專利名稱：一種具有抗氧化活性的雞骨泥酶解物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種具有抗氧化活性的雞骨泥酶解物的制備方法，屬于生物酶解技術(shù) 領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
生物體在生命活動(dòng)的代謝過程中，會(huì)不斷的產(chǎn)生多種自由基，DPPH自由基 (DPPH )、羥自由基(0H* )是兩種具有代表性的自由基。自由基過多，會(huì)導(dǎo)致生物機(jī)體中 許多生物大分子如核酸、蛋白質(zhì)、多糖及膜多聚不飽和脂肪酸發(fā)生過氧化反應(yīng)，使生物大分 子出現(xiàn)交聯(lián)或斷裂，引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能損害。雖然合成抗氧化劑曾在清除活性氧、食物保 鮮等方面做出了巨大貢獻(xiàn)，但人工合成抗氧化劑存在直接或間接的致癌作用，具有潛在的 不安全性。目前天然的抗氧化劑取得了很大的進(jìn)展，而且天然抗氧化劑已從單純作為油脂 和含脂食品的抗氧化劑，發(fā)展到作為體內(nèi)氧自由基的清除劑，以達(dá)到保護(hù)人體細(xì)胞組織、心 腦血管循環(huán)系統(tǒng)及抗癌、延緩衰老等生理作用。我國是禽肉生產(chǎn)和消費(fèi)的大國。2008年我國雞肉產(chǎn)量達(dá)1015萬噸，位居世界第 二，約占雞總重25%的雞骨產(chǎn)量也相當(dāng)可觀。目前，雞骨大部分只作為動(dòng)物飼料，產(chǎn)品附加 值低，利用率很低。然而，雞骨中含有豐富的優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)和人體所需的微量元素以及磷脂、 軟骨素、維生素和礦物質(zhì)等多種營養(yǎng)素。若是能將雞骨泥進(jìn)行酶解，提取其抗氧化活性肽， 開發(fā)成為天然抗氧化劑和功能性食品，將帶來重要的經(jīng)濟(jì)與社會(huì)意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種具有抗氧化活性的雞骨泥酶解物的制備方法。以廉價(jià)的下 腳料——雞骨為原料，利用生物酶解技術(shù)，開發(fā)出一種具有清除DPPH自由基、羥自由基能力 以及還原能力的酶解物。本發(fā)明的技術(shù)方案包括下列步驟
(1)原料預(yù)處理將雞骨進(jìn)行粉碎，制成80 100目的骨泥(由福建圣農(nóng)食品有限公司 提供)，加水配制雞骨泥懸浮液，濃度為5 9% (重量，以下百分比類同)，80 100°C加熱 20 30分鐘；
(2)用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)整步驟(1)所述懸浮液的pH值，添加蛋白酶進(jìn)行水解；
(3)對(duì)步驟(2)制得的溶液滅酶升高反應(yīng)體系溫度至85°C 95°C，保持10 20分
鐘；
(4)將步驟(3)滅酶后的溶液進(jìn)行過濾采用離心機(jī)，4000 4800轉(zhuǎn)/分鐘離心8 15分鐘；
(5)干燥取步驟(4)所述離心后的上清液，干燥至淡黃色粉末，得到雞骨蛋白酶解物。 干燥可以采用凍干、噴霧干燥、真空干燥或加熱干燥等。其中水解的蛋白酶為復(fù)合風(fēng)味蛋白酶Flavourzyme (購自丹麥N0VE公司)、復(fù)合 蛋白酶Protamex (購自丹麥N0VE公司)、胰酶(購自蘇州天綠制藥有限公司)、水解蛋白酶Alcalase (購自丹麥N0VE公司)、胰蛋白酶(購自北京華美公司)、AS. 1398中性蛋白酶(購自 無錫星達(dá)生物有限公司)或木瓜蛋白酶(購自上海旭梅公司)。選用復(fù)合風(fēng)味蛋白酶加入時(shí)，復(fù)合風(fēng)味蛋白酶用量為雞骨泥原料鮮重的0. 75% 1. 25%，控制反應(yīng)溫度為45 65°C，用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)整pH為6 8，反應(yīng)20 120分 鐘；
選用復(fù)合蛋白酶加入時(shí)，復(fù)合蛋白酶用量為雞骨泥原料鮮重的1.0% 1.5%，控制溫度 為45 55°C，用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)整pH為6. 5 7. 5，反應(yīng)20 100分鐘；
選用胰酶加入時(shí)，胰酶用量為雞骨泥原料鮮重的0. 5% 1. 5%，控制溫度為50 60°C， 用氫氧化鈉調(diào)整pH為8. 0 9. 0，反應(yīng)20 100分鐘；
選用水解蛋白酶加入時(shí)，水解蛋白酶用量為雞骨泥原料鮮重的0. 75% 1. 5%，控制反 應(yīng)溫度為60 65°C，用氫氧化鈉調(diào)整pH為8. 0 9. 0，反應(yīng)20 90分鐘；
選用胰蛋白酶加入時(shí)，胰蛋白酶用量為雞骨泥原料鮮重的0. 5% 1. 5%，控制溫度為 45 55°C，用氫氧化鈉調(diào)整pH為8. 0 9. 0，反應(yīng)20 100分鐘；
選用AS. 1398中性蛋白酶加入時(shí)，AS. 1398中性蛋白酶用量為雞骨泥原料鮮重的 0. 5% 1. 5%，控制溫度為50 60°C，用氫氧化鈉調(diào)整pH為7. 0 9. 0，反應(yīng)10 100分 鐘；
選用木瓜蛋白酶加入時(shí)，木瓜蛋白酶用量為雞骨泥原料鮮重的0. 5% 1. 5%，控制溫度 為50 70°C，用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)整pH為6. 0 8. 0，反應(yīng)20 120分鐘。本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)
1、本發(fā)明采用價(jià)格低廉的雞骨泥為原料，利用生物酶解技術(shù)生產(chǎn)雞骨蛋白 酶解物。酶解物具有良好的風(fēng)味且含有大量短肽和游離氨基酸，易于人體吸收，并且具 有抗氧化活性。2、熱反應(yīng)條件較為溫和，對(duì)營養(yǎng)成分破壞力低，同時(shí)使骨骼中的營養(yǎng)物質(zhì) 在產(chǎn)品中得以充分保留，有益于人體健康。3、本發(fā)明為天然的抗氧化劑，安全性高，具有有效地保護(hù)人體細(xì)胞組織、心腦血管 循環(huán)系統(tǒng)及抗癌、延緩衰老等生理作用。4、制備過程簡單，原料為肉雞加工的下腳料，可以有效地節(jié)約資源、降低成本，產(chǎn) 品具有明顯的市場競爭力。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例一利用復(fù)合風(fēng)味蛋白酶Flavourzyme水解得到雞骨酶解物
(1)原料預(yù)處理取lKg雞骨剔肉、清洗，進(jìn)行粉碎(80目)。加水至底物濃度為5% (重 量，以下百分比類同)，于80°C下加熱30分鐘。(2)水解控制反應(yīng)溫度為45°C，用0. 5mol/L的鹽酸調(diào)整pH為6，加入復(fù)合風(fēng)味 蛋白酶Flavourzyme，加酶量為原料鮮重的0. 75%，反應(yīng)120分鐘。(3)滅酶升高反應(yīng)體系溫度至85°C保持20分鐘。(4)過濾采用離心機(jī)，4000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘。(5)干燥取離心后的上清液冷凍干燥至淡黃色粉末，得到雞骨蛋白酶解物。實(shí)施例二
4(1)原料預(yù)處理取lKg雞骨剔肉、清洗，進(jìn)行粉碎(90目)。加水至底物濃度為7%，于 90°C下加熱25分鐘。(2)水解控制反應(yīng)溫度為55°C，用0. 5mol/L氫氧化鈉調(diào)整pH為7，加入復(fù)合風(fēng) 味蛋白酶Flavourzyme，加酶量為原料鮮重的1%，反應(yīng)70分鐘。(3)滅酶升高反應(yīng)體系溫度至90°C保持15分鐘。(4)過濾采用離心機(jī)，4400轉(zhuǎn)/分鐘離心11分鐘。(5)干燥取離心后的上清液噴霧干燥至淡黃色粉末，得到雞骨蛋白酶解物。實(shí)施例三
(1)原料預(yù)處理取lKg雞骨剔肉、清洗，進(jìn)行粉碎(100目)。加水至底物濃度為9%， 于100°C下加熱20分鐘。(2)水解控制反應(yīng)溫度為65°C，用0. 5mol/L氫氧化鈉調(diào)整pH為8，加入復(fù)合風(fēng) 味蛋白酶Flavourzyme，加酶量為原料鮮重的1. 25%，反應(yīng)20分鐘。(3)滅酶升高反應(yīng)體系溫度至95°C保持10分鐘。(4)過濾采用離心機(jī)，4800轉(zhuǎn)/分鐘離心8分鐘。(5)干燥取離心后的上清液真空干燥至淡黃色粉末，得到雞骨蛋白酶解物。實(shí)施例四利用復(fù)合蛋白酶Protamex水解得到雞骨酶解物
(1)原料預(yù)處理取lKg雞骨剔肉、清洗，進(jìn)行粉碎(100目)。加水至底物濃度為5%， 于100°C下加熱20分鐘。(2)水解控制反應(yīng)溫度為45°C，用0. 5mol/L鹽酸調(diào)整pH為6. 5，加入復(fù)合蛋白 酶Protamex，加酶量為原料鮮重的1. 25%，反應(yīng)60分鐘。(3)滅酶升高反應(yīng)體系溫度至95°C保持10分鐘。(4)過濾采用離心機(jī)，4800轉(zhuǎn)/分鐘離心8分鐘。(5)干燥取離心后的上清液真空干燥至淡黃色粉末，得到雞骨蛋白酶解物。實(shí)施例五
(1)原料預(yù)處理取lKg雞骨剔肉、清洗，進(jìn)行粉碎(90目)。加水至底物濃度為9%，于 90°C下加熱25分鐘。(2)水解控制反應(yīng)溫度為55°C，用0. 5mol/L氫氧化鈉調(diào)整pH為7，加入復(fù)合蛋 白酶Protamex，加酶量為原料鮮重的1. 5%，反應(yīng)20分鐘。(3)滅酶升高反應(yīng)體系溫度至90°C保持15分鐘。(4)過濾采用離心機(jī)，4400轉(zhuǎn)/分鐘離心11分鐘。(5)干燥取離心后的上清液噴霧干燥至淡黃色粉末，得到雞骨蛋白酶解物。實(shí)施例六
(1)原料預(yù)處理取lKg雞骨剔肉、清洗，進(jìn)行粉碎(80目)。加水至底物濃度為7%，于 80°C下加熱30分鐘。(2)水解控制反應(yīng)溫度為50°C，用0. 5mol/L氫氧化鈉調(diào)整pH為7. 5，加入復(fù)合 蛋白酶Protamex，加酶量為原料鮮重的1%，反應(yīng)100分鐘。(3)滅酶升高反應(yīng)體系溫度至85°C保持20分鐘。(4)過濾采用離心機(jī)，4000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘。(5)干燥取離心后的上清液冷凍干燥至淡黃色粉末，得到雞骨蛋白酶解物。
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實(shí)施例七利用胰酶水解得到雞骨酶解物
(1)原料預(yù)處理取lKg雞骨剔肉、清洗，進(jìn)行粉碎(100目)。加水至底物濃度為5%， 于100°C下加熱20分鐘。(2)水解控制反應(yīng)溫度為50°C，用0. 5mol/L氫氧化鈉調(diào)整pH為9，加入胰酶水 解蛋白酶，加酶量為原料鮮重的1%，反應(yīng)60分鐘。(3)滅酶升高反應(yīng)體系溫度至95°C保持10分鐘。(4)過濾采用離心機(jī)，4800轉(zhuǎn)/分鐘離心8分鐘。(5)干燥取離心后的上清液真空干燥至淡黃色粉末，得到雞骨蛋白酶解物。實(shí)施例八
(1)原料預(yù)處理取lKg雞骨剔肉、清洗，進(jìn)行粉碎(90目)。加水至底物濃度為9%，于 90°C下加熱25分鐘。(2)水解控制反應(yīng)溫度為55°C，用0. 5mol/L氫氧化鈉調(diào)整pH為8，加入胰酶水 解蛋白酶，加酶量為原料鮮重的1. 5%，反應(yīng)20分鐘。(3)滅酶升高反應(yīng)體系溫度至90°C保持15分鐘。(4)過濾采用離心機(jī)，4400轉(zhuǎn)/分鐘離心11分鐘。(5)干燥取離心后的上清液加熱干燥至淡黃色粉末，得到雞骨蛋白酶解物。實(shí)施例九
(1)原料預(yù)處理取lKg雞骨剔肉、清洗，進(jìn)行粉碎(80目)。加水至底物濃度為7%，于 80°C下加熱30分鐘。(2)水解控制反應(yīng)溫度為60°C，用0. 5mol/L氫氧化鈉調(diào)整pH為8. 5，加入胰酶 水解蛋白酶，加酶量為原料鮮重的0. 5%，反應(yīng)100分鐘。(3)滅酶升高反應(yīng)體系溫度至85°C保持20分鐘。(4)過濾采用離心機(jī)，4000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘。(5)干燥取離心后的上清液冷凍干燥至淡黃色粉末，得到雞骨蛋白酶解物。實(shí)施例十利用水解蛋白酶Alcalase水解得到雞骨酶解物
(1)原料預(yù)處理取lKg雞骨剔肉、清洗，進(jìn)行粉碎(90目)。加水至底物濃度為9%，于 100°C下加熱20分鐘。(2)水解控制反應(yīng)溫度為60°C，用0. 5mol/L氫氧化鈉調(diào)整pH為9，加入水解蛋 白酶Alcalase，加酶量為原料鮮重的1%，反應(yīng)55分鐘。(3)滅酶升高反應(yīng)體系溫度至95°C保持10分鐘。(4)過濾采用離心機(jī)，4800轉(zhuǎn)/分鐘離心8分鐘。(5)干燥取離心后的上清液噴霧干燥至淡黃色粉末，得到雞骨蛋白酶解物。實(shí)施例十一
(1)原料預(yù)處理取lKg雞骨剔肉、清洗，進(jìn)行粉碎(80目)。加水至底物濃度為5%，于 90°C下加熱25分鐘。(2)水解控制反應(yīng)溫度為65°C，用0. 5mol/L氫氧化鈉調(diào)整pH為8，加入水解蛋 白酶Alcalase，加酶量為原料鮮重的1. 5%，反應(yīng)20分鐘。(3)滅酶升高反應(yīng)體系溫度至90°C保持15分鐘。(4)過濾采用離心機(jī)，4400轉(zhuǎn)/分鐘離心11分鐘。
(5)干燥取離心后的上清液加熱干燥至淡黃色粉末，得到雞骨蛋白酶解物。實(shí)施例十二
(1)原料預(yù)處理取lKg雞骨剔肉、清洗，進(jìn)行粉碎(100目)。加水至底物濃度為1%， 于80°C下加熱30分鐘。(2)水解控制反應(yīng)溫度為62. 5°C，用0. 5mol/L氫氧化鈉調(diào)整pH為8. 5，加入水 解蛋白酶Alcalase，加酶量為原料鮮重的0. 5%，反應(yīng)90分鐘。(3)滅酶升高反應(yīng)體系溫度至85°C保持20分鐘。(4)過濾采用離心機(jī)，4000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘。(5)干燥取離心后的上清液冷凍干燥至淡黃色粉末，得到雞骨蛋白酶解物。實(shí)施例十三利用胰蛋白酶水解得到雞骨酶解物
(1)原料預(yù)處理取lKg雞骨剔肉、清洗，進(jìn)行粉碎(100目)。加水至底物濃度為5%， 于100°C下加熱20分鐘。(2)水解控制反應(yīng)溫度為50°C，用0. 5mol/L氫氧化鈉調(diào)整pH為9，加入，加酶量 為原料鮮重的1%，反應(yīng)60分鐘。(3)滅酶升高反應(yīng)體系溫度至95°C保持10分鐘。(4)過濾采用離心機(jī)，4800轉(zhuǎn)/分鐘離心8分鐘。(5)干燥取離心后的上清液噴霧干燥至淡黃色粉末，得到雞骨蛋白酶解物。實(shí)施例十四
(1)原料預(yù)處理取lKg雞骨剔肉、清洗，進(jìn)行粉碎(90目)。加水至底物濃度為9%，于 90°C下加熱25分鐘。(2)水解控制反應(yīng)溫度為55°C，用0. 5mol/L氫氧化鈉調(diào)整pH為8，加入胰蛋白 酶，加酶量為原料鮮重的1. 5%，反應(yīng)20分鐘。(3)滅酶升高反應(yīng)體系溫度至90°C保持15分鐘。(4)過濾采用離心機(jī)，4400轉(zhuǎn)/分鐘離心11分鐘。(5)干燥取離心后的上清液加熱干燥至淡黃色粉末，得到雞骨蛋白酶解物。實(shí)施例十五
(1)原料預(yù)處理取lKg雞骨剔肉、清洗，進(jìn)行粉碎(80目)。加水至底物濃度為7%，于 80°C下加熱30分鐘。(2)水解控制反應(yīng)溫度為45°C，用0. 5mol/L氫氧化鈉調(diào)整pH為8. 5，加入胰蛋 白酶，加酶量為原料鮮重的0. 5%，反應(yīng)100分鐘。(3)滅酶升高反應(yīng)體系溫度至85°C保持20分鐘。(4)過濾采用離心機(jī)，4000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘。(5)干燥取離心后的上清液冷凍干燥至淡黃色粉末，得到雞骨蛋白酶解物。實(shí)施例十六利用AS. 1398中性蛋白酶水解得到雞骨酶解物
(1)原料預(yù)處理取lKg雞骨剔肉、清洗，進(jìn)行粉碎(80目)。加水至底物濃度為7%，于 100°C下加熱20分鐘。(2)水解控制反應(yīng)溫度為50°C，用0. 5mol/L氫氧化鈉調(diào)整pH為9，加入，加酶量 為原料鮮重的1%，反應(yīng)60分鐘。(3)滅酶升高反應(yīng)體系溫度至95°C保持10分鐘。
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(4)過濾采用離心機(jī)，4800轉(zhuǎn)/分鐘離心8分鐘。(5)干燥取離心后的上清液真空干燥至淡黃色粉末，得到雞骨蛋白酶解物。實(shí)施例十七
(1)原料預(yù)處理取IKg雞骨剔肉、清洗，進(jìn)行粉碎(90目)。加水至底物濃度為5%，于 90°C下加熱25分鐘。(2)水解控制反應(yīng)溫度為55°C，用0. 5mol/L氫氧化鈉調(diào)整pH為8，加入AS. 1398 中性蛋白酶，加酶量為原料鮮重的1. 5%，反應(yīng)20分鐘。(3)滅酶升高反應(yīng)體系溫度至90°C保持15分鐘。(4)過濾采用離心機(jī)，4400轉(zhuǎn)/分鐘離心11分鐘。(5)干燥取離心后的上清液加熱干燥至淡黃色粉末，得到雞骨蛋白酶解物。實(shí)施例十八
(1)原料預(yù)處理取IKg雞骨剔肉、清洗，進(jìn)行粉碎(100目)。加水至底物濃度為9%， 于80°C下加熱30分鐘。(2)水解控制反應(yīng)溫度為60°C，用0. 5mol/L氫氧化鈉調(diào)整pH為7，加入AS. 1398 中性蛋白酶，加酶量為原料鮮重的0. 5%，反應(yīng)100分鐘。(3)滅酶升高反應(yīng)體系溫度至85°C保持20分鐘。(4)過濾采用離心機(jī)，4000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘。(5)干燥取離心后的上清液冷凍干燥至淡黃色粉末，得到雞骨蛋白酶解物。實(shí)施例十九利用木瓜蛋白酶水解得到雞骨酶解物
(1)原料預(yù)處理取IKg雞骨剔肉、清洗，進(jìn)行粉碎(80目)。加水至底物濃度為7%，于 100°C下加熱20分鐘。(2)水解控制反應(yīng)溫度為50°C，用0. 5mol/L鹽酸調(diào)整pH為6，加入木瓜蛋白酶， 加酶量為原料鮮重的1%，反應(yīng)70分鐘。(3)滅酶升高反應(yīng)體系溫度至95°C保持10分鐘。(4)過濾采用離心機(jī)，4800轉(zhuǎn)/分鐘離心8分鐘。(5)干燥取離心后的上清液真空干燥至淡黃色粉末，得到雞骨蛋白酶解物。實(shí)施例二十
(1)原料預(yù)處理取IKg雞骨剔肉、清洗，進(jìn)行粉碎(90目)。加水至底物濃度為5%，于 90°C下加熱25分鐘。(2)水解控制反應(yīng)溫度為70°C，用0. 5mol/L氫氧化鈉調(diào)整pH為8，加入木瓜蛋 白酶，加酶量為原料鮮重的1. 5%，反應(yīng)20分鐘。(3)滅酶升高反應(yīng)體系溫度至90°C保持15分鐘。(4)過濾采用離心機(jī)，4400轉(zhuǎn)/分鐘離心11分鐘。(5)干燥取離心后的上清液噴霧干燥至淡黃色粉末，得到雞骨蛋白酶解物。實(shí)施例二i^一
(1)原料預(yù)處理取IKg雞骨剔肉、清洗，進(jìn)行粉碎(100目)。加水至底物濃度為9%， 于80°C下加熱30分鐘。(2)水解控制反應(yīng)溫度為60°C，用0. 5mol/L氫氧化鈉調(diào)整pH為7，加入木瓜蛋 白酶，加酶量為原料鮮重的0. 5%，反應(yīng)120分鐘。
(3)滅酶升高反應(yīng)體系溫度至85°C保持20分鐘。(4)過濾采用離心機(jī)，4000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘。(5)干燥取離心后的上清液冷凍干燥至淡黃色粉末，得到雞骨蛋白酶解物。實(shí)施例二十二七種蛋白酶的雞骨酶解物的體外抗氧活性
按所述的相同步驟重復(fù)進(jìn)行實(shí)施例一、實(shí)施例四、實(shí)施例七、實(shí)施例十、實(shí)施例十三、 實(shí)施例十六以及實(shí)施例十九。將制得的復(fù)合風(fēng)味蛋白酶Flavourzym的雞骨酶解物、復(fù)合 蛋白酶Protamex的雞骨酶解物、胰酶的雞骨酶解物、水解蛋白酶Alcalase的雞骨酶解物、 胰蛋白酶的雞骨酶解物、AS. 1398中性蛋白酶的雞骨酶解物和木瓜蛋白酶的雞骨酶解物溶 于水配制成相同的蛋白質(zhì)濃度(3mg/mL)，分別采用DPPH顯色法、Fenton反應(yīng)測定羥自由 基法、鐵氰化鉀測定法，進(jìn)行體外清除DPPH自由基、清除羥自由基以及還原能力的實(shí)驗(yàn)。 如表1所示，復(fù)合風(fēng)味蛋白酶Flavourzyme的雞骨酶解物的DPPH自由基清除率最高，達(dá) 91. 37士0. 68%，而復(fù)合蛋白酶Protamex和AS. 1398中性蛋白酶的雞骨酶解物的DPPH自由 基清除率均高于85%。復(fù)合風(fēng)味蛋白酶Flavourzyme的雞骨酶解物的羥自由基清除能力最 強(qiáng)，達(dá)到35. 5士 1. 09% ；木瓜蛋白酶的雞骨酶解物的還原性最強(qiáng)，達(dá)到0. 36士0. 01 (700nm處 吸光值)?？梢姡?種蛋白酶的雞骨酶解物均具有較強(qiáng)的DPPH自由基、羥自由基的清除能力 及還原性，其中對(duì)DPPH自由基的清除能力最顯著。因此，雞骨酶解物是一種潛在的天然抗 氧化劑和功能性食品。
表1 七種雞骨酶解物的體外抗氧化活性測定結(jié)果
權(quán)利要求
一種具有抗氧化活性的雞骨泥酶解物的制備方法，其特征在于包括下列步驟(1)原料預(yù)處理將雞骨進(jìn)行粉碎，制成80～100目的骨泥，加水配制成雞骨泥懸浮液，濃度為5 %～9 %(重量，以下百分比類同)，在80～100℃下加熱20～30分鐘；(2)對(duì)步驟(1)制得的懸浮液進(jìn)行酶解添加蛋白酶進(jìn)行水解；(3)對(duì)步驟(2)制得的溶液滅酶升高反應(yīng)體系溫度至85℃～95℃，保持10～20分鐘； (4)將步驟(3)滅酶后的溶液進(jìn)行過濾采用離心機(jī)，4000～4800轉(zhuǎn)/分鐘離心8～15分鐘；(5)干燥取步驟(4)所述離心后的上清液，干燥至淡黃色粉末，得到雞骨蛋白酶解物，所述干燥采用凍干、噴霧干燥、真空干燥或加熱干燥。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有抗氧化活性的雞骨泥酶解物的制備方法，其特征 在于在加入蛋白酶進(jìn)行水解的過程中，選用復(fù)合風(fēng)味蛋白酶Flavourzyme、復(fù)合蛋白酶 Protamex、胰酶、水解蛋白酶Alcalase、胰蛋白酶、AS. 1398中性蛋白酶或木瓜蛋白酶進(jìn)行 水解。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種具有抗氧化活性的雞骨泥酶解物的制備方法，其特征在 于按以下任意一種方法選用蛋白酶進(jìn)行水解選用復(fù)合風(fēng)味蛋白酶Flavourzyme加入時(shí)，復(fù)合風(fēng)味蛋白酶Flavourzyme用量為雞骨 泥原料鮮重的0. 75% 1. 25%，控制反應(yīng)溫度為45 65°C，用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)整pH為 6 8，反應(yīng)20 120分鐘；選用復(fù)合蛋白酶Protamex加入時(shí)，復(fù)合蛋白酶Protamex用量為雞骨泥原料鮮重的 1. 0% 1. 5%，控制溫度為45 55°C，用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)整pH為6. 5 7. 5，反應(yīng)20 100分鐘；選用胰酶加入時(shí)，胰酶用量為雞骨泥原料鮮重的0. 5% 1. 5%，控制溫度為50 60°C， 用氫氧化鈉調(diào)整pH為8. 0 9. 0，反應(yīng)20 100分鐘；選用水解蛋白酶Alcalase加入時(shí)，水解蛋白酶Alcalase用量為雞骨泥原料鮮重的 0. 75% 1. 5%，控制反應(yīng)溫度為60 65°C，用氫氧化鈉調(diào)整pH為8. 0 9. 0，反應(yīng)20 90 分鐘；選用胰蛋白酶加入時(shí)，胰蛋白酶用量為雞骨泥原料鮮重的0. 5% 1. 5%，控制溫度為 45 55°C，用氫氧化鈉調(diào)整pH為8. 0 9. 0，反應(yīng)20 100分鐘；選用AS. 1398中性蛋白酶加入時(shí)，AS. 1398中性蛋白酶用量為雞骨泥原料鮮重的 0. 5% 1. 5%，控制溫度為50 60°C，用氫氧化鈉調(diào)整pH為7. 0 9. 0，反應(yīng)10 100分 鐘；選用木瓜蛋白酶加入時(shí)，木瓜蛋白酶用量為雞骨泥原料鮮重的0. 5% 1. 5%，控制溫度 為50 70°C，用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)整pH為6. 0 8. 0，反應(yīng)20 120分鐘。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種具有抗氧化活性的雞骨泥酶解物的制備方法，能夠獲得有效清除DPPH自由基、羥自由基及具有還原性的酶解物，屬于生物酶解技術(shù)領(lǐng)域。該方法是將雞骨進(jìn)行粉碎，制成骨泥，配制雞骨泥懸浮液，在80～100℃下加熱預(yù)處理20～30分鐘，冷卻至酶反應(yīng)的最適溫度，調(diào)整pH，加入蛋白酶，反應(yīng)一定時(shí)間后，升溫到85℃～90℃保持10～20分鐘滅酶，得到淡黃色粉狀物，即為雞骨蛋白酶解物。本發(fā)明所獲得的雞骨蛋白酶解物具有清除DPPH自由基、羥自由基及還原的能力，是潛在的天然抗氧化劑和功能性食品，且安全性高，具有有效地保護(hù)人體細(xì)胞組織、心腦血管循環(huán)系統(tǒng)及抗癌、延緩衰老等生理作用。
文檔編號(hào)A61P39/06GK101856367SQ20101011591
公開日2010年10月13日 申請(qǐng)日期2010年3月2日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月2日
發(fā)明者倪莉, 易余艷 申請(qǐng)人:福州大學(xué)