), 朱泳協(xié), 樸元錫, 樸永鎬, 沈范, 申洪柱, 金善暎, 金赫, 高在濚 申請人:株式會(huì)社愛茉莉太平洋