專利名稱：：7p肽在預防或治療肺炎中的應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術領域：
，具體而言，本發(fā)明涉及涉及丙型肝炎病毒免疫原性肽7P及其衍生物的在制備預防或治療肺炎的藥物中的應用，尤其涉及該肽或其衍生物制備預防或治療肺炎的250μg/kg小鼠劑量的藥物中的應用。
背景技術：
：序列為GQTYTSG的肽(本文中簡稱為7P)是一種最初根據丙型肝炎病毒而設計的免疫原性肽，本發(fā)明人在中國專利CN1194986C和CN1216075C中披露了用作丙型肝炎病毒免疫原性肽的7P及其衍生物。另外，在PCT申請WCV2007/137456中，本發(fā)明人也發(fā)現了7P及其衍生物還能用于預防和治療肝損傷的應用，尤其能預防或治療免疫性肝損傷和肝毒性化學物質引起的肝損傷。此后，本發(fā)明人又發(fā)現7P對于腎炎也有一定的治療作用，并披露于中國專利申請CN101559217A中。然而，與腎炎和肝損傷不同，肺炎，尤其是因TNFa增加而引起的肺炎，是通過TNFa增加的途徑來引起肺部炎性病變的，現有技術中并沒有發(fā)現7P及其衍生物能抑制肺部TNFα增加，也沒有觀察到7P及其衍生物能改善肺炎病變癥狀。但是，本發(fā)明人令人意外地發(fā)現，7P及其衍生物還能夠改善肺炎病變癥狀，特別是改善該肺炎病變癥狀是通過抑制肺部TNFa增加的途徑來完成的，因此可以預防或治療需要抑制肺部TNFa增加的并發(fā)癥。而且，本發(fā)明人經過長期摸索，綜合用藥成本、安全性和療效，發(fā)現250μg/kg小鼠劑量的7P及其衍生物最佳。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的在于提供7P或其衍生物在制備預防或治療肺炎的藥物中的應用，并提供7P或其衍生物在制備抑制肺部TNFα增加的藥物中的應用。另外，本發(fā)明的目的還在于提供相應藥劑盒。具體而言，在第一方面，本發(fā)明提供了7P或其衍生物在制備預防或治療肺炎的藥物中的應用，其中7P或其衍生物指如下式I所示的肽或其藥學上可接受的鹽或酯Xaal-Gln-Xaa2-Xaa3-Thr-Ser-Gly-Xaa4(式I)其中，Xaal為缺失、Ala、Gly、Val、Leu或lie,Xaa2為Thr或Ser，Xaa3為Tyr、Phe或Trp，而且Xaa4為缺失、Ala、Gly、Val、Leu、lie或Pro。本文所稱的“7P或其衍生物”指如下式I所示的肽或其藥學上可接受的鹽或酯Xaal-Gln-Xaa2-Xaa3-Thr-Ser-Gly-Xaa4(式I)其中，Xaal為缺失、Ala、Gly、Val、Leu或lie,Xaa2為Thr或Ser，Xaa3為Tyr、Phe或Trp，而且Xaa4為缺失、Ala、Gly、Val、Leu、Ile或Pro。優(yōu)選其中，7P或其衍生物是唯一有效成分。在本發(fā)明的第一方面中，7P或其衍生物優(yōu)選為GQTYTSG的肽或其藥學上可接受的鹽或酯，尤其優(yōu)選為7P。在本發(fā)明的具體實施方式中，我們發(fā)現，7P能夠在作為唯一有效成分的情況下，能夠有效預防或治療肺炎，尤其是能抑制TNFα的增加從而預防或治療肺炎。因此，在本發(fā)明的第一方面中，肺炎優(yōu)選是TNFa增加而引起的肺炎。在本文中，“藥學上可接受的酯”指適于與人或動物的組織接觸而且無過多的毒性、刺激或變態(tài)反應等的酯。通常，酯化修飾后能降低機體中的蛋白酶對肽的水解。對本發(fā)明的肽的末端氨基、羧基或側鏈基團進行修飾可以形成藥學上可接受的酯。對氨基酸側鏈基團的修飾包括但不限于蘇氨酸、絲氨酸側鏈羥基與羧酸發(fā)生的酯化反應。優(yōu)選末端基團用蛋白質化學領域的技術人員已知的保護性基團保護起來，如乙酰基、三氟乙?；moc(9-芴基-甲氧羰基)、Boc(叔丁氧羰基)、Alloc(烯丙氧羰基)、C1-3烷基、C6-12芳烷基等。在本發(fā)明的具體實施方式中，我們發(fā)現，7P不經修飾也足以在生理條件下進行治療，因此優(yōu)選不對式I多肽N末端的氨基和C末端的羧基以及氨基酸側鏈基團進行修飾，即N末端的化學基團仍舊為第一個氨基酸上的α-氨基(-NH2),C末端的化學基團是C末端氨基酸的羧基(-C00H)。在本文中，“藥學上可接受的鹽”指適于與人或動物的組織接觸而且無過多的毒性、刺激或變態(tài)反應等的鹽。藥學上可接受的鹽是本領域熟知的。這種鹽可以在本發(fā)明多肽的最終分離和純化的過程中制備，也可以將肽與適當的有機或無機酸或堿反應單獨制備。代表性酸加成鹽包括但不限于乙酸鹽、二己酸鹽、藻酸鹽、檸檬酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、富馬酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、煙酸鹽、2-萘磺酸鹽、草酸鹽、3-苯基丙酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、磷酸鹽、谷氨酸鹽、碳酸氫鹽、對甲苯磺酸鹽和十一烷酸鹽。能用于形成藥學上可接受鹽的優(yōu)選的酸是鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、草酸、馬來酸、琥珀酸和檸檬酸。藥學上可接受的堿加成鹽中的陽離子包括但不限于堿金屬或堿土金屬離子如鋰、鈉、鉀、鈣、鎂和鋁等，以及非毒性季銨陽離子如銨、四甲基銨、四乙基銨、甲基胺、二甲基胺、三甲基胺、三乙基胺、二乙基胺、乙基胺、二乙胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶、哌嗪等。優(yōu)選的堿加成鹽包括磷酸鹽、tris和乙酸鹽。這些鹽一般能夠增加多肽的溶解性，而且所形成的鹽基本上不改變多肽的活性。本發(fā)明的多肽可以單獨使用，也可以以藥學上可接受的鹽形式使用。在本文中，“藥物”、“藥物制劑”、“藥用制劑”以及簡稱的“制劑”入未特別說明，可以互換使用，指的是包含藥物有效成分的制品，并任選其中還包含藥學上可接受的載體。其中，“藥學上可接受的載體”指無毒固態(tài)、半固態(tài)或液態(tài)填充劑、稀釋劑、佐劑、包裹材料或其他制劑輔料。所用載體可與相應的給藥形式相適應，可使用本領域技術人員所知曉的載體配成注射劑、(注射用)凍干粉、噴霧劑、口服溶液、口服混懸液、片劑、膠囊、腸溶片、丸劑、粉劑、顆粒劑、持續(xù)釋放或延遲釋釋放等制劑。在本發(fā)明的具體實施方式中，7P通過注射方式給藥，使用生理鹽水作為載體溶解即可，因此，本發(fā)明的藥物優(yōu)選為注射劑或注射用凍干粉。在本發(fā)明的第一方面中，為了方便給藥，藥物優(yōu)選是單位制劑，即滿足一次給藥所需活性成分的制劑。常見的單位制劑如一單位(片)片劑、一單位(針)針劑或粉針劑等，其中活性成分的為一次給藥所需的量。一次給藥所需的量可以方便地計算受試者的體重和該受試者一次用藥所需單位體重劑量(在本文中簡稱為“劑量”)的乘積得到。例如，在制備藥物的過程中，通常將成人的體重被定為60kg，可以用該體重值來計算。不同受試者的單位體重劑量可以通過等效劑量換算關系來計算。例如，根據的本領域普通技術人員所公知的實驗動物與人的等效劑量換算關系(通?？蓞⒁奆DA、SFDA等藥品管理機構的指導意見，也可參見“黃繼漢等.藥理試驗中動物間和動物與人體間的等效劑量換算.中國臨床藥理學與治療學，2004S印；9(9)1069-1072”)可從實驗動物的劑量推導出人的有效劑量。如未特別指出，本文中的“劑量”指小鼠的劑量。通?？梢允褂?2這個系數來換算人和小鼠的劑量。經過本發(fā)明人長期研究，發(fā)現綜合用藥安全、成本和藥效，在本發(fā)明的第一方面中，單位制劑中7P或其衍生物的劑量優(yōu)選為30-400μg/kg小鼠劑量，更優(yōu)選為100-350μg/kg小鼠劑量，更優(yōu)選為180-320μg/kg小鼠劑量，更優(yōu)選為200-300μg/kg小鼠劑量，最優(yōu)選為250μg/kg小鼠劑量，其取得了最佳的用藥安全、成本和藥效的平衡。根據劑量，制藥商可以換算得到單位制劑中的活性成分含量，用以應用于其制藥過程中。在第二方面，本發(fā)明提供了7P或其衍生物在制備抑制肺部TNFα增加的藥物中的應用，其中7Ρ或其衍生物指如下式I所示的肽或其藥學上可接受的鹽或酯Xaal-Gln-Xaa2-Xaa3-Thr-Ser-Gly-Xaa4(式I)其中，Xaal為缺失、Ala、Gly、Val、Leu或lie,Xaa2為Thr或Ser，Xaa3為Tyr、Phe或Trp，而且Xaa4為缺失、Ala、Gly、Val、Leu、Ile或Pro。優(yōu)選其中，7P或其衍生物是唯一有效成分。在本發(fā)明的第二方面中，7P或其衍生物優(yōu)選為GQTYTSG的肽或其藥學上可接受的鹽或酯，尤其優(yōu)選為7P。在本發(fā)明的具體實施方式中，我們發(fā)現，7P能夠在作為唯一有效成分的情況下，能夠有效抑制肺部TNFα增加。在本發(fā)明的第二方面中，為了方便給藥，藥物優(yōu)選是單位制劑，即滿足一次給藥所需活性成分的制劑。常見的單位制劑如一單位(片)片劑、一單位(針)針劑或粉針劑等，其中活性成分的為一次給藥所需的量。一次給藥所需的量可以方便地計算受試者的體重和該受試者一次用藥所需單位體重劑量(在本文中簡稱為“劑量”)的乘積得到。例如，在制備藥物的過程中，通常將成人的體重被定為60kg，可以用該體重值來計算。不同受試者的單位體重劑量可以通過等效劑量換算關系來計算。例如，根據的本領域普通技術人員所公知的實驗動物與人的等效劑量換算關系(通?？蓞⒁奆DA、SFDA等藥品管理機構的指導意見，也可參見“黃繼漢等.藥理試驗中動物間和動物與人體間的等效劑量換算.中國臨床藥理學與治療學，2004S??；9(9)1069-1072”)可從實驗動物的劑量推導出人的有效劑量。如未特別指出，本文中的“劑量”指小鼠的劑量。通?？梢允褂?2這個系數來換算人和小鼠的劑量。經過本發(fā)明人長期研究，發(fā)現綜合用藥安全、成本和藥效，在本發(fā)明的第二方面中，單位制劑中7P或其衍生物的劑量優(yōu)選為30-400μg/kg小鼠劑量，更優(yōu)選為100-350μg/kg小鼠劑量，更優(yōu)選為180-320μg/kg小鼠劑量，更優(yōu)選為200-300μg/kg小鼠劑量，最優(yōu)選為250μg/kg小鼠劑量，其取得了最佳的用藥安全、成本和藥效的平衡。根據劑量，制藥商可以換算得到單位制劑中的活性成分含量，用以應用于其制藥過程中。在第三方面，本發(fā)明提供了藥劑盒，其包括，(1)包含7P或其衍生物的容器；和(2)指示7P或其衍生物給藥預防或治療肺炎或抑制肺部TNFα增加的說明書，任選說明書指示給藥劑量為30-400μg/kg小鼠劑量，優(yōu)選為100-350μg/kg小鼠劑量，更優(yōu)選為180-320μg/kg小鼠劑量，更優(yōu)選為200-300μg/kg小鼠劑量，最優(yōu)選為250μg/kg小鼠齊U量。藥劑盒是大眾所熟知的代包裝的藥品形式，其中包括裝有藥劑的容器，如瓶、管等，并包括有說明書，所述說明書可以以單獨形式裝于藥劑盒內，也可以印刷在藥劑盒或容器外壁上。在本發(fā)明的第三方面中，優(yōu)選說明書記載有指示給藥劑量為30-400μg/kg小鼠劑量，優(yōu)選為100-350μg/kg小鼠劑量，更優(yōu)選為180-320μg/kg小鼠劑量，更優(yōu)選為200-300μg/kg小鼠劑量，最優(yōu)選為250μg/kg小鼠劑量的內容。為了便于理解，以下將通過具體的實施例對本發(fā)明進行詳細地描述。需要特別指出的是，具體實例僅是為了說明，并不構成對本發(fā)明范圍的限制。顯然本領域的普通技術人員可以根據本文說明，在本發(fā)明的范圍內對本發(fā)明做出各種各樣的修正和改變，這些修正和改變也納入本發(fā)明的范圍內。另外，本發(fā)明引用了公開文獻，這些文獻也是為了更清楚地描述本發(fā)明，它們的全文內容均納入本發(fā)明進行參考，就好像它們的全文已經在本發(fā)明說明書中重復敘述過一樣。具體實施例方式實施例1.免疫7肽藥物對小鼠肺炎的保護作用1.實驗材料1.1動物清潔級ICR小鼠，體重18g22g，雌雄各半，由南通大學實驗動物中心提供(實驗動物生產許可證SCXK(蘇)2008-0010；實驗動物使用許可證SYXK(蘇)2007—0030)。1.2藥物序列為GQTYTSG的肽(以下稱“免疫7肽”)，使用時用生理鹽水溶解。陽性對照藥地塞米松注射液，由貴州華圣制藥有限公司提供，批號071017，規(guī)格5mg/ml/支。1.3藥物配制、劑量及分組地塞米松注射液組(給藥劑量為0.9mg/kg)，免疫7肽藥物高、中、低劑量組分別為250μg/kg,125μg/kg,62.5μg/kg，空白對照組，模型組給予等容積生理鹽水。上述各組藥物使用時均用生理鹽水配置成所需濃度。免疫7肽各劑量組均皮下注射給藥，給藥體積為0.lml/10g體重，地塞米松注射液組腹腔注射給藥，給藥體積為0.lml/10g體重。1.4試齊[J脂多糖(LPS)，SIGMA公司產品，批號L2880。小鼠TNFaELISAKit，上海源葉生物科技有限公司，YY02868B1.5儀器Electronicparticlecounter(Diana5,HycelDiagnostics,ReimsFrance)BIO-RAD680伯樂酶標儀2.試驗方法2.1實驗方案實驗動物隨機分為6組，即空白組、模型組、陽性藥(地塞米松注射液)組，免疫7肽高劑量組、免疫7肽中劑量組、免疫7肽低劑量組。小鼠每組10只。除空白組小鼠外，其余各組小鼠腹腔注射脂多糖(LPS)lmg/kg,腹腔注射LPS后2小時，免疫7肽高劑量組、免疫7肽中劑量組、免疫7肽低劑量組右后肢皮下給藥0.lml/10g體重，陽性藥地塞米松組腹腔注射0.lml/10g體重。腹腔注射LPS后24小時后，收集支氣管肺泡灌洗液(BALF)，使用Electronicparticlecounter檢測支氣管肺泡灌洗液(BALF)白細胞計數。根據廠商說明，應用小鼠TNFaELISA檢測試劑盒檢測支氣管肺泡灌洗液TNFa水平，將標準品用稀釋液作倍比稀釋，然后按照試劑盒說明書進行操作。計算出標準曲線，從標準曲線上讀出所測樣本的數值，再乘以稀釋倍數，即得出原液濃度。另取右頁肺臟以10%甲醛固定，石蠟包埋，切片，HE染色，再經梯度乙醇脫水，二甲苯透明，以中性樹膠封片，進行病理組織學檢查各組肺炎損傷程度。2.2數據處理對所有數據進行數據處理，對病理學評分采用秩和檢驗，其他數據采用t檢驗，并統計分析結果。3.結果3.1.免疫7肽藥物對小鼠肺炎肺泡灌洗液白細胞計數及TNFa的影響從表1可以看出，模型組小鼠肺炎肺泡灌洗液白細胞計數及TNFa水平顯著升高(P<0.01)，表明LPS可造成小鼠釋放TNFa，引起肺部炎性病變。免疫7肽藥物高、中、低劑量組能顯著性降低LPS實驗性肺炎小鼠白細胞計數及肺泡灌洗液TNFa(P<0.05或P<0.01)。表1藥物免疫7肽對小鼠肺炎肺泡灌洗液白細胞計數及TNFa的影響(X士SD，n=5)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注與模型組比較，*P<0.05，**P<0.013.2.免疫7肽藥物對小鼠肺炎病理組織學檢查的影響免疫7肽藥物對小鼠肺炎影響的組織病理學檢查評分結果見表2。病理組織學研究表明，本實驗用脂多糖造模的小鼠肺部炎性病變，主要表現為肺泡壁增厚、伴有輕度到重度充血及炎細胞浸潤，其它病變有支氣管周圍炎間質水腫。藥物免疫7肽應用后能減輕肺部炎癥的病變，各劑量組比較，以免疫7肽高劑量組減輕肺部炎癥的效果最好，其次為免疫7肽中劑量組，免疫7肽低劑量組，與模型組相比均有非常顯著性差異(P<0.01)。表2.藥物免疫7肽對小鼠肺炎模型影響的病理評分(X士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>權利要求7P或其衍生物在制備預防或治療肺炎的藥物中的應用，其中7P或其衍生物指如下式I所示的肽或其藥學上可接受的鹽或酯Xaal-Gln-Xaa2-Xaa3-Thr-Ser-Gly-Xaa4(式I)其中，Xaa1為缺失、Ala、Gly、Val、Leu或Ile，Xaa2為Thr或Ser，Xaa3為Tyr、Phe或Trp，而且Xaa4為缺失、Ala、Gly、Val、Leu、Ile或Pro。2.權利要求1所述的應用，其中藥物是單位制劑，優(yōu)選所述制劑是注射制劑。3.權利要求2所述的應用，其中單位制劑中7P或其衍生物的劑量為30-400μg/kg小鼠劑量，優(yōu)選為100-350μg/kg小鼠劑量，更優(yōu)選為180-320μg/kg小鼠劑量，更優(yōu)選為200-300μg/kg小鼠劑量，最優(yōu)選為250μg/kg小鼠劑量。4.權利要求1-3之任一所述的應用，其中7P或其衍生物為GQTYTSG的肽或其藥學上可接受的鹽或酯。5.權利要求1所述的應用，其中所述肺炎是TNFα增加而引起的肺炎。6.7Ρ或其衍生物在制備抑制肺部TNFα增加的藥物中的應用，其中7Ρ或其衍生物指如下式I所示的肽或其藥學上可接受的鹽或酯Xaal-Gln-Xaa2-Xaa3-Thr-Ser-Gly-Xaa4(ζI)其中，Xaal為缺失、Ala、Gly、Val、Leu或lie，Xaa2為Thr或Ser，Xaa3為Tyr、Phe或Trp，而且Xaa4為缺失、Ala、Gly、Val、Leu、Ile或Pro。7.權利要求6所述的應用，其中藥物是單位制劑，優(yōu)選所述制劑是注射制劑。8.權利要求7所述的應用，其中單位制劑中7P或其衍生物的劑量為30-400μg/kg小鼠劑量，優(yōu)選為100-350μg/kg小鼠劑量，更優(yōu)選為180-320μg/kg小鼠劑量，更優(yōu)選為200-300μg/kg小鼠劑量，最優(yōu)選為250μg/kg小鼠劑量。9.權利要求6-8之任一所述的應用，其中7P或其衍生物為GQTYTSG的肽或其藥學上可接受的鹽或酯。10.藥劑盒，其包括，(1)包含7P或其衍生物的容器；和(2)指示7P或其衍生物給藥預防或治療肺炎或抑制肺部TNFα增加的說明書，任選說明書指示給藥劑量為30-400μg/kg小鼠劑量，優(yōu)選為100-350μg/kg小鼠劑量，更優(yōu)選為180-320μg/kg小鼠劑量，更優(yōu)選為200-300μg/kg小鼠劑量，最優(yōu)選為250μg/kg小鼠劑量。全文摘要本發(fā)明公開了丙型肝炎病毒免疫原性肽7P及其衍生物的在制備預防或治療肺炎的藥物中的應用，尤其涉及該肽或其衍生物制備預防或治療肺炎的250μg/kg小鼠劑量的藥物中的應用。文檔編號A61P11/00GK101822816SQ20101018412公開日2010年9月8日申請日期2010年5月27日優(yōu)先權日2010年5月27日發(fā)明者李伯安,程云,虞瑞鶴,趙萬洲,陳平雁申請人:程云;虞瑞鶴