專利名稱：Fviii衍生肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種肽。具體地說，本發(fā)明涉及至少其核心序列可衍生自因子 VIII (FVIII)的肽。這些肽可以用來減少或阻止因子VIII抑制劑抗體(factor VIII inhibitor antibody)的形成，例如在A型血友病治療和獲得性血友病中。
背景技術(shù)：
血友病血友病(haemophilia)屬于一組遺傳性血液病癥，包括A型血友病、B型血友病 (克里斯馬斯病(Christmas disease))和血管性血友病(Von Willebrand' sdisease)。在血友病中，血液凝固能力由于某種關(guān)鍵的凝血因子的部分或全部缺失而嚴(yán)重降低，導(dǎo)致出血時間增加。A型血友病是一種凝血因子VIII缺陷，而B型血友病是一種凝血因子IX缺陷。在這兩種疾病中，出問題的基因均存在于X染色體上，因此這些癥候是X連鎖的。A型血友病的常見程度是B型血友病的五倍。血友病是一種終身性、遺傳性的基因疾病，其影響女性(作為攜帶者)和遺傳了這種癥候的男性。大約三分之一的新確診病例沒有過往家族史。這種疾病在全世界都有出現(xiàn)， 在所有種族中均有發(fā)生。在英國大約有6000人受血友病影響。血友病人(haemophiliacs)在受傷后發(fā)生長時間的出血。外部損傷，如切割傷或擦傷，通常不會造成嚴(yán)重問題往往可以通過施加一定程度的壓力和包覆受傷區(qū)域(例如用石膏)即可止血。主要的問題是向關(guān)節(jié)、肌肉和軟組織中的內(nèi)出血，這些可能自發(fā)發(fā)生。內(nèi)出血，例如向腦中的出血，非常難以處理，且可能致命。關(guān)節(jié)中的重復(fù)出血會導(dǎo)致急性疼痛，并可導(dǎo)致致殘的長期性關(guān)節(jié)損傷和/或關(guān)節(jié)炎。血友病的治療通常是通過替代(!^placement)缺失的凝血因子。在輕度或中度的血友病中，可以在發(fā)生出血時提供注射(應(yīng)求式(on-demand)療法)。但是，在嚴(yán)重血友病中，則有規(guī)律地提供預(yù)防性注射，以幫助血液凝固并盡可能減小長期性關(guān)節(jié)損傷的可能性。A型血友病凝血因子(coagulation factor)替代治療的一個潛在的嚴(yán)重并發(fā)癥是會產(chǎn)生可中和因子VIII的促凝血功能的抗體。因子VIII抑制劑在大約25%的嚴(yán)重A型血友病人中出現(xiàn)。由于先天性A型血友病人可能具有FVIII的遺傳缺陷，抑制劑的合成是一種針對為了預(yù)防或治療出血事件而施用的外來蛋白的同種異體免疫應(yīng)答。⑶4+T細(xì)胞在針對FVIII的免疫應(yīng)答中扮演著中樞角色。FVIII被抗原呈遞細(xì)胞 (APC)摻入后，經(jīng)過蛋白水解性降解成為肽片段(Reding等Q006)Haemophilia 12(supp 6) 30-36)。然后這些肽與II類MHC分子結(jié)合呈遞在APC的表面。然后，該復(fù)合物由對FVIII 特異性的⑶4+細(xì)胞的T細(xì)胞受體所識別。在合適的共刺激信號的存在下，這種識別作用最終導(dǎo)致CD4+細(xì)胞去指導(dǎo)B細(xì)胞合成抗體。抑制劑形成的頻度最開始隨著因子VIII治療的次數(shù)增加而增加，但是在暴露 50-100天后似乎達(dá)到平臺。抑制劑形成在嚴(yán)重血友病中比在中度或輕度的病中常見得多， 而且某些分子缺陷，最明顯的是因子VIII輕鏈中的大段缺失和無義突變，似乎引起抑制劑形成的傾向。替代因子的濃度、類型(純化的或重組的)、以及治療歷史等參數(shù)也可能影響抗體產(chǎn)生的可能性。管理攜帶抑制劑的血友病患者是正在面臨的挑戰(zhàn)。使用脫敏技術(shù)的免疫耐受誘導(dǎo) (ITI)在一些攜帶抗因子VIII的同種抗體的患者中獲得了成功。這種治療手段要求正在暴露于因子替代治療，因此是一種長期性的策略。雖然ITI可能取得成功，但有相當(dāng)比例(大約30% )的患者對ITI無應(yīng)答。抑制劑效價高的患者對治療應(yīng)答的可能性低得多。另一個明顯起作用的因素是開始ITI時的年齡，當(dāng)患者大于20歲時成功率大大降低(Hay等Q005) kminars in Thrombosis and Hemostasis 32:15-21)。當(dāng)ITI療法不成功時，抑制劑一般會持續(xù)終身，而由于這樣的患者通常是高應(yīng)答者，需要使用FVIII旁路產(chǎn)品，如活化的凝血酶原復(fù)合物濃縮物(FEIBA )和重組-活化的 FVII，來治療出血事件。然而，使用此類藥劑與彌漫性血管內(nèi)凝血、急性心肌梗死、肺栓塞和血栓等不良事件相關(guān)(Acharya 和 DiMichele (2006)Best Practice&Research Clinical Haematology 19 :51-66)。對于不應(yīng)答ITI的患者有時使用免疫抑制療法。治療包括施用非特異性地靶向免疫系統(tǒng)的免疫抑制藥如環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)、強的松(prednisone)、硫唑嘌呤 (azathioprine)和環(huán)孢菌素(cyclosporine)。這些治療可能具有與普遍性免疫抑制相關(guān)的副作用。人們對利用利妥昔單抗(Rituximab )——一種針對B細(xì)胞⑶20抗原的人源化單克隆抗體——進(jìn)行的選擇性B細(xì)胞耗竭又產(chǎn)生了興趣。但是，用這種藥物治療一些兒童時， 發(fā)生了輸注反應(yīng)、血清病和機(jī)會性感染(DiMichele Q007) J Thromb Haemost 5:143-50)。獲得性血友病獲得性血友病是一種罕見的自身免疫病癥，在每100萬人中有1至4人罹患此病。 在此病癥中，生來不具有血友病的受試者產(chǎn)生對抗一種凝血因子如因子VIII的抗體。人們認(rèn)為妊娠和自身免疫疾病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及癌癥可能增加發(fā)生獲得性血友病的風(fēng)險。 雖然在導(dǎo)致其產(chǎn)生的潛在免疫機(jī)制方面有所不同，但應(yīng)答于凝血因子替代治療而產(chǎn)生的 FVIII抑制劑與獲得性血友病中產(chǎn)生的FVIII抑制劑的臨床表現(xiàn)是相似的。獲得性血友病患者的死亡率接近25%，部分地是由于獲得的抑制劑與嚴(yán)重的出血并發(fā)癥有關(guān)聯(lián)。對獲得性自身抗體抑制劑的治療，主要是根據(jù)控制或阻止急性出血性并發(fā)癥的需要(這些并發(fā)癥常常危及生命和四肢)，其次是去除自身抗體以恢復(fù)正常凝血的需要。對于某些伴隨有低效價自身抗體抑制劑(< 5個Bethesda單位)的出血，可以通過高劑量施用FVIII濃縮物來有效治療。先前，豬FVIII濃縮物被看作針對獲得性血友病相關(guān)出血的關(guān)鍵的一線治療，因為它是唯一提供了在實驗室中實際測量輸注后FVIII凝血活性水平的機(jī)會的替代治療。由于豬血漿池被豬細(xì)小病毒污染，該產(chǎn)品于2004年下市。目前，最常用的是“旁路(bypassing) ”藥物，但存在產(chǎn)生血栓的潛在風(fēng)險，而且每種產(chǎn)品的效力僅有約80%。可能需要通過血漿去除術(shù)和體外免疫吸附進(jìn)行血漿交換，以暫時性將抑制劑效價降低，該降低足以使旁路藥物或FVIII替代法提供充分的止血。自身抗體抑制劑的根除取決于免疫抑制措施，如(1)施用皮質(zhì)類固醇，在3-6周內(nèi)的效力為30% -50%； (2)使用細(xì)胞毒性和骨髓抑制性化療劑，例如環(huán)磷酰胺、環(huán)孢菌素、 2-氯脫氧腺苷；C3)用靜脈內(nèi)免疫球蛋白進(jìn)行的免疫調(diào)節(jié)；和(4)用利妥昔單抗進(jìn)行的選擇性B淋巴細(xì)胞耗竭。利妥昔單抗(Rituximab )應(yīng)答者可能需要同時使用類固醇，復(fù)發(fā)可對再次治療有應(yīng)答。因此，目前所有可用來減少與A型血友病治療相關(guān)的同種異體抗體產(chǎn)生、以及獲得性血友病中自身抗體產(chǎn)生的方法，都存在著缺點。因此需要改進(jìn)的方法來解決A型血友病和獲得性血友病中抗-VIII抗體的問題。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，通過用FVIII衍生肽預(yù)耐受化患者，來阻止FVIII抑制劑抗體形成是可能的。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的第一個方面涉及至少部分序列可從FVIII衍生的、能夠誘導(dǎo)或恢復(fù)對FVIII的耐受的肽。在第一個實施方案中，本發(fā)明提供一種肽，其包含下列FVIII衍生序列之一
權(quán)利要求
1.一種肽，其包含下列F VIII衍生序列之一
2.一種肽，其包含序列 X(aa)n-核心序列 _(aa)m 其中X是荷電親水性殘基； aa是氨基酸；η是0-5的整數(shù)； m是0-5的整數(shù)；并且所述“核心序列”選自下列F VIII衍生肽組成的組LYISQFIIMFIIMYSLDGIARYIRLHPLIIFKNQASLTRYYSSFVMVTFRNQAS LRIHPQSffV所述肽無需進(jìn)一步抗原加工就能夠結(jié)合II類MHC分子，并能由因子VIII特異性T細(xì)胞所識別。
3.權(quán)利要求1所述的肽，其包含序列)(DNIMVTFRNQAS。
4.一種肽，其包含序列 Y(aa)n-核心序列 _(aa)mZ其中Y和Z是具有相反極性的荷電氨基酸； aa是氨基酸； η是0-5的整數(shù)； m是0-5的整數(shù)；并且所述“核心序列”選自下列FVIII衍生肽組成的組LYISQFIIMFIIMYSLDGIARYIRLHPLIIFKNQASLTRYYSSFVMVTFRNQASLRIHPQSffV所述肽無需進(jìn)一步抗原加工就能夠結(jié)合II類MHC分子，并能由因子VIII特異性T細(xì)胞所識別。
5.權(quán)利要求4所述的肽，其包含序列YDNIMVTFRNQASZ。
6.權(quán)利要求4或5所述的肽，其中Y是荷正電的氨基酸并且Z是荷負(fù)電的氨基酸。
7.權(quán)利要求4、5或6所述的肽，其中Z是K或R。
8.權(quán)利要求2-7中任一項所述的肽，其中X或Y是D或E。
9.任一前述權(quán)利要求所述的肽，其包含序列EDNIMVTFRNQASR。
10.任一前述權(quán)利要求所述的肽，其由序列EDNIMVTFRNQASR組成。
11.一種包含多種肽的組合物，其包括一種或多種任一前述權(quán)利要求所述的肽。
12.權(quán)利要求1-10中任一項所述的肽或權(quán)利要求11所述的組合物，用于阻遏或防止因子VIII抑制劑抗體在體內(nèi)的產(chǎn)生。
13.權(quán)利要求1-10中任一項所述的肽或權(quán)利要求11所述的組合物在制備用于阻遏或防止因子VIII抑制劑抗體的在體內(nèi)產(chǎn)生的藥物中的用途。
14.一種阻遏或防止受試者中因子VIII抑制劑抗體的產(chǎn)生的方法，所述方法包括對受試者施用權(quán)利要求1-10中任一項所述的肽或權(quán)利要求11所述的組合物的步驟。
15.一種治療受試者中血友病的方法，所述方法包括對受試者施用權(quán)利要求1-10中任一項中所述的肽或權(quán)利要求11所述的組合物的步驟。
16.權(quán)利要求14或15所述的方法，其中所述受試者患有A型血友病，并且正在接受或即將接受因子VIII替代治療。
17.權(quán)利要求14或15所述的方法，其中所述受試者患有獲得性血友病，或者有感染獲得性血友病的風(fēng)險。
18.權(quán)利要求14-17中任一項所述的方法，其中所述受試者為HLA-DR2。
全文摘要
本發(fā)明提供至少部分地衍生自FVIII的肽，所述肽無需進(jìn)一步的抗原加工就能夠結(jié)合II類MHC分子，并能由因子VIII特異性T細(xì)胞所識別。具體地說，本發(fā)明提供一種肽，其包括序列EDNIMVTFRNQASR或由序列EDNIMVTFRNQASR組成。本發(fā)明還涉及這樣的肽用于防止或阻遏A型血友病和/或獲得性血友病中抑制劑抗體形成的用途。
文檔編號A61K38/37GK102458445SQ201080032337
公開日2012年5月16日 申請日期2010年5月17日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月18日
發(fā)明者D.賴思 申請人:艾匹托普技術(shù)(布里斯托爾)有限公司