專利名稱：用于治療2型糖尿病的glp-1和fgf21組合的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及成纖維細胞生長因子21 (FGF21)化合物和胰高血糖素樣肽I (GLP-I)化合物組合用于制備用于治療糖尿病、更特別是2型糖尿病的藥物中的用途。本發(fā)明還涉及包含某些FGF21化合物和GLP-I化合物組合以及藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。
背景技術(shù)：
成纖維細胞生長因子為表達于正在發(fā)育的組織和成熟組織中的多肽。其涉及幾種
生理機制，包括例如代謝調(diào)控和細胞分化。整個家族(FGF家族)存在超過二十種成纖維細胞生長因子。包括FGF19、FGF21和FGF23在內(nèi)的FGF家族的三個成員形成起參與代謝調(diào)控的內(nèi)分泌因子作用的亞族。FGF21優(yōu)先表達于肝臟中并且已顯示出發(fā)揮激素樣代謝作用。成熟的人FGF21多肽具有SEQ ID NO : I的第1-181個氨基酸的序列。FGF21已被證明在小鼠的脂肪細胞中激活葡萄糖攝取，并且當(dāng)給予糖尿病嚙齒類動物時降低血糖和甘油三酯的水平(Kharitonenkov等，J. Clin. Invest. (2005), 115 1627-1635)。FGF21對血糖和甘油三酯的降低作用已在糖尿病猴中顯示?；谶@些結(jié)果，已將FGF21提議作為具有治療尤其是糖尿病的潛能的藥理作用劑。GLP-I是在攝入食物后由腸的內(nèi)分泌細胞產(chǎn)生的腸促胰島素激素。GLP-I是葡萄糖代謝和胰臟中胰島的P細胞分泌胰島素的調(diào)節(jié)物。GLP-I還導(dǎo)致糖尿病狀態(tài)中的胰島素分泌。然而GLP-I本身的體內(nèi)半衰期非常短，因此備受關(guān)注延長GLP-I在體內(nèi)的半衰期的方法。WO 98/08871公開了具有延長的半衰期的基于人GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO 3的第1-31個氨基酸)的延長GLP-I類似物和衍生物，包括利拉糖肽，其為由Novo Nordisk A/S開發(fā)的用于每日一次給藥的GLP-I衍生物并且有望很快上市用于治療2型糖尿病。艾塞那妝(Exenatide)是由Amylin Pharmaceuticals 和 Eli Lilly & Co 生產(chǎn)和銷售的用于2型糖尿病的治療的市售腸促胰島素模擬物。艾塞那肽基于毒蜥外泌肽-4 (7-45) (SEQ ID NO 4的第1-39個氨基酸)，存在于吉拉毒蜥(Gila monster)唾液中的激素。其展示出與人GLP-I類似的生物學(xué)性質(zhì)。US 5，424，286尤其涉及通過給予毒蜥外泌肽-4(7-45)(該美國專利中的SEQ ID NO I)在哺乳動物中刺激胰島素釋放的方法。WO 2009/020802涉及FGF21化合物和GLP-I化合物基于所謂的協(xié)同效應(yīng)在生產(chǎn)用于減少體重和用于治療肥胖癥的藥物中的用途。此外，所述組合被指出(但僅一次而且非常簡略地，僅僅附帶地在第7頁中)還導(dǎo)致“在降低提高的血糖水平方面的協(xié)同效應(yīng)，并且因此在治療糖尿病方面有潛在應(yīng)用”。然而，后來的宣稱完全未被支持。本發(fā)明提供關(guān)于通過使用FGF21化合物和GLP-I化合物的組合治療2型糖尿病的顯著作用的實現(xiàn)和證據(jù)。發(fā)明簡述本發(fā)明涉及FGF21化合物和GLP-I化合物組合用于制備用于治療2型糖尿病的藥物中的用途。本申請?zhí)峁┝擞绕溆梢韵卵芯恐С值脑摻M合的意外的和未預(yù)料的顯著作用的展示在游離脂肪酸存在下的離體P細胞的生存力的相關(guān)研究；在游離脂肪酸存在下的離體^細胞的胱天蛋白酶活性(細胞凋亡的衡量)的相關(guān)研究；和/或在體內(nèi)對db/db小鼠顯示出降血糖作用的研究。與FGF21聯(lián)合檢測的化合物之一為新型化合物N- e _37-[2-(2-{2-[2-(2-{2_[ (S)-4-羧基-4-(15-羧基十五酰氨基)丁酰氨基]-乙氧基}乙氧基)-乙酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基][Aib8，22，35，Lys37] GLP-I-(7-37)，在下文中為“化合物G4”。本發(fā)明還涉及用于治療2型糖尿病的FGF21化合物和GLP-I化合物的組合；包含F(xiàn)GF21化合物和GLP-I化合物以及藥學(xué)上可接受的載體的組合物，其中所述GLP-I化合物i)包含以下中的至少一種脫氨基 His7、Aib8、Aib22、Arg26、Aib35 和 / 或 Lys37 ；ii)為包含白蛋白結(jié)合部分的GLP-I衍生物，所述結(jié)合部分包含至少一個、優(yōu)選至少兩個、更優(yōu)選兩個游離的羧酸基團；或者其藥學(xué)上可接受的鹽；iii)為包含白蛋白結(jié)合部分的GLP-I衍生物，所述結(jié)合部分包含二羧酸的?；鋬?yōu)選包含總計12-24個碳原子，例如C12、C14、C16、C18、C20、C22或C24，最優(yōu)選C16、C18或C20 ;其中優(yōu)選a)所述?；cGLP-I肽的賴氨酸殘基的e氨基經(jīng)由接頭連接；b)所述接頭包含至少一個OEG基團和/或至少一個Trx基團，并且任選還包含至少一個Glu ;和/或iv)選自除化合物Gl外的權(quán)利要求28的化合物；和/或所述FGF21化合物a)包含-11 、571(、1(561 、1(591 、1(691 和/或1(1221 中的至少一種；b)為經(jīng)由半胱氨酸殘基優(yōu)選內(nèi)部半胱氨酸殘基例如71C的巰基修飾的FGF21衍生物；c)為包含白蛋白結(jié)合部分的FGF21衍生物；d)并非聚乙二醇化的FGF21衍生物；e)為包含白蛋白結(jié)合部分的FGF21衍生物，所述結(jié)合部分包含至少一個、優(yōu)選至少兩個、更優(yōu)選兩個游離的羧酸基團或者其藥學(xué)上可接受的鹽；f)為包含白蛋白結(jié)合部分的FGF21衍生物，所述結(jié)合部分包含酰基，例如脂肪酸或二羧酸的?；鲺；鶅?yōu)選包含總計12-24個碳原子，例如C12、C14、C16、C18、C20、C22或C24，最優(yōu)選C18或C20 ;或者其藥學(xué)上可接受的鹽；其中優(yōu)選i)所述?；cFGF21肽的N端氨基酸殘基的氨基例如與-IM的氨基或與FGF21肽的內(nèi)部半胱氨酸殘基的巰基例如與71C的巰基經(jīng)由接頭連接；并且優(yōu)選b)所述接頭包含至少一個OEG基團和/或至少一個Glu基團；和/或g)選自除具有SEQ ID NO : I的多肽之外的權(quán)利要求51的化合物；以及治療2型糖尿病、增強P細胞的生存力、減少P細胞的凋亡和降低血糖的方法，所有方法包括給予患者有效量的FGF21化合物和GLP-I化合物組合。在另一個方面，本發(fā)明涉及包含F(xiàn)GF21化合物和GLP-1化合物以及藥學(xué)上可接受的載體的組合物，其中所述GLP-I化合物
i)包含以下中的至少一種脫氨基 His7、Aib8、Aib22、Arg26、Aib35 和 / 或 Lys37 ；ii)為包含白蛋白結(jié)合部分的GLP-I衍生物，所述結(jié)合部分包含至少一個、優(yōu)選至少兩個、更優(yōu)選兩個游離的羧酸基團；或者其藥學(xué)上可接受的鹽；iii)為包含白蛋白結(jié)合部分的GLP-I衍生物，所述結(jié)合部分包含二羧酸的?；?，其優(yōu)選包含總計12-24個碳原子，例如C12、C14、C16、C18、C20、C22或C24，最優(yōu)選C16、C18或C20 ;其中優(yōu)選a)所述?；cGLP-I肽的賴氨酸殘基的e氨基經(jīng)由接頭連接；b)所述接頭包含至少一個OEG基團和/或至少一個Trx基團，并且任選還包含至少一個Glu ;和/或iv)選自除化合物Gl外的權(quán)利要求2 8的化合物；和/或所述FGF21化合物a)與SEQ ID NO 1相比包含以下修飾中的至少一種:_1G、-1C、_1A、-IS、Q27E、Q28R、A31E、K56R、K59R、K69R、S71C、D102E、D102N、D102T、N121Q、desl21N、N121D、K122R、D159E、L166F、S167G、M168L、V169aT、G170T、P171L、S172E、Q173A、G174A、G174V、Y179F、A180E、S181K和/或S181R ;獨立地任選帶有N端的M(例如-1M);和/或b)與SEQ ID NO 1相比包含最多25個氨基酸殘基、優(yōu)選最多20個氨基酸殘基、更優(yōu)選最多15個氨基酸殘基、甚至更優(yōu)選最多10個氨基酸殘基或者最優(yōu)選最多6個氨基酸殘基的N端延伸,其中至少50%、優(yōu)選至少60%、更優(yōu)選至少70%、甚至更優(yōu)選至少80%或者最優(yōu)選至少90%的N端延伸的氨基酸殘基為G或S，前提條件是所述FGF21類似物包含不超過210個氨基酸殘基、優(yōu)選不超過209個氨基酸殘基、更優(yōu)選不超過206個氨基酸殘基，并且另外的前提條件是若N端延伸僅由單一氨基酸組成，則所述氨基酸不為Met，這樣的 FGF21 化合物的特定實例為[-1A, 71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 171L, 172E, 173A, 174V,179F,180E,desl81]FGF21。定義本文所用術(shù)語“FGF21化合物”是指天然的人FGF21以及保持FGF21活性的其類似物、融合肽及衍生物。天然的人FGF21蛋白的序列可來自UNIPR0T數(shù)據(jù)庫，登錄號Q9NSA1。209個氨基酸前體蛋白包含信號肽(氨基酸1-28)和成熟蛋白(氨基酸29-209)。將成熟蛋白作為SEQID NO :1(氨基酸1-181)包括在本文中，以及將信號肽作為SEQ ID NO :2 (氨基酸1_28)包括在本文中。在成熟蛋白的本文SEQ ID NO :1第146位用Pro代替Leu的天然人FGF21的同種型或等位基因形式，自尤其是US 2001012628A1(已公開的美國申請中SEQ ID NO 2的第174位殘基)獲知。天然的人FGF21的具體實例是成熟的部分，即SEQ ID NO :1及其L146P同種型。FGF21活性可使用本領(lǐng)域已知的任何方法確定，例如本文實施例8的測定法(3T3-L1脂肪細胞中的葡萄糖攝取)。本文所用術(shù)語“GLP-1化合物”是指人GLP-I (7-37) (SEQ ID NO 3的第1-31個氨基酸)、毒蜥外泌肽-4(7-45) (SEQ ID NO 4的第1_39個氨基酸)以及保持GLP-I活性的其類擬物、融合肽及衍生物。至于GLP-I化合物的位置編號對于本目的，將任何氨基酸取代、缺失和/或添加相對于SEQ ID N0:3和/或SEQ ID NO :4的序列指出。然而，序列表的氨基酸殘基的編號始終從第I號開始，而對于我們想要的本目的，按照本領(lǐng)域的已建立的實踐，以氨基酸殘基編號7起始并給其分配編號7。因此，一般而言，本文對GLP-I (7-37)或毒蜥外泌肽_4序列的位置編號的任何參考都是指在兩種情況下以第7位的His起始并分別以第37位Gly或者第45位Ser終止的序列。GLP-I活性可使用本領(lǐng)域已知的任何方法確定，例如本文實施例7的測定法(表達人GLP-I受體的細胞系中對cAMP形成的刺激)。在FGF21和GLP-I的情況下本文所用術(shù)語“類似物”是指以下多肽，其通過修飾其氨基酸序列或可通過修飾其氨基酸序列分別推導(dǎo)或衍生自SEQ ID NOs :1、3和4的各自的FGF2UGLP-1和毒蜥外泌肽-4序列。這樣的修飾可包括一個或多個氨基酸的取代、缺失和/或添加。例如，氨基酸可在氨基酸序列的C端、N端或內(nèi)部添加和/或缺失。優(yōu)選氨基酸在C端和/或N端，更優(yōu)選在N端添加和/或缺失。帶有C端或N端缺失的氨基酸的氨基酸序列也可稱為截短序列，如本領(lǐng)域所已知。類似地，序列內(nèi)部添加的氨基酸可被稱作插入。本文在此和接下來使用術(shù)語“變體”或“突變蛋白質(zhì)”替代術(shù)語“類似物”。本文具體的實施方案部分、實驗部分以及權(quán)利要求中公開FGF21類似物和GLP-I類似物的實例。在FGF21修飾和GLP-I修飾的情況下本文所指術(shù)語“氨基酸”或“氨基酸殘基”包括被細胞用于蛋白生物合成中并由遺傳密碼規(guī)定的二十種標準的a-氨基酸，即丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸和纈氨酸。所述術(shù)語還包括非標準氨基酸，例如硒代半胱氨酸和吡咯賴氨酸，其也由遺傳密碼編碼但罕見于蛋白中。存在于蛋白中的其它非標準氨基酸可通過翻譯后修飾形成，例如Y-羧基谷氨酸鹽/酯和羥脯氨酸。并非由遺傳密碼編碼的非標準或非天然的氨基酸的另外的實例為鳥氨酸和磷酸絲氨酸。非標準氨基酸的另外的實例還為合成的氨基酸，包括通過化學(xué)合成生產(chǎn)的氨基酸，例如由遺傳密碼編碼的氨基酸的D-異構(gòu)體，例如D-丙氨酸、D-谷氨酰胺、D-組氨酸和D-亮氨酸、Aib ( a -氨基異丁酸)、Abu ( a -氨基丁酸)Jle (叔丁基甘氨酸)、P -丙氨酸、3-氨甲基苯甲酸、鄰氨基苯甲酸、脫氨基組氨酸(縮寫為脫氨基His (或DesaH)，備選名咪唑基丙酸，縮寫為Impr)，氨基酸的P類似物例如￠-丙氨酸、2-氨基-組氨酸、￠-羥基-組氨酸、高組氨酸、N a -乙?；?組氨酸、a -氟甲基-組氨酸、a -甲基-組氨酸、a，a - 二甲基-谷氨酸、m-CF3-苯丙氨酸(縮寫為m-CF3-Phe)、a, P - 二氨基丙酸(縮寫為DAP)、3_吡啶基丙氨酸、2-吡啶基丙氨酸或4-吡啶基丙氨酸、(I-氨基環(huán)丙基)甲酸、(I-氨基環(huán)丁基)甲酸、(I-氨基環(huán)戊基)甲酸、(I-氨基環(huán)己基)甲酸、(I-氨基環(huán)庚基)甲酸和(I-氨基環(huán)辛基)甲酸。對于本目標而言，標準氨基酸的兩種公認密碼(單字母和三字母)可互換使用，或者在此和接下來將氨基酸名稱完全拼出。顯然這些術(shù)語被認為是完全相等的(例如C =Cys =半胱氨酸)。在FGF21和GLP-I的情況下本文所用術(shù)語“衍生物”是指已被共價修飾的多肽。所述術(shù)語并不限于所述而是描述性的，因為其旨在標出如所述對組成性多肽化合物作出的變化(“類似物”)和側(cè)鏈與多肽的共價結(jié)合(籍此其變成“衍生化的”)的區(qū)別。若需要的話，術(shù)語衍生物可被其它的普通化學(xué)術(shù)語例如化合物取代。衍生物的實例包括?；途垡叶蓟亩嚯模绫绢I(lǐng)域所已知。衍生物的另外的實例公開于本文具體的實施方案部分、實驗部分和權(quán)利要求中。
術(shù)語“白蛋白結(jié)合劑(albumin binder) ”也不意指限制于所述。此外,其相反地是描述性的，因為其反映了側(cè)鏈的總體目標或目的，即所得化合物(衍生物)能夠結(jié)合人血清白蛋白，其提供或至少有利于本發(fā)明衍生物常常針對的延長作用。若需要的話，該術(shù)語還可用其它的普通化學(xué)術(shù)語例如化合物取代。白蛋白結(jié)合劑的實例公開于具體的實施方案部分、實驗部分以及權(quán)利要求中。命名本文可互換地使用多肽命名、有機化學(xué)命名和化學(xué)式或其混合來命名類似物和衍生物，無論哪一種都被認為最適合使討論中的技術(shù)問題易于理解。變體命名本文可互換地使用多肽命名、有機化學(xué)命名、化學(xué)式、氨基酸序列或其混合來命名FGF21、GLP-1和毒蜥外泌肽-4的變體，無論哪一種都被認為最適合使討論中的技術(shù)問題易于理解。例如，變體的取代可表示為“原始的氨基酸-位置-取代的氨基酸”?？墒褂萌帜复a或單字母碼。因此，以FGF21為例，符號“K122C”或“Lysl22Cys”意指，討論中的FGF21
變體包括在FGF21(SEQ ID NO 1)中第122位氨基酸對應(yīng)的變體氨基酸位置用半胱氨酸取代賴氨酸。但取代可僅僅表示為位置和所得的氨基酸殘基，如122C被認為等同于K122C，因為其指的是相同的所得分子。若需要的話，可如下進一步所述(“比對”)通過比對變體和FGF21證實位置。多個取代可通過逗號分隔，如果需要的話用括號包圍以明晰它們屬于同一變體。再次以FGF21為例，用于制備化合物F3(實施例2)的FGF21類似物可例如命名為“K56R，K59R, K69R, K122R Met_FGF21 ”，或其可被稱為“帶有 K56R，K59R, K69R, K122R 和 N 端 M 的SEQ ID N0:1”?；蛘撸?+ ”可用于分隔，如在 SEQ ID NO 1 的(-1M+56R+59R+69R+122R)變體中。另一實例為SEQ ID NO :3的GLP-I變體(8V+22E)，其中第8位的Ala(序列表中的第2位)被Val取代，并且在第22位的Gly (序列表中的第16位)被Glu取代。可如下描述延伸通過添加位置編號(C端為繼續(xù)的正編號，而在N端為負編號)參考真實的SEQ ID NO來描述，或者更簡單地，通過利用其正確序列對討論中的化合物添加討論中的延伸的氨基酸，如例如在Met-FGF21 (-1M-FGF21)中。對于本發(fā)明的目標，兩個相關(guān)氨基酸序列的比對，例如FGF21與其類似物的比對，可使用EMBOSS軟件包的Needle程序(http://emboss.org)進行。優(yōu)選版本為2.8.0。Needle 程序?qū)崿F(xiàn)了 Needleman, S. B.和 Wunsch，C. D. (1970) J. MoI. Biol. 48，443-453 中所述的總體比對算法。所用取代矩陣為BL0SUM62，空位開放罰分為10，空位延伸罰分為0. 5?；蛘?，可使用程序“比對”，其為Needleman-Wunsch比對(即總體比對)。序列通過該程序利用缺省打分矩陣BL0SUM50比對。對于空位的第一個殘基的罰分為12，對于空位的另外的殘基的罰分為2。Needleman-Wunsch算法描述于Needleman, S. B.和Wunsch,CD. , (1970) ,Journal of Molecular Biology, 48 :443-453,比對程序由 Myers 和 W. Miller在 Optimal Alignments in Linear Space " CABIOS(computer applications in thebiosciences (生物科學(xué)中的計算機運用))(1988)4 :11-17描述?！氨葘Α睘镕ASTA軟件包版本 v20u6 的一部分(參見 W. R. Pearson 和 D. J. Lipman (1988), " Improved Tools forBiological Sequence Analysis" , PNAS 85 :2444-2448 和 W. R. Pearson(1990)" Rapidand Sensitive Sequence Comparison with FASTP and FASTA," Methods in Enzymology183 :63-98)。
包含本發(fā)明的FGF21化合物和GLP-I化合物的藥物組合物可進一步包含藥學(xué)上可接受的載體。對于注射，所述載體可為水，若需要的話，補充有其它物質(zhì)，例如鹽水，例如生理鹽水。還可使用其它藥學(xué)上可接受的物質(zhì)例如稀釋劑和適當(dāng)?shù)木彌_液。若需要的話，還可使用其它藥學(xué)上可接受的物質(zhì)，例如乳化劑、助懸劑、溶劑、填充劑、膨脹劑、佐劑、防腐齊U、抗氧化劑、著色劑和/或調(diào)味劑。所述FGF21化合物和GLP-I化合物可以純化的多肽的形式使用，或者利用合適的藥學(xué)上可接受的賦形劑配制，如本領(lǐng)域所已知。所述藥物組合物可以本領(lǐng)域已知的任何方式給予，例如注射，例如靜脈(i.v.)或皮下(s. c)注射。所述FGF21化合物和GLP-I化合物可以以治療有效量或預(yù)防有效量包含于藥物組合物中。所述量根據(jù)治療目的或預(yù)防目的而定，例如需要治療的患者的狀況、所需的給藥途徑等。如在本領(lǐng)域常規(guī)的，熟練的醫(yī)師可能不得不根據(jù)這些因素調(diào)整劑量和修改給藥。示例性和非限制性的劑量在本實施例中公開。根據(jù)本發(fā)明使用的很多FGF21化合物和GLP-I化合物為已知化合物。根據(jù)本發(fā)明使用的那些非已知化合物的FGF21化合物和GLP-I化合物可與相似化合物的制備類似地制
備。
具體實施方案以下為本發(fā)明的具體實施方案I. FGF21化合物和GLP-I化合物組合用于制備用于治療2型糖尿病的藥物中的用途。2.實施方案I的用途，其中所述GLP-I化合物包含SEQ ID NO :3、SEQ ID NO 4的氨基酸序列，或者為具有最多15個氨基酸取代、缺失和/或添加的SEQ ID NO :3或4的類似物。3.實施方案2的用途，其中所述GLP-I化合物包含SEQ ID NO 3的氨基酸序列，或者為其具有最多15個氨基酸取代、缺失和/或添加的類似物。4.實施方案2的用途，其中所述GLP-I化合物包含SEQ ID NO 4的氨基酸序列，或者為其具有最多15個氨基酸取代、缺失和/或添加的類似物；例如艾塞那肽。5.實施方案1-4中任一項的用途，其中所述GLP-I化合物具有GLP-I活性。6.實施方案5的用途，其中所述GLP-I化合物與N-e 26-((S)-4-羧基-4-十六酰氨基丁酰)[Arg34]GLP-I-(7-37)(化合物Gl)相比具有一樣的活性、活性更高、或者為其活性的最少1/10，優(yōu)選最少1/8、1/6、1/5、1/4、1/3或1/2，其中所述活性優(yōu)選按照在含人GLP-I受體的培養(yǎng)基中刺激cAMP形成的能力來檢測，例如如實施例7中所述。7.實施方案5-6中任一項的用途，其中所述GLP-I化合物的EC5tl值基于測量在含人GLP-I受體的培養(yǎng)基中刺激cAMP形成的能力的測定法來測定，所述EC5tl值優(yōu)選不超過1000pM、更優(yōu)選不超過800、600、500、400、300或200pM，其中所述測定優(yōu)選如實施例7中所述進行。8.實施方案2-7中任一項的用途，其中氨基酸取代、缺失和/或添加的最大數(shù)目為14、優(yōu)選13、更優(yōu)選12、甚至更優(yōu)選11或者最優(yōu)選10。9.實施方案2-8中任一項的用途，其中氨基酸取代、缺失和/或添加的最大數(shù)目為9、優(yōu)選8、更優(yōu)選7、甚至更優(yōu)選6或者最優(yōu)選5。
10.實施方案2-9中任一項的用途，其中氨基酸取代、缺失和/或添加的最大數(shù)目為4、優(yōu)選3、更優(yōu)選2或者最優(yōu)選I。11.實施方案2-3和5-10中任一項的用途，其中所述GLP-I化合物包含以下中的至少一種脫氨基 His7、Aib8、Aib22、Arg26、Aib35 和 / 或 Lys37。12.實施方案2-3和5-10中任一項的用途，其中所述GLP-I化合物包含以下中的至少一種Glu22和/或Arg34。13.實施方案2-3和5-12中任一項的用途，其中所述GLP-I化合物包含以下組合(34R)、(8Aib+22Aib+35Aib+37K)、(8Aib+34R)或(7DesaH+22E+26R+34R+37K)。
14.實施方案2和4-10的用途，其中所述GLP-I化合物包含以下中的至少一種8V、G ；22E ；33I ；36G ；37P ；38S ；39S ；40G ；41A ；42P ；43P ；44P ；45S ；46C ；46C-酰胺；優(yōu)選包含以下組合(8V+22E)、(8G+22E+36G)或(8V+22E+33I+36G+37P+38S+39S+40G+41A+42P+43P+44P+45S)。15.實施方案1-14中任一項的用途，其中所述GLP-I化合物為任選經(jīng)由接頭的帶
有第二多肽的融合肽。16.實施方案15的用途，其中所述第二多肽選自免疫球蛋白的Fe部分、人白蛋白及其類似物和片段。17.實施方案1-14中任一項的用途，其中所述GLP-I化合物為GLP-I衍生物。18.實施方案17的用途，其中所述GLP-I衍生物在C端氨基酸殘基或者內(nèi)部氨基酸殘基處修飾。19.實施方案18的用途，其中所述GLP-I衍生物經(jīng)由賴氨酸殘基例如26K或37K的e氨基修飾。20.實施方案17-19中任一項的用途，其中所述GLP-I衍生物包含白蛋白結(jié)合部分。21.實施方案20的用途，其中所述白蛋白結(jié)合部分包含至少一個、優(yōu)選至少兩個、更優(yōu)選兩個游離的羧酸基團或者其藥學(xué)上可接受的鹽。22.實施方案17-21中任一項的用途，其中所述白蛋白結(jié)合部分包含?；?，例如脂肪酸或二羧酸的?；?，例如十六酰-和15-羧基十五酰_，所述酰基優(yōu)選包含總計12-24個碳原子，例如C12、C14、C16、C18、C20、C22或C24，最優(yōu)選C16、C18或C20 ;或者其藥學(xué)上可接受的鹽。23.實施方案22的用途，其中所述?；cGLP-I肽的賴氨酸殘基的e氨基經(jīng)由接頭連接。24.實施方案23的用途，其中所述接頭包含至少一個OEG基團(0EG為8-氨基-3，6-二氧雜辛酸)、至少一個Trx基團(Trx為氨甲環(huán)酸，或者反式-4-(氨甲基)環(huán)己烷甲
酸)
O H
和/或至少一個Glu (谷氨酰胺)基團。25.實施方案24的用途，其中所述接頭包含二-OEG基團，其中兩個OEG基團已經(jīng)
由酰胺鍵結(jié)合。26.實施方案25的用途，其中所述接頭還包含Glu基團，其中優(yōu)選Glu的氨基與所述酰基形成酰胺鍵，并且更優(yōu)選地，Glu的Y-?；c二 -OEG基團的氨基形成酰胺鍵，所述二 -OEG基團的羧基最優(yōu)選與GLP-I肽的Lys殘基的e -氨基形成酰胺鍵。27.實施方案24-25中任一項的用途，其中所述接頭還包含Trx基團，其中優(yōu)選Trx的氨基與所述?；纬甚０锋I，并且更優(yōu)選地，Trx的酰基與Glu的氨基形成酰胺鍵，所述Glu的Y -酰基甚至更優(yōu)選與二 -OEG基團的氨基形成酰胺鍵，所述二 -OEG基團的羧基最優(yōu)選與GLP-I肽的Lys殘基的e -氨基形成酰胺鍵。28.實施方案1-27中任一項的用途，其中所述GLP-I化合物選自以下化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、酰胺、鏈烴基化合物(alkyls)或酯N- e 26- ((S) _4_ 羧基 _4_ 十六酰氨基丁酰)[Arg34] GLP-I- (7-37)
HO
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H-H AEGTFTSDVSSYLEGQA A~N ^jj-E F I A W L V R G R~N 丫
OO(化合物Gl);N-e 37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-( {反式 _4_[ (19-羧基十九酰氨基)_甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠-[脫氨基把87，611122，六找26，六找34，1^837]61^-1-(7-37)
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權(quán)利要求
1.FGF21化合物和GLP-I化合物組合用于制備用于治療2型糖尿病的藥物中的用途。
2.權(quán)利要求I的用途，其中所述GLP-I化合物包含SEQID NO :3、SEQ ID NO 4的氨基酸序列，或者為具有最多15個氨基酸取代、缺失和/或添加的SEQ ID NO :3或4的類似物。
3.權(quán)利要求1-2中任一項的用途，其中所述GLP-I化合物為包含白蛋白結(jié)合部分的GLP-I衍生物。
4.權(quán)利要求3的用途，其中所述白蛋白結(jié)合部分包含至少一個、優(yōu)選至少兩個、更優(yōu)選兩個游離的羧酸基團或者其藥學(xué)上可接受的鹽。
5.權(quán)利要求3-4中任一項的用途，其中所述白蛋白結(jié)合部分包含?；?，例如脂肪酸或二羧酸的?；?，例如十六酰-和15-羧基-十五酰_，所述?；鶅?yōu)選包含總計12-24個碳原子，例如C12、C14、C16、C18、C20、C22或C24，最優(yōu)選C16、C18或C20 ;或者其藥學(xué)上可接受的鹽。
6.權(quán)利要求5的用途，其中所述酰基與GLP-I肽的賴氨酸殘基的ε氨基經(jīng)由接頭連接，其中所述接頭優(yōu)選包含至少一個OEG基團(0EG為8-氨基-3，6- 二氧雜辛酸)、至少一個Trx基團(Trx為氨甲環(huán)酸，或者反式-4-(氨甲基)環(huán)己烷甲酸)
7.權(quán)利要求1-6中任一項的用途，其中所述GLP-I化合物選自以下化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、酰胺、鏈烴基化合物或酯 N- ε 26- ((S) -4-羧基 _4_ 十六酰氨基丁酰)[Arg34] GLP-I- (7-37)
8.權(quán)利要求1-7中任一項的用途，其中所述FGF21化合物包含SEQID NO : I的氨基酸序列，或者為其具有最多30個氨基酸取代、缺失和/或添加的類似物。
9.權(quán)利要求1-40中任一項的用途，其中所述FGF21化合物為包含白蛋白結(jié)合部分的FGF21衍生物。
10.權(quán)利要求9的用途，其中所述白蛋白結(jié)合部分包含至少一個、優(yōu)選至少兩個、更優(yōu)選兩個游離的羧酸基團或者其藥學(xué)上可接受的鹽。
11.權(quán)利要求9-10中任一項的用途，其中所述白蛋白結(jié)合部分包含酰基，例如脂肪酸或二羧酸的?；?7-羧基-十七酰-和19-羧基十九酰_，所述?；鶅?yōu)選包含總計12-24個碳原子，例如C12、C14、C16、C18、C20、C22或C24，最優(yōu)選C18或C20 ;或者其藥學(xué)上可接受的鹽。
12.權(quán)利要求11的用途，其中所述?；cFGF21肽的N端氨基酸殘基的氨基例如與-IM的氨基經(jīng)由接頭連接，或與FGF21肽的內(nèi)部半胱氨酸殘基的巰基例如與71C的巰基經(jīng)由接頭連接，其中所述接頭優(yōu)選包含至少一個OEG基團(OEG為8-氨基-3，6- 二氧雜辛酸)和/或至少一個Glu (谷氨酰胺)基團。
13.權(quán)利要求1-12中任一項的用途，其中所述FGF21化合物選自以下化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、酰胺、鏈烴基化合物或酯 具有SEQ ID NO 1的多肽(人FGF21)； 具有SEQ ID NO 1和添加的N端Met的多肽((Met_FGF21_人，化合物Fl)； S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(19-羧基十九酰氨基)丁酰氨基]-乙氧基}乙氧基)乙酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰氨基]乙基氨甲酰基}甲基)[Cys71]Met-FGF21(化合物 F2);和 Ν-α I-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七酰氨基)丁酰氨基]_乙氧基}乙氧基)乙酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Arg56，Arg59，Arg69，Argl22]-Met-FGF21 (化合物 F3)。
14.權(quán)利要求1-13中任一項的用途，其中所述化合物同時和/或序貫給予。
15.一種用于治療2型糖尿病的FGF21化合物和GLP-I化合物的組合。
全文摘要
本發(fā)明涉及成纖維細胞生長因子21(FGF21)化合物和胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)化合物組合用于制備用于治療糖尿病、更特別是2型糖尿病的藥物中的用途，以及包含某些FGF21化合物和GLP-1化合物組合以及藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。所述組合對2型糖尿病相關(guān)參數(shù)(即在游離脂肪酸存在下的離體β細胞的生存力、離體β細胞的胱天蛋白酶活性(細胞凋亡的衡量))具有顯著的作用，并且在體內(nèi)對db/db小鼠具有降血糖作用。
文檔編號A61P3/10GK102802657SQ201080026383
公開日2012年11月28日 申請日期2010年6月8日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月11日
發(fā)明者B·安德森, A·M·K·漢森, B·C·羅林 申請人:諾沃-諾迪斯克有限公司