專利名稱：加載于無機鹽載體的脂溶性光敏劑的制備方法及其在制備光動力療法藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于具有光動力活性的光敏劑技術(shù)領(lǐng)域，涉及一新型的加載于無機鹽載體 或表面修飾的無機鹽載體的脂溶性光敏劑的制備方法，以及采用該方法制備的脂溶性光敏 劑在制備光動力療法藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
光動力治療法(Photodynamic Therapy,簡稱PDT)也稱光輻射療法 (Photoradiation Therapy, PRT)或光化學療法(Photochemotherapy，PCT)。PDT 是基于光 動力反應(yīng)的一種新型醫(yī)療技術(shù)，自20世紀70年代進入臨床研究以來，PDT已成為惡性腫瘤、 淺表微血管疾病、皮膚病及眼病的有效治療方法。目前已取得了令人矚目的成就，PDT不僅 對體表惡性腫瘤有治療作用，對體腔內(nèi)臟器官腫瘤也可通過光纖內(nèi)窺鏡進行治療。目前臨 床可用于皮膚癌、肺癌、胃癌、食管癌、膀胱癌等。1993年加拿大衛(wèi)生部門首先批準將血卟啉 應(yīng)用于膀胱癌和食管癌的光動力治療，到目前為止，光動力療法在荷蘭、法國、德國、日本和 美國等國相繼獲得批準，還有11個歐洲國家正在尋求獲得批準。PDT主要依據(jù)周身給藥后 光敏劑在腫瘤組織處的富集效應(yīng)并使用適當波長的光激發(fā)富集的光敏劑進而產(chǎn)生活性氧 物質(zhì)(Reactive Oxygen Species，ROS)，如單線態(tài)氧(1O2)、超氧陰離子自由基(02_)及羥基 自由基(0H_)等。這些活性氧可以損傷各種細胞器，造成細胞不可逆的損傷。因此PDT是 一種高效且低副作用的極具潛力的治療手段。然而，多數(shù)光敏劑都為疏水性物質(zhì)，在生理條件下溶解性差，在血液傳輸過程中容 易聚集形成團塊堵塞毛細血管，進而影響到藥物的有效傳輸。因而阻礙其制作成為胃腸道 外注射藥物制劑。因此，開展脂溶性臨床前期的應(yīng)用基礎(chǔ)研究，解決其在血液中的有效傳輸 等問題，成為推動光動力療法臨床應(yīng)用進程的關(guān)鍵。目前研究者主要通過如下兩個途徑來 克服光敏劑水溶性差的缺陷(1)結(jié)構(gòu)修飾合成出水溶性的光敏劑衍生物。例如溴代、磺化、糖苷修飾、環(huán)糊精 修飾、氨基酸修飾，以及金屬配合等方法來增加光敏劑的水溶性。然而衍生物制備工藝復 雜、分離純化困難且產(chǎn)率難達理想。并且研究結(jié)果表明這些衍生物的水溶性雖然得到明顯 改善，但是這類衍生物的活性氧量子產(chǎn)率往往較母體均有一定程度降低，而且體外細胞攝 取衍生物的效率也比較低，這些原因?qū)е鹿饷魟┑墓鈩恿钚允艿斤@著的抑制，這表明通 過化學修飾的途徑往往不能達到在低成本運作的條件下，不降低光敏劑光動力活性的基礎(chǔ) 上，促進其在血液中有效傳輸?shù)哪康摹?2)構(gòu)建光敏劑水溶性的藥物載體。目前使用的載體包括兩種可釋放光敏劑的 載體和不可釋放光敏劑的載體?？舍尫殴饷魟┹d體主要包括脂質(zhì)體、油狀分散體和可生物 降解的高分子聚合物(聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸烷烴酯、聚氰基丙烯酸烷烴酯)。利用 上述的載體來包裹光敏劑，雖然可增強光敏劑的水溶性并且使得腫瘤細胞吸收的藥物效果 比游離的藥物好，卻仍然存在缺陷，例如脂質(zhì)體藥物負載量少，在包裹狀態(tài)下藥物自聚集增多且容易因調(diào)理作用被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)捕獲(J. Photochem. Photobio. B =Biology. 2002， 66,89-106 ;J. Photochem. Photobio. B =Biology. 2001,60,50-60 J. Pharm. Sci. 1995,84, 166-173)；而乳化劑往往又會在體內(nèi)引起急性超敏反應(yīng)(Br. Med. J. 1980，280，1353 ；Ann. Pharmacother. 1997，31，1402-1404)。不可釋放光敏劑主要為陶瓷載體(如二氧化硅納米 粒)等，這些載體能夠有效包裹光敏劑繼而增強其水溶性，研究表明該類載體還可有效增 強光敏劑的光敏活性。而且納米二氧化硅堅固而穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)能夠防止光敏劑的釋放，這就 會大大降低藥物傳遞過程中光敏劑釋放造成的副作用，而光敏劑激發(fā)后產(chǎn)生的活性氧卻可 以自如穿越載體表面的微孔從而發(fā)揮光敏作用。然而雖然二氧化硅生物相容性較好但其畢 竟為外源物質(zhì)且光療后其在體內(nèi)的降解排出周期也會因其穩(wěn)定的性質(zhì)而延長。因此，探索 研發(fā)新型光敏劑載體成為該領(lǐng)域的研究熱點。無機鹽載體(包括磷酸鈣、磷酸鎂、磷酸錳、磷酸鐵、碳酸鈣、碳酸鎂、碳酸錳、碳 酸鐵等)是一類新型載體材料，該類載體材料制備簡單、成本低廉、功能性強、穩(wěn)定性高 且生物相容性極好。以納米磷酸鈣為例，磷酸鈣本身即為動物體骨骼和牙齒的重要組成 部分。較大濃度的磷酸鈣(l_5mM)對所有的脊椎動物幾乎無毒且能被有效的吸收(CRC Press :Boca Raton, FL,1992,406 ；Kidney Stones :Medical and Surgical Management ； Lippincott-RavenPublishers !Philadelphia,1996,1109 ；Culture ofAnimal Cells A Manual of BasicTechnique. 3rd ed. , ffiley-Liss, Inc. :New York,1994,486)。 而 且磷酸鈣納米?？梢员欢喾N細胞有效吸收，如黑素瘤細胞和乳腺癌細胞(Nano Lett., 2008,8,4116-4121).適當?shù)谋砻嫘揎椇?，磷酸鈣納米粒體又可以靶向特定的腫瘤細胞 (Biomaterials 2005，26，2157-2163)。無機鹽載體可以通過離子通道介導的內(nèi)吞作用有效 的進入細胞，進入細胞后依賴Ca、Mg、Mn及Ba等離子對DNA的高度親和性可使載體與靶細 胞DNA結(jié)合進而增強其光敏活性。而Fe、Cu、Zn及Ba等元素的存在又可以通過這些重原 子的高電荷引起或增強光敏劑的自旋-軌道耦合作用，從而增大了 Stl到T1的吸收躍遷和S1 到1\的系間躥躍的幾率進而進一步增強光敏劑的光敏活性。藥劑學研究表明，表面活性劑 如AOT能夠有效的增加細胞核對藥物的吸收從而增強藥效，因此無機鹽載體表面被表面活 性劑修飾后，其吸收及活性都將有一定程度的提高。但是，無機鹽載體材料在動力療法領(lǐng)域 的應(yīng)用還沒有得到有效開發(fā)，因此，該類載體在光動力療法領(lǐng)域具有極大的潛力。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服脂溶性光敏劑由于水溶性差而不便于制成藥劑的缺點，同時依據(jù)光動力療法臨床治療過程中光敏藥物增敏原則，將無機鹽納米粒引入到光敏劑的應(yīng) 用研究中，制備出具有臨床應(yīng)用前景的負載脂溶性光敏劑的水溶性無機鹽載體，并將該成 果應(yīng)用于光動力療法領(lǐng)域，即，本申請將提供一種脂溶性光敏劑的水溶性無機鹽載體及表 面修飾的無機鹽載體的制備方法及其在制備光動力療法靜脈注射劑中的應(yīng)用。該載體可以 達到使脂溶性光敏劑在血液中有效傳輸和增強其生理相容性的目的。本發(fā)明對推動脂溶性 光敏劑的實用化進程具有理論和實用雙重意義。在本發(fā)明的實施例中，所用的光敏劑為竹紅菌甲素(HA)。HA為一種天然的光敏 齊U，已被用于臨床治療皮膚病、眼病及婦科疾病等，研究表明HA還具有一定的抗腫瘤和抗 病毒活性。本發(fā)明通過以下的實施例進行描述是為了闡明本發(fā)明，而不是以任何方式限制本發(fā)明。本發(fā)明的水溶性無機鹽載體及表面修飾的無機鹽載體同樣適用于其他的脂溶性光 敏劑。本發(fā)明的技術(shù)方案是一種加載于無機鹽載體或表面修飾的無機鹽載體的脂溶性 光敏劑的制備方法，其特征在于，步驟如下
在表面活性劑存在或不存在情況下，先后加入蒸餾水、脂溶性光敏劑的DMSO溶 液、氯化物水溶液(如氯化鎂、氯化錳、氯化鋅、氯化鐵、氯化鋰、氯化鋇、氯化銅等)、磷酸鹽 水溶液(如磷酸二氫鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀等)后，磁力攪拌，反應(yīng)結(jié)束后得到粒徑小 于IOOnm的脂溶性光敏劑的磷酸鈣納米粒；其中，所述氯化物水溶液與磷酸鹽水溶液的摩 爾比為1 10 10 1。本申請推薦所述氯元素與磷元素優(yōu)化的摩爾比為1.67 1。以上所述粒徑小于IOOnm的脂溶性光敏劑的磷酸鈣納米粒，是一種適合靜脈注射 的水溶性無機鹽納米粒。本發(fā)明的以上方案可以細分為以下的三種不同步驟(1)、單一體系條件制備水溶性竹紅菌素磷酸鈣納米粒；(2)、反相微乳液體系制備水溶性竹紅菌素磷酸鈣納米粒；(3)、正相微乳液體系制備復合AOT修飾的包裹竹紅菌甲素的磷酸鈣納米粒。以上所述的三種方法，是在不同反應(yīng)體系中獨立完成的，S卩，本發(fā)明的方法可以表 述為在不同體系中，在表面活性劑存在或不存在情況下，通過控制無機鹽沉淀速度對 脂溶性光敏劑進行包封，制備出適合靜脈注射的粒徑小于IOOnm的包裹脂溶性光敏劑的水 溶性無機鹽納米粒。更具體和更優(yōu)化地說，本發(fā)明的以上三種不同步驟的方案分別是1、單一體系條件制備水溶性竹紅菌素磷酸鈣納米粒，反應(yīng)體系及條件如下實驗體系中依次加入二次蒸餾水20mL，一定量HA的DMSO溶液(15mM)、氯化鈣溶 液、磷酸氫二鈉溶液后，磁力攪拌器20小時，反應(yīng)結(jié)束后透析除去體系中的小分子物質(zhì)得 水溶性竹紅菌素磷酸鈣納米粒。2、反相微乳液體系制備水溶性竹紅菌素磷酸鈣納米粒，反應(yīng)體系及條件如下稱取2.223g AOT溶于50ml環(huán)己烷中，混合均勻后取25ml，在其中加入50 μ 1氯化 鈣溶液、400 μ 1蒸餾水和一定量HA的DMSO溶液(15mM)，攪拌72小時后得到液體A。另取25ml AOT/環(huán)己烷混合溶液，在其中加入50 μ 1磷酸氫二鈉溶液、350 μ 1蒸餾 水和一定量HA的DMSO溶液(15mM)，攪拌48小時后得到液體B。液體A和液體B澄清透明后，將液體B以每小時5ml的速度滴到A溶液中并不斷 的攪拌6小時后以16000rpm的速度離心0. 5h，得到的顆粒用乙醇洗滌3次，然后加入IOml 蒸餾水溶解后超聲2小時，超聲完靜置10小時即得到包裹竹紅菌甲素的磷酸鈣納米粒。3、正相微乳液體系制備復合AOT修飾的包裹竹紅菌甲素的磷酸鈣納米粒，反應(yīng)體 系及條件如下體系中依次加入二次蒸餾水20mL、正丁醇0. 8mL、一定量HA的DMSO溶液(15mM)、 0. 44gA0T、氯化鈣溶液后，磁力攪拌器2小時至透明液體A。體系中依次加入二次蒸餾水20mL、正丁醇0. 8mL、一定量HA的DMSO溶液(15mM)、0. 44gA0T、磷酸氫二鈉溶液后，磁力攪拌器2小時至透明液體B。將液體B以每小時5ml的速度滴到A溶液中并不斷的攪拌36小時，使用12_14kD 透析袋透析72h后以2000rpm的速度離心lOmin，得到的顆粒用乙醇洗滌3次，然后加入蒸 餾水溶解后超聲2小時即得到包裹表面AOT修飾的包裹竹紅菌甲素的磷酸鈣納米粒。
本發(fā)明中所涉及的脂溶性光敏劑包括竹紅菌素(包括竹紅菌甲素、竹紅菌乙素以 及兩種母體的衍生物)、痂囊腔菌素(包括痂囊腔菌素A、痂囊腔菌素B、痂囊腔菌素C以及 三種母體的衍生物)、2_脫乙烯基-2-(l-己基氧乙基)焦脫鎂葉綠甲酯一酸(HPPH)、嚇啉 類光敏劑、酞菁類光敏劑等。本發(fā)明中所涉及的無機鹽包括氯化物、硫酸鹽、硝酸鹽以及磷酸二氫鹽、磷酸一氫 鹽、碳酸鹽及碳酸氫鹽等。本發(fā)明中所涉及的表面活性劑包括吐溫系列(Tween)、司盤系列(Span)、曲拉通 系列(Triton)、磺基丁二酸鈉二辛酯(AOT)、十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)等。完成本發(fā)明第二項發(fā)明任務(wù)的方案是上述加載于無機鹽載體或表面修飾的無機 鹽載體的脂溶性光敏劑在制備光動力療法藥物中的應(yīng)用。同樣，該發(fā)明在光動力療法領(lǐng)域中的應(yīng)用所涉及的脂溶性光敏劑包括竹紅菌素 (包括竹紅菌甲素、竹紅菌乙素以及兩種母體的衍生物，如硫代、鹵代、氨基、糖基衍生物 等)、痂囊腔菌素(包括痂囊腔菌素A、痂囊腔菌素B、痂囊腔菌素C以及三種母體的衍生物， 如硫代、鹵代、氨基、糖基衍生物等)、2_脫乙烯基-2-(l-己基氧乙基)焦脫鎂葉綠甲酯一 酸(HPPH)、嚇啉類光敏劑、酞菁類光敏劑等。本發(fā)明所制得的水溶性竹紅菌素磷酸鈣納米粒具有如下的優(yōu)點1.制備方法簡單、易操作、穩(wěn)定性高且成本低廉，同時其納米粒的直徑約為70nm， 有利于該發(fā)明的制備和保存；2.與單獨存在的脂溶性光敏劑相比，該納米粒不但水溶性高和分散性好，因此可 以促進竹脂溶性光敏劑在血液中的有效傳輸，同時消除其單獨使用時產(chǎn)生的毒副作用；3.該納米粒光敏產(chǎn)生單重態(tài)氧(1O2)活性氧的能力也得到不同程度的增強。離體 癌細胞實驗結(jié)果表明，該類納米粒子的暗毒性低，光毒性高。


圖1為表面活性劑修飾的包裹竹紅菌甲素的磷酸鈣納米粒(HA-CaP-AOT)的透射 電鏡圖；圖2為表面活性劑修飾的包裹竹紅菌甲素(HA)的磷酸鈣納米粒(HA-CaP-AOT)及 竹紅菌甲素(DMF助溶)紫外光譜比較圖，其中a為HA-CaP-AOT ；b為HA的DMF/水溶液；圖3為表面活性劑修飾的包裹竹紅菌甲素(HA)的磷酸鈣納米粒(HA-CaP-AOT)及 竹紅菌甲素(DMF助溶)熒光發(fā)射光譜比較圖，其中a為HA-CaP-AOT ；b為HA的DMF/水溶 液；圖4為表面活性劑修飾的磷酸鈣納米粒包裹竹紅菌甲素前后單線態(tài)氧產(chǎn)生能力 比較圖；其中a為HA-CaP-AOT ；b為HA的DMF/水溶液；(插圖HA-CaP_A0T光漂白ADPA效 果圖)圖5表面活性劑修飾的磷酸鈣納米粒包裹竹紅菌甲素前后藥物劑量依賴的光敏殺傷腫瘤細胞能力比較。圖6表面活性劑修飾的磷酸鈣納米粒包裹竹紅菌甲素前后光劑量依賴的光敏殺 傷腫瘤細胞能力比較。
具體實施例方式實施例1 單一體系條件制備水溶性竹紅菌素磷酸鈣納米粒，反應(yīng)體系及條件如下實驗體系中依次加入二次蒸餾水20mL，一定量HA的DMSO溶液(15mM)、氯化鈣溶 液、磷酸氫二鈉溶液后，磁力攪拌器20小時，反應(yīng)結(jié)束后透析除去體系中的小分子物質(zhì)得 水溶性竹紅菌素磷酸鈣納米粒。實施例2反相微乳液體系制備水溶性竹紅菌素磷酸鈣納米粒，反應(yīng)體系及條件如下稱取2.223g AOT溶于50ml環(huán)己烷中，混合均勻后取25ml，在其中加入50μ 1氯化 鈣溶液、400 μ 1蒸餾水和一定量HA的DMSO溶液(15mM)，攪拌72小時后得到液體A。另取25ml AOT/環(huán)己烷混合溶液，在其中加入50 μ 1磷酸氫二鈉溶液、350 μ 1蒸餾 水和一定量HA的DMSO溶液(15mM)，攪拌48小時后得到液體B。液體A和液體B澄清透明后，將液體B以每小時5ml的速度滴到A溶液中并不斷 的攪拌6小時后以16000rpm的速度離心0. 5h，得到的顆粒用乙醇洗滌3次，然后加入IOml 蒸餾水溶解后超聲2小時，超聲完靜置10小時即得到包裹竹紅菌甲素的磷酸鈣納米粒。實施例3正相微乳液體系制備復合AOT修飾的包裹竹紅菌甲素的磷酸鈣納米粒，反應(yīng)體系 及條件如下體系中依次加入二次蒸餾水20mL、正丁醇0. 8mL、一定量HA的DMSO溶液(15mM)、 0. 44g Α0Τ、氯化鈣溶液后，磁力攪拌器2小時至透明液體A。體系中依次加入二次蒸餾水20mL、正丁醇0. 8mL、一定量HA的DMSO溶液(15mM)、 0. 44g Α0Τ、磷酸氫二鈉溶液后，磁力攪拌器2小時至透明液體B。將液體B以每小時5ml的速度滴到A溶液中并不斷的攪拌36小時，使用12_14kD 透析袋透析72h后以2000rpm的速度離心lOmin，得到的顆粒用乙醇3次，然后加入蒸餾水 溶解后超聲2小時即得到包裹表面AOT修飾的包裹竹紅菌甲素的磷酸鈣納米粒。竹紅菌素無機鹽納米粒表征本發(fā)明實例中納米粒的形貌以透射電子顯微鏡觀測。光譜性質(zhì)以紫外光譜、熒光 光譜表征。單線態(tài)氧產(chǎn)生能力以光漂白9，10-二苯基恩丙酸鈉(ADPA)法使用紫外光譜儀 檢測。納米粒的光敏活性使用酶標儀通過MTT法定量比較。(1)表面AOT修飾的包裹竹紅菌甲素的磷酸鈣納米粒的電鏡觀察透射電鏡觀察納米粒大小及形貌，透射電鏡照片顯示表面AOT修飾的包裹竹紅菌 甲素的磷酸鈣納米粒的粒徑為70nm，為中心磷酸鈣納米粒及表面AOT兩部分組成。粒徑分 布較均勻且單分散性良好。(2)光譜測定結(jié)果比較表面AOT修飾的包裹竹紅菌甲素的磷酸鈣納米粒與等濃度單獨存在的竹紅菌甲素在水溶液的紫外-可見光譜可以發(fā)現(xiàn)，包裹前后的HA在350nm-800nm范圍內(nèi)均有三個峰，且包裹后三個峰的峰位及峰型幾乎沒有不變化，說明包裹本身不會影響到竹紅菌素 的發(fā)色團。熒光發(fā)射光譜則顯示包裹前后HA的熒光峰位相同，均位于600nm處，而包裹后 的熒光強度明顯比HA大，這是因為納米載體內(nèi)部是疏水環(huán)境，能夠有效避免水分子與HA分 子的接觸，從而降低水分子對HA分子熒光的猝滅，HA中的HA處于水環(huán)境，可以充分與水分 子接觸，使其熒光被顯著猝滅。這也進一步證明HA被有效的包裹于納米磷酸鈣的內(nèi)部。(3)單線態(tài)氧產(chǎn)生能力比較表面活性劑修飾的包裹竹紅菌甲素的磷酸鈣納米粒(HA-CaP-AOT)及竹紅菌甲素 (DMF助溶)均可有效的光漂白ADPA，這表明了單線態(tài)氧的產(chǎn)生。但是與HA相比包裹后其 光漂白ADPA的速度更快。若設(shè)HA在水溶液中的單線態(tài)氧量子產(chǎn)率是1，則表面活性劑修飾 的包裹竹紅菌甲素的磷酸鈣納米粒的單線態(tài)氧量子產(chǎn)率為1. 612。(4)光敏殺傷腫瘤細胞能力比較MTT實驗結(jié)果顯示包裹前后的HA在該試驗條件下具有藥物劑量及光劑量依賴的 光敏殺傷腫瘤細胞的能力，且包裹后的效果較包裹前有極大程度的提高。者主要歸功于包 裹后增強的單線態(tài)氧產(chǎn)生能力以及AOT介導的更強的細胞核吸收能力。實施例4，與實施例1基本相同，但所述的竹紅菌甲素改用竹紅菌乙素、痂囊腔菌 素、2-脫乙烯基-2-α-己基氧乙基)焦脫鎂葉綠甲酯一酸、嚇啉類光敏劑、酞菁類光敏劑中 的一種或幾種混合。實施例5，與實施例1基本相同，但所述的氯化鈣水溶液改用其他氯化物水溶液 (如氯化鎂、氯化錳、氯化鋅、氯化鐵、氯化鋰、氯化鋇、氯化銅等)。所述氯化物水溶液與磷 酸鹽水溶液的摩爾比為1 10。實施例6，與實施例1基本相同，但所述的磷酸氫二鈉水溶液改用其他磷酸鹽水溶 液(如磷酸二氫鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀等)。所述氯化物水溶液與磷酸鹽水溶液的摩 爾比為10 1。實施例7，與實施例2基本相同，但所述的竹紅菌甲素改用竹紅菌乙素、痂囊腔菌 素、2-脫乙烯基-2-α-己基氧乙基)焦脫鎂葉綠甲酯一酸、嚇啉類光敏劑、酞菁類光敏劑中 的一種或幾種混合。所述氯化物水溶液與磷酸鹽水溶液的摩爾比為1 1。實施例8，與實施例2基本相同，但所述的氯化鈣水溶液改用其他氯化物水溶液 (如氯化鎂、氯化錳、氯化鋅、氯化鐵、氯化鋰、氯化鋇、氯化銅等)。所述氯化物水溶液與磷 酸鹽水溶液的摩爾比為1.67 1。實施例9，與實施例2基本相同，但所述的磷酸氫二鈉水溶液改用其他磷酸鹽水溶 液(如磷酸二氫鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀等)。實施例10，與實施例2基本相同，但所述的表面活性劑改用吐溫系列中的一種(吐 溫-20、吐溫-40、吐溫-60、吐溫-80等)。實施例11，與實施例2基本相同，但所述的表面活性劑改用司盤系列中的一種(司 盤-60、司盤-65、司盤-80、司盤-85等)。實施例12，與實施例2基本相同，但所述的表面活性劑改用曲拉通系列中的一種 (曲拉通Χ-100、曲拉通Χ-102、曲拉通Χ-165等)。實施例13，與實施例3基本相同，但所述的竹紅菌甲素改用竹紅菌乙素、痂囊腔菌素、2-脫乙烯基-2-α-己基氧乙基)焦脫鎂葉綠甲酯一酸、嚇啉類光敏劑、酞菁類光敏劑中 的一種或幾種混合。實施例14，與實施例3基本相同，但所述的氯化鈣水溶液改用其他氯化物水溶液 (如氯化鎂、氯化錳、氯化鋅、氯化鐵、氯化鋰、氯化鋇、氯化銅等)。實施例15，與實施例3基本相同，但所述的磷酸氫二鈉水溶液改用其他磷酸鹽水 溶液(如磷酸二氫鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀等)。實施例16，與實施例3基本相同，但所述的表面活性劑改用吐溫系列中的一種(吐 溫-20、吐溫-40、吐溫-60、吐溫-80等)。
實施例17，與實施例3基本相同，但所述的表面活性劑改用司盤系列中的一種(司 盤-60、司盤-65、司盤-80、司盤-85等)。實施例18，與實施例3基本相同，但所述的表面活性劑改用曲拉通系列中的一種 (曲拉通Χ-100、曲拉通Χ-102、曲拉通Χ-165等)。實施例本發(fā)明中的竹紅菌甲素或竹紅菌乙素，可以采用該兩種母體的硫代衍生 物、鹵代衍生物、氨基衍生物或糖基衍生物，均與以上實施例基本相同。本發(fā)明中的痂囊腔 菌素Α、痂囊腔菌素B或痂囊腔菌素C，可以采用該三種母體的硫代衍生物、鹵代衍生物、氨 基衍生物或糖基衍生物，均與以上實施例基本相同。
權(quán)利要求
一種加載于無機鹽載體或表面修飾的無機鹽載體的脂溶性光敏劑的制備方法，其特征在于，步驟如下在表面活性劑存在或不存在情況下，先后加入蒸餾水、脂溶性光敏劑的DMSO溶液、氯化物水溶液與磷酸鹽水溶液后，磁力攪拌，反應(yīng)結(jié)束后得到粒徑小于100nm的脂溶性光敏劑的磷酸鈣納米粒；其中，所述氯化物水溶液與磷酸鹽水溶液的摩爾比為1∶10～10∶1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的加載于無機鹽載體或表面修飾的無機鹽載體的脂溶性光敏 劑的制備方法，其特征在于，所述氯元素與磷元素優(yōu)化的摩爾比為1.67 1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的加載于無機鹽載體或表面修飾的無機鹽載體的脂溶性光敏 劑的制備方法，其特征在于，所述的氯化物水溶液選自以下溶液氯化鎂、氯化錳、氯化鋅、 氯化鐵、氯化鋰、氯化鋇或氯化銅；所述的磷酸鹽水溶液選自以下溶液磷酸二氫鈉、磷酸 氫二鉀或磷酸二氫鉀。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的加載于無機鹽載體或表面修飾的無機鹽載體的脂溶性光 敏劑的制備方法，其特征在于，所述的操作步驟包括以下的三種不同步驟(1)、單一體系條件制備水溶性竹紅菌素磷酸鈣納米粒；(2)、反相微乳液體系制備水溶性竹紅菌素磷酸鈣納米粒；(3)、正相微乳液體系制備復合A0T修飾的包裹竹紅菌甲素的磷酸鈣納米粒；以上所述的三種方法，是在不同反應(yīng)體系中，在表面活性劑存在或不存在情況下，通過 控制無機鹽沉淀速度對脂溶性光敏劑進行包封，制備出適合靜脈注射的粒徑小于lOOnm的 包裹脂溶性光敏劑的水溶性無機鹽納米粒。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的加載于無機鹽載體或表面修飾的無機鹽載體的脂溶性光敏 劑的制備方法，其特征在于，所述的三種不同步驟的具體操作分別是(1)、單一體系條件制備水溶性竹紅菌素磷酸鈣納米粒，反應(yīng)體系及條件如下實驗體系中依次加入二次蒸餾水20mL、15mM的HA的DMS0溶液、氯化鈣溶液、磷酸氫二 鈉溶液后，磁力攪拌器20小時，反應(yīng)結(jié)束后透析除去體系中的小分子物質(zhì)得水溶性竹紅菌 素磷酸鈣納米粒；(2)、反相微乳液體系制備水溶性竹紅菌素磷酸鈣納米粒，反應(yīng)體系及條件如下稱取2. 223g A0T溶于50ml環(huán)己烷中，混合均勻后取25ml，在其中加入50 u 1氯化鈣溶液、400 u 1蒸餾水和15mM的HA的DMS0溶液，攪拌72小時后得到液體A ；另取25ml A0T/環(huán)己烷混合溶液，在其中加入50 ill磷酸氫二鈉溶液、350 ill蒸餾水和 15mM的HA的DMS0溶液，攪拌48小時后得到液體B ；液體A和液體B澄清透明后，將液體B以每小時5ml的速度滴到A溶液中并不斷的攪 拌6小時后以16000rpm的速度離心0. 5h，得到的顆粒用乙醇洗滌3次，然后加入10ml蒸餾 水溶解后超聲2小時，超聲完靜置10小時即得到包裹竹紅菌甲素的磷酸鈣納米粒；(3)、正相微乳液體系制備復合A0T修飾的包裹竹紅菌甲素的磷酸鈣納米粒，反應(yīng)體系 及條件如下體系中依次加入二次蒸餾水20mL、正丁醇0. 8mL、15mM的HA的DMS0溶液、0. 44g A0T、 氯化鈣溶液后，磁力攪拌器2小時至透明液體A ；體系中依次加入二次蒸餾水20mL、正丁醇0. 8mL、15mM的HA的DMS0溶液、0. 44g A0T、磷酸氫二鈉溶液后，磁力攪拌器2小時至透明液體B ；將液體B以每小時5ml的速度滴到A溶液中并不斷的攪拌36小時，使用12_14kD透析 袋透析72h后以2000rpm的速度離心lOmin，得到的顆粒用乙醇洗滌3次，后加入蒸餾水溶 解后超聲2小時即得到包裹表面AOT修飾的包裹竹紅菌甲素的磷酸鈣納米粒。5.根據(jù)權(quán)利要求1 4之一所述的加載于無機鹽載體或表面修飾的無機鹽載體的脂溶 性光敏劑的制備方法，其特征在于，所述的脂溶性光敏劑包括竹紅菌素、痂囊腔菌素、2-脫 乙烯基-2-(l-己基氧乙基)焦脫鎂葉綠甲酯一酸(HPPH)、P卜啉類光敏劑，或酞菁類光敏劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的加載于無機鹽載體或表面修飾的無機鹽載體的脂溶性光敏 劑的制備方法，其特征在于，所述的竹紅菌素包括竹紅菌甲素、竹紅菌乙素以及兩種母體的 衍生物；所述的痂囊腔菌素包括痂囊腔菌素A、痂囊腔菌素B、痂囊腔菌素C以及三種母體的 衍生物。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的加載于無機鹽載體或表面修飾的無機鹽載體的脂溶性光敏 劑的制備方法，其特征在于，所涉及的無機鹽選自氯化物、硫酸鹽、硝酸鹽以及磷酸二氫 鹽、磷酸一氫鹽、碳酸鹽或碳酸氫鹽；所述的表面活性劑選自吐溫系列、司盤系列、曲拉通系列、磺基丁二酸鈉二辛酯，或 十六烷基三甲基溴化銨。
8.—種權(quán)利要求1所述的制備方法得到的加載于無機鹽載體或表面修飾的無機鹽載 體的脂溶性光敏劑在制備光動力療法藥物中的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的加載于無機鹽載體或表面修飾的無機鹽載體的脂溶性光敏 劑在制備光動力療法藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述的脂溶性光敏劑包括竹紅菌素、痂囊 腔菌素、2-脫乙烯基-2-(l-己基氧乙基)焦脫鎂葉綠甲酯一酸(HPPH)、嚇啉類光敏劑，或 酞菁類光敏劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的加載于無機鹽載體或表面修飾的無機鹽載體的脂溶性光敏 劑在制備光動力療法藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述的竹紅菌素包括竹紅菌甲素、竹紅菌 乙素以及兩種母體的衍生物；所述的痂囊腔菌素包括痂囊腔菌素A、痂囊腔菌素B、痂囊腔 菌素C以及三種母體的衍生物。
全文摘要
加載于無機鹽載體或表面修飾的無機鹽載體的脂溶性光敏劑的制備方法及其在制備光動力療法藥物中的應(yīng)用，制備步驟是在表面活性劑存在或不存在情況下，先后加入蒸餾水、脂溶性光敏劑的DMSO溶液、氯化物水溶液與磷酸鹽水溶液后，磁力攪拌，反應(yīng)結(jié)束后得到粒徑小于100nm的脂溶性光敏劑的磷酸鈣納米粒；其中，所述氯化物水溶液與磷酸鹽水溶液的摩爾比為1∶10～10∶1。本發(fā)明制備方法簡單、易操作、穩(wěn)定性高且成本低廉，制成的納米粒的直徑約為70nm，有利于該發(fā)明的制備和保存；該類納米粒不但水溶性高和分散性好，可促進竹脂溶性光敏劑在血液中的有效傳輸，同時消除其單獨使用時產(chǎn)生的毒副作用；且暗毒性低，光毒性高。
文檔編號A61K41/00GK101850118SQ20101902604
公開日2010年10月6日 申請日期2010年2月4日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月4日
發(fā)明者馮玉英, 周家宏, 周林, 沈健, 魏少華 申請人:南京師范大學