專利名稱：注射用丹紅的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及丹紅制劑的制備方法。
背景技術(shù)：
在《國家藥品標(biāo)準(zhǔn)(試行)頒布件》中所公布的丹紅注射液是一種有很好臨床療 效、應(yīng)用已有二十多年歷史的傳統(tǒng)中成藥，主要用于心腦血管的重要急癥治療，常見的有冠 心病、心絞痛等，還可以治療淤血閉塞所致的胸痹即中風(fēng)等?，F(xiàn)有提取的丹酚酸B和羥基紅 花黃色素A的方法存在對丹酚酸B和羥基紅花黃色素A提取不徹底。而且現(xiàn)有的丹紅注射 液〔部頒標(biāo)準(zhǔn)WS-11220(ZD-1220)-2002〕制備過程中采用混合提取工藝，提取出的有效成分 含量低，而且制備出的是水針劑，由于水溶液中含氧氣，所以其中的丹酚酸B和羥基紅花黃 色素A容易氧化分解，長期儲存后顏色會變深并產(chǎn)生沉淀，穩(wěn)定性差，水針劑的運輸和儲存 不方便。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有丹酚酸B和羥基紅花黃色素A的提取方法存在對丹酚酸B 和羥基紅花黃色素A提取不徹底和制備丹紅注射液過程中采用混合提取工藝，提取出的有 效成分含量低、長期儲存后顏色會變深并產(chǎn)生沉淀，以及制備出的丹紅注射液的穩(wěn)定性差、 運輸和儲存不方便的問題，而提供注射用丹紅的制備方法。本發(fā)明的丹酚酸B的提取方法按如下步驟進(jìn)行一、先向丹參藥材飲片加入丹參 飲片質(zhì)量8 18倍、質(zhì)量濃度為35% 60%的乙醇和體積為乙醇體積1%。 4%。、濃度為 Imol/L的鹽酸浸泡1 2小時，然后回流提取1. 5 3小時，濾出丹參藥液，再向藥渣加入 藥渣質(zhì)量6 16倍、質(zhì)量濃度為35% 60%的乙醇和體積為乙醇體積1%。 4%。、濃度為 lmol/L的鹽酸，回流提取1 2小時，濾出丹參藥液，合并兩次提取的丹參藥液，再減壓濃縮 成相對密度為1. 16 1. 24的丹參清膏；二、向丹參清膏中加入丹參清膏重量3 5倍的水， 邊加水邊攪拌，室溫下靜置12 24小時，再過濾，丹參濾液用鹽酸調(diào)節(jié)pH值為2. 8 3. 2， 得到丹參酸化濾液；三、將大孔吸附樹脂柱用PH值為2. 8 3. 2的鹽酸酸化，將步驟二得 到的丹參酸化濾液上樣于大孔吸附柱上，用5 7倍樹脂體積pH值為2. 8 3. 2的鹽酸沖 洗雜質(zhì)，再用質(zhì)量濃度為35% 55%的乙醇洗脫，收集1. 5 2. 5倍樹脂體積的丹參洗脫 液，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)丹參洗脫液的PH值為4. 0 4. 2，減壓濃縮至相對密度為1. 08 1. 25的丹酚酸清膏；即得到丹酚酸B。本發(fā)明的羥基紅花黃色素A的提取方法按如下步驟進(jìn)行一、先向紅花加入質(zhì)量 為紅花質(zhì)量16 20倍的水浸泡20 40分鐘，煎煮20 40分鐘，濾出紅花藥液，再向藥渣加入質(zhì)量為藥渣質(zhì)量14 18倍的水，煎煮20 40分鐘，濾出紅花藥液，合并兩次濾出的 紅花藥液，冷卻至室溫；二、紅花藥液用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1. 9 2. 2，靜置6 24小時，再過 濾，得到紅花酸化濾液；三、將大孔吸附樹脂柱用PH值為1. 9 2. 2的鹽酸酸化，將步驟二 得到的紅花酸化濾液上樣于大孔吸附柱上，用6 8倍樹脂體積pH值為1. 9 2. 2的鹽酸 沖洗雜質(zhì)，再用質(zhì)量濃度為8% 15%的乙醇洗脫，收集4. 5 6. 0倍樹脂體積的紅花洗脫 液，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)紅花洗脫液的PH值為4. 0 4. 2，減壓濃縮至相對密度為1. 08 1. 25的羥基紅花黃色素清膏；即得羥基紅花黃色素A。用上述方法提取的丹酚酸B和羥基紅花黃色素A制備注射用丹紅的方法按如下步 驟進(jìn)行一、按照丹參和紅花藥材重量比為3 1的比例上述方法提取的丹酚酸B和羥基紅 花黃色素A，加入注射用水使配制成丹紅藥液并使丹紅藥液的含水量為75% 99%，攪拌 后用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)丹紅藥液的pH值為4. 0 4. 5，在0 10°C的條件下靜置12 48 小時；二、先用0. 22 μ m或0. 45 μ m的微孔濾膜過濾后，再經(jīng)過截流分子量為30K或50K的 Millipore超濾柱進(jìn)行超濾，將丹紅濾液分裝并凍干；即得到注射用丹紅。本發(fā)明的丹酚酸B的提取方法、羥基紅花黃色素A的提取方法及注射用丹紅的制 備方法具有以下優(yōu)點1、丹參采用35% 60%乙醇加鹽酸回流提取，有效地防止了有效成分丹酚酸B 在水溶液中的受熱分解，并且提取完全充分，提取率為85% 95%，是現(xiàn)有方法的1. 5 3倍。2、羥基紅花黃色素A提取率為85% 95%，是現(xiàn)有方法的1. 1 2. 4倍。3、丹參精制采取水洗液先過濾，后調(diào)pH值，再經(jīng)過大孔吸附樹脂柱，有效地防止 了有效成分被濾掉，使得有效單體成分丹酚酸B的含量及轉(zhuǎn)移率都在80%以上。4、在丹參和紅花的大孔樹脂精制時，均采用了大孔樹脂使用前酸化、洗脫時酸水 沖洗雜質(zhì)的方法，有效地減少了有效成分的損失。5、本發(fā)明的制備工藝所采用的大孔吸附樹脂成本低，在本制備工藝過程中吸附率 高、洗脫效果好、再生容易、使用壽命長，至少可重復(fù)使用20次以上。6、本發(fā)明的制備工藝所采用的截流分子量為30K或50K的Millipore超濾柱既可 以徹底有效地除掉藥液中的雜質(zhì)、細(xì)菌和熱原，又可以有效地保留有效成分。7、本發(fā)明的制備工藝操作過程比較簡單、容易、效率高、成本低，特別適合于工業(yè) 化生產(chǎn)。8、本發(fā)明產(chǎn)品有效成分含量控制采用丹酚酸B和羥基紅花黃色素A兩個單體有效 成分指標(biāo)，采用高效液相色譜法測定，測定方法準(zhǔn)確、簡單、穩(wěn)定，使得有效成分在生產(chǎn)過程 中的檢測和控制都非常穩(wěn)定，二者含量合計在60%以上。9、本發(fā)明將丹酚酸B和羥基紅花黃色素A根據(jù)它們物理性質(zhì)的差異分別進(jìn)行提 取，提取出的丹酚酸B和羥基紅花黃色素A不但提取率高，丹酚酸B的純度也提高了 40% 100%，羥基紅花黃色素A純度也提高了 30% 50%。10、現(xiàn)有的丹紅注射水針劑，由于水溶液中含氧氣，所以其中的丹酚酸B和羥基紅 花黃色素A容易氧化分解，長期儲存后顏色會變深并產(chǎn)生沉淀，藥物失效，而且水針劑不便 于運輸。
具體實施例方式具體實施方式
一本實施方式的丹酚酸B的提取方法按如下步驟進(jìn)行一、先向丹 參藥材飲片加入丹參飲片質(zhì)量8 18倍、質(zhì)量濃度為35% 60 %的乙醇和體積為乙醇體 積1%。 4%。、濃度為lmol/L的鹽酸浸泡1 2小時，然后回流提取1. 5 3小時，濾出丹 參藥液，再向藥渣加入藥渣質(zhì)量6 16倍、質(zhì)量濃度為35% 60%的乙醇和體積為乙醇體 積1%。 4%。、濃度為lmol/L的鹽酸，回流提取1 2小時，濾出丹參藥液，合并兩次提取的 丹參藥液，再減壓濃縮成相對密度為1. 16 1. 24的丹參清膏；二、向丹參清膏中加入丹參 清膏重量3 5倍的水，邊加水邊攪拌，室溫下靜置12 24小時，再過濾，丹參濾液用鹽酸 調(diào)節(jié)PH值為2. 8 3. 2，得到丹參酸化濾液；三、將大孔吸附樹脂柱用pH值為2. 8 3. 2的 鹽酸酸化，將步驟二得到的丹參酸化濾液上樣于大孔吸附柱上，用5 7倍樹脂體積pH值 為2. 8 3. 2的鹽酸沖洗雜質(zhì)，再用質(zhì)量濃度為35% 55%的乙醇洗脫，收集1. 5 2. 5 倍樹脂體積的丹參洗脫液，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)丹參洗脫液的PH值為4. 0 4. 2，減壓濃縮 至相對密度為1. 08 1. 25的丹酚酸清膏；即得到丹酚酸B。本實施方式中步驟一的丹參清膏的相對密度為40 60°C的條件下丹參清膏相對 于水的密度；步驟三的丹酚酸清膏的相對密度為40 60°C的條件下丹酚酸清膏相對于水 的密度。
具體實施方式
二 本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟一中先向丹參 藥材飲片加入丹參飲片質(zhì)量12 14倍、質(zhì)量濃度為45% 55%的乙醇和體積為乙醇體積 2%0 3%。、濃度為lmol/L的鹽酸浸泡1. 2 1. 8小時，然后回流提取2 2. 5小時。其它 步驟及參數(shù)與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟一中先向丹參 藥材飲片加入丹參飲片質(zhì)量13倍、質(zhì)量濃度為50%的乙醇和體積為乙醇體積2. 5%。、濃度 為lmol/L的鹽酸浸泡1. 5小時，然后回流提取2. 2小時。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
四本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟一中再向藥 渣加入藥渣質(zhì)量10 12倍、質(zhì)量濃度為48% 52%的乙醇和體積為乙醇體積1. 5%0 3. 5%。、濃度為lmol/L的鹽酸，回流提取1. 2 1. 8小時。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
五本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟一中再向藥渣 加入藥渣質(zhì)量11倍、質(zhì)量濃度為51%的乙醇和體積為乙醇體積2%。、濃度為lmol/L的鹽 酸，回流提取1.5小時。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
六本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟一中丹參藥液 減壓濃縮成相對密度為1. 18 1. 22的丹參清膏。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
七本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟一中丹參藥液 減壓濃縮成相對密度為1. 20的丹參清膏。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
八本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟二中向丹參清 膏中加入丹參清膏重量4倍的水。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
九本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟二中丹參清膏 加水后靜置15 21小時。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
十本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟二中丹參清膏 加水后靜置17 19小時。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
十一本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟二中丹參清 膏加水后靜置18小時。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
十二 本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟二中丹參濾 液用鹽酸調(diào)節(jié)PH值為3.0。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
一相同。本實施方式中鹽酸的質(zhì)量濃度為3% 10%。
具體實施方式
十三本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟三中將大孔 吸附樹脂柱用PH值為3. 0的鹽酸酸化。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
十四本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟三中用6倍 柱體積PH值3. 0的鹽酸沖洗雜質(zhì)。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
十五本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟三中再用質(zhì) 量濃度為40% 50%的乙醇洗脫。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
十六本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟三中再用質(zhì) 量濃度為55%的乙醇洗脫。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
十七本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟三中用氫氧 化鈉溶液調(diào)節(jié)丹參洗脫液的PH值為4. 1。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
一相同。本實施方式中氫氧化鈉溶液的質(zhì)量濃度為3% 10%。
具體實施方式
十八本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟三中減壓濃 縮至相對密度為1. 16 1. 20的丹酚酸清膏。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
十九本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟三中減壓濃 縮至相對密度為1. 18的丹酚酸清膏。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
二十本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟三中大孔吸 附樹脂的型號為HZ801、AB-8或D101。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
二十一本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟三中上樣 流速為1個樹脂體積/小時 1. 5個樹脂體積/小時。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
一 相同。
具體實施方式
二十二 本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟三中沖洗 雜質(zhì)的流速為1個樹脂體積/小時 1. 5個樹脂體積/小時。其它步驟及參數(shù)與具體實施 方式一相同。
具體實施方式
二十三本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟三中洗脫 流速為1個樹脂體積/小時 1. 5個樹脂體積/小時。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
一 相同。
具體實施方式
二十四本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟三中收集 2倍樹脂體積的丹參洗脫液。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
二十五本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟三中大孔 吸附樹脂的重量為丹參重量的2倍。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
二十六本實施方式的羥基紅花黃色素A的提取方法按如下步驟進(jìn) 行一、先向紅花加入質(zhì)量為紅花質(zhì)量16 20倍的水浸泡20 40分鐘，煎煮20 40分鐘，濾出紅花藥液，再向藥渣加入質(zhì)量為藥渣質(zhì)量14 18倍的水，煎煮20 40分鐘，濾出 紅花藥液，合并兩次濾出的紅花藥液，冷卻至室溫；二、紅花藥液用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至1. 9 2. 2，靜置6 24小時，再過濾，得到紅花酸化濾液；三、將大孔吸附樹脂柱用pH值為1. 9 2. 2的鹽酸酸化，將步驟二得到的紅花酸化濾液上樣于大孔吸附柱上，用6 8倍樹脂體積 PH值為1.9 2. 2的鹽酸沖洗雜質(zhì)，再用質(zhì)量濃度為8% 15%的乙醇洗脫，收集4. 5 6. 0倍樹脂體積的紅花洗脫液，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)紅花洗脫液的pH值為4. 0 4. 2，減壓 濃縮至相對密度為1. 08 1. 25的羥基紅花黃色素清膏；即得羥基紅花黃色素A。本實施方式中步驟三的羥基紅花黃色素清膏的相對密度為40 60°C的條件下羥 基紅花黃色素清膏相對于水的密度。
具體實施方式
二十七本實施方式與具體實施方式
二十六的不同點是步驟一中 先向紅花加入質(zhì)量為紅花質(zhì)量17 19倍的水浸泡25 35分鐘，煎煮25 35分鐘。其 它步驟及參數(shù)與具體實施方式
二十六相同。
具體實施方式
二十八本實施方式與具體實施方式
二十六的不同點是步驟一中 先向紅花加入質(zhì)量為紅花質(zhì)量18倍的水浸泡30分鐘，煎煮30分鐘。其它步驟及參數(shù)與具 體實施方式二十六相同。
具體實施方式
二十九本實施方式與具體實施方式
二十六的不同點是步驟一中 再向藥渣加入質(zhì)量為藥渣質(zhì)量15 17倍的水，煎煮25 30分鐘。其它步驟及參數(shù)與具 體實施方式二十六相同。
具體實施方式
三十本實施方式與具體實施方式
二十六的不同點是步驟一中再 向藥渣加入質(zhì)量為藥渣質(zhì)量16倍的，煎煮28分鐘。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
二十六 相同。
具體實施方式
三十一本實施方式與具體實施方式
二十六的不同點是步驟二中 紅花藥液用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至2. 0 2. 1，靜置10 20小時。其它步驟及參數(shù)與具體實施 方式二十六相同。
具體實施方式
三十二 本實施方式與具體實施方式
二十六的不同點是步驟二中 紅花藥液用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至2.0，靜置15小時。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
二十六相 同。本實施方式的鹽酸質(zhì)量濃度為3% 10%。
具體實施方式
三十三本實施方式與具體實施方式
二十六的不同點是步驟三中 將大孔吸附樹脂柱用PH值為2. 1的鹽酸酸化。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
二十六相 同。
具體實施方式
三十四本實施方式與具體實施方式
二十六的不同點是步驟三中 用7倍樹脂體積pH值2. 0的鹽酸沖洗雜質(zhì)。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
二十六相同。
具體實施方式
三十五本實施方式與具體實施方式
二十六的不同點是步驟三中 再用質(zhì)量濃度為10% 12%的乙醇洗脫。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
二十六相同。
具體實施方式
三十六本實施方式與具體實施方式
二十六的不同點是步驟三中 再用質(zhì)量濃度為11%的乙醇洗脫。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
二十六相同。
具體實施方式
三十七本實施方式與具體實施方式
二十六的不同點是步驟三中 用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)紅花洗脫液的PH值為4. 1。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
二十六相同。本實施方式的氫氧化鈉溶液的質(zhì)量濃度為3% 10%。
具體實施方式
三十八本實施方式與具體實施方式
二十六的不同點是步驟三中 減壓濃縮至相對密度為1. 12 1. 20的羥基紅花黃色素清膏。其它步驟及參數(shù)與具體實施 方式二十六相同。
具體實施方式
三十九本實施方式與具體實施方式
二十六的不同點是步驟三中 減壓濃縮至相對密度為1. 16的羥基紅花黃色素清膏。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
二十六相同。
具體實施方式
四十本實施方式與具體實施方式
二十六的不同點是步驟三中大 孔吸附樹脂的型號為X-5或D4020。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
二十六相同。
具體實施方式
四十一本實施方式與具體實施方式
二十六的不同點是步驟三中 上樣流速為1個樹脂體積/小時 1. 5個樹脂體積/小時。其它步驟及參數(shù)與具體實施方 式二十六相同。
具體實施方式
四十二 本實施方式與具體實施方式
二十六的不同點是步驟三中 沖洗雜質(zhì)的流速為1個樹脂體積/小時 1. 5個樹脂體積/小時。其它步驟及參數(shù)與具體 實施方式二十六相同。
具體實施方式
四十三本實施方式與具體實施方式
二十六的不同點是步驟三中 洗脫流速為1個樹脂體積/小時 1. 5個樹脂體積/小時。其它步驟及參數(shù)與具體實施方 式二十六相同。
具體實施方式
四十四本實施方式與具體實施方式
二十六的不同點是步驟三中 收集5倍樹脂體積的紅花洗脫液。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
二十六相同。
具體實施方式
四十五本實施方式與具體實施方式
二十六的不同點是步驟三中 大孔吸附樹脂的重量為紅花重量的4倍。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
二十六相同。
具體實施方式
四十六本實施方式用具體實施方式
一提取的丹酚酸B和具體實施 方式二十六提取的羥基紅花黃色素A制備注射用丹紅的方法按如下步驟進(jìn)行一、按照丹 參和紅花藥材重量比為31的比例取具體實施方式
一提取的丹酚酸B和具體實施方式
二十六提取的羥基紅花黃色素A，加入注射用水使配制成丹紅藥液并使丹紅藥液的含水量 為75% 99%，攪拌后用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)丹紅藥液的pH值為4. 0 4. 5，在0 10°C的 條件下靜置12 48小時；二、先用0. 22 μ m或0. 45 μ m的微孔濾膜過濾后，再經(jīng)過截流分 子量為30K或50K的Millipore超濾柱進(jìn)行超濾，將丹紅濾液分裝并凍干；即得到注射用丹 紅。
具體實施方式
四十七本實施方式與具體實施方式
四十六的不同點是步驟一中 使丹紅藥液的含水量為80% 95%。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
四十六相同。
具體實施方式
四十八本實施方式與具體實施方式
四十六的不同點是步驟一中 使丹紅藥液的含水量為85% 90%。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
四十六相同。
具體實施方式
四十九本實施方式與具體實施方式
四十六的不同點是步驟一中 使丹紅藥液的含水量為88%。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
四十六相同。
具體實施方式
五十本實施方式與具體實施方式
四十六的不同點是步驟一中 用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)丹紅藥液的PH值為4. 2 4. 4。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
四十六四相同。本實施方式的氫氧化鈉溶液的質(zhì)量濃度為3% 10%。
具體實施方式
五十一本實施方式與具體實施方式
四十六的不同點是步驟一中 用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)丹紅藥液的PH值為4. 3。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
四十六相 同。
具體實施方式
五十二 本實施方式與具體實施方式
四十六的不同點是步驟一中 在2 8°C的條件下靜置18 30小時。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
四十六相同。
具體實施方式
五十三本實施方式與具體實施方式
四十六的不同點是步驟一中 在4 6°C的條件下靜置25 28小時。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
四十六相同。
具體實施方式
五十四本實施方式與具體實施方式
四十六的不同點是步驟一中 在5°C的條件下靜置27小時。其它步驟及參數(shù)與具體實施方式
四十六相同。
具體實施方式
五十五本實施方式的注射用丹紅的制備方法按如下步驟進(jìn)行 一、提取丹酚酸B; 二、提取羥基紅花黃色素A ；三、按照丹參和紅花藥材重量比為3 1的 比例取步驟一提取的丹酚酸B和步驟二提取的羥基紅花黃色素A，加入注射用水使配制成 丹紅藥液并使丹紅藥液的含水量為85%，攪拌后用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)丹紅藥液的pH值為 4. 2，在5°C的條件下靜置40小時；四、先用0. 22 μ m的微孔濾膜過濾后，再經(jīng)過截流分子量 為30K的Millipore超濾柱進(jìn)行超濾，將丹紅濾液分裝并凍干；即得到注射用丹紅。本實施方式步驟一提取丹酚酸B的方法為一、先向丹參藥材飲片加入丹參飲片 質(zhì)量16倍、質(zhì)量濃度為50%的乙醇和體積為乙醇體積2%。、濃度為lmol/L的鹽酸浸泡1. 5 小時，然后回流提取2小時，濾出丹參藥液，再向藥渣加入藥渣質(zhì)量12倍、質(zhì)量濃度為55% 的乙醇和體積為乙醇體積2%。、濃度為lmol/L的鹽酸，回流提取1. 5小時，濾出丹參藥液，合 并兩次提取的丹參藥液，再減壓濃縮成相對密度為1. 18的丹參清膏；二、向丹參清膏中加 入丹參清膏重量4倍的水，邊加水邊攪拌，室溫下靜置20小時，再過濾，丹參濾液用鹽酸調(diào) 節(jié)pH值為2. 9，得到丹參酸化濾液；三、將大孔吸附樹脂柱用pH值為2. 9的鹽酸酸化，將步 驟二得到的丹參酸化濾液上樣于大孔吸附柱上，上樣流速為1個樹脂體積/小時 1. 5個 樹脂體積/小時，用6倍樹脂體積pH值2. 9的鹽酸沖洗雜質(zhì)，洗脫流速為1個樹脂體積/ 小時 1. 5個樹脂體積/小時，再用2倍柱體積、質(zhì)量濃度為50%的乙醇洗脫，洗脫流速為 1個樹脂體積/小時 1. 5個樹脂體積/小時，收集2. 0倍樹脂體積的丹參洗脫液，用氫氧 化鈉溶液調(diào)節(jié)丹參洗脫液的PH值為4. 1，減壓濃縮至相對密度為1. 16的丹酚酸清膏；即得 到丹酚酸B。本實施方式步驟二提取羥基紅花黃色素A的方法為一、先向紅花加入質(zhì)量為紅 花質(zhì)量18倍的水浸泡30分鐘，煎煮30分鐘，濾出紅花藥液，再向藥渣加入質(zhì)量為藥渣質(zhì)量 16倍的水浸泡35分鐘，煎煮35分鐘，濾出紅花藥液，合并兩次濾出的紅花藥液，冷卻至室 溫；二、紅花藥液用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至2. 0，靜置18小時，再過濾，得到紅花酸化濾液；三、將 大孔吸附樹脂柱用PH值為2. 0的鹽酸酸化，將步驟二得到的紅花酸化濾液上樣于大孔吸附 柱上上樣流速為1個樹脂體積/小時 1. 5個樹脂體積/小時，用7倍柱體積pH值2. 0的 鹽酸沖洗雜質(zhì)，洗脫流速為1個樹脂體積/小時 1. 5個樹脂體積/小時，再用質(zhì)量濃度為 12%的乙醇洗脫，洗脫流速為1個樹脂體積/小時 1. 5個樹脂體積/小時，收集5. 0倍樹 脂體積的紅花洗脫液，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)紅花洗脫液的PH值為4. 1，減壓濃縮至相對密
9度為1. 16的羥基紅花黃色素清膏；即得羥基紅花黃色素A。將本實施方式制得的注射用丹紅進(jìn)行如下藥效學(xué)試驗研究1、注射用丹紅對冠脈結(jié)扎所致犬心肌梗塞模型及血流動力學(xué)的影響目的觀察注射用丹紅給藥對冠脈結(jié)扎所致犬心肌梗死及血流動力學(xué)的影響。方法取健康成年家犬30只，雌雄各半，體重13. 6士 1.25kg，按體重隨機(jī)分為5 組，分別為模型組、注射用丹紅低、中、高劑量組和丹紅注射液陽性對照組。試驗時將犬以 戊巴比妥鈉30mg · kg"1麻醉，氣管插管，連接人工呼吸機(jī)，以針狀電極插入四肢及胸前皮 下。沿胸骨左緣3-4肋間開胸，充分暴露心臟。剪開心包縫制心包吊床。用0號絲線結(jié)扎 左冠狀動脈前降支上中1/3處，結(jié)扎15min后各組分別給藥，注射用丹紅低、中、高劑量組 給藥劑量分別為3mg · kg-\6mg · kg—1、和12mg · kg—1，陽性對照組給予丹紅注射液，給藥劑 量為4ml · kg—1，模型組給予相應(yīng)體積的0. 9%氯化鈉注射液。用多導(dǎo)生理記錄儀記錄結(jié)扎 前、結(jié)扎穩(wěn)定后、給藥后15min、30min、60min、90min、120min、180min心外膜電圖EKG，并計 算Σ -ST和NST。用多導(dǎo)生理記錄儀、多普勒血流儀檢測記錄結(jié)扎前、結(jié)扎穩(wěn)定后和給藥后 1511^11、301^11、601^11、901^11、1201^11、1801^11血流動力學(xué)生理參數(shù)。分離頸動脈，抽取動脈 血，經(jīng)頸外靜脈插管至冠狀靜脈竇取冠狀靜脈血以血氧計測血氧含量。同時抽血2ml用自 動生化分析儀測定血清乳酸脫氫酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)的含量。藥后3h，取心臟稱 重，TTC染色測定心肌梗死面積。結(jié)果(1)心肌缺血程度(Σ -ST)和心肌缺血范圍(NST)冠脈結(jié)扎后，各組犬ST 段明顯抬高。與同期模型組相比，注射用丹紅各劑量組和陽性對照藥丹紅注射液藥后Σ-ST 和NST均有降低，高劑量組藥后30 90min的Σ -ST、藥后60 120min的NST顯著降低， 與模型組比較有顯著性差異(P < 0. 05)，其他時間點雖無統(tǒng)計學(xué)差異，但均有降低趨勢；中 劑量組藥后60min的Σ _ST、藥后60 90min的NST顯著降低，與模型組比較有顯著性差異 (P < 0. 05)；低劑量組Σ -ST和NST均有降低趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異；丹紅注射液陽性對照 組藥后30min、60 90min分別對Σ -ST的抬高和NST的增加有明顯抑制作用，與模型組比 較有顯著性差異(P <0.05)。與陽性對照組比較，注射用丹紅低、中、高劑量組藥后各時間 點Σ -ST和NST無顯著性差異，但注射用丹紅高劑量有進(jìn)一步降低Σ -ST和NST趨勢，具體 實驗數(shù)據(jù)如表1和表2所示。表1注射用丹紅對急性心肌缺血心外膜電圖Σ -ST (x±S, mv)的影響 注①n= 6 ；②*P<0. 05，**P<0. 01，與模型組比較；③ ΔΡ < 0. 05，Δ ΔΡ < 0. 01
與藥前值比較。(2)心肌梗死范圍冠脈結(jié)扎后195min各組犬均出現(xiàn)明顯的心肌梗死，與模型組 相比，陽性對照藥和注射用丹紅各劑量均明顯縮小心肌梗死范圍。注射用丹紅中劑量組 心肌梗死區(qū)面積占左心室及全心的比例分別較模型組低2. 68%和6. 36%，高劑量組分別 降低3. 06%和6. 55%，均有明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P <0.05)；注射用丹紅低劑量組分別降低 1.29%和5. 15%，有降低趨勢，但無明顯的統(tǒng)計學(xué)意義；陽性對照組心肌梗死區(qū)面積占左 心室及全心的比例分別較模型組低2. 18%和5. 75%，有明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P<0. 05)。與陽 性對照組比較，注射用丹紅低、中、高劑量組心肌梗死區(qū)面積無顯著性差異，但注射用丹紅 高劑量有進(jìn)一步降低心肌梗死區(qū)面積趨勢，具體實驗數(shù)據(jù)如表3所示。表3注射用丹紅對冠狀動脈結(jié)扎犬心肌梗塞范圍([±S:>的影響 注①η = 6 ；②* P < 0. 05，* * P < 0. 01，與模型組比較。(3)肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)冠狀動脈結(jié)扎后各組動物血清CK和LDH 較結(jié)扎前明顯升高。注射用丹紅各劑量組和陽性對照組藥后ISOmin血清酶雖亦有升高，但 升高的幅度均有不同程度的降低。與模型組比較，注射用丹紅3mg · kg"1藥后ISOmin對血 清酶的升高有一定抑制趨勢，但無顯著性差異；6mg · kg"1和12mg · kg-1給藥可明顯抑制血 清LDH、CK的活性升高(P < 0. 05或P < 0. 01)。丹紅注射液藥后亦可顯著抑制血清LDH、 CK的升高，與模型組比較有顯著性差異(P<0.05)。與陽性對照組比較，注射用丹紅低、 中、高劑量組抑制血清LDH、CK的活性升高作用無顯著性差異，但注射用丹紅高劑量組可進(jìn) 一步抑制LDH、CK的活性升高程度，具體實驗數(shù)據(jù)如表4和表5所示。表4注射用丹紅對冠狀動脈結(jié)扎犬血清乳酸脫氫酶( ±S，U/L)的影響 注①η = 6 ；②* P < 0. 05，* * P < 0. 01，與模型組比較。表5注射用丹紅對冠狀動脈結(jié)扎犬血清肌酸肌酶(，U/L)的影響 注①η = 6 ；②*P < 0. 05，**P < 0.01，與模型組比較。(4)左心室內(nèi)壓(LVP)、左心室舒張末壓(LVEDP)及左心室內(nèi)壓最大變化速率(dp/ dtmax)與模型組比較，注射用丹紅各劑量和陽性對照組結(jié)扎后15min給藥，LVP未見變化； 對于LVEDP，注射用丹紅中、高劑量組和丹紅注射液陽性對照組對心肌收縮性能下降引起的 左心室舒張期末壓升高有顯著的降低作用，藥后90 ISOmin與模型組比較有顯著性差異 (P < 0. 05或P < 0. 01)，注射用丹紅低劑量給藥后對左心室舒張期末壓升高有一定抑制趨 勢，但無顯著性差異，具體實驗數(shù)據(jù)如表6、表7和表8所示。表6注射用丹紅對犬dp/dtmax的影響( 注:*P<0.05，<0.01，與模型組比較。表8注射用丹紅對犬LVP的影響( 注*P <0.05，** 1 <0.01，與模型組比較。對于dp/dtmax，與模型組比較，注射用丹紅中、高劑量組和丹紅注射液陽性對照組 均有增加作用，藥后90 ISOmin與模型組比較有顯著性差異(P < 0. 05)，注射用丹紅低劑 量給藥后對dp/dtmax有增加趨勢，但無顯著性差異。與陽性對照組比較，注射用丹紅低、中、高劑量組LVP、LVEDP和dp/dtmax差異不明 顯，但注射用丹紅高劑量組LVEDP、dp/dtmax分別有進(jìn)一步降低和增加趨勢。(5)主動脈流量(CO)和冠狀動脈流量(CAF)與模型組比較，注射用丹紅中、高劑 量給藥后，對麻醉犬CO和CAF藥后變化率有增加作用，分別于藥后60 120min和60 ISOmin有顯著性差異(P<0. 05)，其他時間點雖無統(tǒng)計學(xué)差異，但均有增加趨勢；注射用丹 紅低劑量藥后CO和CAF藥后變化率亦有增加趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異。丹紅注射液陽性對照 組藥后90 120min對CO和CAF藥后變化率有明顯增加作用，與模型組比較有顯著性差異 (P < 0. 05)。與陽性對照組比較，注射用丹紅低、中、高劑量組CO、CAF無顯著性差異，但注 射用丹紅高劑量有進(jìn)一步增加CO、CAF趨勢，具體實驗數(shù)據(jù)如表9和表10所示。表9注射用丹紅對犬CO的影響( 注①η = 6 ；②*P < 0. 05，< 0. 01，與模型組比較。表10注射用丹紅對犬CAF的影響(x±S) 注①η = 6 ；②*Ρ < 0·05，**Ρ < 0.01，與模型組比較。(6)動靜脈血氧含量與模型組進(jìn)行比較，注射用丹紅中、高劑量組和丹紅注射液 陽性對照組于給藥后60min開始，動靜脈血氧含量差值明顯上升(P < 0. 05或P < 0. 01)， 其中注射用丹紅高劑量組作用時間可達(dá)藥后180min。注射用丹紅低劑量組有增加趨勢，但 無顯著性差異。與陽性對照組比較，注射用丹紅低、中、高劑量組動靜脈血氧含量差值各時 間點均無顯著性差異，但注射用丹紅高劑量組可進(jìn)一步增加動靜脈血氧含量差值，具體實 驗數(shù)據(jù)如表11所示。表11注射用丹紅對犬動靜脈血氧含量差值的影響 注①η = 6 ；②*P < 0. 05，**P < 0. 01，與模型組比較。結(jié)論⑴本試驗?zāi)Ｐ腿诿}結(jié)扎后Σ -ST和NST升高，血清LDH和CK活性增加， 結(jié)扎后195min心肌梗死面積明顯，說明模型制備成功。(2)注射用丹紅對犬心肌缺血有明顯的保護(hù)作用，具有改善心血管功能、促進(jìn)血液 循環(huán)、增加動靜脈血氧含量差值等功效，其起效劑量為3 6mg · kg—1。在本試驗條件下，陽 性對照藥丹紅注射液和注射用丹紅6mg · kg—1對犬心肌梗死引起的Σ -ST、NST升高，血清 LDH、CK活性增加和LVEDP升高有明顯的降低作用，對dp/dtmax、CO、CAF和動靜脈血氧含量 差值有增加作用，與模型組分別比較均有顯著性差異(P <0.05)；注射用丹紅3mg· kg—1對 以上指標(biāo)均有一定作用趨勢，但與模型組比較差異不明顯；注射用丹紅12mg -kg"1能進(jìn)一步 改善犬心肌缺血指標(biāo)和dp/dtmax、CO、CAF和動靜脈血氧含量。隨用藥劑量的增加注射用丹 紅作用呈現(xiàn)一定的劑量效應(yīng)關(guān)系，藥后30min開始起效，藥效時間可達(dá)藥后180min。(3)與陽性對照藥比較，注射用丹紅6mg · kg—1作用效果與其相當(dāng)。與丹紅注射液 比較，注射用丹紅12mg -kg"1對Σ -ST,NST升高、血清LDH、CK活性增加、LVEDP升高的降低 作用和對dp/dtmax、CO、CAF和動靜脈血氧含量差值的增加作用雖無統(tǒng)計學(xué)差異，但程度有進(jìn)一步改善；注射用丹紅3mg · kg—1對以上指標(biāo)有一定作用趨勢，與丹紅注射液比較無顯著 性差異，但作用程度較輕。(4)由以上藥效學(xué)研究結(jié)果提示，注射用丹紅臨床用藥有效起始劑量約為1. 5 3mg · kg"1,以人體體重60kg計推薦臨床擬用給藥劑量約為90 180mg。2、注射用丹紅對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型的影響目的觀察注射用丹紅給藥對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。方法取健康雄性Wistar大鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，按體重隨機(jī)分為6組假手術(shù) 組、模型組、注射用丹紅低、中、高劑量組，和陽性對照組。采用改進(jìn)的Zea Longa's大腦 中動脈內(nèi)栓線阻斷法(MCAO)制備大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型，并于缺血1.5h后進(jìn) 行再灌注。試驗過程中，MCAO手術(shù)失敗，造模不成功及24h內(nèi)死亡的動物均棄之不用，不 足預(yù)定數(shù)額者按照隨機(jī)抽樣原則補(bǔ)齊動物并重新造模，并保證每組造模成功的動物數(shù)為8 只。假手術(shù)組給予相應(yīng)體積0. 9%氯化鈉注射液，注射用丹紅低、中、高組給藥劑量分別為 IOmg · kg"\20mg · kg-1和40mg · kg—1，陽性對照組給予丹紅注射液，給藥劑量為12ml · kg—1。 各組分別于腦缺血即刻尾靜脈注射相應(yīng)藥物。腦缺血1. 5h再灌注24h后，各組動物進(jìn)行神 經(jīng)病學(xué)檢查，繼而斷頭取腦經(jīng)TTC染色后測定缺血側(cè)腦組織梗死體積。結(jié)果與假手術(shù)組相比，模型組大鼠局灶性腦缺血1. 5h再灌注損傷24h后神經(jīng)功 能缺損體征明顯，缺血側(cè)腦組織肉眼可見明顯的乳白色梗死灶，并伴有水腫，同時缺血側(cè)血 管腫脹較明顯，TTC染色可見明顯的梗死灶，說明模型制備成功，滿足本試驗要求。與模型 組相比，陽性對照組及各用藥組缺血再灌注損傷大鼠的神經(jīng)功能障礙均有改善，腦梗死體 積明顯縮小，缺血側(cè)腦水腫程度減輕。陽性對照組腦梗死面積減小12%，有明顯統(tǒng)計學(xué)意 義(P < 0. 05)。低劑量組腦梗死體積減小5%，但無明顯的統(tǒng)計學(xué)意義；中劑量組腦梗死體 積降低14%，高劑量組降低18%，兩組均有明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0. 01)。與陽性對照組比 較，低、中劑量組無明顯差異，高劑量組有統(tǒng)計學(xué)差異(P < 0. 05)，比丹紅注射液治療效果 好，具體實驗數(shù)據(jù)見表12和表13。表12注射用丹紅對大鼠神經(jīng)行為學(xué)改變的影響
組別劑量(mg'kg"1)神經(jīng)學(xué)評分P0123假手術(shù)組/8000模型組/0242丹紅注射液組12 ml.kg14400*><0.01注射用丹紅組101430202600"><0.01403500*><0.01注η= 8 ;*P < 0. 05，**P < 0. 01，與模型組比較。表13注射用丹紅對大鼠腦梗死面積的影響
20 注η = 8廣P < 0. 05，η P < 0. 01，與模型組比較；ΔΡ < 0. 05，與丹紅注射液組 比較。結(jié)論(1)本試驗?zāi)Ｐ徒M大鼠神經(jīng)功能學(xué)評分符合模型成功的標(biāo)準(zhǔn)，TTC染色可見 明顯腦梗死灶，說明模型制備成功。陽性對照藥可顯著改善大鼠腦缺血再灌注損傷。(2)注射用丹紅IOmg Ag4對損傷有一定的改善作用，但在統(tǒng)計學(xué)上與模型組無明 顯差異。20mg · kg"1對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷有明顯的保護(hù)作用，可改善缺血1. 5h 再灌注24h后神經(jīng)功能缺損癥狀，顯著縮小腦梗死體積，減輕缺血側(cè)腦水腫程度。40mg -kg"1 可進(jìn)一步降低腦損傷程度，且較陽性對照組治療效果好。隨用藥劑量的增加，腦梗死體積逐 漸減小，呈現(xiàn)一定的劑量效應(yīng)關(guān)系。(3)與陽性對照藥丹紅注射液比較，注射用丹紅低劑量IOmg · kg—1效果不明顯，中 劑量20mg · kg"1療效與其相當(dāng)；高劑量40mg · kg—1可明顯改善缺血再灌注損傷大鼠的神經(jīng) 功能障礙，腦梗死體積顯著縮小，缺血側(cè)腦水腫程度減輕，較丹紅注射液治療效果好。(4)由以上藥效學(xué)研究結(jié)果提示，注射用丹紅臨床用藥有效起始劑量約為1. 7 3. 3mg · kg"1,以人體體重60kg計推薦臨床治療腦中風(fēng)擬用給藥劑量約為100 200mg。3、注射用丹紅對ADP誘發(fā)的小鼠急性肺栓塞的影響目的觀察注射用丹紅多次尾給藥對ADP所致小鼠急性肺栓塞的影響。方法取健康成年昆明小鼠50只，按體重隨機(jī)分為空白組(Veh)、注射用丹紅低、 中、高劑量組及陽性對照組，每組10只，雌雄各半。連續(xù)尾給藥3天，Veh組給予相應(yīng)體積 的0. 9%氯化鈉注射液，注射用丹紅給藥劑量分別為15、30、和60mg · kg_S陽性對照組給予 丹紅注射液，劑量為20ml · kg—1。于末次給藥后Ih尾靜脈注射ADP 0. 25g · kg_S造急性肺 栓塞模型，記錄注射誘導(dǎo)劑后至小鼠呼吸正常，四肢恢復(fù)自主活動所需的時間。結(jié)果與Veh組相比，陽性對照組小鼠恢復(fù)自主活動所需時間降低131s，有顯著 統(tǒng)計學(xué)差異(P <0.01)。注射用丹紅低、中、高劑量組小鼠恢復(fù)自主活動所需的時間明 顯縮短，其中低劑量組縮短98s，中、高劑量分別縮短136s、165s，均有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P <0.01)。與陽性對照組比較，低、中、高劑量組均無明顯統(tǒng)計學(xué)差異，具體實驗數(shù)據(jù)見表 14。表14注射用丹紅對ADP致小鼠急性肺栓塞的影響(；士S, s)
21 注n= 10 ;**P < 0.01，與 Veh 組比較。結(jié)論⑴注射用丹紅15mg · kg"1可顯著縮短ADP誘發(fā)的小鼠急性肺栓塞后恢復(fù) 自主活動所需時間(P < 0. 01)，中劑量30mg · kg-1和高劑量60mg · kg-1也可明顯縮短恢復(fù) 自主活動所需時間(P<0.01)。且隨給藥劑量的增加，可使ADP誘發(fā)的小鼠急性肺栓塞后 恢復(fù)自主活動所需時間逐漸縮短，存在明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系。(2)與陽性對照藥丹紅注射液比較，低劑量組作用效果不顯著，中、高劑量組療效 較其有改善，但無統(tǒng)計學(xué)意義。(3)由以上藥效學(xué)研究結(jié)果提示，注射用丹紅臨床用藥有效起始劑量約為1. 5 3mg · kg"1,以人體體重60kg計推薦臨床治療淤血型肺心病擬用給藥劑量約為90 180mg。4、注射用丹紅對小鼠凝血時間的影響目的觀察注射用丹紅多次尾給藥對小鼠凝血時間的影響。方法健康成年昆明小鼠50只，按體重隨機(jī)分為空白組(Veh)、注射用丹紅低、中、 高劑量組及陽性對照組，每組10只，雌雄各半。連續(xù)尾給藥3天，Veh組給予相應(yīng)體積的 0. 9%氯化鈉注射液，注射用丹紅給藥劑量分別為15mg -kg^^Omg .kg—1和60mg .kg—1，陽性 對照組給予丹紅注射液，劑量為20ml ^kgl于末次給藥后1小時用眼科彎鑷迅速摘去一側(cè) 眼球，舍棄第一滴血，將血液滴于潔凈的載玻片上，直徑約為5 10mm，秒表計時，每隔30s 用清潔大頭針自血液邊緣向里輕輕挑動1次，觀察有無血絲挑起。從采血開始至挑起絲時 間血即為凝血時間。結(jié)果與Veh組相比，注射用丹紅各劑量組小鼠凝血時間明顯延長，其中低劑量組 延長27s，但無統(tǒng)計學(xué)意義。中劑量組延長54s，具有統(tǒng)計學(xué)差異(P <0.05)。高劑量組小 鼠凝血時間延長129s，具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P < 0. 01)。與陽性對照組比較，低劑量組有 統(tǒng)計學(xué)差異(P < 0. 05)，中、高劑量組無顯著統(tǒng)計學(xué)差異，具體實驗數(shù)據(jù)見表15。表15注射用丹紅對小鼠凝血時間的影響
組別劑量(mpkg4)凝血時間(S)Veh/192±37.95丹紅注射液組20 ml.kg1276±53.3(Γ注射用丹紅組15219±40.12δ
22 注n=10;*P<0.05 <0.01，與 Veh 組比較；ΔΡ< 0.05，與丹紅注射液組比較。結(jié)論(1)注射用丹紅15mg · kg—1可對小鼠凝血時間有一定的延長作用，但與Veh 組相比，無統(tǒng)計學(xué)差異。30mg · kg—1可明顯延長小鼠凝血時間，高劑量組60mg · kg—1效果更 明顯。且隨用藥劑量的增加，注射用丹紅使小鼠凝血時間遞增，表現(xiàn)明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系。(2)與陽性對照藥丹紅注射液比較，低劑量組療效沒有其明顯，中、高劑量組作用 效果較其有改善，但無統(tǒng)計學(xué)意義。(3)由以上藥效學(xué)研究結(jié)果提示，注射用丹紅臨床用藥有效起始劑量約為1. 5 3mg · kg"1,以人體體重60kg計推薦臨床治療擬用給藥劑量約為90 180mg。5、注射用丹紅對大鼠血小板聚集率的影響目的觀察注射用丹紅多次尾給藥對大鼠血小板聚集率的影響。方法取健康成年Wistar大鼠50只，按體重隨機(jī)分為空白組(Veh)、注射用丹紅 低、中、高劑量組及陽性對照組。每組10只，雌雄各半。連續(xù)尾給藥3天，Veh組給予相應(yīng)體 積的0. 9%氯化鈉注射液，注射用丹紅給藥劑量分別為IOmg -kg-\20mg .kg—1和40mg .kg—1， 陽性對照組給予丹紅注射液，給藥劑量為12ml呤一，于末次給藥后Ih頸靜脈竇取血，3. 8% 枸櫞酸鈉抗凝。將抗凝血離心(800rpm、10min)，吸取上層血漿(為富血小板血漿，PRP)將 剩余部分再次離心(3000rpm、15min)，吸取上層血漿(為貧血小板血漿，PPP)，然后用血小 板聚集儀測透光率的變化，求算血小板聚集率，具體實驗數(shù)據(jù)如表16所示。表16注射用丹紅對大鼠血小板聚集率的影響的影響(Slts) 注*P< 0. 05，**P < 0. 01，與 Veh 組比較;ΔΡ < 0. 05，ΔΔΡ < 0. 01，與丹紅注射
液組比較。結(jié)果與Veh組相比，注射用丹紅低、中、高劑量組大鼠血小板聚集率均明顯下降， 其中低劑量使血小板聚集率下降10%，但無統(tǒng)計學(xué)差異。中、高劑量組下降14%、22%，均 有統(tǒng)計學(xué)差異(P <0.05)，而高劑量組差異極顯著(P <0.01)，說明注射用丹紅可以有效 抑制ADP及Collagen誘導(dǎo)的血小板聚集率。與陽性對照組比較，注射用丹紅低、中、高劑量組無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論(1)注射用丹紅IOmg · kg—1可在一定程度上降低大鼠血小板聚集率。 20mg · kg"1可顯著抑制血小板聚集，40mg · kg—1抑制作用更強(qiáng)。同時隨劑量增加，血小板聚 集抑制作用增強(qiáng)，有一定的劑量效應(yīng)關(guān)系。(2)與陽性對照藥丹紅注射液比較，低、中劑量組效果不顯著，高劑量組療效較其 有進(jìn)一步改善，但沒有顯著性差異。(3)由以上藥效學(xué)研究結(jié)果提示，注射用丹紅臨床用藥有效起始劑量約為1. 7 3. 3mg · kg"1,以人體體重60kg計推薦臨床治療擬用給藥劑量約為100 200mg。
權(quán)利要求
注射用丹紅的制備方法，其特征在于注射用丹紅的制備方法按如下步驟進(jìn)行一、按照丹參和紅花藥材重量比為3∶1的比例下述方法提取的丹酚酸B和下述方法提取的羥基紅花黃色素A，加入注射用水使配制成丹紅藥液并使丹紅藥液的含水量為75％～99％，攪拌后用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)丹紅藥液的pH值為4.0～4.5，在0～10℃的條件下靜置12～48小時，其中丹酚酸B的提取方法按如下步驟進(jìn)行一、先向丹參藥材飲片加入丹參飲片質(zhì)量8～18倍、質(zhì)量濃度為35％～60％的乙醇和體積為乙醇體積1‰～4‰、濃度為1mol/L的鹽酸浸泡1～2小時，然后回流提取1.5～3小時，濾出丹參藥液，再向藥渣加入藥渣質(zhì)量6～16倍、質(zhì)量濃度為35％～60％的乙醇和體積為乙醇體積1‰～4‰、濃度為1mol/L的鹽酸，回流提取1～2小時，濾出丹參藥液，合并兩次提取的丹參藥液，再減壓濃縮成相對密度為1.16～1.24的丹參清膏；二、向丹參清膏中加入丹參清膏重量3～5倍的水，邊加水邊攪拌，室溫下靜置12～24小時，再過濾，丹參濾液用鹽酸調(diào)節(jié)pH值為2.8～3.2，得到丹參酸化濾液；三、將大孔吸附樹脂柱用pH值為2.8～3.2的鹽酸酸化，將步驟二得到的丹參酸化濾液上樣于大孔吸附柱上，用5～7倍樹脂體積pH值為2.8～3.2的鹽酸沖洗雜質(zhì)，再用質(zhì)量濃度為35％～55％的乙醇洗脫，收集1.5～2.5倍樹脂體積的丹參洗脫液，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)丹參洗脫液的pH值為4.0～4.2，減壓濃縮至相對密度為1.08～1.25的丹酚酸清膏；即得到丹酚酸B；羥基紅花黃色素A的提取方法按如下步驟進(jìn)行一、先向紅花加入質(zhì)量為紅花質(zhì)量16～20倍的水浸泡20～40分鐘，煎煮20～40分鐘，濾出紅花藥液，再向藥渣加入質(zhì)量為藥渣質(zhì)量14～18倍的水，煎煮20～40分鐘，濾出紅花藥液，合并兩次濾出的紅花藥液，冷卻至室溫；二、紅花藥液用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1.9～2.2，靜置6～24小時，再過濾，得到紅花酸化濾液；三、將大孔吸附樹脂柱用pH值為1.9～2.2的鹽酸酸化，將步驟二得到的紅花酸化濾液上樣于大孔吸附柱上，用6～8倍樹脂體積pH值為1.9～2.2的鹽酸沖洗雜質(zhì)，再用質(zhì)量濃度為8％～15％的乙醇洗脫，收集4.5～6.0倍樹脂體積的紅花洗脫液，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)紅花洗脫液的pH值為4.0～4.2，減壓濃縮至相對密度為1.08～1.25的羥基紅花黃色素清膏；即得羥基紅花黃色素A；二、先用0.22μm或0.45μm的微孔濾膜過濾后，再經(jīng)過截流分子量為30K或50K的Millipore超濾柱進(jìn)行超濾，將丹紅濾液分裝并凍干；即得到注射用丹紅。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用丹紅的制備方法，其特征在于步驟一中使丹紅藥液的 含水量為88%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用丹紅的制備方法，其特征在于步驟一中用氫氧化鈉溶 液調(diào)節(jié)丹紅藥液的PH值為4. 3。
全文摘要
注射用丹紅的制備方法，它涉及丹紅制劑的制備方法。本發(fā)明解決了現(xiàn)有提取方法存在對丹酚酸B和羥基紅花黃色素A提取不徹底和制備出的丹紅注射液運輸和儲存不方便的問題。本發(fā)明的注射用丹紅按如下步驟進(jìn)行提取一、配比，靜置；二、過濾，凍干；即得到注射用丹紅。本發(fā)明對丹酚酸B和羥基紅花黃色素A的提取率高，制備出的注射用丹紅便于儲存和運輸。
文檔編號A61K9/19GK101879155SQ20101023656
公開日2010年11月10日 申請日期2007年12月4日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月4日
發(fā)明者付饒, 任瑞濤, 劉占濱, 吳志軍, 李殿明, 王英新, 秦緒江, 馬志強(qiáng) 申請人:哈藥集團(tuán)中藥二廠