專利名稱：組織粘連的治療的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及干粉組合物或呈粉末形式的纖維蛋白密封劑用于預(yù)防或減少例如術(shù)后粘連的組織粘連的用途。
背景技術(shù)：
外科術(shù)后粘連具有顯著的臨床和醫(yī)學(xué)經(jīng)濟(jì)相關(guān)性，因?yàn)?，例如，外科術(shù)后粘連引起約40%的慢性盆腔疼痛病例和大約20%的不育癥病例。實(shí)際上，不使用佐藥療法不能預(yù)防粘連，并且創(chuàng)傷每分鐘都可能引起它們的粘連形成。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)許多材料對外科手術(shù)粘連的減少有積極作用，所述材料諸如透明質(zhì)酸鈉 /羧甲基纖維素膜、膠原蛋白膜和凝膠，以及纖維蛋白膠。EP1905443描述了施用含有海藻糖的溶液來用于減少和/或預(yù)防外科手術(shù)期間或之后的粘連。Lee 等人(Japanese Journal of Veterinary Anesthesia & Surgery，第 40 卷， 第19- 頁Q009))公開了通過向內(nèi)臟器官表面上噴灑羧甲基纖維素鈉的溶液連同海藻糖溶液來減少在兔模型中實(shí)施卵巢子宮切除術(shù)之后內(nèi)臟器官的實(shí)驗(yàn)誘發(fā)性術(shù)后粘連。液體纖維蛋白膠對抗粘連的作用多少是有爭論的。許多報(bào)道暗示了使用這些液體纖維蛋白膠可能預(yù)防術(shù)后粘連(例如Brands等人，Chirurg 61(1990) 22~26 ；Lindenberg 等 A, Ann. Chir. Gynecol. 73 (1984) :11-13 ；De Iaco 等人，F(xiàn)ertility and Sterility 62 (2) (94) :400-404 ；Takeuchi 等人，J. Am. Assoc. Gynecol. Laparosc. 3 (4) (1996) 575-579 ;Martin-Cartez 等人，Surg Today, 2008, 38 (2) :135-40) 然而，其他研究發(fā)現(xiàn)， 這些液體纖維蛋白膠在防止粘連形成中沒有顯著的作用，或在術(shù)后粘連并發(fā)癥之后沒有發(fā)現(xiàn)作用再現(xiàn)(參見，例如 Marana 等人，Gynecol. Obstet. Invest. 41 (1996) :199-202 和 Gauwerky 等人，Arch. Gynecol. Obstet. 247(1990) :161-166)。最近的比較測試表明，膠原蛋白凝膠、膠原蛋白膜和透明質(zhì)酸鈉/羧甲基纖維素膜有效地減少粘連形成，而液體纖維蛋白膠對于粘連形成的作用類似于對照物。因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種用于有效減少或預(yù)防患者的組織粘連的方法和組合物。發(fā)明概述在本發(fā)明的第一方面中，提供一種用于減少或預(yù)防患者在外科手術(shù)期間或之后或在傷口治療期間的組織粘連的方法，所述方法包括在所述外科手術(shù)或傷口治療期間對暴露或分離的組織局部施用有效量的含海藻糖干粉。在一個(gè)相關(guān)方面中，本發(fā)明提供一種呈含海藻糖干粉形式的藥物組合物，其用于治療或預(yù)防在外科手術(shù)期間或之后或在傷口治療期間的組織粘連。令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，當(dāng)該含海藻糖干粉組合物在外科手術(shù)中作為添加劑使用時(shí)，術(shù)后粘連得以減少或預(yù)防。在本發(fā)明的第二方面中，提供一種用于減少或預(yù)防患者在外科手術(shù)期間或之后或在傷口治療期間的組織粘連的方法，所述方法包括在所述外科手術(shù)或傷口治療期間對暴露或分離的組織局部施用有效量的干粉纖維蛋白密封劑。在一個(gè)相關(guān)方面中，本發(fā)明提供一種呈干粉纖維蛋白密封劑形式的藥物組合物，其用于治療或預(yù)防在外科手術(shù)期間或之后或在傷口治療期間的組織粘連。在本發(fā)明的第三方面中，提供一種用于減少或預(yù)防患者在外科手術(shù)期間或之后或在傷口治療期間的組織粘連的方法，所述方法包括在所述外科手術(shù)或傷口治療期間對暴露或分離的組織局部施用有效量的干粉纖維蛋白密封劑組合物，其中所述干粉纖維蛋白密封劑組合物包含含有纖維蛋白原的第一微粒和含有凝血酶的第二微粒的混合物。在一個(gè)相關(guān)方面中，本發(fā)明提供一種包含含有纖維蛋白原的第一微粒和含有凝血酶的第二微粒的混合物的呈干粉纖維蛋白密封劑形式的藥物組合物，其用于治療或預(yù)防在外科手術(shù)期間或之后或在傷口治療期間的組織粘連。在本發(fā)明的第四方面中，提供一種用于減少或預(yù)防患者在外科手術(shù)期間或之后或在傷口治療期間的組織粘連的方法，所述方法包括在所述外科手術(shù)或傷口治療期間對暴露或分離的組織局部施用有效量的干粉纖維蛋白密封劑組合物，其中所述干粉纖維蛋白密封劑組合物包含含有纖維蛋白原的第一微粒和含有凝血酶的第二微粒的混合物，并且進(jìn)一步包含添加劑材料。在一個(gè)相關(guān)方面中，本發(fā)明提供一種包含含有纖維蛋白原的第一微粒和含有凝血酶的第二微粒的混合物且進(jìn)一步包含添加劑材料的呈干粉纖維蛋白密封劑形式的藥物組合物，其用于治療或預(yù)防在外科手術(shù)期間或之后或在傷口治療期間的組織粘連。在本發(fā)明的第五方面中，提供一種用于減少或預(yù)防患者在外科手術(shù)期間或之后或在傷口治療期間的組織粘連的方法，所述方法包括在所述外科手術(shù)或傷口治療期間對暴露或分離的組織局部施用有效量的干粉纖維蛋白密封劑組合物，其中所述干粉纖維蛋白密封劑組合物包含含有纖維蛋白原和海藻糖的第一微粒和含有凝血酶和海藻糖的第二微粒的混合物。在一個(gè)相關(guān)方面中，本發(fā)明提供一種包含含有纖維蛋白原和海藻糖的第一微粒和含有凝血酶和海藻糖的第二微粒的呈干粉纖維蛋白密封劑形式的藥物組合物，其用于治療或預(yù)防在外科手術(shù)期間或之后或在傷口治療期間的組織粘連。在本發(fā)明的第六方面中，提供一種用于減少或預(yù)防患者在外科手術(shù)期間或之后或在傷口治療期間的組織粘連的方法，所述方法包括在所述外科手術(shù)或傷口治療期間對暴露或分離的組織局部施用有效量的干粉纖維蛋白密封劑組合物，其中所述干粉纖維蛋白密封劑組合物包含含有纖維蛋白原和海藻糖的第一微粒、含有凝血酶和海藻糖的第二微粒的混合物，并且進(jìn)一步包含添加劑材料。在一個(gè)相關(guān)方面中，本發(fā)明提供一種包含含有纖維蛋白原和海藻糖的第一微粒、含有凝血酶和海藻糖的第二微粒的混合物且進(jìn)一步包含添加劑材料的呈干粉纖維蛋白密封劑形式的藥物組合物，其用于治療或預(yù)防在外科手術(shù)期間或之后或在傷口治療期間的組織粘連。在本發(fā)明的第七方面中，提供一種用于減少或預(yù)防患者在外科手術(shù)期間或之后或在傷口治療期間的組織粘連的方法，所述方法包括在所述外科手術(shù)或傷口治療期間對暴露或分離的組織局部施用有效量的干粉纖維蛋白密封劑組合物，其中所述干粉纖維蛋白密封劑組合物包含含有纖維蛋白原的第一微粒、含有凝血酶的第二微粒的混合物，并且進(jìn)一步包含添加劑材料，其中所述添加劑材料包含多糖或化學(xué)修飾的多糖。在一個(gè)相關(guān)方面中，本發(fā)明提供一種包含含有纖維蛋白原的第一微粒、含有凝血酶的第二微粒的混合物且進(jìn)一步包含添加劑材料的呈干粉纖維蛋白密封劑形式的藥物組合物，其中所述添加劑材料包含多糖或化學(xué)修飾的多糖，所述藥物組合物用于治療或預(yù)防在外科手術(shù)期間或之后或在傷口治療期間的組織粘連。在第八方面中，本發(fā)明提供一種試劑盒，其包含根據(jù)本發(fā)明的組合物并任選帶有分配裝置。在第九方面中，本發(fā)明提供本發(fā)明組合物或其組分在制造用于預(yù)防、治療和/或減輕組織粘連的藥物中的用途。W097/44015描述一種基于纖維蛋白原和凝血酶的微粒的干粉纖維蛋白密封劑。這些微粒組合物的進(jìn)一步優(yōu)化的制劑描述于共同待審的第12/636，718號的美國申請中，該申請以引用的方式并入本文。在這個(gè)美國申請的實(shí)施例中，該組分是通過分別噴霧干燥帶有海藻糖的纖維蛋白原和帶有海藻糖的凝血酶來制備。各產(chǎn)品的主要粒徑為最多50 μ m的直徑。所述纖維蛋白密封劑(這些組分的摻混物)已被證明是一種易于使用，穩(wěn)定并且有效的局部止血劑。所述產(chǎn)品可以不經(jīng)復(fù)原就立即使用。一經(jīng)與諸如血液的含水流體接觸， 暴露的活性凝血酶就將暴露的纖維蛋白原轉(zhuǎn)化成不溶性纖維蛋白聚合體。發(fā)明詳述本發(fā)明的第一方面是基于海藻糖存在于粉末組合物中時(shí)的新用途的發(fā)現(xiàn)。根據(jù)本發(fā)明的方法在通過對外科手術(shù)部位或傷口施用含海藻糖的干粉組合物來減少或預(yù)防患者的組織粘連中是有效的。用根據(jù)本發(fā)明的方法來減少或預(yù)防的患者的粘連可以是對器官、 器官一部分或其他組織的粘連或是它們之間的粘連。粘連也可以定義為器官和/或其他組織之間的異常粘著。在本發(fā)明的其他實(shí)施方案中，在外科手術(shù)或傷口治療期間對暴露或分離的組織局部施用有效量的干粉纖維蛋白密封劑減少或預(yù)防了患者的粘連。在本發(fā)明的其他實(shí)施方案中，在外科手術(shù)或傷口治療期間對暴露或分離的組織局部施用有效量的干粉纖維蛋白密封劑減少或預(yù)防了患者的粘連，其中所述干粉纖維蛋白密封劑組合物包含含有纖維蛋白原的第一微粒和/或含有凝血酶的第二微粒的混合物。眾所周知，纖維蛋白在減少或預(yù)防粘連中起作用。不希望受理論的局限，據(jù)信，呈粉末形式的凝血酶和纖維蛋白原的反應(yīng)(由此干粉溶于少量血液或血漿中等)引起比使用液體纖維蛋白密封劑或纖維蛋白膠時(shí)所見更稠密的纖維蛋白層的形成。纖維蛋白的這種稠密屏障增強(qiáng)了抗粘連作用。因?yàn)檎尺B經(jīng)常抑制包括器官的組織的正常運(yùn)動，因此被認(rèn)為是外科手術(shù)后的嚴(yán)重并發(fā)癥。例如，肌腱外科手術(shù)之后的粘連可能導(dǎo)致運(yùn)動障礙。此外，腹腔內(nèi)的外科手術(shù)之后的器官粘連可能引起諸如腸梗阻、疼痛和不孕癥的并發(fā)癥。使用干粉凝血酶制劑和/或干粉纖維蛋白原制劑的情況下，可以將它們作為一套提供，優(yōu)選和適當(dāng)?shù)氖┯醚b置一起提供。優(yōu)選的被減少或預(yù)防的粘連可能是由婦科生殖外科手術(shù)、腹部外科手術(shù)、脊椎外科手術(shù)和腹腔鏡外科手術(shù)引起的，但所述組合物不僅可以廣泛用于胸廓切開術(shù)或剖腹術(shù)而且可以用于肝臟外科手術(shù)、神經(jīng)外科手術(shù)、有關(guān)肌腱或韌帶的整形外科手術(shù)等，以及用于傷口治療。根據(jù)本發(fā)明的制劑的“有效量”是與不進(jìn)行此施用的對照組相比能夠顯著地減少或預(yù)防患者的粘連形成的任何量。
根據(jù)另一方面，本發(fā)明涉及包含有效量的海藻糖、其同系物、類似物或衍生物的干粉纖維蛋白密封劑/組合物用于生產(chǎn)用于減少或預(yù)防患者在外科手術(shù)期間或之后的粘連形成的制劑的用途。所述組合物也可以包括至少一種或多種具有潤滑性質(zhì)的多糖、粘多糖、多糖的鹽和粘多糖的鹽。諸如苯甲基化透明質(zhì)酸等的粘多糖的化學(xué)修飾衍生物也可以存在于所述組合物中。在本說明書中，“組織”指的是諸如皮膚、器官、肌肉、神經(jīng)、軟骨、骨骼的身體組織。 本發(fā)明的用于組織粘連預(yù)防的干粉可應(yīng)用于各種動物、哺乳動物物種，最特別地用于人類。海藻糖廣泛存在于包括動物、植物和微生物的自然界中。它是含在諸如面包酵母和啤酒酵母的酵母中，并且它是經(jīng)常在食物中發(fā)現(xiàn)的糖類。可以用于本發(fā)明的海藻糖的合適類型或異構(gòu)體包括含水結(jié)晶海藻糖、無水結(jié)晶海藻糖、無水無定形海藻糖、α，α -海藻糖、α, β-海藻糖(新海藻糖)、β，β -海藻糖(異海藻糖)或其混合物。也可以存在含有羧基、羧甲基纖維素、羧甲基幾丁質(zhì)、羧甲基殼聚糖、羧甲基淀粉、 褐藻酸、果膠、羧甲基葡聚糖等的多糖。也可以存在包括透明質(zhì)酸(HA)、肝素、硫酸肝素和硫酸軟骨素的粘多糖。作為水溶性鹽時(shí)，可以使用鈉鹽、堿金屬鹽或堿土金屬鹽。也可以包括組合，諸如羧甲基纖維素和化學(xué)修飾的透明質(zhì)酸。可分別配制含纖維蛋白原和含凝血酶的包含海藻糖的可溶性微粒并且以穩(wěn)定的干燥形式摻混在一起。隨后可以將這種制劑作為適用于傷口治療和外科手術(shù)修復(fù)的纖維蛋白密封劑使用。所述纖維蛋白原和凝血酶可以從捐獻(xiàn)人的血液中分離得到或通過培養(yǎng)細(xì)胞或轉(zhuǎn)基因動物或植物的重組DNA技術(shù)來制造。所述纖維蛋白原或凝血酶可以是全長的或其任何活性片段。所述微粒含有的纖維蛋白原的含量可以是約0. w/w至50% w/w，優(yōu)選約0. 5% w/w至20% w/w，以及5% w/ w至10% w/w，或約6. 5% w/w。所述微粒含有的凝血酶的含量可以是約10至20，000IU/g, 優(yōu)選約 25 至 1000IU/g,或 100IU/g 至 500IU/g。諸如在微囊情況下，含有活性物的微粒和/或添加劑材料可以是固體或中空的。 包含纖維蛋白原或凝血酶的微?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域已知方法制備，例如按WO 92/18164、WO 96/09814、WO 96/18388或WO 97/44015的描述來制備。這些噴霧干燥和相關(guān)的粒子操作工藝使具有限定粒徑分布(例如直徑最多50μπι)的可溶性蛋白質(zhì)微囊的生產(chǎn)成為可能。 例如，按那些文獻(xiàn)的描述，所述微粒可以可再現(xiàn)的方式來生產(chǎn)，例如，其中90%或以上(按體積計(jì))的尺寸最多30 μ m，例如10至20 μ m。這些粒子的易流動集聚體可以通過將在噴霧干燥器中的空氣流動設(shè)置調(diào)整成逆流，或?qū)⒍鄠€(gè)噴霧器布置成“強(qiáng)制型初級集聚(forced primary agglomeration) ”結(jié)構(gòu)來就地制造，本領(lǐng)域的技術(shù)人員對此會有所了解。此等集聚體的直徑可以是50 μ m至1000 μ m或100 μ m至500 μ m，或125 μ m至250 μ m?？梢苑謩e配制含纖維蛋白原的可溶性微粒和含凝血酶的可溶性微粒并且按WO 03/037303的描述，在噴霧干燥設(shè)備內(nèi)，通過使用多噴嘴噴霧器來摻混在一起。雖然制備干粉制劑的優(yōu)選方法包括噴霧干燥，但也可以使用其他干燥技術(shù)來制備干粉制劑。適當(dāng)?shù)姆椒ㄔ诒绢I(lǐng)域中是已知的并且包括流化床干燥和冷凍干燥，隨后進(jìn)行微粉化，或噴霧冷凍干燥。必要或希望時(shí)，微?？梢允褂帽绢I(lǐng)域已知的技術(shù)來滅菌。本發(fā)明的微粒優(yōu)選通過噴霧干燥來制備。通常，在噴霧工藝期間使用利用壓縮空氣的二流式噴嘴；這會引起生成中空微粒?？梢允褂肗iro Mobile Minor噴霧干燥器上的這種噴霧系統(tǒng)來制造的微粒最大粒徑0(50，由Sympatec測量)是約30 μ m。本發(fā)明的微粒的優(yōu)選X50值介于5 μ m與50 μ m之間，最優(yōu)選介于10與20 μ m之間。所述微?？梢允侵锌盏幕蚬腆w。本發(fā)明的第一微?；虻诙⒘？梢酝ㄟ^噴霧干燥活性組分(例如具有諸如糖類的載體材料的纖維蛋白原或凝血酶)的溶液來制備。一種替代工序包括共噴霧干燥，在該工序中配制活性組分和另一種壁材形成材料，并且噴霧干燥，以得到活性組分被合并到所述粒子中的微粒。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述干粉組合物包含海藻糖與適用于預(yù)防或減少在外科手術(shù)期間或之后的粘連的纖維蛋白原。所述纖維蛋白原和海藻糖可以通過在本文中描述的噴霧干燥或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何其他技術(shù)一起合并到復(fù)合微粒中。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，將包含纖維蛋白原的單獨(dú)微粒和包含凝血酶的單獨(dú)微粒與海藻糖摻混，以生產(chǎn)適用于預(yù)防或減少在外科手術(shù)期間或之后的粘連的干粉組合物。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，將固體或中空的含纖維蛋白原的微粒與固體或中空的含凝血酶的微粒并與如本文中描述的添加劑材料以任意順序摻混，從而產(chǎn)生一種均質(zhì)摻混物。此種摻混可以使用低剪切摻混或高剪切摻混，或本領(lǐng)域技術(shù)人員所知的任何其他技術(shù)來進(jìn)行。所述纖維蛋白原或凝血酶可以是全長的或其任何活性片段。這些片段是已知的； 參見Coller等人，J. Clin. Invest. 89 :546-555 (1992)。雖然纖維蛋白原原料可以是冷凍溶液，但是可以使用在噴霧干燥之前需要復(fù)原的凍干粉末。適當(dāng)?shù)钠渌鞍卓梢允翘烊淮嬖诘幕蛲ㄟ^培養(yǎng)細(xì)胞或轉(zhuǎn)基因動物或植物的重組 DNA技術(shù)來制造。所述纖維蛋白原或凝血酶可以是全長的或其任何活性片段。它們可以擔(dān)當(dāng)“壁材形成材料”，正如W092/18164中的描述，其中給出了多個(gè)實(shí)施例。一種優(yōu)選材料是 HSA(人血清白蛋白)。例如，纖維蛋白原是單獨(dú)噴霧干燥或是在不同量的諸如HSA(例如比例為1 1、1 3、3 1的纖維蛋白原HSA)的賦形劑和海藻糖存在下噴霧干燥。HSA的其他適當(dāng)替代物包括表面活性劑，諸如Tween 20、Tween 80、Poloxamer 407或Poloxamer 188。鈣離子(例如氯化鈣)可以合并到凝血酶原料中?；蛘撸梢詫⒙然}添加到加工后的微粒中。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的添加劑材料通常具有的平均粒徑為 10 μ m 至 1000 μ m，或 100 μ m 至 500 μ m，或 125 μ m 至 250 μ m 或可能為，例如 10 μ m 至 40 μ m。 添加劑可以包含一種材料或可以是材料的混合物。此添加劑材料可以擔(dān)當(dāng)活性材料的載體和/或稀釋劑?？梢跃哂星懊娑温渲兴鶖⑹黾墑e的粒徑的粒子的形式存在的添加劑材料包括如下的添加劑生物相容的吸水性和/或水溶脹性材料、多糖、多孔和/或中空的材料。在此類情況下，添加劑材料可以構(gòu)成組合物重量的約1%、約2%、約3%、約4%、 約 5%、約 6%、約 7%、約 8%、約 9%、約 10%、約 11%、約 12%、約 13%、約 14%、約 15%、約 16 %、約 17 %、約 18 %、約 19 %、約 20 %、約 21 %、約 22 %、約 23 %、約 M %、約 25 %、 約洸％、約27 %、約沘％、約四％、約30 %、約31 %、約32 %、約33 %、約；34 %、約；35 %、 約 36 %、約 37 %、約 38 %、約 39 %、約 40 %、約 41 %、約 42 %、約 43 %、約 44 %、約 45 %、 約 46 %、約 47 %、約 48 %、約 49 %、約 50 %、約 51 %、約 52 %、約 53 %、約 M %、約 55 %、 約 56 %、約 57 %、約 58 %、約 59 %、約 60 %、約 61 %、約 62 %、約 63 %、約 64 %、約 65 %、 約 66 %、約 67 %、約 68 %、約 69 %、約 70 %、約 71 %、約 72 %、約 73 %、約 74 %、約 75 %、 約 76 %、約 77 %、約 78 %、約 79 %、約 80 %、約 81 %、約 82 %、約 83 %、約 84 %、約 85 %、 約 86%、約 87%、約 88%、約 89%、約 90%、約 91%、約 92%、約 93%、約 94%、約 95%、約 96 %、約97 %、約98 %、約99 %，或之間的任何范圍或數(shù)值。通常，在此類情況下的組合物將包含至少1 %，或至少5%或至少10% w/w的添加劑材料，并且最多60%、最多70%或最多80%的添加劑材料。因此，添加劑可以組合物的 1% (或 5%或 10%)至 80%，或 (或 5% 或 10%)至 70%，或 (或 5%或 10%) 至60% w/w的含量存在。在本發(fā)明的其他實(shí)施方案中，添加劑材料通常具有的平均粒徑為約IOnm至 10 μ m,并且可以包含一種材料或可以是材料的混合物。在本發(fā)明的其他實(shí)施方案中，添加劑材料不是固體、可溶性材料。各種材料可以作為添加劑粒子存在，以增強(qiáng)流動性和可潤濕性等。材料優(yōu)選是不溶性或可非常緩慢溶解的。此類材料可以包括葡聚糖聚合物，例如kphadex，不同的粒徑均可用；淀粉，包括羥乙基淀粉、支鏈淀粉衍生物、透明質(zhì)酸和其酯。纖維素產(chǎn)品，諸如微晶纖維素(Avicel級)、甲基纖維素、羧甲基纖維素、微細(xì)纖維素或羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、低取代羥丙基纖維素、羥乙基纖維素和可以單獨(dú)或以混合物使用的其他材料，諸如交聯(lián)的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。同樣，擔(dān)當(dāng)載體的適當(dāng)添加劑材料包括聚乙二醇(PEG)，優(yōu)選具有約1000的分子量；聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，優(yōu)選具有約50，000的平均分子量 ’聚(丙烯酸)、聚丙烯酰胺、聚乙烯醇(PVA)、聚(甲基乙烯基醚-共-馬來酸酐)、聚 (環(huán)氧乙烷)和葡聚糖，通常具有約40，000的平均分子量。其他適當(dāng)?shù)奶砑觿┎牧峡梢允强扇苄缘?，諸如包括單糖和二糖的糖類，包括乳糖、 乳糖一水化物、無水乳糖、蔗糖、麥芽糖、無水麥芽糖、果糖、麥芽糖醇、山梨糖醇、木糖醇、甘露醇，或當(dāng)含有纖維蛋白原和/或凝血酶的微粒中的載體材料不包含海藻糖時(shí)，包括海藻糖本身。適當(dāng)?shù)牡途厶前▎为?dú)的或以組合物形式的糊精、硫酸葡聚糖、支鏈淀粉、透明質(zhì)酸和其鹽。在本發(fā)明的其他實(shí)施方案中，添加劑是一種高度多孔和高度可溶性的交織絲狀晶體，例如，山梨糖醇和/或甘露醇的交織絲狀晶體。此類材料是以PARTECK SI和PARTECK M(Merck KGaA,Darmstadt,Germany)的名稱出售。這些等級具有高的吸附容量并且因此適于與本發(fā)明的干粉纖維蛋白密封劑粉末組合物摻混，從而產(chǎn)生一種新型的粉末，它通過使血液浸透所涂覆的粉末床層來降低起塵并且增強(qiáng)所述干粉纖維蛋白密封劑的可潤濕性、溶解性和性能，并且因此避免在所述粉末界面處的單獨(dú)凝結(jié)。必要或希望時(shí)，本發(fā)明的微?？梢詼缇?。適當(dāng)技術(shù)的實(shí)例為無菌處理、電子束照射、Y-射線照射和環(huán)氧乙烷。添加劑材料可以作為單一組分或以組合形式存在于本發(fā)明的組合物中，并且可以存在于原料中，或在摻混在一起之前添加到噴霧干燥凝血酶或纖維蛋白原中，或添加到最終摻混物中并經(jīng)歷進(jìn)一步摻混。此種摻混可以使用低剪切或高剪切摻混、機(jī)械化學(xué)鍵接、雜化作用或本領(lǐng)域技術(shù)人員所知的任何其他技術(shù)來進(jìn)行。雖然本發(fā)明的纖維蛋白密封劑中的微粒的組分優(yōu)選是水溶性的，并且微粒優(yōu)選是通過噴霧干燥適當(dāng)?shù)娜芤憾@得，但是可獲得的微?？梢允亲杂闪鲃?、離散并且大體上干燥或無水的，殘留的含水量優(yōu)選不大于約8% w/w或約5% w/w，最優(yōu)選不大于約3% w/w0 這意味著根據(jù)本發(fā)明的纖維蛋白密封劑的化合物并不是直到它們(例如)通過與傷口部位的液體進(jìn)行接觸而被潤濕時(shí)才活化。活性組分因此可以作為干燥混合物來遞送，盡管也設(shè)想過不同微粒的獨(dú)立應(yīng)用。含有活性物的微粒優(yōu)選是無定形的或在室溫(例如25°C)下呈玻璃態(tài)，以便穩(wěn)定所截留的蛋白質(zhì)以及使活性物處于如此迅速溶解的狀態(tài)。按差示掃描量熱法或調(diào)制差示掃描量熱法的測量，含有活性物的微粒組合物優(yōu)選呈現(xiàn)出大于約25°C，或約30°C，或約40°C，或約50°C或以上的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度。添加劑材料也可以是無定形的或在室溫(例如25°C )下呈玻璃態(tài)以便處于迅速溶解的狀態(tài)。按差示掃描量熱法或調(diào)制差示掃描量熱法的測量，添加劑材料優(yōu)選呈現(xiàn)出大于約25°C，或約30°C，或約40°C，或約50°C的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度。此玻璃態(tài)組合物使組合物能在環(huán)境溫度或室溫下(例如25°C)長期貯存，例如大于3個(gè)月或大于6個(gè)月，而不使活性顯著地?fù)p失。添加劑材料也可以是結(jié)晶的或無定形狀態(tài)，但也可以是自由流動、離散并且大體上無水的，殘留含水量優(yōu)選不大于5% w/w，最優(yōu)選不大于3% w/w。粉末組合物可以使用共同待審的申請PCT/GB2009/051714的粉末遞送裝置來施用，所述申請以引用的方式并入本文?，F(xiàn)僅通過說明方式參考以下實(shí)施例來描述本發(fā)明。實(shí)施例1本研究探究根據(jù)本發(fā)明的粉末在豬肝臟傷口模型中的作用。也考查組織對應(yīng)用包含海藻糖的纖維蛋白密封劑的反應(yīng)，并且也將使用所述纖維蛋白密封劑的組織反應(yīng)和止血與Tisseel ( 一種市售的液體應(yīng)用纖維蛋白密封劑)相比較。研究材料按共同待審的第12/636，718號美國申請中的描述來制備干粉纖維蛋白密封劑。 簡單地說，制備纖維蛋白原(ZLB，Marburg，Germany)和海藻糖(Pfanstiehl，Waukegan，IL， USA)的中空球狀粒子。所述粒子中的纖維蛋白原的濃度是12% (w/w) 0將凝血酶(SNBTS，Glasgow, Scotland)和海藻糖噴霧干燥以獲得中空的粒子。凝血酶是以每克粒子1000IU的濃度存在。將所述粒子以1 1的比例摻混；所得粉末具有 6% w/w濃度的纖維蛋白原和500IU/克的粉末。此摻混物稱為本發(fā)明粉末。制備本發(fā)明粉末并且做好應(yīng)用準(zhǔn)備，同時(shí)購買Tisseel并且按照供應(yīng)商的操作指南制備。動物使用一頭體重為45kg的雌性大白豬/長白豬雜交豬。實(shí)驗(yàn)方案將本發(fā)明粉末和Tisseel應(yīng)用于肝臟活檢傷口部位。外科手術(shù)方案
使用透熱療法進(jìn)行中線剖腹術(shù)，以暴露出肝臟的腹側(cè)面。橫切在肝臟和隔膜之間的背部肝韌帶以允許肝臟的末端運(yùn)動。將所述肝臟的左外葉提起并且從腹中取出放在濕紗布上。調(diào)節(jié)IOmm點(diǎn)啄活檢工具以切割4mm深度。在所述肝臟左葉的實(shí)質(zhì)表面進(jìn)行六次點(diǎn)啄活檢，每次一個(gè)，使在各活檢部位邊緣之間至少有3cm的正常組織。除去點(diǎn)啄活檢組織以在所述肝葉表面留下10mmX4mm坑狀缺口。一旦除去所述組織，用預(yù)先稱重的紗布從所述部位以每分鐘一片紗布的速率收集血液。將紗布稱重以確定所述部位三分鐘的流血速率。 然后根據(jù)實(shí)驗(yàn)方案治療所述部位并且用紗布繼續(xù)收集5分鐘或直到止血。一旦在左葉上造成并治療6個(gè)部位，就將左葉放回它在腹膜腔內(nèi)的原始位置并且將中葉提起并從腹中取出放在濕紗布上。在肝臟中葉的5個(gè)部位進(jìn)行同樣的程序。一旦所有活檢部位的所有外科手術(shù)程序完成并且實(shí)現(xiàn)滿意的止血，就將500ml無菌鹽水沖洗肝臟表面進(jìn)入腹膜腔。將剖腹術(shù)的腹膜和內(nèi)部肌肉層用半圓非致外傷針上的2/OVicryl縫線縫合。將剖腹術(shù)的外部肌肉和皮膚切口用半圓切割針上的2/OProlene縫線縫合?？p合的剖腹術(shù)部位用Cicatrin粉末治療并且用Opsite全面噴涂。將受試者從麻醉劑中恢復(fù)，除管并且放回動物房舍。監(jiān)測受試者14天的任何不利的臨床征象。結(jié)束將受試者預(yù)先用藥治療并且麻醉。在髂窩齊平處開始中線剖腹術(shù)切割并且就近延伸以露出肝臟表面和手術(shù)部位。記錄肉眼可見的觀察結(jié)果。將所述肝臟的左葉和中葉完全除去。結(jié)果臨床在術(shù)后監(jiān)測期間沒有注意到不利的臨床征象，在此期間所有生理機(jī)能表現(xiàn)正常。肉眼檢查在剖腹術(shù)結(jié)束時(shí)，腹膜縫合線內(nèi)面(internal aspect)與下方的腸、網(wǎng)膜或脾臟之間沒有粘連。然而，從所述肝葉的葉頂?shù)酵瑐?cè)腹膜存在粘連，這種粘連延展到所述手術(shù)程序期間已經(jīng)操作的整個(gè)肝臟表面上。中葉和左外葉沿中葉覆蓋左外葉的接合處粘連在一起。 這些粘連的大部分(除了中葉葉頂?shù)牟课煌?全部容易通過輕柔的手指按壓來解除。有兩個(gè)部位似乎與所治療的活檢部位一致，它們更難以分離，這些區(qū)域之一粘連相當(dāng)嚴(yán)重以致在分離期間撕裂肝臟。與所治療的活檢部位一致的其他部位主觀上比肝實(shí)質(zhì)區(qū)域的周圍更容易分離。還有一塊似乎是治療材料，其在粘連分離期間從它的粘著物除去。所有傷口部位呈現(xiàn)良好的閉合并且特征是肝葉實(shí)質(zhì)表面中的小凹坑。所述活檢缺口邊緣似乎沒有明顯的發(fā)炎并且不存在肝臟表面上存在治療材料的肉眼可見的跡象。在三個(gè)部位上都有不透明膜狀材料的區(qū)域，它們似乎呈纖維狀并且粘著于活檢缺口。在隔膜的內(nèi)表面上有兩個(gè)區(qū)域， 它們顯示似乎是粘著于所述隔膜并且由不透明膜狀纖維組織圍繞的一定量的治療材料。已驚訝地發(fā)現(xiàn)，Tisseel與本發(fā)明粉末之間的粘連存在差異。在所有Tisseel治療的部位中，在填充材料與上方的隔膜或肝葉之間存在強(qiáng)力的粘連。一個(gè)部位處如此的強(qiáng)力以致分離引起傷口部位損失一些填充材料并且再次出血。比較而言，用本發(fā)明粉末治療的所有部位中除一個(gè)以外，雖然在靠近治療部位的未手術(shù)的肝臟表面與上方的隔膜之間存在粘連，但是治療部位本身與上方的隔膜之間全部沒有粘連，即便在一個(gè)病例中顯示出了增強(qiáng)的發(fā)炎反應(yīng)。
實(shí)施例2材料和方法由于公開的數(shù)據(jù)和自有的經(jīng)驗(yàn)，將兔用于本研究。將來自實(shí)施例1的本發(fā)明粉末和kprafilm(不包括Genzyme，一種市售的抗粘連產(chǎn)品)與用作對照的未治療的組織相比較。測試的所有材料根據(jù)制造商的操作指南來貯存和應(yīng)用。外科手術(shù)程序外科手術(shù)是由穿戴帽子、面罩和無菌手套的外科醫(yī)生，使用無菌技術(shù)來進(jìn)行。首先將器具通過高壓滅菌法來滅菌，而隨后各動物手術(shù)之間用在乙醇中的氯己定 (chlorhexidine)來清洗。 進(jìn)行腹部全厚度中線切割并且用組織鉗收起傷口邊緣。 定位到一側(cè)的子宮角并且從腹腔提起以便易于接近。 將測量為^mmX3mm的長方形模板放置在所述子宮角上，并且將表面用特制的鋸齒狀金屬刮刀刮十次(各方向5次)以造成損傷。 然后將測量為24mmX3mm尺寸的模板放置在同側(cè)腹膜壁上并且如上所述造成損傷。 在未治療的對照部位情況下，使兩個(gè)傷口接近并且用兩個(gè)5/Oprolene縫線固定，在損傷區(qū)域每端一個(gè)。在所治療的部位情況下，在接近和固定之前將測試物品應(yīng)用到損傷部位之間。 然后，在相對的子宮角上進(jìn)行類似的程序。 完成時(shí)，用間斷2/Ovicryl縫線將腹部肌肉縫合，同時(shí)使用第一連續(xù)表皮下3/0 絲縫線接著間斷2/0絲縫線將皮膚縫合。結(jié)束手術(shù)后14天，使用過量巴比妥鹽對所有受試者實(shí)施安樂死。將兩個(gè)手術(shù)部位連同鄰近的相關(guān)組織從各受試者中切除，并且將這些樣品放入10%中性緩沖甲醛生理鹽水中以硬化。結(jié)果在用本發(fā)明粉末治療的動物中，兩個(gè)損傷表面存在明顯的分離，以使得這些表面彼此獨(dú)立地愈合。S印rafilm處理的樣品也是如此。根據(jù)組織學(xué)結(jié)果(未展示)，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明粉末可以減少或預(yù)防術(shù)后粘連。
權(quán)利要求
1.一種用于減少或預(yù)防受試者在外科手術(shù)期間或之后或在傷口治療期間的組織粘連形成的方法，所述方法包括在所述外科手術(shù)或傷口治療期間對暴露或分離的組織局部施用有效量的包含海藻糖、其異構(gòu)體、鹽或衍生物的干粉組合物。
2.一種包含海藻糖、其異構(gòu)體、鹽或衍生物的呈干粉形式的藥物組合物，其用于治療或預(yù)防在外科手術(shù)期間或之后或在傷口治療期間的組織粘連。
3.如權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的方法或組合物，其中所述干粉組合物進(jìn)一步包含纖維蛋白原和/或凝血酶。
4.如權(quán)利要求3所述的方法或組合物，其中所述干粉組合物含有約0.5% w/w至20% w/w纖維蛋白原和/或約25IU/g至1000IU/g凝血酶。
5.如權(quán)利要求1所述的方法或組合物，其中所述干粉組合物進(jìn)一步包含含有纖維蛋白原的第一微粒和含有凝血酶的第二微粒的混合物。
6.如權(quán)利要求5所述的方法或組合物，其中所述第一微粒含有0.5% w/w至20% w/w 纖維蛋白原。
7.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法或組合物，其中所述干粉組合物包含含水結(jié)晶海藻糖、無水結(jié)晶海藻糖、無水無定形海藻糖、α, α-海藻糖、α, β-海藻糖(新海藻糖)、 β，β-海藻糖(異海藻糖)或其混合物。
8.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法或組合物，其中所述干粉組合物是纖維蛋白密封劑。
9.如權(quán)利要求8所述的方法或組合物，在權(quán)利要求8從屬于權(quán)利要求5時(shí)，所述第一微粒含有0. 5% w/w至20% w/w纖維蛋白原。
10.如權(quán)利要求8所述的方法或組合物，在權(quán)利要求8從屬于權(quán)利要求5時(shí)，所述第二微粒含有25IU/g至1000IU/g凝血酶。
11.如權(quán)利要求8至10中任一項(xiàng)所述的方法或組合物，其包含0.001% w/w至95% w/ w的添加劑材料。
12.如權(quán)利要求11所述的方法或組合物，其中所述添加劑材料包含生物相容的、吸水性材料。
13.如權(quán)利要求11所述的方法或組合物，其中所述添加劑材料包含生物相容的、水溶脹性材料。
14.如權(quán)利要求11所述的方法或組合物，其中所述添加劑材料包含生物相容的、水不溶性材料。
15.如權(quán)利要求11所述的方法或組合物，其中所述添加劑材料包含多糖。
16.如權(quán)利要求8至15中任一項(xiàng)所述的方法或組合物，其中所述添加劑材料具有從約 IOnm至1000 μ m的平均粒徑。
17.如權(quán)利要求16所述的方法或組合物，其中所述平均粒徑是約10μ m至500 μ m。
18.一種用于減少或預(yù)防受試者在外科手術(shù)期間或之后或在傷口治療期間的組織粘連形成的方法，所述方法包括在所述外科手術(shù)或傷口治療期間對暴露或分離的組織局部施用有效量的包含纖維蛋白原和/或凝血酶的干粉組合物。
19.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述干粉組合物含有約0.5% w/w至20% w/w纖維蛋白原和/或約25IU/g至1000IU/g凝血酶。
20.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述干粉組合物包含含有纖維蛋白原的第一微粒和含有凝血酶的第二微粒的混合物。
21.一種包含海藻糖、其異構(gòu)體、鹽或衍生物的干粉組合物在制造用于預(yù)防和/或減輕組織粘連的藥物中的用途。
22.一種包含纖維蛋白原和/或凝血酶的干粉組合物在制造用于預(yù)防和/或減輕組織粘連的藥物中的用途。
23.如權(quán)利要求1至20中任一項(xiàng)所定義的組合物或其組分在制造用于預(yù)防、治療和/ 或減輕組織粘連的藥物中的用途。
24.一種包含纖維蛋白原和/或凝血酶的干粉組合物，其用于在外科手術(shù)期間或之后或在傷口治療期間治療或預(yù)防組織粘連。
全文摘要
本發(fā)明提供適用于在外科手術(shù)期間或之后或在傷口治療期間治療或預(yù)防組織粘連的干粉組合物。所述干粉組合物可以含有海藻糖。所述干粉組合物可以是含有纖維蛋白原和/或凝血酶的纖維蛋白密封劑組合物。
文檔編號A61K38/36GK102448442SQ201080022683
公開日2012年5月9日 申請日期2010年5月28日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月28日
發(fā)明者J·考夫曼 申請人:普羅菲布瑞克斯公司