專利名稱：殼聚糖-單甲氧基聚乙二醇凝膠給藥系統(tǒng)及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種給藥緩釋系統(tǒng)。具體而言，本發(fā)明公開了殼聚糖-單甲氧基聚乙二醇凝膠給藥系統(tǒng)及其制備方法。本發(fā)明還涉及殼聚糖-單甲氧基聚乙二醇凝膠為載體的腫瘤壞死因子α與瘦素的給藥緩釋系統(tǒng)。本發(fā)明凝膠具有溫度敏感性好，在醫(yī)療領(lǐng)域具有良好的應(yīng)用前景。
背景技術(shù)：
殼聚糖(chitosan)是一類甲殼素的脫乙酰衍生物，它具有良好的生物相容性和生物降解性。殼聚糖具有生物黏附性能，可起到控制藥物釋放的作用，具有獨(dú)特的性質(zhì)，因此殼聚糖已經(jīng)被廣泛地應(yīng)用于藥物載體的研究中[Chitosansodium alginate nanoparticles as submicroscopic reservoirs for oculardelivery :Formulation, optimization and in vitro characterization. Euro J PharmBio. 2008,66(3) :513-525. Ever G, Jean C L. In situ-forming hydrogels reviewof temperature-sensitive systems. Euro J Pharm Bio. 2004,58(2) :409-426. Sanjaykm, Shruti C, Sushma T et al.]。殼聚糖屬于天然堿性多糖，不溶于水，但是殼聚糖含有游離氨基，在酸性條件下可以結(jié)合氫離子，從而使殼聚糖成為帶正電荷的電解質(zhì)。單甲氧基聚乙二醇(Methoxy Polyethylene Glycol, mPEG)具有良好的水溶性、潤濕性、潤滑性、生理惰性、對人體無刺激、溫和，在化妝品和制藥工業(yè)中應(yīng)用廣泛，分子量為2KD。膠原蛋白是細(xì)胞外最重要的水不溶性纖維蛋白，是構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)的骨架。膠原在細(xì)胞外基質(zhì)中形成半晶體的纖維，給細(xì)胞提供抗張力和彈性，并在細(xì)胞的遷移和發(fā)育中起作用。膠原在各種動物中都有存在，脊椎動物中腱、軟骨和骨中的膠原非常豐富，幾乎占了蛋白總重的一半。膠原經(jīng)酸或堿部分水解或在水中煮沸，可以形成溶液。在殼聚糖的酸溶液中加入適量的單甲氧基聚乙二醇不會立刻中和殼聚糖的質(zhì)子而使殼聚糖沉淀下來，可使殼聚糖溶液的PH值升至生理范圍即pH7. O左右。在低溫條件下，殼聚糖與水的作用阻止了殼聚糖鏈的聚集；溫度升高時，單甲氧基聚乙二醇與水的結(jié)構(gòu)化作用(該作用能減弱殼聚糖與水的作用)加強(qiáng)，使殼聚糖鏈脫水，水分子的區(qū)域被聚乙二醇的羥基集團(tuán)取代，殼聚糖鏈聚集。殼聚糖/單甲氧基聚乙二醇溫敏凝膠的形成有兩個重要因素，一個是殼聚糖游離氨基的存在，它將使殼聚糖在溶液中帶正電荷。第二是單甲氧基聚乙二醇的加入，它賦予凝膠系統(tǒng)穩(wěn)定在PH中性的環(huán)境且具有溫敏特性。這個特點(diǎn)， 使得殼聚糖溫敏凝膠在形成凝膠前可以非常方便加載藥物[Back，J. F.，Oakenful 1, D.， Smith,M. B. Increased thermal stability of proteins inthe presence of sugars and polyols. Biochem. 1979，18(23) :5191-5196.]月中瘤壞死因子α (Tumor Necrosis Factor α , TNF- α )是一種多功能的細(xì)胞因子，她對細(xì)胞的增殖、分化、炎癥反應(yīng)與免疫功能等具有調(diào)節(jié)作用，特別是是其免疫調(diào)節(jié)功能更為重要[Smyth, Μ. J. ， Johnstone, R. W. ， Role of TNF inlymphocyte-mediated cytotoxicity. Microsc. Res. Technol. 2000,50 :196-208. ]。TNF-α 主要由激活的單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞分泌，其它如中性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞在一定條件下也會邑產(chǎn)生[Pennica D，Nedwin GE, Hayflick JS, et a 1. Human tumour necrosis factor precursor structure，expression and homology to lymphotoxin. Nature，1984， 312(5996) :724-729.Sherry B，Cerami A. Cachectin/tumor necrosis factor exerts endocrine, paracrine, and autocrine control of inflammatory responses. J Cell Biol, 1988,107(4) :1269-1277.]。成熟的 TNF-α (17kD)由膜型 TNF-a (26kD)切割而產(chǎn)生，兩種形式的TNF-ci都具有生物活性W]。TNF-a有三個與受體結(jié)合的主要活性表位， 即四 36、84 91和143 146位。TNF-a以活性三聚體的形式與細(xì)胞表面的TNF-a 受體(TNFR)結(jié)合，從而啟動信號通路，發(fā)揮生物學(xué)功能[Boone E，Vanden Berghe T，Van Loo G， et al.Structure/Function analysis ofp55 tumor necrosis factor receptor and fas-associated death domain. Effect onnecrosis in L929sA cells. J Biol Chem, 2000,275(48) :37596-37603.]。TNF-α 的過表達(dá)與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)、Crohn，s 病、多發(fā)性硬化癥(multiple sclerosis)等自身免疫性疾病的密切關(guān)系已得到證實(shí)[Xanthoulea S，Pasparakis M，Kousteni S，et al. Tumor necrosis factor (TNF) receptor shedding controls thresholds of innate immune activation thatbalance opposing TNF functions in infectious and inflammatory diseases. J ExpMed， 2004,200 (3) :367-376. Kollias G，Douni E，Kassiotis G，et al. On the roleof tumor necrosis factor and receptors in models of multiorgan failure， rheumatoid arthritis，multiple sclerosis and inflammatory bowel disease. Immunol Rev，1999， 169 :175-194.] ο TNF-α還是一個重要的前炎性細(xì)胞因子，可以介導(dǎo)多種炎性因子的釋放，如 IL-U IL-6、GM-CSF[B. J. Scallon, M. A. Moore, H. Trinh，D. Μ. Knight，J. Ghrayeb, Chimeric anti-TNF—alphamonoclonal antibody cA2 binds recombinant transmembrane TNF-aIpha andactivates immune effector functions. Cytokine 7 (1995) 251-259·]。越來越多的疾病被發(fā)現(xiàn)與TNF-α的過量分泌有關(guān)，TNF-α已經(jīng)成為治療這類疾病的一個有效革巴標(biāo)[Camussi G, Lupia E.The future role of anti-tumour necrosis factor (TNF) products in the treatment of rheumatoid arth ritis. Drugs,1998,55(5) :613-620. Feldmann M and Maini RN. Development of anti—TNF therapy forrheumatoid arthritis. Nat. Rev Immunol,2002, 2 :364-371.]。1994年，Zhang等利用定位克隆的方法獲得“Obese”基因。ob基因編碼脂肪組織特異性mRNA，翻譯成167個氨基酸的蛋白質(zhì)，N端21個氨基酸為分泌信號肽，在被分泌入血的過程中去除N端的信號肽成瘦素[Cohen SL, Halaas幾，F(xiàn)riedman JM, et al. Human leptin characterization. Nature, 1996, 382 (6592) :589.]。血液循環(huán)中的瘦素為 146 個氨基酸的多肽類激素，其活性部位含146個氨基酸殘基，相對分子質(zhì)量為16KD，親水性強(qiáng)， 以單體形式存在于血漿中。與其他激素的分泌相似，瘦素的分泌也呈脈沖式。瘦素mRNA表達(dá)呈日周期變化，夜間表達(dá)量最高，半衰期為9. 4士3. Omin其分泌具有一定的節(jié)律性。瘦素在血液中的運(yùn)輸有游離和結(jié)合2種形式在人血清中2種形式各占50%，在肥胖的人和鼠中該比例發(fā)生變化。分泌到血中的瘦素大部分通過與血清蛋白結(jié)合來運(yùn)輸。在人類至少有兩種瘦素結(jié)合蛋白，相對分子質(zhì)量分別為176KD和240KD，只有游離的瘦素才具有生物活性。
在體內(nèi)，瘦素的功能呈現(xiàn)多樣性。能量代謝方面瘦素與下丘腦的瘦素受體結(jié)合后可能通過下丘腦2神經(jīng)肽通路，抑制NPY的合成與釋放，增加交感神經(jīng)系統(tǒng)活性，引起食欲降低，能量消耗增加，從而減輕體質(zhì)量。生殖和發(fā)育方面瘦素可作用于下丘腦-垂體性腺這一生殖軸的各個層次。瘦素通過位于下丘腦的長型受體調(diào)節(jié)性行為和促性腺激素釋放激素(&1RH)釋放；在性腺水平，瘦素可直接作用于卵巢，恢復(fù)雌性ob/ob小鼠的生育能力； 瘦素對胎兒的生長發(fā)育也有一定的促進(jìn)作用。骨代謝方面瘦素可通過中樞途徑增強(qiáng)成骨細(xì)胞功能，影響骨重建，抑制骨形成，但對破骨細(xì)胞分化功能無明顯影響。心血管系統(tǒng)方面瘦素能提高大鼠交感神經(jīng)興奮性而升高動脈壓，可影響心肌細(xì)胞的代謝和功能血液系統(tǒng)方面瘦素能刺激造血干細(xì)胞的分裂和分化，提高細(xì)胞數(shù)量，血小板有瘦素受體(OB-R) 表達(dá)，瘦素能誘導(dǎo)血小板聚集。OB和ObR在多種腫瘤組織中均有表達(dá)，如乳腺癌、結(jié)腸癌、 胃癌、前列腺癌禾口月干癌等[Cecilia G，Eva S. Leptin and Cancer. Journal of Cellular. Physiology,2006,207 12-22. Ambrosini G， Nath AK, Sierra Honigmann MR, etal. Transcriptional activation of the human leptin gene in response to hypoxia. Involvement of hypoxia-inducible factor 1. J Biol Chem,277 (37) :34601-34609. Artwoh M，Roden M，Holzenbein T，et al. Modulation by leptin of proliferationand apoptosis in vascular endothelial cells.Int J Obes Relat MetabDisord,2002， 26(4) :577-580.]。近年來發(fā)現(xiàn)瘦素還有影響水鹽代謝，致使飲水增加、尿液稀釋、腎臟排鉀減少，增加機(jī)體免疫應(yīng)答能力的作用。根據(jù)殼聚糖和單甲氧基聚乙二醇的理化性質(zhì)，本發(fā)明經(jīng)過多次嘗試改進(jìn)了殼聚糖和單甲氧基聚乙二醇制備水凝膠系統(tǒng)，為TNF-α與瘦素給藥提供了高性能的緩釋系統(tǒng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開了殼聚糖-單甲氧基聚乙二醇凝膠給藥系統(tǒng)及其制備方法。本發(fā)明所述的殼聚糖凝膠給藥系統(tǒng)，是由殼聚糖和單甲氧基聚乙二醇所組成。本發(fā)明確定了殼聚糖和單甲氧基聚乙二醇混合比例，即為按照重量比的2. 0% -2. 5%的殼聚糖、3. 5% -4. O%的單甲氧基聚乙二醇以及0. 膠原蛋白。本發(fā)明還公開了一種溫度敏感的殼聚糖水凝膠的制備方法，包括以下步驟1)單甲氧基聚乙二醇溶液的配制稱取單甲氧基聚乙二醇，溶于雙蒸水，振蕩攪拌器上持續(xù)震蕩15min，使其徹底溶解，制成濃度為30%單甲氧基聚乙二醇溶液(w/v)，濾膜過濾，4°C低溫儲存?zhèn)溆谩?)殼聚糖溶液的配制使用0. IM的醋酸配制殼聚糖溶液，攪拌2天后將獲得的殼聚糖溶液高溫高壓消毒20min，冷卻至室溫后使用。3)將膠原溶于0. IM的氫氧化鈉中，形成重量的膠原溶液，并調(diào)節(jié)pH值至 7. 0-7. 4.4)殼聚糖-單甲氧基聚乙二醇凝膠的制備將三種溶液冰浴30min后，吸取殼聚糖醋酸溶液到容器中，滴加1 %的膠原溶液后，快速攪拌同時逐滴加入單甲氧基聚乙二醇溶液，并持續(xù)攪拌20min。獲得的殼聚糖-單甲氧基聚乙二醇凝膠系統(tǒng)中，殼聚糖質(zhì)量濃度為 2.0% -2.5%，單甲氧基聚乙二醇濃度為3.5% -4.0%,0. 膠原蛋白。本發(fā)明所研制的凝膠給藥系統(tǒng)與以往文獻(xiàn)與專利文件更具有技術(shù)的精確性。在殼聚糖和單甲氧基聚乙二醇混合系統(tǒng)中，2%以下濃度的殼聚糖在生理溫度下很難凝固，而超過4. 0%的濃度則難以溶解；本發(fā)明同時也確定了在重量比的2. 0%-2. 5%的殼聚糖下，溫度敏感水凝膠系統(tǒng)中，單甲氧基聚乙二醇的精確濃度。本發(fā)明公開了一種TNF- α的凝膠給藥系統(tǒng)，含有濃度為10_7Μ的TNF- α、重量百分比2. 5%的殼聚糖、3. 5%單甲氧基聚乙二醇以及0. 膠原蛋白。本發(fā)明還公開了一種瘦素的凝膠給藥系統(tǒng)，含有濃度為10_7Μ的瘦素、重量百分比 2.0%的殼聚糖、4.0%單甲氧基聚乙二醇以及0. 膠原蛋白。


圖ITNF- α與瘦素的SDS-PAGE電泳圖。其中泳道1為TNF- α，泳道2為瘦素蛋白。圖單甲氧基聚乙二醇濃度下，殼聚糖不同濃度對凝膠系統(tǒng)膠凝時間的影響。圖32. 5%殼聚糖濃度下，單甲氧基聚乙二醇濃度百分比對于凝膠系統(tǒng)膠凝時間的影響。圖4TNF-ci在殼聚糖-單甲氧基聚乙二醇水凝膠系統(tǒng)與在磷酸鹽緩沖液在體外釋放比較。圖5瘦素在殼聚糖-單甲氧基聚乙二醇水凝膠系統(tǒng)與在磷酸鹽緩沖液在體外釋放比較。
具體實(shí)施例方式實(shí)驗(yàn)材料殼聚糖(!Iomega，美國)、單甲氧基聚乙二醇(Sigma，美國)、膠原蛋白(Sigma，美國)、TNF_a (實(shí)驗(yàn)室自制)、瘦素(實(shí)驗(yàn)室自制)、冰醋酸(北京化學(xué)試劑公司)、乙腈(北京化學(xué)試劑公司)、氫氧化鈉(北京化學(xué)試劑公司)、丙稀酰胺&甲叉雙丙稀酰胺(Sigma，美國)、磷酸氫二鈉(北京化學(xué)試劑公司)、磷酸二氫鈉(北京化學(xué)試劑公司)。實(shí)驗(yàn)方法DTNF-α與瘦素的蛋白表達(dá)采用大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng)，兩種帶有組氨酸標(biāo)簽。2)殼聚糖-單甲氧基聚乙二醇凝膠給藥系統(tǒng)的制備①殼聚糖脫乙酰度的測定依照文獻(xiàn)對本發(fā)明所用殼聚糖進(jìn)行了脫乙酰度測定， 脫乙酰度為86%。②單甲氧基聚乙二醇溶液的配制稱取單甲氧基聚乙二醇，溶于雙蒸水，振蕩攪拌器上持續(xù)震蕩lOmin，使其徹底溶解。制成濃度為30%單甲氧基聚乙二醇溶液(w/v)， 0.22 um濾膜過濾，低溫放置備用。③殼聚糖溶液的配制0. IM的醋酸溶液配制4%的殼聚糖溶液。先將醋酸加入雙蒸水混勻后，稱取殼聚糖放入燒杯中，加入0. IM的醋酸溶液，攪拌M小時將獲得的殼聚糖溶液121°C高溫高壓消毒，冷卻至室溫后使用。④膠原蛋白溶液的配制稱取一定量的膠原蛋白，溶于0. IM的氫氧化鈉中，配制重量1 %的膠原溶液，并用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值至7. 0-7. 4.⑤殼聚糖-單甲氧基聚乙二醇的凝膠合成三種溶液冰浴后，吸取殼聚糖醋酸溶液到新燒杯中，滴加的膠原溶液后，快速攪拌同時逐滴加入單甲氧基聚乙二醇溶液，并持續(xù)攪拌。最終獲得殼聚糖質(zhì)量濃度為2. 0 % -2. 5 %，單甲氧基聚乙二醇終濃度為 3.5% -4.0%的殼聚糖-單甲氧基聚乙二醇溶液。⑥凝膠粘度測定將樣品轉(zhuǎn)移到盛樣器中，4°C以及37°C水浴中恒溫，分別采用10 與IOOrpm轉(zhuǎn)速測量膠凝前后殼聚糖_單甲氧基聚乙二醇水凝膠的粘度。3) TNF-α給藥凝膠系統(tǒng)體外釋藥實(shí)驗(yàn)將含TNF- α (10_7Μ)殼聚糖-單甲氧基聚乙二醇給藥緩釋溶液在37°C恒溫孵育箱膠凝后立即取出Iml分別置于透析袋(截留分子量5KD)中，放入小玻璃瓶內(nèi)，在瓶中加入 ρΗ7· 4 的 PBS,于 37°C恒溫振蕩器中振搖(轉(zhuǎn)速 60rpm)。在 5min, 15min, 45min, 2h，5h，IOh 分別將溶出液全部取出，補(bǔ)加同樣的37°C的PBS，高效液相色譜法測定制劑在各時間點(diǎn)的累積釋放量。同樣的方式，將TNF-α (IO-7M)在PBS溶液下進(jìn)行高效液相色譜法測定在各時間點(diǎn)的累積釋放量。在所有實(shí)驗(yàn)均在室內(nèi)溫度20士3°C條件下完成。流動相經(jīng)過0.45 μ m 微孔濾膜真空負(fù)壓過濾、超聲排氣。將析出的液體經(jīng)0. 22 μ m濾膜過濾后依次進(jìn)行HPLC檢測，觀察TNF- α體外釋藥的情況。4)瘦素給藥凝膠系統(tǒng)體外釋藥實(shí)驗(yàn)將含瘦素(10_7Μ)殼聚糖-單甲氧基聚乙二醇給藥緩釋溶液在37°C恒溫孵育箱膠凝后立即取出Iml分別置于透析袋(截留分子量5KD)中，放入小玻璃瓶內(nèi)，在瓶中加入 ρΗ7· 4 的 PBS,于 37°C恒溫振蕩器中振搖(轉(zhuǎn)速 IOOrpm)。在 5min, IOmin, 15min，30min， 45min，60min分別將溶出液全部取出，補(bǔ)加37°C的PBS，高效液相色譜法測定制劑在各時間點(diǎn)的累積釋放量。同樣方式，將瘦素(IO-7M)在PBS溶液下進(jìn)行高效液相色譜法測定在各時間點(diǎn)的累積釋放量。在所有實(shí)驗(yàn)均在室內(nèi)溫度20士3°C條件下完成。流動相經(jīng)過0.45 μ m 微孔濾膜真空負(fù)壓過濾、超聲排氣。將析出的液體經(jīng)0. 22 μ m濾膜過濾后依次進(jìn)行HPLC檢測，觀察瘦素體外釋藥。結(jié)果與討論DTNF-α與瘦素的蛋白表達(dá)TNF-α與瘦素的純度都較高，滿足了實(shí)驗(yàn)的要求，其純化的電泳圖見圖1。TNF-α 與瘦素的純度都達(dá)到了 90%左右。2)殼聚糖含量對對于膠凝時間的影響在4.0%的單甲氧基聚乙二醇下，含量濃度1.0%的凝膠時間過長達(dá)到3h， 1.5% -3.0%濃度的殼聚糖凝膠時間比較合適。終含量為2.0%單甲氧基聚乙二醇、4.0% 單甲氧基聚乙二醇組膠凝時間為10-15min(圖2)。而含量高于4%殼聚糖幾乎難以攪拌溶解于0. IM的醋酸溶液中。3)單甲氧基聚乙二醇含量對于膠凝時間的影響在2. 0%的殼聚糖下，單甲氧基聚乙二醇含量濃度2 %的凝膠時間過長達(dá)到 SOmin, 3.0% -6. 0%濃度的單甲氧基聚乙二醇凝膠時間比較合適。終含量為3. 5%單甲氧基聚乙二醇、4. O %單甲氧基聚乙二醇組膠凝時間約為15-20miη，終含量8 %、10 %單甲氧基聚乙二醇組膠凝時間為:3min以下，隨著單甲氧基聚乙二醇逐滴加入局部就立刻膠凝(圖3)。單甲氧基聚乙二醇含量的變化致使單甲氧基聚乙二醇分子中的磷酸根基團(tuán)與殼聚糖分子中氨基之間的靜電作用增強(qiáng)，促進(jìn)系統(tǒng)膠凝時間。本發(fā)明過程中也證實(shí)了單甲氧基聚乙二醇含量對于殼聚糖-單甲氧基聚乙二醇凝固時間的影響。當(dāng)單甲氧基聚乙二醇在系統(tǒng)終含量大于8 %或低于2 %時系統(tǒng)膠凝形態(tài)均不理想，單甲氧基聚乙二醇終含量3. 5 %-4. 0 % 時膠凝時間、膠凝形態(tài)最為適宜。這是因?yàn)殡S著單甲氧基聚乙二醇用量比的增加，單甲氧基聚乙二醇會奪取更多NH3+質(zhì)子，加速了殼聚糖鏈間靜電斥力減弱，使殼聚糖-單甲氧基聚乙二醇溶液凝膠化時間減少，或在較低的溫度下就可以凝膠化，37°C時加速了這種過程。因?yàn)橹泻碗姾伞⑷芤簤A性提高及溶解達(dá)到飽和等諸多因素的影響使混合液中的殼聚糖沉淀析出。研究發(fā)現(xiàn)，通過流變學(xué)和電子順磁共振光譜學(xué)的方法對殼聚糖溫敏凝膠的性質(zhì)進(jìn)行研究，羥基的濃度決定了殼聚糖溫敏凝膠的粘稠度及PH值，并觀察了殼聚糖溫敏凝膠對瘦素的緩釋作用[K. Gekko, S. N. Timasheff. Mechanism of protein stabilization by glycerol :Preferentialhydratation in glycerol-water mixtures.Biochem. 1981,20 (16) :4667-4676.]。3) TNF-α給藥凝膠系統(tǒng)體外釋藥實(shí)驗(yàn)將含1(ΓΜ TNF- α的殼聚糖-單甲氧基聚乙二醇給藥緩釋溶液在37°C恒溫孵育箱膠凝后透析得到的蛋白，用高效液相色譜法測定在各時間點(diǎn)的累積釋放量，與相同濃度 TNF-α在PBS系統(tǒng)中透析釋放的比較見圖4。圖中發(fā)現(xiàn)，在前5小時之內(nèi)，TNF-α在殼聚糖-單甲氧基聚乙二醇給藥緩釋系統(tǒng)中，釋放的速度基本成線性關(guān)系，而TNF-α在PBS系統(tǒng)在45min內(nèi)可以成線性關(guān)系；由此可見，殼聚糖_單甲氧基聚乙二醇給藥緩釋大大降低了 TNF-α的分解速度。4)瘦素給藥凝膠系統(tǒng)體外釋藥實(shí)驗(yàn)將含10_7Μ瘦素的殼聚糖-單甲氧基聚乙二醇給藥緩釋溶液在37°C恒溫孵育箱膠凝后透析得到的蛋白，用高效液相色譜法測定在各時間點(diǎn)的累積釋放量，與相同濃度瘦素在PBS系統(tǒng)中透析釋放的比較見圖5。本發(fā)明明顯降低蛋白質(zhì)藥物的分解速度，通過藥物凝膠緩釋系統(tǒng)改善蛋白質(zhì)藥物的半衰期，提高蛋白質(zhì)藥物的效力。本發(fā)明殼聚糖-單甲氧基聚乙二醇凝膠緩釋系統(tǒng)，具有溫度敏感的良好特性。本發(fā)明還提出了 TNF-α與瘦素的凝膠緩釋系統(tǒng)，為殼聚糖-單甲氧基聚乙二醇凝膠系統(tǒng)在其他蛋白類藥物與多肽類藥物的緩釋應(yīng)用提供了一定的基礎(chǔ)。
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權(quán)利要求
1.殼聚糖-單甲氧基聚乙二醇凝膠給藥系統(tǒng)及其制備方法，含有重量百分比 2.0% -2. 5%的殼聚糖、3. 5% -4.0%的單甲氧基聚乙二醇以及0. 膠原蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的殼聚糖-單甲氧基聚乙二醇凝膠給藥系統(tǒng)，其制備方法包括以下過程1)單甲氧基聚乙二醇溶液的配制稱取單甲氧基聚乙二醇，溶于雙蒸水，振蕩攪拌器上持續(xù)震蕩15min，使其徹底溶解，制成濃度為30%單甲氧基聚乙二醇溶液(w/v)，濾膜過濾，4°C低溫儲存?zhèn)溆谩?)殼聚糖溶液的配制使用0.IM的醋酸配制的殼聚糖溶液，攪拌2天后將獲得的殼聚糖溶液經(jīng)高溫高壓消毒20min，冷卻至室溫后使用。3)將膠原溶于0.IM的氫氧化鈉中，形成重量的膠原溶液，并調(diào)節(jié)pH值至7. 0-7. 4.4)殼聚糖-單甲氧基聚乙二醇凝膠的制備將三種溶液冰浴30min后，吸取殼聚糖醋酸溶液到容器中，滴加的膠原溶液后，快速攪拌同時逐滴加入單甲氧基聚乙二醇溶液， 并持續(xù)攪拌20min。獲得的殼聚糖-單甲氧基聚乙二醇凝膠系統(tǒng)中，殼聚糖質(zhì)量濃度為 2.0% -2.5%，單甲氧基聚乙二醇濃度為3.5% -4.0%,0. 膠原蛋白。
3.一種腫瘤壞死因子α的給藥緩釋系統(tǒng)，其特征在于，所述的緩釋系統(tǒng)含有濃度為10_7Μ的腫瘤壞死因子α、重量百分比2. 5%的殼聚糖、3. 5%的單甲氧基聚乙二醇以及 0. 膠原蛋白。
4.一種瘦素的給藥緩釋系統(tǒng)，其特征在于，所述的緩釋系統(tǒng)含有濃度為ΙΟ—Μ的瘦素、 重量百分比2.0%的殼聚糖、4.0%的單甲氧基聚乙二醇以及0. 膠原蛋白。
全文摘要
本發(fā)明公開了殼聚糖-單甲氧基聚乙二醇凝膠給藥系統(tǒng)及其制備方法，包含重量比2.0％-2.5％殼聚糖、3.5％-4.0％單甲氧基聚乙二醇及膠原蛋白。該凝膠系統(tǒng)具有溫度敏感性，能夠在常溫保持液態(tài)，37℃時轉(zhuǎn)變?yōu)楣虘B(tài)。本發(fā)明同時公開了其制備方法，包括配制濃度為30％單甲氧基聚乙二醇溶液；使用醋酸配制殼聚糖溶液；將膠原蛋白溶于0.1M的氫氧化鈉；將三種溶液冰浴后攪拌混合制備凝膠溶液系統(tǒng)。本發(fā)明還公開了一種腫瘤壞死因子α的凝膠給藥系統(tǒng)和一種瘦素的凝膠給藥系統(tǒng)。本發(fā)明所述的凝膠給藥系統(tǒng)，溫度敏感性好、制備條件溫和，可以廣泛的應(yīng)用于藥物載體領(lǐng)域。
文檔編號A61K38/22GK102370612SQ201010261118
公開日2012年3月14日 申請日期2010年8月24日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月24日
發(fā)明者吳志宏 申請人:吳志宏