專利名稱：銀杏葉總內(nèi)酯在制備預(yù)防或治療耳聾耳鳴藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥，具體涉及銀杏葉總內(nèi)酯在制備預(yù)防或治療耳聾耳鳴藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
耳聾在臨床上大致分為以外耳和中耳病變引起的傳音性耳聾；以內(nèi)耳和聽神經(jīng) 病變引起的感音神經(jīng)性耳聾；以及外中耳病變和中耳聽神經(jīng)共同病變引起的混合性耳聾。 造成耳聾的原因很多，如遺傳、產(chǎn)傷、感染、藥物應(yīng)用不當(dāng)、免疫性疾病、生理機(jī)能退化、某些 化學(xué)物質(zhì)中毒等都能導(dǎo)致耳聾。感音神經(jīng)性毫(sensorineural deafness, neurosensory deafness)是指耳蟲呂螺 旋器病變不能將音波變?yōu)樯窠?jīng)興奮或神經(jīng)及其中樞途徑發(fā)生障礙不能將神經(jīng)興奮傳入；或 大腦皮質(zhì)中樞病變不能分辯語言。如梅尼埃病、耳藥物中毒、迷路為、噪聲損傷、聽神經(jīng)瘤 等。由于內(nèi)耳耳蝸螺旋器發(fā)生病變引起的聽力障礙稱感音性耳聾(臨床上還將內(nèi)、外淋巴 及基底膜病變引起的內(nèi)耳導(dǎo)音性聾亦概括在感音性耳聾中)，神經(jīng)傳導(dǎo)徑路發(fā)生病變引起 的耳聾稱神經(jīng)性耳聾。老年性耳聾是人體老化過程在聽覺器官中的表現(xiàn)，臨床表現(xiàn)的共同特點(diǎn)是由高頻 向語頻緩慢進(jìn)行的雙側(cè)對(duì)稱性耳聾，伴高調(diào)持續(xù)耳鳴，常為高頻聲。開始時(shí)為間歇性，在夜 深人靜時(shí)出現(xiàn)，以后漸變?yōu)槌掷m(xù)性，白天也可聽見。耳鳴常始于30 40歲，其出現(xiàn)率隨年 齡而漸增，60 70歲時(shí)達(dá)到頂點(diǎn)。通常情況下65 75歲的老年人中，耳聾發(fā)病率可高達(dá) 60%左右。噪聲性耳聾是由于長期遭受噪聲刺激所引起的一種緩慢性、進(jìn)行性的感音神經(jīng)性 耳聾。早期表現(xiàn)為聽覺疲勞，離開噪聲環(huán)境后可以逐漸恢復(fù)，久之則難以恢復(fù)，終致感音神 經(jīng)性聾，主要癥狀為進(jìn)行性聽力減退及耳鳴。早期聽力損失在4，OOOHz處，因此，對(duì)普通說 話聲無明顯影響，僅在聽力計(jì)檢查中發(fā)現(xiàn)，以后聽力損害逐漸向高低頻發(fā)展，終于普遍下 降，此時(shí)感到聽力障礙，嚴(yán)重者可全聾。耳鳴與耳聾可同時(shí)發(fā)生，亦可單獨(dú)發(fā)生，常為高音性 耳鳴，日夜煩擾不寧。目前無真正有效的療法常用耳蝸血管擴(kuò)張藥、ATP、維生素Bl等。銀杏葉提取物主要含有銀杏葉總黃酮和銀杏葉總內(nèi)酯兩大類有效成分，按藥典規(guī) 定總黃酮含量不得低于對(duì)％，總內(nèi)酯含量不得低于6%。銀杏葉提取物具有抑制血小板聚 集、擴(kuò)張腦血管、保護(hù)神經(jīng)等作用，臨床上主要用于腦血管疾病、腦血栓等。另外，據(jù)報(bào)道，銀 杏葉提取物還有其它功能。如常傲霜等研究了銀杏葉提取物對(duì)噪聲致大鼠螺旋神經(jīng)節(jié)損 傷的保護(hù)作用，發(fā)現(xiàn)銀杏葉提取物對(duì)大鼠聽功能有一定的保護(hù)作用，但同時(shí)也發(fā)現(xiàn)該藥對(duì) 耳蝸的保護(hù)作用不完全，有一定局限性(銀杏葉提取物對(duì)噪聲致大鼠螺旋神經(jīng)節(jié)損傷的保 護(hù)作用，聽力學(xué)及言語疾病雜志，2010年18卷第1期)。林海觀察了甲鈷胺與銀杏葉片聯(lián) 合治療神經(jīng)性耳鳴的作用，總有效率為84. 1% (甲鈷胺與銀杏葉聯(lián)合治療神經(jīng)性耳鳴療效 觀察，中醫(yī)誤診學(xué)雜志，2008年第8卷第M期)。但也有報(bào)道銀杏葉片治療耳鳴沒有效果 (健康伴侶雜志)。
銀杏葉總內(nèi)酯是從銀杏葉中提取出來的以銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C、白 果內(nèi)酯四個(gè)化學(xué)成分為主要成分的銀杏葉提取物，另外含有少量黃酮類、多酚類等成分，研 究銀杏葉總內(nèi)酯對(duì)于耳聾耳鳴的作用有較大的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于克服上述不足之處，研究銀杏葉總內(nèi)酯對(duì)于耳聾 耳鳴的作用，設(shè)計(jì)制備防治耳聾耳鳴的藥物。本發(fā)明提供了銀杏葉總內(nèi)酯在制備預(yù)防或治療耳聾耳鳴藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所述銀杏總內(nèi)酯從銀杏葉中提取得到，經(jīng)HPLC檢測內(nèi)酯類成分含量為 50-99 %。主要含有銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C、白果內(nèi)酯等化學(xué)成分。本發(fā)明所述銀杏總內(nèi)酯從銀杏葉中提取，通過銀杏葉經(jīng)醇提、水沉、大孔樹脂柱吸 附、醋酸乙酯萃取等步驟制成，采用HPLC方法檢測，所用制備和檢測方法均為中藥常規(guī)方 法。(本發(fā)明實(shí)施例1提供了制備和檢測方法)本發(fā)明人進(jìn)行了銀杏葉總內(nèi)酯對(duì)大鼠聽力作用實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，銀杏葉總內(nèi)酯對(duì) 大鼠聽力有一定的保護(hù)作用，并且銀杏葉總內(nèi)酯的作用明顯好于銀杏葉提取物，且呈一定 量效關(guān)系。因此，銀杏葉總內(nèi)酯可用于制備預(yù)防或治療耳聾耳鳴藥物。本發(fā)明所述藥物是由銀杏葉總內(nèi)酯作為活性成分與藥用輔料按常規(guī)方法制成的 藥物組合物?？梢灾瞥善瑒?、膠囊劑等口服制劑，也可以制成針劑、凍干粉針等注射制劑，還 可以制成貼劑等。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 (所用原料銀杏葉通過市售得到)步驟1提取濃縮取銀杏葉100kg，90%酒精400kg，浸泡過夜；70°C回流提取3小時(shí)，過濾，殘?jiān)?加入400kg純水，70°C攪拌回流提取2小時(shí)，合并兩次提取液，減壓濃縮至無醇味，真空度 為-0. 085Mpa，溫度為 50-55°C ；步驟2第一次上柱步驟1濃縮液中加入80kg35-40°C的熱水稀釋，然后加入300kg冷水稀釋，靜置12 小時(shí)；取上清液稀釋至密度為1-1. lg/ml，上大孔樹脂柱(DlOl)，先用IOOkg純水沖洗，再用 PH值為7.0的15%乙醇沖洗，然后用60%乙醇洗脫，待色帶下移至出口，流出液顏色變深， 收集流出洗脫液；步驟3第二次上柱步驟2洗脫液進(jìn)行減壓濃縮至含乙醇量37%，再次上大孔樹脂柱(DlOl)，用60% 乙醇繼續(xù)洗脫，收集洗脫液至流出液顏色變淡，乙醇含量為60%時(shí)停止收集，洗脫液進(jìn)行減 壓濃縮，溫度55-55°C，真空度-0. 085Mpa，呈糊狀時(shí)停止?jié)饪s；步驟4乙醇沉降步驟3濃縮液加50kg的95%乙醇稀釋，攪拌均勻，靜置4小時(shí)，過濾，濾液減壓濃 縮至無醇味，溫度55-55°C，真空度-0. 085Mpa ；步驟5萃取
步驟4之濃縮液加IOOkg純水稀釋，以醋酸乙酯萃取3次，每次100kg，合并醋酸乙 酯液，濃縮至稠膏，溫度55-55°C，真空度-0. 085Mpa ；真空干燥(溫度80°C )，得銀杏葉總內(nèi) 酯 0. 17kg ；上述制得的銀杏葉總內(nèi)酯經(jīng)HPLC檢測，總內(nèi)酯含量為65%。檢測方法采用《2010年版藥典》方法，具體色譜條件為色譜柱HypersilODS 柱；流動(dòng)相正丙醇-四氫呋喃-水(1 33 66)；柱溫30°C；流速1. Oml/min ；檢測器蒸發(fā)光散射檢測器；計(jì)算方法采用外標(biāo)法，以銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C、白果內(nèi)酯四個(gè)成分 的含量之和為總內(nèi)酯含量。實(shí)施例2銀杏葉提取物和銀杏葉總內(nèi)酯對(duì)大鼠聽力的保護(hù)作用藥品銀杏葉片(市售，每片含銀杏葉提取物80mg)銀杏葉總內(nèi)酯(自制實(shí)施例1，含量65% )動(dòng)物SD大鼠(第二軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)；銀杏葉片組(每片含銀杏葉提取物80mg)；銀杏葉總內(nèi)酯組(含量65%，大劑量9. 2mg/kg/天；中劑量4. 6mg/kg/天；小劑 量 2. 3mg/kg/ 天)取SD大鼠72只，體重250_280g，隨機(jī)分為六組正常對(duì)照組、噪聲組、銀杏葉片 (每片含銀杏葉提取物80mg)組、銀杏葉總內(nèi)酯(自制實(shí)施例1)大劑量組、銀杏葉總內(nèi)酯中 劑量組、銀杏葉總內(nèi)酯小劑量組，正常組置于常規(guī)環(huán)境中，每日灌胃純水代替藥物，其余五 組每天8小時(shí)置于頻率為4kHz、強(qiáng)度為IOODB SPL噪聲環(huán)境中，噪聲組每日灌胃純水，銀杏 葉片組灌胃銀杏葉(片)(以銀杏葉提取物計(jì)42. 8mg/kg/天)，銀杏葉總內(nèi)酯組灌胃銀杏葉 總內(nèi)酯(含量65%，大劑量9. 2mg/kg/天；中劑量4. 6mg/kg/天；小劑量2. 3mg/kg/天)， 連續(xù)三周。分別于實(shí)驗(yàn)前后測定聽性腦干反應(yīng)(ABR)。結(jié)果見表1。表1大鼠ABR反應(yīng)閾
組別實(shí)驗(yàn)前試驗(yàn)后正常組23. 5824. 33噪聲組22.4989. 74銀杏葉片組24.1760. 76銀杏葉總內(nèi)酯小劑量組22. 9554. 6權(quán)利要求
1.銀杏葉總內(nèi)酯在制備預(yù)防或治療耳聾耳鳴藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述銀杏葉總內(nèi)酯含量為50-99%，包括 銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C和白果內(nèi)酯。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物由銀杏葉總內(nèi)酯作為活性成分 與藥用輔料按常規(guī)方法制成的藥物組合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物組合物為片劑、膠囊劑、針劑、凍 干粉針劑或貼劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種銀杏葉總內(nèi)酯在制備治療耳聾耳鳴藥物中的應(yīng)用。銀杏總內(nèi)酯從銀杏葉中提取，經(jīng)HPLC檢測內(nèi)酯類成分含量為50-99％，主要包括銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C、白果內(nèi)酯四個(gè)化學(xué)成分。本發(fā)明人進(jìn)行了銀杏葉總內(nèi)酯對(duì)大鼠聽力作用實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，銀杏葉總內(nèi)酯對(duì)大鼠聽力有一定的保護(hù)作用，并且銀杏葉總內(nèi)酯的作用明顯好于銀杏葉提取物，且呈一定量效關(guān)系。因此，銀杏葉總內(nèi)酯可用于制備預(yù)防或治療耳聾耳鳴藥物。本發(fā)明所述藥物由銀杏葉總內(nèi)酯作為活性成分與藥用輔料按常規(guī)方法制成的藥物組合物?？梢灾瞥善瑒⒛z囊劑等口服制劑，也可以制成針劑、凍干粉針等注射制劑，還可以制成貼劑等。
文檔編號(hào)A61K127/00GK102078343SQ20101060568
公開日2011年6月1日 申請(qǐng)日期2010年12月21日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月21日
發(fā)明者胡林森 申請(qǐng)人:上海信誼百路達(dá)藥業(yè)有限公司