專利名稱：一種油茶籽多肽及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及利用冷榨油茶籽油生產(chǎn)剩余的冷榨油茶籽 餅，采用蛋白酶水解工藝，制備油茶籽生物活性肽的方法。
背景技術(shù)：
油茶(CamelliaoleiferaAbel)系山茶科山茶屬植物，是一種常綠、長壽、果實含
油率高的我國特有的油料作物，也是與油棕、橄欖、椰子齊名的四大木本食用油源樹種 之一。根據(jù)相關(guān)資料表明，中國是唯一一個將油茶作為食用油料栽培的國家，雖然在日 本和東南亞各國也有油茶，但數(shù)量極少，可以忽略不計。通過農(nóng)業(yè)部油料及制品質(zhì)量監(jiān) 督檢測中心介紹，現(xiàn)今全國油茶林達(dá)到400萬hm2，主要分布在南方的16個省(區(qū))1100 多個縣，占全國木本油料面積的80%以上，年產(chǎn)油茶籽60余萬噸。油茶籽粕中蛋白質(zhì)含 量約為12%-15%，其氨基酸組成為15種，其中8種為人體必需氨基酸。油茶籽粕蛋白 具有很高的經(jīng)濟(jì)價值，可將其作為生產(chǎn)蛋白飲料、沖調(diào)食品、焙烤食品的蛋白質(zhì)強(qiáng)化劑 以及作為醬油等發(fā)酵產(chǎn)品的蛋白原料。因此，以油茶籽粕為原料提取蛋白，進(jìn)行開發(fā)和 利用是非常有意義的。油茶籽蛋白在生物酶法條件下，水解生成多肽及氨基酸等物質(zhì)， 具有很高的營養(yǎng)價值與功能特性，因此該法已成為研究熱點(diǎn)。很多種植物蛋白質(zhì)酶解后 產(chǎn)生的多肽除了具有易被人體消化吸收的特性外，還具有很強(qiáng)的抗氧化、降低膽固醇等 功能特性。開展對油茶籽多肽保健功能活性的研究具有重要的現(xiàn)實意義。肽是由氨基酸通過肽鍵連接而成的化合物，它是機(jī)體組織細(xì)胞的基本組成成 分。最簡單的肽是由兩個氨基酸組成的二肽，其中含有1個肽鍵；含有3個、4個、5個 等氨基酸的肽分別稱為三肽、四肽、五肽等。由2個到10個氨基酸通過肽鍵形成的直鍵 肽稱為寡肽或小肽；由肽鍵結(jié)合起來的多于10個氨基酸的聚合體則稱為多肽?？茖W(xué)家 已在人體中發(fā)現(xiàn)了 100多種生物活性肽，這些肽具有傳遞生理信息，調(diào)節(jié)生理功能的作 用，對于人體的神經(jīng)、消化、生殖、生長、運(yùn)動、代謝、循環(huán)等系統(tǒng)的正常生理活動的 維持非常重要，所有疾病的發(fā)生、發(fā)展、治療、康復(fù)都與多肽有關(guān)系。油茶籽肽是指油茶籽蛋白經(jīng)蛋白酶作用后，再經(jīng)分離、精制等過程得到的蛋白 質(zhì)水解產(chǎn)物。油茶籽肽具有較好的功能特性，如油茶籽肽溶液在高濃度下黏度依然較 低，能在較寬的pH值范圍內(nèi)保持溶解狀態(tài)；具有較高的吸濕性和保濕性；滲透壓比氨基 酸低得多；能抑制蛋白質(zhì)形成凝膠，減少了由于油茶籽蛋白大分子引起的過敏原性，增 加了產(chǎn)品的穩(wěn)定性等。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的是為了提供一種油茶籽多肽。本發(fā)明的另一目的在于提供所述油茶籽多肽的制備方法。本發(fā)明的第一方面，提供了一種油茶籽多肽，其中油茶籽多肽占總氮含量(以 干基計)沖5.0%，肽含量(以干基計)沖0.0%，所得的相對分子質(zhì)量均在4000Da以下，相對分子質(zhì)量SOODa以下的肽段含量勸0%。在一較佳實施例中，油茶籽多肽占總氮含量(以干基計)的三氯乙酸氮溶解指數(shù) (TCA-NSI) >95.0%,水分含量《5.0%，灰分含量(以干基計)《5.0%，粗脂肪含量(以干 基計)《1.0% ；在一較佳實施例中，本方法制備的油茶籽肽為白色或淡黃色粉末，100%通過80 目篩，無肉眼可見外來物質(zhì)；在所有的pH條件下都能溶于水。本方面的另一方面，提供了一種制備該油茶籽多肽的方法，該方法包括如下步 驟(1)將油茶籽餅粕粉碎，并去除里面的油脂；(2)采用堿溶酸沉方法提取分離油茶籽餅粕里的蛋白；(3)采用酶解方法將步驟(2)中的蛋白水解為多肽粗制液；(4)用超濾膜過濾多肽粗液，收集超濾液；未透過超濾膜部分為濃縮液，將濃 縮液回收至反應(yīng)罐中再次水解并再次超濾，收集超濾液；(5)超濾液在陰陽離子交換樹脂洗脫，得油茶籽多肽液。在本方面的較佳實施例中，步驟(5)之后，還包括步驟(6)多肽液經(jīng)濃縮，經(jīng)噴霧干燥或冷凍干燥制成干粉。在本方面的較佳實施例中，所述的油茶籽餅粕為冷榨法制油后的油茶籽餅粕。在本方面的較佳實施例中，所述的步驟(1)的方法為將油茶籽餅粕碎，過 40 120目篩，用95%正己烷溶劑在40 50°C條件下浸提2 3次，每次2 3h，浸 提后晾曬至正己烷試劑完全揮發(fā)，待用。在本方面的較佳實施例中，所述的步驟(2)的方法為(a)將步驟(1)的去除油脂后的油茶籽餅粕按1 5 1 10(W/V)溶解至水 中，加熱至45 55°C，用堿調(diào)節(jié)pH至8.0 10.0，不停攪拌15min，之后再3 000 4 000r/min, 15min,離心取上清液；(b)將步驟a的上清液加熱至70 90°C，用酸調(diào)節(jié)pH至3.0 5.0，不停攪拌 IOmin,之后再3 000 4 000r/min，15min,離心收集沉淀。在本方面的較佳實施例中，步驟(3)所述的方法為(a)將步驟(2)的沉淀按1 10 1 20溶解至水中，加熱至90 100°C，保 持15 30min，然后冷卻至40 50°C，加入堿性蛋白酶Alcalase 70 80AU/Kg蛋白， 用NaOH試劑調(diào)節(jié)并保持pH在7.5 9.0，酶解2 4h，酶解過程中不斷攪拌；(b)待酶解結(jié)束后，迅速加熱至90 95°C，并保持10 20min，之后3 000 5000r/min, 15min,離心取上清液，即為油茶籽多肽粗制液。在本方面的較佳實施例中，步驟(4)所述的方法為將步驟5中的油茶籽多肽粗制液注入儲槽中，調(diào)節(jié)至一個固定的流速，溶液經(jīng) 微濾后通過分子量截留量為3000 5000Da超濾膜，溶液中的小分子物質(zhì)經(jīng)中空纖維膜的 內(nèi)壁滲透出來成為超濾液，收集超濾液；溶液中的蛋白等大分子物質(zhì)得以保留并得到濃 縮，將濃縮液回收至反應(yīng)罐中再次水解。在本方面的較佳實施例中，步驟(5)所述的方法為去離子交換樹脂于水中浸泡處理24小時后裝柱，然后分別用7.5%鹽酸或10%NaOH對其進(jìn)行處理，轉(zhuǎn)化為H+型陽離子交換樹脂和OH-型陰離子交換樹脂，再用水清 洗至微酸性或微堿性待用；將步驟(4)中所得的油茶籽多肽超濾液，以5 10倍柱體積/h的流速通過H+ 型陽離子交換樹脂來脫除陽離子，待流出液pH = 4.0左右時停止加樣，之后將此流出液 以同樣流速通過OH-型陰離子交換樹脂來脫除陰離子，至流出液呈弱酸性時停止加樣。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點(diǎn)和效果(1)直接以冷榨油茶籽餅為原料，提高了原料利用率；(2)油茶籽餅里還含有少量油脂、以95%正己烷溶劑浸提去除油脂之后，可減 少油脂的干擾，提高后續(xù)的蛋白的純度；正己烷作為油脂浸出的溶劑，對油脂浸出非常 有效，它很少浸出非油物質(zhì)且易于從油及粕中脫除。(3)采用超濾法對油茶籽肽進(jìn)行分級處理，保證95%的油茶籽肽分子量在3 000 5000Da以下，并對于分子量3 000 5000Da以上的油茶籽肽進(jìn)行二次酶解，提高 原料的利用率；(4)利用陰陽交換樹脂對油茶籽肽粗品進(jìn)行脫鹽，在脫鹽的同時，也可去除油茶 籽肽中的色素成分，提高了油茶籽多肽的純度；(5)由本發(fā)明制備并精制的油茶籽肽，分子量低、產(chǎn)品穩(wěn)定性好，具有良好的抗 疲勞、降血壓、抗氧化等效果。(6)本發(fā)明方法易于工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實施例方式原料冷榨油茶籽餅，廈門中盛糧油集團(tuán)堿性蛋白酶Alcalase，無錫市雪梅酶制劑科技有限公司陰陽離子交換樹脂長沙市大禹化工有限公司型號001X7(732)陽離子交換 樹脂；201X7(717)陰離子交換樹脂。試劑所用試劑均為市售的分析純試劑。實施例一(1)取油茶籽餅100g，用植物粉碎機(jī)粉碎，過80目篩，將篩下物在95%的正己 烷溶劑中浸提脫脂，水浴加熱溶劑溫度為50°C，浸提2次，每次2h，浸提完成后晾曬至 試劑完全揮發(fā)，待用；(2)將步驟1的油茶籽餅粕溶解在IOOOmL水中，加熱至50°C，用NaOH溶劑調(diào) 節(jié)pH至8.0，不斷攪拌15min，再3 000r/min離心15min，取上清液待用；(3)將步驟2的上清液加熱至70°C，用檸檬酸調(diào)節(jié)pH至5.0，不斷攪拌15min， 3 000r/min離心15min，收集沉淀待用；(4)將步驟3的油茶籽蛋白按1 10加入去離子水，加熱至90°C保持15min， 然后冷卻并保持溶液溫度至45°C，用NaOH試劑調(diào)節(jié)并保持溶液pH為8.0，加入堿性蛋 白酶Alcalase 75AU/Kg蛋白，在此條件下進(jìn)行酶解，酶解時間為2h，在酶解過程中需不 停攪拌；(5)待酶解結(jié)束，迅速加熱至90°C，保持15min，3 000r/min離心15min，取上
清液待用，為油茶籽肽粗制液；
(6)將步驟5中的油茶籽肽粗制液注入儲槽中，調(diào)節(jié)至一個固定的流速，溶液經(jīng) 微濾后通過分子量截留量為3000Da超濾膜，溶液中的小分子物質(zhì)經(jīng)中空纖維膜的內(nèi)壁滲 透出來成為超濾液，收集超濾液；溶液中的蛋白等大分子物質(zhì)得以保留并得到濃縮，將 濃縮液回收至反應(yīng)罐中在此水解。(7)去離子交換樹脂(001X7(732)陽離子交換樹脂；201X7(717)陰離子交換樹 脂)于水中浸泡處理24小時后裝柱，然后分別用7.5%鹽酸或10% NaOH對其進(jìn)行處理， 轉(zhuǎn)化為H+型陽離子交換樹脂和OH-型陰離子交換樹脂，再用水清洗至微酸性或微堿性待用。將步驟6中所得的油茶籽肽超濾液，以10倍柱體積/h的流速通過H+型陽離子 交換樹脂來脫除陽離子，待流出液pH = 4.0左右時停止加樣，之后將此流出液以同樣流 速通過OH-型陰離子交換樹脂來脫除陰離子，至流出液呈弱酸性時停止加樣。(8)將濾液冷凍干燥，為油茶籽肽成品。實施例二(1)取油茶籽餅100g，用植物粉碎機(jī)粉碎，過80目篩，將篩下物在95%的正己 烷溶劑中浸提脫脂，水浴加熱溶劑溫度為50°C，浸提2次，每次2h，浸提完成后晾曬至 試劑完全揮發(fā)，待用；(2)將步驟1的油茶籽餅粕溶解在IOOOmL水中，加熱至50°C，用NaOH溶劑調(diào) 節(jié)pH至8.0，不斷攪拌15min，3 000r/min離心15min，取上清液待用；(3)將步驟2的上清液加熱至70°C，用檸檬酸調(diào)節(jié)pH至5.0，不斷攪拌15min， 3 000r/min離心15min，收集沉淀待用；(4)將步驟3的油茶籽蛋白按1 10加入去離子水，加熱至90°C保持15min， 然后冷卻并保持溶液溫度至45°C，用NaOH試劑調(diào)節(jié)并保持溶液pH為8.0，加入堿性蛋 白酶Alcalase 75AU/Kg蛋白，在此條件下進(jìn)行酶解，酶解時間為2h，在酶解過程中需不 停攪拌；(5)待酶解結(jié)束，迅速加熱至90°C，保持15min，3 000r/min離心15min，取上
清液待用，為油茶籽肽粗制液；(6)將步驟5中的油茶籽肽粗制液注入儲槽中，調(diào)節(jié)至一個固定的流速，溶液經(jīng) 微濾后通過分子量截留量為3 OOODa超濾膜，溶液中的小分子物質(zhì)經(jīng)中空纖維膜的內(nèi)壁滲 透出來成為超濾液，收集超濾液；溶液中的蛋白等大分子物質(zhì)得以保留并得到濃縮，將 濃縮液回收至反應(yīng)罐中在此水解。(7)去離子交換樹脂于水中浸泡處理24小時后裝柱，然后分別用7.5%鹽酸或 10% NaOH對其進(jìn)行處理，轉(zhuǎn)化為H+型陽離子交換樹脂和OH-型陰離子交換樹脂，再 用水清洗至微酸性或微堿性待用。將步驟6中所得的油茶籽肽超濾液，以10倍柱體積/h的流速通過H+型陽離子 交換樹脂來脫除陽離子，待流出液pH = 4.0左右時停止加樣，之后將此流出液以同樣流 速通過OH-型陰離子交換樹脂來脫除陰離子，至流出液呈弱酸性時停止加樣。(8)將濾液噴霧干燥，為油茶籽肽成品。實施例三(1)取油茶籽餅100g，用植物粉碎機(jī)粉碎，過80目篩，將篩下物在95%的正己烷溶劑中浸提脫脂，水浴加熱溶劑溫度為50°C，浸提2次，每次2h，浸提完成后晾曬至 試劑完全揮發(fā)，待用；(2)將步驟1的油茶籽餅粕溶解在IOOOmL水中，加熱至50°C，用NaOH溶劑調(diào) 節(jié)pH至8.0，不斷攪拌15min，3 000r/min離心15min，取上清液待用；(3)將步驟2的上清液加熱至70°C，用檸檬酸調(diào)節(jié)pH至5.0，不斷攪拌15min， 3 OOOr/min離心15min，收集沉淀待用；(4)將步驟3的油茶籽蛋白按1 10加入去離子水，加熱至90°C保持15min， 然后冷卻并保持溶液溫度至45°C，用NaOH試劑調(diào)節(jié)并保持溶液pH為8.0，加入堿性蛋 白酶Alcalase 75AU/Kg蛋白，在此條件下進(jìn)行酶解，酶解時間為2h，在酶解過程中需不 停攪拌；(5)待酶解結(jié)束，迅速加熱至90°C，保持15min，3 OOOr/min離心15min，取上
清液待用，為油茶籽肽粗制液；(6)將步驟5中的油茶籽肽粗制液注入儲槽中，調(diào)節(jié)至一個固定的流速，溶液經(jīng) 微濾后通過分子量截留量為3 OOODa超濾膜，溶液中的小分子物質(zhì)經(jīng)中空纖維膜的內(nèi)壁滲 透出來成為超濾液，收集超濾液；溶液中的蛋白等大分子物質(zhì)得以保留并得到濃縮，將 濃縮液回收至反應(yīng)罐中在此水解。(7)去離子交換樹脂于水中浸泡處理24小時后裝柱，然后分別用7.5%鹽酸或 10% NaOH對其進(jìn)行處理，轉(zhuǎn)化為H+型陽離子交換樹脂和OH-型陰離子交換樹脂，再 用水清洗至微酸性或微堿性待用。將步驟6中所得的油茶籽肽超濾液，以10倍柱體積/h的流速通過H+型陽離子 交換樹脂來脫除陽離子，待流出液pH = 4.0左右時停止加樣，之后將此流出液以同樣流 速通過OH-型陰離子交換樹脂來脫除陰離子，至流出液呈弱酸性時停止加樣。(8)將濾液冷凍干燥，為油茶籽肽成品。按本發(fā)明實施例方法制備的油茶籽肽，其產(chǎn)品包括如下特點(diǎn)(1)本方法制備的油茶籽肽為白色或淡黃色粉末，100%通過80目篩，無肉眼可 見外來物質(zhì)；(2)本方法制備的油茶籽肽溶解度高，在所有的pH條件下都能溶于水，吸濕性 和熱穩(wěn)定性強(qiáng)，起泡性和泡沫穩(wěn)定性均較好；(3)本方法制備的油茶籽肽產(chǎn)總氮含量(以干基計)沖5.0%，肽含量(以干基 計)沖0.0%，所得的相對分子質(zhì)量均在3 OOODa以下，相對分子質(zhì)量1 OOODa以下的肽段 含量勸0%，三氯乙酸氮溶解指數(shù)(TCA-NSI) 295.0%，水分含量《5.0%，灰分含量(以 干基計)動.0%，粗脂肪含量(以干基計)《1.0% ；(4)本方法制備的油茶籽肽具有良好的抗氧化、抗疲勞、降血壓、提高機(jī)體免疫 力等功能，能夠廣泛用于食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域。上述僅為本發(fā)明的具體實施例，但本發(fā)明的設(shè)計構(gòu)思并不局限于此，凡利用此 構(gòu)思對本發(fā)明進(jìn)行非實質(zhì)性的改動，均應(yīng)屬于侵犯本發(fā)明保護(hù)范圍的行為。
權(quán)利要求
1.一種油茶籽多肽，其特征在于油茶籽多肽以干基計占總氮含量沖5.0%，肽含量 以干基計沖0.0%，所得的相對分子質(zhì)量均在4000Da以下，相對分子質(zhì)量SOODa以下的 肽段含量勸0%，三氯乙酸氮溶解指數(shù)TCA-NS&95.0%，水分含量《5.0%，灰分含量以 干基計動.0%，粗脂肪含量以干基計《1.0%。
2.一種制備油茶籽多肽的方法，包括如下步驟(1)將油茶籽餅粕粉碎，并用溶劑去除餅粕的油脂；(2)采用堿溶酸沉方法提取分離油茶籽餅粕里的蛋白；(3)采用酶解方法將步驟(2)中的蛋白水解為多肽粗制液；(4)用超濾膜過濾步驟(3)所得的多肽粗制液，收集超濾液；未透過超濾膜部分為濃 縮液，將濃縮液回收至反應(yīng)罐中再次水解并再次超濾，收集超濾液；(5)超濾液在陰陽離子交換樹脂洗脫，得油茶籽多肽液。
3.如權(quán)利要求2所述的制備油茶籽多肽的方法，其特征在于，步驟(5)之后，還包括 步驟(6)油茶籽多肽液經(jīng)濃縮之后，噴霧干燥或冷凍干燥制成干粉。
4.如權(quán)利要求2或3所述的制備油茶籽多肽的方法，其特征在于，所述的油茶籽餅粕 為冷榨法制油后的油茶籽餅粕。
5.如權(quán)利要求2或3所述的制備油茶籽多肽的方法，其特征在于所述的步驟(1)的 方法為將油茶籽餅粕碎，過40 120目篩，用95%正己烷溶劑在40 50°C條件下浸 提2 3次，每次2 3h，浸提后晾曬至正己烷試劑完全揮發(fā)，待用。
6.如權(quán)利要求2或3所述的制備油茶籽多肽的方法，其特征在于，所述的步驟(2)的 方法為(a)將步驟(1)的去除油脂后的油茶籽餅粕按1 5 1 10(W/V)溶解至水中， 加熱至45 55°C，用堿調(diào)節(jié)pH至8.0 10.0，不停攪拌15min，之后3 000 4 OOOr/ min, 15min離心取上清液；(b)將步驟a的上清液加熱至70 90°C，用酸調(diào)節(jié)pH至3.0 5.0，不停攪拌lOmin， 之后再3 OOO 4 OOOr/min，15min,離心收集沉淀。
7.如權(quán)利要求6所述的制備油茶籽多肽的方法，其特征在于，步驟(3)所述的方法為(a)將步驟(2)的沉淀按1 10 1 20溶解至水中，加熱至90 100°C，保持 15 30min，然后冷卻至40 50°C，加入堿性蛋白酶Alcalase 70 80AU/Kg蛋白，用 NaOH試劑調(diào)節(jié)并保持pH在7.5 9.0，酶解2 4h，酶解過程中不斷攪拌；(b)待酶解結(jié)束后，迅速加熱至90 95°C，并保持10 20min，之后3OOO 5000r/ min, 15min,離心取上清液，該上清液即為油茶籽多肽粗制液。
8.如權(quán)利要求7所述的制備油茶籽多肽的方法，其特征在于，步驟(4)所述的方法為將步驟(3)中的油茶籽多肽粗制液注入儲槽中，調(diào)節(jié)至一個固定的流速，溶液經(jīng)微 濾后通過分子量截留量為3 OOO 5 OOODa超濾膜，溶液中的小分子物質(zhì)經(jīng)中空纖維膜的 內(nèi)壁滲透出來成為超濾液，收集超濾液；溶液中的蛋白等大分子物質(zhì)得以保留并得到濃 縮，將濃縮液回收至反應(yīng)罐中再次水解。
9.如權(quán)利要求8所述的制備油茶籽多肽的方法，其特征在于，步驟(5)所述的方法為去離子交換樹脂于水中浸泡處理24小時后裝柱，然后分別用7.5%鹽酸或10% NaOH 對其進(jìn)行處理，轉(zhuǎn)化為H+型陽離子交換樹脂和OH-型陰離子交換樹脂，再用水清洗至微 酸性或微堿性待用；將步驟(4)中所得的油茶籽多肽超濾液，以5 10倍柱體積/h的流速通過H+型陽 離子交換樹脂來脫除陽離子，待流出液pH = 4.0左右時停止加樣，之后將此流出液以同 樣流速通過OH-型陰離子交換樹脂來脫除陰離子，至流出液呈弱酸性時停止加樣。
10. —種如權(quán)利要求1所述的油茶籽多肽的用途，其特征在于，所述的油茶籽多肽 用于制備抗氧化的組合物；或用于制備降低膽固醇的組合物；或用于制備抗疲勞的組合 物；或用于制備降血壓的組合物；或用于制備提高機(jī)體免疫力的組合物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種油茶籽多肽及其制備方法，其中油茶籽多肽占總氮含量(以干基計)≥95.0％，肽含量(以干基計)≥90.0％，所得的相對分子質(zhì)量均在4000Da以下，相對分子質(zhì)量800Da以下的肽段含量≥80％，三氯乙酸氮溶解指數(shù)(TCA-NSI)≥95.0％，水分含量≤5.0％，灰分含量(以干基計)≤5.0％，粗脂肪含量(以干基計)≤1.0％。其制備方法為冷榨發(fā)的油茶籽餅粕粉碎，并去除里面的油脂；再采用堿溶酸沉方法提取分離油茶籽餅粕里的蛋白；蛋白水解為多肽粗液；用超濾膜過濾多肽粗液，收集超濾液；超濾液在陰陽離子交換樹脂洗脫，得油茶籽多肽液。
文檔編號A61P9/12GK102010460SQ20101029459
公開日2011年4月13日 申請日期2010年9月27日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月27日
發(fā)明者黃金安 申請人:廈門盛洲植物油有限公司