專利名稱：：腎炎康浸膏及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及腎炎康浸膏及其制備方法以及這種浸膏作為藥物的用途。
背景技術(shù)：
：牛蒡子(ArctiumLappaL)是菊科植物，性味辛、苦而寒，無毒，主歸肺、胃經(jīng)。以疏散風(fēng)熱，清熱解毒，透疹為主要功效，并兼利尿、潤腸等作用。是臨床冶療傷風(fēng)表證(感冒)、溫病衛(wèi)分證(急性感染性疾病初期)、麻疹熱毒盛而疹出不透、瘙癢(過敏性皮膚病)、喉痹(急性咽、喉炎)、瘡癰(皮膚化膿性感染)的常用要藥，而且單用有效。該藥用于治療風(fēng)水證(急性腎小球腎炎)的歷史悠久，常可單用而獲良效。如唐代初年孟詵《食療本草》稱"炒過末之，如茶煎三匕，通利小便。"稍后，陳藏器《本草拾遺》稱其"主風(fēng)毒腫"，《藥性論》亦有類似記載。《斗門方》以之主治"頭面浮腫"。說明本品在1500年前就廣泛用于治療風(fēng)水水腫。宋代《圣濟(jì)總錄》以單味牛蒡子微炒后研末，面糊為丸，主治"水病身體洪腫"。《太平圣惠方》亦稱其單味炒研末服，可治"風(fēng)水身腫"，這是明確指出本品善治風(fēng)水的最早記載，迄今已逾千年。明代《本草蒙簽》認(rèn)為本品能"散面目浮腫"。《經(jīng)驗(yàn)方》治"風(fēng)熱浮腫，咽喉閉塞"，以牛蒡子生、熟各半為末，每服1寸匕。明末清初的《藥品化義》及《本草求真》亦肯定其能主治"感受風(fēng)邪熱毒而見面目浮腫"。此后，如《本草正義》也認(rèn)為本品可治熱結(jié)之"癰腫水腫"。至于在治療風(fēng)水的復(fù)方中，牛蒡子的使用更為普遍。根據(jù)前人的用藥經(jīng)驗(yàn)，當(dāng)代臨床在治療急性腎小球腎炎的風(fēng)熱證、熱毒證中多選用本品。現(xiàn)代有關(guān)本品的化學(xué)成分和藥理研究表明，提取牛蒡子的有效部位口服可抗實(shí)驗(yàn)性腎病變，減少尿中蛋白質(zhì)排泄，并改善血清生化指標(biāo)。其醇提取物和牛蒡苷對(duì)蛙、小鼠、家兔均有一定的利尿作用；并有較明顯的抗菌、抗病毒、降血壓和抗變態(tài)反應(yīng)等作用。據(jù)報(bào)道，牛蒡子治療腎性蛋白尿，療效顯著，還有認(rèn)為"牛蒡子是目前中藥治療糖尿病性腎病不可多得的佳品"。急性腎小球腎炎(簡稱急性腎炎)，是內(nèi)、兒科臨床常見的腎臟疾病。急性起病，以血尿、蛋白尿、高血壓、水腫、少尿及氮質(zhì)血癥為常見的臨床表現(xiàn)，這是一組臨床綜合征，故又稱之為"急性腎炎綜合征"。其中以急性鏈球菌感染后腎小球腎炎最為常見，通常所說的急性腎炎多指此類。此外，尚可見于其他細(xì)菌或病原微生物感染后，如肺炎球菌、腦炎球菌、淋球菌、克雷伯桿菌、布氏桿菌、傷寒桿菌及水痘病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、乙型肝炎病毒、EB病毒、柯薩奇病毒、巨細(xì)胞病毒等。本病在我國是一種常見的腎臟病，尤其在兒童及青年中，主要是兒童疾病。我國北方患者約90%以上發(fā)生于呼吸道鏈球菌感染之后，故冬、春多見；南方不少患者(約30%80%)發(fā)生于膿皰病。之后，多見于夏季。發(fā)病率波動(dòng)性很大，在鏈球菌感染流行期的發(fā)病率為28.3%;若遇到猩紅熱流行，則急性腎炎發(fā)病率會(huì)高于平時(shí)。兩性均可發(fā)病，男女之比約為2:1?；颊叨酁?14歲，2歲以下較少(<5%)。而成年甚至老年發(fā)生急性腎炎者也不少見，據(jù)報(bào)道發(fā)病于55歲以上者占12.2%。另據(jù)一組1014例該病患者的流行病學(xué)分析，1424歲為本病的高發(fā)人群。本病為良性自限性疾病，經(jīng)恰當(dāng)治療大部分病人的腎臟能自行恢復(fù)。隨著治療措施的日臻完善、有效，近期死亡率明顯下降至約1%，且多見于老年組。急性期預(yù)后好。西醫(yī)藥對(duì)本病的治療，目前尚缺乏直接針對(duì)急性腎炎腎小球免疫病理過程的特異性治療，加之本病是一自限性疾病，因此基本上是對(duì)癥治療，主要環(huán)節(jié)是預(yù)防和治療水、鈉潴留，控制循環(huán)血容量，從而達(dá)到減輕癥狀、防治急性并發(fā)癥、保護(hù)腎功能，以及防止各種誘發(fā)加重因素，促進(jìn)腎臟病理組織學(xué)及功能上的修復(fù)。急性起病后，除臥床休息，進(jìn)食富含維生素的高熱量飲食，合理給予優(yōu)質(zhì)量的食物和限制水、鈉、鉀的攝入外，通常對(duì)癥給以利尿、降壓、抗感染、抗凝血等治療藥物。糖皮質(zhì)激素與細(xì)胞毒藥物已被不少醫(yī)家視為有害無益而不再主張使用。通過中醫(yī)病因病機(jī)的研究，近代各醫(yī)家對(duì)急性腎小球腎炎病因的認(rèn)識(shí)已基本趨于統(tǒng)一。腎氣不足，外邪侵入，內(nèi)憂外患，合而致病的觀點(diǎn)，已得到多數(shù)醫(yī)家所共識(shí)。如云"內(nèi)在腎氣不足，病邪乘虛而入，導(dǎo)致腎炎的發(fā)生。"或稱"乃基于機(jī)體之正氣不足，衛(wèi)氣不固，腠理不密，外在六淫之邪，或濕熱之邪，以及皮膚瘡痍之毒，得以內(nèi)乘，正邪交爭，外而陰陽失調(diào)而發(fā)病。"但首先強(qiáng)調(diào)外邪侵襲的致病作用其一，重視風(fēng)邪、熱毒的作用。"風(fēng)為百病之長"，風(fēng)邪熱毒壅結(jié)咽喉，由肺及腎，或瘡毒內(nèi)陷于腎，腎臟受邪，即可發(fā)病。所以，風(fēng)邪熱毒是腎炎急性發(fā)作的重要因素。其二，重視濕熱與溫毒，認(rèn)為外感濕熱溫毒也是導(dǎo)致本病發(fā)生的基本病理因素。在冶療方面，辨證論治仍是本病中醫(yī)治療的主體，在臨床發(fā)揮著重要作用。雖然各個(gè)醫(yī)家在辨證分型和施治用藥方面均有所不同，但多數(shù)都取得了較好療效，報(bào)道的總有效率多在95%以上，甚至為100%;專病專方及單方驗(yàn)方的治療貫穿其中，療效不凡。說明中醫(yī)藥治療本病安全而有效，具有一定的臨床應(yīng)用優(yōu)勢，臨床尤其需要研制定位準(zhǔn)確，又有統(tǒng)一的納入、排除標(biāo)準(zhǔn)和療效判定標(biāo)準(zhǔn)，具有確切療效的中成藥產(chǎn)品。
發(fā)明內(nèi)容因此，本發(fā)明的目的是提供了一種腎炎康浸膏；本發(fā)明的另一發(fā)明目的是提供了一種制備腎炎康浸膏的方法；本發(fā)明的另一發(fā)明目的是提供了腎炎康浸膏用于制備改善腎臟代謝、抗炎、抗菌、解熱和利尿的藥物的用途；本發(fā)明的另一發(fā)明目的是提供了含有本發(fā)明腎炎康浸膏的藥物組合物。本發(fā)明的目的是通過下列方法實(shí)現(xiàn)的具體而言，本發(fā)明提供了一種腎炎康浸膏，其特征在于取牛蒡子用水分2-5次煎煮，每次加3-12倍量水，提取時(shí)間1-3小時(shí)，濾過，濾液離心，收集離心液，離心液通過已處理好的大孔吸附樹脂D101，用水洗至流出液無色，再用乙醇洗脫至流出液無色，收集洗脫液，減壓，回收乙醇并濃縮至6(TC時(shí)的清膏(相對(duì)密度為1.05125)，噴霧干澡，得浸膏粉。根據(jù)上述方法所得到的浸膏為牛蒡子提取物，主要成分為牛蒡苷，其次為牛蒡酚(異名牛蒡元)等苷類，屬于木脂素類。牛蒡苷牛蒡苷元C21H2406分于量372.42優(yōu)選的，用水分2次煎煮；優(yōu)選的每次加6-10倍量水，更優(yōu)選8倍量水提??；優(yōu)選的，提取時(shí)間1.5小時(shí)；優(yōu)選的，過濾液濃縮至6(TC時(shí)的相對(duì)密度為1.101.15;優(yōu)選的，過濾濃縮至6(TC時(shí)的相對(duì)密度為1.121.14，再優(yōu)選1.13。優(yōu)選的，所用乙醇重量百分比濃度為60%95%，優(yōu)選80%。上述浸膏可用于制備抗炎藥物，特別是用于制備改善腎臟代謝藥物。上述浸膏還可用于制備抗菌藥，特別是用于制備抗金葡球菌、表葡球菌、肺炎鏈球菌、大腸埃希菌、產(chǎn)氣腸桿菌、陰溝腸桿菌或銅綠假單胞菌藥物。另外該浸膏還可用于制備利尿藥物或制備解熱藥物。本發(fā)明的另一技術(shù)方案是提供了一種腎炎康浸膏組合物，其含有上述浸膏和可藥用輔料。本發(fā)明的藥物組合物可以制成膠囊劑、片劑、顆粒劑、丸劑、噴霧劑、注射劑、洗劑、栓齊U、合齊U、口服液齊U、擦劑、貼劑、膜齊U、紙型齊iJ、混懸齊iJ、酊齊iJ、干糖漿齊iJ、膏齊iJ、糖漿齊iJ、乳劑、散劑、緩釋、控釋制劑及靶向制劑。將上述浸膏過篩，與可藥用輔料混勻，填充入膠囊，即得膠囊劑。具體實(shí)施例方式—、提取物制備本發(fā)明的腎炎康浸膏是通過下列方法得到的實(shí)施例1:取牛蒡子加水提取2次，每次加8倍量水，提取時(shí)間1.5小時(shí)，濾過，濾液離心，收集離心液，離心液通過已處理好的大孔吸附樹脂D101，用水洗至流出液無色，再用重量百分比濃度80%乙醇洗脫至流出液無色，收集洗脫液，減壓(75°C，-0.07Mpa)回收乙醇并濃縮至清膏相對(duì)密度1.101.15(60°C)，噴霧干燥(進(jìn)液物料溫度60±5°C，進(jìn)液速度5055ml/min，進(jìn)風(fēng)溫度220±5°C，出風(fēng)溫度85±5°C，收集干燥浸膏粉。實(shí)施例2:取牛蒡子加水提取3次，每次加8倍量水，提取時(shí)間2小時(shí)，濾過，濾液離心，收集離心液，離心液通過已處理好的大孔吸附樹脂D101，用水洗至流出液無色，再用重量百分比濃度80%乙醇洗脫至流出液無色，收集洗脫液，減壓(75°C，-0.07Mpa)回收乙醇并濃縮至清膏相對(duì)密度為1.101.15(60°C)，噴霧干燥(進(jìn)液物料溫度60士5t:，進(jìn)液速度5055ml/min，進(jìn)風(fēng)溫度220±5°C，出風(fēng)溫度85±5°C，收集干澡浸膏粉。實(shí)施例3:取上述實(shí)施例中浸膏粉(以牛蒡苷計(jì))150g，過篩，與可藥用輔料混勻，填充入膠囊，即得共1000粒腎炎康膠囊劑。實(shí)施例4:取上述實(shí)施例中浸膏粉(以牛蒡苷計(jì))450g，過篩，與可藥用輔料混勻，填充入膠囊，即得共3000粒腎炎康膠囊劑。二、藥效學(xué)、藥理、毒性研究對(duì)上述實(shí)施例1的腎炎康浸膏進(jìn)行了藥效學(xué)試驗(yàn)、藥理試驗(yàn)、急性毒性試驗(yàn)、長期毒性試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，本品具有良好的改善腎臟代謝、抗炎、抗菌、解熱、利尿等藥理活性。具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及結(jié)果如下1、藥效學(xué)試驗(yàn)1.1對(duì)大鼠腎小球腎炎動(dòng)物模型的作用1.1.1.實(shí)驗(yàn)材料(1)藥物受試藥物上述實(shí)施例1的腎炎康浸膏，每g相當(dāng)于原生藥5.56g。實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配制成7.67%、3.83%、1.92%藥液(每ml分別相當(dāng)于原生藥O.427g、0.213g、0.107g)備用。陽性藥物地塞米松磷酸鈉，江蘇揚(yáng)州制藥公司生產(chǎn)。生產(chǎn)批號(hào)20030105。規(guī)格0.75mg/片。實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配制成0.0075%的藥液備用。造模藥物同種免疫復(fù)合物。制備方法為取SD大鼠10只，腹腔注射戊巴比妥鈉30mg/kg麻醉，無菌操作條件下開腹，結(jié)扎腎動(dòng)脈，自結(jié)扎處向腎臟插管，剪斷腎靜脈，經(jīng)插管用生理鹽水反復(fù)沖洗腎臟呈白色，摘取腎臟，分離腎皮質(zhì)，電動(dòng)勻漿器于冰浴中磨成勻漿。腎皮質(zhì)勻漿與弗氏完全佐劑、生理鹽水按lg:2ml:3ml的比例混合均勻即得。造模藥物陽離子化牛血清白蛋白。制備方法為在適宜的反應(yīng)條件(pH:4.75，T:25°C)下，用碳化二亞胺(EDC)活化天然牛血清白蛋白(電泳純，等電點(diǎn)為4.5，美國進(jìn)口分裝產(chǎn)品)的羧基，使之易為天水乙二胺(EDA)的胺基所置換，制備出陽離子化牛血清白蛋白(C-BSA)。將其溶液用重蒸水(4°C)透析48h冷凍干燥，置于-4(TC冰箱保存?zhèn)溆谩?2)動(dòng)物健康SD大鼠，150只，體重180200克，雌雄各半。動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)99-8。由成都中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。檢疫后備用。1.1.2.實(shí)驗(yàn)方法(1)同種免疫復(fù)合物腎小球腎炎試驗(yàn)取SD大鼠60只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組(N=10)、模型對(duì)照組(N=10)、陽性對(duì)照組(N=10)、腎炎康浸膏高劑量組(N=10)、中劑量組(N=10)和低劑量組(N=10)。除空白對(duì)照組外，各組大鼠均腹腔注射同種免疫復(fù)合物10ml/kg，每周1次，連續(xù)5周。于造模后第2周，除空白對(duì)照組外，按組分別灌胃蒸鎦水、0.075%地塞米松磷酸鈉藥液、7.67%、3.83%、1.92%牛蒡子藥液10ml/kg.d，連續(xù)4周。第4周，于末次給藥后1小時(shí)收集尿液測定尿蛋白含量，股靜脈取血測定尿素氮和肌酐含量。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。(2)陽離子牛血清腎小球腎炎試驗(yàn)取SD大鼠80只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組(N=10)、模型對(duì)照組(N=16)、陽性對(duì)照組(N=13)、高劑量組(N=14)、中劑量組(N=13)和低劑量組(N=13)。除空白組外，各組大鼠背部皮下少量多點(diǎn)注射乳化液(陽離子牛血清1.lmg溶于0.55ml磷酸緩沖液中，與等量弗氏不完全佐劑充分乳化即得)1次，進(jìn)行預(yù)免疫。第8日，除空白對(duì)照組外，按組分別灌胃蒸餾水、0.0075%地塞米松磷酸鈉藥液、7.67%、3.83X、1.92X牛蒡子藥液lml/kg.d，連續(xù)21日。灌胃給藥的同時(shí)隔日1次腹腔注射C-BSA5mg/kg。第28日，于末次給藥后收集24小時(shí)尿液測定尿蛋白含量、尿肌酐、內(nèi)生肌酐清除率；股靜脈取血測定血尿氮、血肌酐、CD3、CD4、CD8、C3b-RR、IC-RR、IL-6;取右腎臟分離腎皮質(zhì)測定S0D、MDA;取左腎臟、腎上腺及胸腺用10%的甲醛固定，石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下觀察。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。1.1.3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)對(duì)同種免疫復(fù)合物腎小球腎炎大鼠動(dòng)物模型的影響大鼠給予同種免疫復(fù)合物5周后尿蛋白明顯增加，血尿氮和血肌酐明顯升高，與空白組比較，有顯著性或極顯著性差異；經(jīng)陽性藥物和提取物治療后，尿蛋白明顯減少，血尿氮和血肌酐明顯降低。其中，陽性對(duì)照組、腎炎康浸膏高、中劑量組與模型組比較，有顯著性或極顯著性差異。結(jié)果詳見表1和表2。表l腎炎康浸膏對(duì)同種免疫復(fù)合物腎小球腎炎大鼠模型動(dòng)物腎功能的影響(文士SD)H動(dòng)物(只)劑量(g/kg)血肌酐(umol/L)~~血尿氮(mmol/L)注與空白組比較，AAP<0.Ol，AAAP<0.01;與模型組比較，P<0.05，^P<0.01，微P<0.001。表2腎炎康浸膏對(duì)同種免疫復(fù)合物腎小球腎炎大鼠模型動(dòng)物尿蛋白的影響~11動(dòng)物(只)劑量(g/kg)~S^^^注-:無蛋白；±:微量蛋白；+:少許蛋白；++:較多蛋白；+++:很多蛋白。與空白組比較，△△P<0.01;與模型組比較，*P<0.05。(2)對(duì)陽離子牛血清腎小球腎炎大鼠動(dòng)物模型的影響大鼠給予陽離子牛血清白蛋白后尿中蛋白含量明顯增加，尿肌酐顯著升高，24小時(shí)內(nèi)生肌酐清除率顯著降代；血清尿素氮、肌酐、CD8、IL-6、IC-RR明顯升高，CD3、CD4、CD4/CD8、S0D、C3b-RR明顯降低；腎皮質(zhì)中SOD明顯降低，MDA明顯升高；病檢發(fā)現(xiàn)腎臟炎癥、壞死、充血明顯，腎上腺亦有明顯髓質(zhì)出血和皮質(zhì)C脫脂，胸腺腎髓質(zhì)變薄、減少，與空白組比較，有顯著性或極顯著性差異。經(jīng)腎炎康浸膏治療后，尿蛋白含量明顯減少，24小時(shí)內(nèi)生肌酐清除率明顯升高，尿肌酐明顯降低；血清尿素氮、肌酐、CD8、IL-6、IC-RR明顯降低，CD3、CD4、CD4/CD8、S0D、C3b-RR明顯升高；腎皮質(zhì)中SOD明顯升高，MDA明顯降低；腎、腎上腺和胞腺病理改變亦顯著改善。與模型組比較，有顯著性或極顯著性差異。實(shí)驗(yàn)過程中，由于灌胃和實(shí)驗(yàn)造模等因素引起動(dòng)物先后死亡10余只。結(jié)果詳見表3、4、5、6、7、8、9。<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表3腎炎康浸膏對(duì)陽離子牛血清腎小球腎炎大鼠模型動(dòng)物腎功能的影響(X±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注與空白組比較，△P<0.05，△△P<0.01;與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。表4腎炎康浸膏對(duì)同種免疫復(fù)合物腎小球腎炎大鼠模型動(dòng)物尿蛋白的影響~H動(dòng)物(只)劑量(g/kg)w~~^^^~~注-:無蛋白；±:微量蛋白；+:少許蛋白；++:較多蛋白；+++:很多蛋白。與空白組比較，△△P<0.01;與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。表5腎炎康浸膏對(duì)陽離子牛血清腎小球腎炎大鼠尿肌酐及24小時(shí)內(nèi)生肌酐清除率的影響(文士SD)11動(dòng)物(只)~劑量(g/kg)尿肌酐(mg)內(nèi)細(xì)酐清除率注與空白組比較AAAP<0.001;與模型組比較P<0.05，，<0.01，<0.001。表6腎炎康浸膏對(duì)陽離子牛血清腎小球腎炎模型大鼠C3b-RR、IC-RR及IL-6的影響(X士SD)~H動(dòng)物(只)HC3b-RR(%)IC-RR(%)IL-6(pg/ml)~注與空白組比較Ap<0.05，AAp<0.01;與模型組比較fp<0.05，**p<0.01。表7腎炎康浸膏對(duì)陽離子牛血清腎小球腎炎模型大鼠腎皮質(zhì)SOD與MDA的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注與空白組比較AAP<0.Ol，AAAP<0.001;與模型組比較、<0.05，、微p<0.001。表8腎炎康浸膏對(duì)陽離子牛血清腎小球腎炎模型大鼠T細(xì)胞亞群的影響(X士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注*與模型組比較*。<0.05，**p<0.01，微p<0.001;A與空白細(xì)比較Ap<0.05，AAp<0.Ol，AAAp<0.001。表9腎炎康浸膏對(duì)陽離子牛血清腎小球腎炎模型大鼠腎和腎上腺的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>1.1.4結(jié)論腎炎康浸膏能明顯減少同種免疫復(fù)合物型腎小球腎炎大鼠動(dòng)物模型和陽離子牛血清型腎小球腎炎大鼠動(dòng)物模型尿蛋白含量，降低血清尿素氮和肌酐；能顯著增加陽離子牛血清型腎小球腎炎大鼠動(dòng)物模型24小時(shí)內(nèi)生肌酐清除率，降低尿肌酐，明顯降低CD8、IL-6、IC-RR，明顯升高CD3、CD4、CD4/CD8、S0D、C3b-RR，亦能明顯升高腎皮質(zhì)中S0D，降低MDA;能明顯逆轉(zhuǎn)腎和腎上腺的炎癥病理改變。結(jié)果提示，腎炎康浸膏對(duì)膜性腎小球腎炎病變具有明顯的對(duì)抗作用。1.2抑菌試驗(yàn)1.2.l體外抑菌試驗(yàn)1.2.1.1實(shí)驗(yàn)材料1.2.1.1.1藥物(1)受試藥物上述實(shí)施例1的腎炎康浸膏，每g相當(dāng)于原生藥5.56g，試驗(yàn)時(shí)稱取21.3g腎炎康浸膏，加至80mL融化的50CM-H瓊脂培養(yǎng)基混勻后，從80mL中吸出40mL含藥培養(yǎng)基傾至平皿，余下的40mL含藥培養(yǎng)基中再添加40mL無藥瓊脂培養(yǎng)基稀釋，混勻后再吸出40mL傾至平皿，依此類推，即以此二倍稱釋法制備出含有腎炎康浸膏終濃度為200、100、50、25、12.5、6.25......0.05mg生藥/mL的系列含藥平皿待用。(2)陽性藥物氟哌酸膠囊，規(guī)格0.lg/粒，批號(hào)011104，浙江醫(yī)藥股份有限公司仙琚制藥廠生產(chǎn)。實(shí)驗(yàn)驗(yàn)時(shí)用無菌水溶解配制，制備成終濃度為100、50、25、12.5、6.25、3.12、1.56、0.78、0.39、0.19511g/mL的系列平皿待用。1.2.1.1.2.細(xì)菌(1)臨床分離菌株試驗(yàn)所用菌株均為2001年1月至10月從四川地區(qū)的臨床分離致病菌，所有菌株經(jīng)本室用API系統(tǒng)重新鑒定。金黃色葡萄球菌10株，表皮葡萄球菌5株，鏈球菌4株(溶血性鏈球菌1株，肺炎鏈球菌3株)，大腸埃希菌4株，產(chǎn)氣腸桿菌2株，陰溝腸桿菌3株，變形桿菌2株，痢疾桿菌1株，肺炎克雷伯菌3株，銅綠假單胞菌4株，共38株。(2)標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控菌株金黃色葡萄球菌29213、大腸埃希菌ATCC25922為四川抗菌素工業(yè)研究所保存菌株。1.2.1.1.3培養(yǎng)基(l)M-H培養(yǎng)基中國藥品生物制品檢定所產(chǎn)品，M-H肉湯培養(yǎng)基稱取25g加1000ml蒸餾水，加熱溶解，分裝，高壓滅菌，116C20分鐘。用于革蘭氏陽性、陰性需氧菌的藥敏試驗(yàn)。(2)鏈球菌用血培養(yǎng)基(即于M-H培養(yǎng)基中加10%脫纖維兔血)，于5%CO，孵箱中培養(yǎng)。1.2.1.2實(shí)驗(yàn)方法(1)最低抑菌濃度(MIC)的測定采用瓊脂二倍稀釋法測定腎炎康浸膏的最低抑菌濃度(MIC)。用多點(diǎn)接種儀(DenleyA400，England)將細(xì)菌接種于含不同藥物濃度的瓊脂平皿表面，每點(diǎn)含菌量約為105CFU/mL，37t:孵育18-20小時(shí)，以無細(xì)菌生長平皿培養(yǎng)基中所含藥物的最低濃度為藥物對(duì)該菌的最低抑菌濃度(MIC值)。(2)最低殺菌濃度(MBC)的測定采用液體稀釋法測定腎炎康浸膏的最小殺菌濃度(MBC)。用M-H肉湯將腎炎康浸膏進(jìn)行二倍稀釋后，分別于2ml含藥培養(yǎng)液中接種50uL受試液，置于37t:孵育18-20小時(shí)，肉眼觀察，以無細(xì)菌生長試管中所含藥物的最低濃度物為該菌的最低抑菌濃度(MIC值)。分別吸取肉眼觀察無細(xì)菌生長的試管的培養(yǎng)液O.lmL涂于不含藥物的瓊脂平皿表面，繼續(xù)37t:孵育18-24小時(shí)后，以瓊脂平皿上未見細(xì)胞生長的對(duì)應(yīng)試管的藥物最低濃度作為藥物對(duì)該菌的最低殺菌濃度(MBC)。1.2.1.3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果顯示，腎炎康浸膏對(duì)所試臨床分離致病菌均現(xiàn)出一定的抗菌活力，其中對(duì)所試金葡球菌、表葡球菌、肺炎鏈球菌的MIC值為50>200mg生藥/mL;對(duì)所試大腸埃希菌、產(chǎn)氣腸桿菌、陰溝腸桿菌、銅綠假單胞菌的MIC值為100>200mg生藥/mL;腎炎康浸膏的最低殺菌濃度(MBC)為其MIC值的2倍以上，表明本品主要為抑菌作用。101.2.2體內(nèi)抑菌試驗(yàn)1.2.2.1實(shí)驗(yàn)材料(1)實(shí)驗(yàn)藥物①受試藥物上述實(shí)施例1的腎炎康浸膏，每g相當(dāng)于原生藥5.56g。實(shí)驗(yàn)時(shí)用0.5%CMC配制成濃度為200mg生藥/mL、100mg生藥/mL、50mg生藥/mL、25mg生藥/mL、12.5mg生藥/mL(給藥劑量為5000、2500、1250、625、312.5mg生藥/kg)的藥液備用。②陽性藥物氟哌酸膠囊，規(guī)格0.lg/粒，批號(hào)011104，浙江醫(yī)藥股份有限公司仙琚制藥廠生產(chǎn)。實(shí)驗(yàn)時(shí)用0.5%CMC配制成濃度為4mg/mL、2mg/mL、lmg/mL、0.5mg/mL、0.25mg/mL(給藥劑量為100mg/kg、50mg/kg、25mg/kg、12.5mg/kg、6.25mg/kg)的藥液備用。(2)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用健康昆明種小鼠，體重18-22克，雌雄各斗，由四川抗菌素工業(yè)研究所動(dòng)物繁殖室提供。動(dòng)物合格證號(hào)川實(shí)動(dòng)質(zhì)管第99-7號(hào)。(3)實(shí)驗(yàn)菌種用于感染動(dòng)物的細(xì)菌為金黃色葡萄球菌01-19-2、大腸埃希菌01-1-1，系2001年從成都地區(qū)收集的臨床分離致病菌，并經(jīng)本室用API方法重新鑒定。挑取試驗(yàn)菌的2-3個(gè)單菌落接種于M-H肉湯中，3(TC培養(yǎng)18小時(shí)，用5%滅菌干酵母液適當(dāng)稀釋備用。1.2.2.2.實(shí)驗(yàn)方法(1)最小致死菌量(MLD)的測定取健康昆明種小鼠，體重18-22克，隨機(jī)分組，每組5只小鼠，雌雄兼用，吸取上述不同稀釋度的菌液分別腹腔注射入小鼠體內(nèi)，每鼠0.5mL，感染后連續(xù)觀察7天，并記錄小鼠死亡數(shù)，以引起小鼠100%死亡的最低菌量作為最小致死菌量(MLD)。用該菌量作為體內(nèi)保護(hù)試驗(yàn)的感染菌量。(2)感染及治療方法將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按性別、體重隨機(jī)均勻分組，每組10只小鼠，雌雄各半，分別給小鼠口服灌胃不同濃度的腎炎康浸膏，每只鼠O.5ml/次，20g，連續(xù)3天，然后分別給小鼠腹腔注射感染菌液，O.5ml/鼠，感染后，再分別給小鼠口服灌胃不同濃度的氟哌酸膠囊，每只鼠0.5ml/次20g，同時(shí)設(shè)感染對(duì)照組，記錄感染后七天內(nèi)小鼠死亡數(shù)，按Bliss法計(jì)算半數(shù)有效劑量ED50及95%可信限，(3)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理腎炎康浸膏與對(duì)照藥氟哌酸膠囊對(duì)金黃色葡萄球菌01-19-2、大腸埃希菌01-1-1感染小鼠的體內(nèi)保護(hù)作用按Bliss法計(jì)算半數(shù)有效劑量ED50及95%可信限。1.2.2.3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果腎炎康浸膏和氟哌酸膠囊對(duì)金色葡萄球菌01-19-2和大腸埃希菌01-1-1感染小鼠體內(nèi)保護(hù)作用。腎炎康膠囊對(duì)小鼠體內(nèi)感染金葡球菌和表葡球菌均有一定的保護(hù)作用，腎炎康浸膏對(duì)小鼠體內(nèi)感染金葡球菌01-19-2、大腸埃希菌01-1-1的半數(shù)有效劑量分別為1714.9mg生藥/kg和2113.2mg生藥/kg。氟哌酸膠囊對(duì)小鼠體內(nèi)感染金葡球菌01-19-2、大腸埃希菌01-1-1的半數(shù)有效劑量分別為35.00mg/kg和39.57mg/kg。1.2.3.結(jié)論經(jīng)試驗(yàn)表明，腎炎康浸膏體外對(duì)常見臨床分離致病菌呈現(xiàn)一定的抑菌作用，對(duì)本實(shí)驗(yàn)所試細(xì)菌的MIC值范圍為50>200mg生藥/mL;體內(nèi)對(duì)敏感的金葡球菌、大腸埃希菌感染小鼠具有一定保護(hù)作用，其半數(shù)有效劑量ED50分別為1714.9mg生藥/mL、21132mg生藥/ml。1.3抗炎試驗(yàn)1.3.l實(shí)驗(yàn)材料(1)藥物受試藥物上述實(shí)施例1腎炎康浸膏，每g相當(dāng)于原生藥5.56g。實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配制成7.67%、3.83%、1.92%藥液(每ml分別相當(dāng)于原生藥O.4265g、0.2133g、0.1067g)備用。陽性對(duì)照藥物①阿斯匹林，由江蘇阿斯利康制藥有限公司生產(chǎn)。生產(chǎn)批號(hào)20030905。規(guī)格O.lg/片。實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸鎦水配制成0.67%的藥液備用。②地塞米松，浙江仙琚制藥股份有限公司生產(chǎn)。批準(zhǔn)文號(hào)國藥準(zhǔn)字H33020882。生產(chǎn)品號(hào)030719。規(guī)格0.75mg/片。實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配制成0.0075%的藥液備用。③吲哚美辛腸溶片，中國醫(yī)藥集團(tuán)總公司國藥集團(tuán)國瑞藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。批準(zhǔn)文號(hào)國藥準(zhǔn)字H33020882。生產(chǎn)批號(hào)020426。規(guī)格25mg/片。實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配制成0.5%的藥液備用。④風(fēng)濕骨痛膠囊，安徽精方藥也股份有限公司生產(chǎn)。批準(zhǔn)文號(hào)國藥準(zhǔn)字Z34020025。生產(chǎn)批號(hào)030702。實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配制成8%的藥液備用。(2)動(dòng)物昆明種小鼠，雄性，體重26-30g。動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)川實(shí)動(dòng)管(99)第7號(hào)。SD大鼠，雄性，體重160-180g。動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)川實(shí)動(dòng)管(99)第8號(hào)。均由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，檢疫后備用。1.3.2實(shí)驗(yàn)方法(1)小鼠二甲苯耳廓腫脹試驗(yàn)取昆明小鼠50只，隨機(jī)分為模型對(duì)照組(N=10)、陽性對(duì)照組(N=10)、腎炎康浸膏高劑量組(N=10)、中劑量組(N=10)、低劑量組(N=10)。按組分別灌胃蒸餾水、0.67%阿司匹林藥液、7.67%、3.83%、1.92%腎炎康浸膏藥液10ml/kg。給藥1小時(shí)后，每只小鼠右耳滴注O.05ml二甲苯，藥后2小時(shí)脫頸椎處死，用9mm打孔器分別在同一部位摘取小鼠雙耳片，稱重，求兩耳片之差值，即為耳腫脹度。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。(2)大鼠巴豆油肉芽腫試驗(yàn)取SD大鼠50只，于大鼠背部肩胛區(qū)皮下注射20ml空氣形成氣囊，隨即向氣囊內(nèi)注入1%巴豆油合劑(取lml，用99ml色拉油配制成)lml。然后將鼠背朝下，徐徐轉(zhuǎn)動(dòng)，使巴豆油與囊壁組織均勻接觸。24小時(shí)后，抽去氣囊內(nèi)空氣。造模后，將大鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組(N=10)、陽性對(duì)照組(N=10)、腎炎康浸膏高劑量組(N=10)、中劑量組(N=10)、低劑量組(N=10)。按組分別灌胃蒸餾水、0.0075%地塞米松藥液、7.67%、3.83%、1.92%腎炎康浸膏藥液10ml/kg，每日一次，連續(xù)給藥7日。第7日，末次給藥1小時(shí)后處死動(dòng)物，抽取滲出液，剝離肉芽腫并稱重。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。(3)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎試驗(yàn)取SD大鼠60只，隨機(jī)分為模型對(duì)照組(N=10)、西藥陽性對(duì)照組(N=10)、中藥陽性對(duì)照組(N=10)、腎炎康浸膏高劑量組(N=10)、中劑量組(N=10)、低劑量組(N=10)。水容積法測定各組大鼠雙足趾的容積值后，每鼠右足趾皮內(nèi)注射弗式完全佐劑0.05mL。致炎后1小時(shí)，按組分別灌胃蒸鎦水、0.5%消炎痛藥液、8%風(fēng)濕骨痛膠囊藥液、7.67%、3.83%、1.92%腎炎康浸膏藥液10ml/kg.d，連續(xù)給藥24天。測定致炎后18h、4d、8d、10d、12d、15d、18d、22d、23d足跖容積，以致炎前后足跖容積之差作為腫脹度。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。1.3.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果(2)對(duì)巴豆油致炎大鼠肉芽腫及滲出液的影響模型組大鼠肉芽組織增生明顯，給予地塞米松或腎炎康浸膏治療后肉芽濕重明顯減輕，滲出液明顯減少。與模型組比較，有顯著性或極顯著性差異。結(jié)果詳見表ll。表11腎炎康浸膏對(duì)巴豆油致炎大鼠肉芽腫及滲出液的影響(文士SD)動(dòng)物(只)劑量(g/kg)滲出液(mL)肉芽濕重(g)~注與模型組比較，P<0.05，P<0.01，P<0.001。(3)對(duì)免疫佐劑性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型的影響模型組大鼠給予弗氏完全佐劑后18小時(shí)，足跖即腫脹明顯，持續(xù)24天。給予消炎痛、風(fēng)濕骨痛膠囊后模型大鼠足跖腫脹明顯減輕，與模型組比較，有顯著性或極顯著性差異。給予腎炎康浸膏后，模型大鼠足跖腫脹亦明顯減輕。其中，中劑量組在18h與模型組比較，有顯著性差異。結(jié)果詳見表12。表12大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎足關(guān)節(jié)腫脹度(ml)統(tǒng)計(jì)結(jié)果(X±SD)細(xì)'J，n，，…量18h4d8d10d12dC只)Cg/kg)(1)對(duì)二甲苯致炎小鼠耳廓腫脹的影響模型組二甲苯致炎后，右耳腫脹明顯。經(jīng)阿司匹林、腎炎康浸膏治療后，小鼠耳廓腫脹度明顯降低。其中，以陽性對(duì)照組、高、中劑量組較為明顯，但與模型組比較，無顯著性差異。結(jié)果詳見表10、11。表10腎炎康浸膏對(duì)二甲苯致炎小鼠耳廓腫脹的影響(文士SD)動(dòng)物(只)劑量(g/kg)耳片腫脹度(mg)蒸餾水5.05±1.985.13±2.190.000751.15±0.59***1.12±0.54***4.2652.8敏92**3.03±0.89**2.1334.09±12.503.52±1,93*1.0674.45±1.983.73±1,09*蒸餾水0.050.84.2652.1331.0670.59歸.190.481±0.1580,523±0.1790,491±0.1040.358迫125**0.492±0.1200.58做2230.463幼.1830.465±0.:2320.58燦.1720,463迫1760.505±0.1460.606±0.3610.388±0.179*0,455±0.2050.50純2090.553±0,1340.562±0.1710.616±0.2390.281±0.242*承0.425±0,202*0.514±0.200.553±0,1560.512±0.2060.516±0.1770.20,.128承**0.455±0.2170.545±0.1310.453±0.1980.487±0.132微十10懶慢組1010.蒸餾水7.4±4.3100.0676肚2.5104.2656.1±2.8102.1336.6±2,6101.0677.1±3.7gi但i巨且且;侍纟自經(jīng)樹樹懂糧糧型性劑劑劑模陽髙中低o、對(duì)對(duì)量量照藥照藥照剎組劑組西中.一。t中県昭J且且且柳樹懂糧糧型性劑劑劑模陽高中低1315d18d22d23d24d0.601±0.2350.526±0.1770,686±0.3660,686±0,3340.676±0.2920.513±0.1900.388±0.1210.225±0.113***0.200±0.093***0.16燦.075***0.495±0.2970.545±0.1980370±0.176**0.290±0,129***0.225±0,101***0.57歸1640.420±0,2320.60&t0.1840.55跳1980.52純2080.503±0.1390.448±0,1120.583±0.1420.573±0.1350.543幼.1720.532iO.2640.477±0.1170.612±0.1220.642±0.2080.612±0.204注與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01，微P<0.001。1.3.4結(jié)論腎炎康浸膏具有減輕二甲苯所致小鼠耳腫脹度的趨勢；能明顯對(duì)抗巴豆油所致大鼠肉芽組織的增生，減少炎性滲出液的形成；有抑制弗氏完全佐劑所致大鼠足關(guān)節(jié)炎性滲出及減輕足跖腫脹的趨勢。結(jié)果提示，腎炎康浸膏具有一定的抗炎作用。1.4利尿試驗(yàn)驗(yàn)1.4.l實(shí)驗(yàn)材料(1)藥物受試藥物上述實(shí)施例1的腎炎康浸膏，每g相當(dāng)于原生藥5.56g。實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配制成3.07%、1.53%、0.77%藥液(每ml分別相當(dāng)于原生藥0.1707g、0.0853g、0.0427g)備用。陽性藥物氫氯噻嗪片，丹陽市藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)。批準(zhǔn)文號(hào)國藥準(zhǔn)字H32020330。生產(chǎn)批號(hào)20030138。規(guī)格25mg/片。實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配制成0.14%的藥液備用。(2)動(dòng)物SD大鼠，雌雄各半，體重180-220克。動(dòng)物使用許可證號(hào)川實(shí)動(dòng)管質(zhì)(99)第8號(hào)。家兔，全雄，體重1.8-22千克。動(dòng)物使用許可證號(hào)川實(shí)動(dòng)管質(zhì)(99)第11號(hào)。均由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供。檢疫后備用。1.4.2實(shí)驗(yàn)方法(1)大鼠代謝籠法取SD大鼠若干，禁食不禁水18小時(shí)后，分別灌胃蒸餾水25m1/kg作為水負(fù)荷。選取2小時(shí)尿量超過1.5ml的大鼠50只，按尿量隨機(jī)分為空白對(duì)照組(N=10)、陽性對(duì)照組(N=10)、腎炎康浸膏高劑量組(N=10)、中劑量組(N=10)、低劑量組(N=10)。按組分別灌胃蒸餾水、0.14%氫氯噻嗪藥液、3.07%、1.53%、0.77%牛蒡子藥液25ml/kg。用藥后輕壓大鼠下腹部排出余尿，置代謝籠內(nèi)測定藥后2h、4h的尿量。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。(2)家兔導(dǎo)尿管集尿法取鍵康雄兔40只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組(N=8)、陽性對(duì)照組(N=8)、高劑量組(N=8)、中劑量組(N=8)、低劑量組(N=8)。按組分別灌胃蒸餾水、0.14%氫氯噻嗪藥液、3.07%、1.53%、0.77X牛蒡子藥液25ml/kg。藥后半小時(shí)，用3%戊巴比妥鈉耳緣靜脈注射麻醉(30mg/kg)，麻醉后固定在兔手術(shù)臺(tái)上，插入涂液體石蠟的導(dǎo)尿管到膀胱，排除膀胱余尿。麻醉后30分鐘，于耳緣靜脈推注10ml/kg生理鹽水(2ml/分鐘)。記錄灌胃給藥后2h、3h、4h、5h量尿。試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。1.4.3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)大鼠代謝籠法大鼠給予水負(fù)荷后，尿量明顯增加，在給藥2小時(shí)內(nèi)，組間比較無顯著性差異。給藥后2-4小時(shí)，陽性對(duì)照組、牛蒡子高劑量組尿量顯著增加，與空白組比較，有顯著性差異。(2)家兔導(dǎo)尿管法陽性對(duì)照組、牛蒡子高劑量組尿量顯著增加，與空白對(duì)照組比14較，有顯著性或極顯著性差異；中、低劑量組各時(shí)間段尿量與空白對(duì)照組雖無顯著性差異，但有增加的趨勢。1.4.4.結(jié)論腎炎康浸膏高、中劑量能明顯增加大鼠的尿量；高劑量能明顯增加家兔3小時(shí)內(nèi)的尿量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，腎炎康浸膏在較高劑量下具有明顯的利尿作用。1.5.解熱試驗(yàn)1.5.l實(shí)驗(yàn)材料(1)藥物受試藥物上述實(shí)施例1的腎炎康浸膏，每g相當(dāng)于原生藥5.56g。實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配制成7.67%、3.83%、1.92%藥液(每ml分別相當(dāng)于原生藥0.4265g、0.2133g、0.1067g)備用。陽性對(duì)照藥物阿斯匹林，由江蘇阿斯利康制藥有限公司生產(chǎn)。生產(chǎn)批號(hào)20030905。規(guī)格O.lg/片。實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配制成0.67%的藥液備用。(2)動(dòng)物家兔，雌雄不拘，體重1.8-2.2千克，由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，動(dòng)物使用許可證號(hào)川實(shí)動(dòng)管質(zhì)(99)第11號(hào)。檢疫后備用。1.5.2.實(shí)驗(yàn)方法取家兔55只，連續(xù)3日于上午9時(shí)測體溫，選擇平均基礎(chǔ)體溫38-39.2t:家兔48只。按體溫高低隨機(jī)分為空白對(duì)照組(N二8)、模型對(duì)照組(N二8)、陽性對(duì)照組(N=8)、腎炎康浸膏高劑量組(N=8)、中劑量組(N=8)、低劑量組(N=8)。除空白對(duì)照組外，按組分別灌胃蒸餾水、0.67%阿司匹林藥液、7.67%、3.83%、1.92%腎炎康浸膏藥液10ml/kg。給藥后30min，耳緣靜脈推注大腸桿菌內(nèi)毒素250ng/kg。測定給藥后lh、2h、3h、4h、6h家兔體溫。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。1.5.3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果模型組動(dòng)物給予內(nèi)毒素后1小時(shí)，體溫即顯著升高，持續(xù)6小時(shí)，與空白組比較，均有極顯著性差異。經(jīng)陽性對(duì)照藥、腎炎康膠囊治療后，體溫明顯降低，與模型組比較，有顯著性或極顯著性差異。1.5.4.結(jié)論腎炎康浸膏能顯著降低由大腸桿菌內(nèi)毒素所致發(fā)熱家兔的體溫。結(jié)果提示，腎炎康浸膏具有顯著的解熱降溫作用。1.6.小結(jié)腎炎康浸膏為中藥牛蒡子的有效提取部位，具有抑菌、抗炎、利尿、解熱等藥理作用。經(jīng)主要藥效學(xué)試驗(yàn)研究，結(jié)果表明(1)腎炎康浸膏能明顯減少同種免疫復(fù)合物型腎小球腎炎大鼠動(dòng)物模型尿蛋白含量，降低血清尿素氮和肌酐。(2)腎炎康浸膏能明顯逆轉(zhuǎn)陽離子牛血清所致大鼠腎小球腎炎動(dòng)物模型腎和腎上腺的病理改變，對(duì)抗血清尿素氮和肌酐的升高，減少尿蛋白含量和尿肌酐；顯著增加其24小時(shí)內(nèi)生肌酐清除率；明顯降低CD8、IL-6、IC-RR，升高CD3、CD4、CD4/CD8、SOD、C3b-RR;能明顯升高腎皮質(zhì)中SOD，降低MDA。(3)腎炎康浸膏對(duì)所試臨床分離致病菌均現(xiàn)出一定的抗菌活力，其中對(duì)所試金葡球菌、表葡球菌、肺炎鏈球菌的MIC值為50>200mg生藥/mL;對(duì)所試大腸埃希菌、產(chǎn)氣腸桿菌、陰溝腸桿菌、銅綠假單胞菌的MIC值為100>200mg生藥/mL;腎炎康浸膏的最低殺菌濃度(MBC)為其MIC值的2倍以上，表明本品主要為抑菌作用。腎炎康浸膏對(duì)金黃色葡萄球菌01-19-2和大腸埃希菌01-1-1感染小鼠具有體內(nèi)保護(hù)作用；對(duì)小鼠體內(nèi)感染金葡球菌和表葡球菌均有一定的保護(hù)作用。腎炎康浸膏對(duì)小鼠體內(nèi)感染金葡球菌01-19-2、大腸埃希菌01-1-1的半數(shù)有效劑量分別為1714.9mg生藥/kg和2113.2mg生藥/kg。(4)腎炎康浸膏對(duì)大鼠、家兔水負(fù)荷動(dòng)物模型具有較強(qiáng)的利尿作用。(5)腎炎康浸膏能明顯對(duì)抗巴豆油所致大鼠肉芽組織的增生，減少炎性滲出液的形成；有減輕二甲苯所致小鼠耳腫脹度的趨勢，有抑制弗氏完全佐劑所致大鼠足關(guān)節(jié)炎性滲出及減輕足跖腫脹的趨勢。(6)腎炎康浸膏能顯著降低由大腸桿菌內(nèi)毒素所致發(fā)熱家兔的體溫。結(jié)果提示，腎炎康浸膏較高劑量下對(duì)腎小球腎炎病變具有明顯的對(duì)抗作用，具有較強(qiáng)的解熱、利尿作用，有一定的抑菌、抗炎作用。2、藥理試檢2.1對(duì)小鼠精神神經(jīng)系統(tǒng)的影響2.1.l實(shí)驗(yàn)材料(1)藥凈勿受試藥物上述實(shí)施例1的腎炎康浸膏，每g相當(dāng)于原生藥5.56g。實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配制成7.67%、3.83%、1.92%藥液(每ml分別相當(dāng)于原生藥O.427g、0.213g、0.107)備用。陽性藥物舒樂安定，常州四藥制藥有限公司生產(chǎn)。批準(zhǔn)文號(hào)蘇衛(wèi)藥準(zhǔn)字(1982)第280801號(hào)。生產(chǎn)批號(hào)020107。規(guī)格lmgX20片/板。實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配制成O.00667%的藥液備用。(2)動(dòng)物昆明種小鼠，雌雄各半，體重18-22克。由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供。動(dòng)物使用許可證號(hào)川實(shí)動(dòng)管質(zhì)(99)第7號(hào)。檢疫后備用。2.1.1.2實(shí)驗(yàn)方法(1)對(duì)小鼠一般行為的影響取昆明小鼠50只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組(N=10)、陽性對(duì)照組(N=10)、腎炎康浸膏高劑量組(N=10)、中劑量組(N=10)、低劑量組(N=10)。除空白對(duì)照組外，按組分別灌胃蒸餾水、0.00667%舒樂安定藥液、7.67%、3.83%、1.92%的腎炎康浸膏藥液10ml/kg。觀察給藥后動(dòng)物的一般行為表現(xiàn)、姿勢、步態(tài)有無異常等變化。給藥60分鐘后，用小動(dòng)物自發(fā)活動(dòng)測定儀測定小鼠五分鐘內(nèi)自發(fā)活動(dòng)的次數(shù)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。(2)協(xié)同催眠試驗(yàn)取昆明小鼠50只，隨機(jī)分為模型對(duì)照組(N=10)、陽性對(duì)照組(N=10)、腎炎康浸膏高劑量組(N=10)、中劑量組(N=10)、低劑量組(N=10)。按組分別灌胃蒸餾水、0.00667%舒樂安定藥液、7.67%、3.83%、1.92%的腎炎康浸膏藥液10m1/kg。給藥60分鐘后，每只小鼠均腹腔注射l^戊巴比妥鈉50mg/kg，記錄小鼠睡眠時(shí)間(翻正反射消失持續(xù)時(shí)間)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。(3)閾下催眠試驗(yàn)取昆明小鼠50只，隨機(jī)分為模型對(duì)照組(N=10)、陽性對(duì)照組(N=10)、腎炎康浸膏高劑量組(N=10)、中劑量組(N=10)、低劑量組(N=10)。按組分別灌胃蒸餾水、0.00667%舒樂安定藥液、7.67%、3.83%、1.92%的腎炎康浸膏藥液10m1/kg。給藥60分鐘后，腹腔注射l^戊巴比妥鈉25mg/kg，記錄小鼠睡眠只數(shù)(翻正反射消失)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。2.1.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)對(duì)小鼠一般行為的影響腎炎康浸膏各劑量組給藥后，動(dòng)物均未出現(xiàn)抽搐、麻痹、肌顫，無異常步態(tài)，對(duì)外界反應(yīng)靈敏，瞳孔無擴(kuò)大或縮小，眼球無突出，眼瞼無下垂，呼吸正常，無興奮或抑制，自發(fā)活動(dòng)無明顯增多或減少，與空白對(duì)照組比較，無顯著性差異。(2)協(xié)同催眠試驗(yàn)陽性藥物能明顯縮短模型小鼠睡眠潛伏期，延長睡眠時(shí)間，與模型組比較，有極顯著性差異。腎炎康浸膏各劑量組對(duì)小鼠睡眠時(shí)間無影響，與模型組比較，無顯著性差異。(3)閾下催眠試驗(yàn)?zāi)Ｐ托∈蠼o予戊巴比妥鈉閾下量后，未見睡眠或翻正反射消失；陽性藥物能明顯促進(jìn)閾下小鼠睡眠。與模型組比較，有顯著性差異。牛蒡子各劑量組與模型組比較，無顯著性差異。2.1.4結(jié)論腎炎康浸膏對(duì)小鼠一般行為無影響，對(duì)小鼠戊巴比妥鈉閾下催眠無明顯作用，對(duì)戊巴比妥鈉所致睡眠小鼠無協(xié)同作用。結(jié)果提示，腎炎康浸膏對(duì)動(dòng)物精神神經(jīng)系統(tǒng)無影響。2.2對(duì)麻醉犬呼吸系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)的影響2.2.l實(shí)驗(yàn)材料(1)藥物及試劑受試藥物上述實(shí)施例1的腎炎康浸膏，每g相當(dāng)于原生藥5.56g。實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配制成5%、10%、20%的藥液備用(分別相當(dāng)于每日臨床劑量的6.5、13、26倍)。試劑戊巴比妥鈉，含量^95.0%，批號(hào)F20020915，中國醫(yī)藥(集團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司進(jìn)口分裝；氯化鈉注射液，批號(hào)021021，四川奇力同心制藥有限公司生產(chǎn)；肝素鈉注射液，批號(hào)20020504，12500單位/m1/支，天津市生物化學(xué)制藥廠生產(chǎn)，用氯化鈉注射液配制成50U/ml備用。(2)主要儀器心電圖記錄儀(ECG-6511)，上海光電醫(yī)用電子儀器有限公司產(chǎn)品；BL-410生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，成都泰盟電子有限公司產(chǎn)品YH-4型生理壓力傳感器和HXH-1型呼吸波傳感器，北京航天生物醫(yī)學(xué)工程研究所產(chǎn)品，MC-3型歐姆龍?bào)w溫計(jì)，歐姆龍(大連)有限公司產(chǎn)品。(3)動(dòng)物選擇符合實(shí)驗(yàn)要求的健康雜種犬24只，(雌12只、雄12只)，體重8-15kg，市購。犬購回后，飼養(yǎng)觀察三周，飼養(yǎng)環(huán)境有足夠的活動(dòng)空間，室內(nèi)光照、濕度、溫度適宜(室溫18-2(TC，相對(duì)濕度60-70%)，通風(fēng)條件良好。實(shí)驗(yàn)環(huán)境設(shè)施一級(jí)，合格證號(hào)醫(yī)動(dòng)字24A00001。2.2.2實(shí)驗(yàn)方法選擇符合實(shí)驗(yàn)要求的健康犬隨機(jī)分成蒸餾水對(duì)照組、腎炎康浸膏高劑量組、腎炎康浸膏中劑量組、腎炎康浸膏低劑量組，每組6只，雌雄各半。試驗(yàn)在屏蔽室內(nèi)進(jìn)行，空調(diào)室溫20-22°C，相對(duì)濕度60-68%。將犬用戊巴比妥鈉30mg/kg靜脈注射麻醉，四肢接標(biāo)準(zhǔn)心電圖肢導(dǎo)聯(lián)，描記標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)；HXH-1型呼吸波傳器固定于犬劍狀軟骨處；分離頸總動(dòng)脈，將與YH-4型生理壓力傳感器連接的動(dòng)脈插管(管內(nèi)充滿50U.ml-l肝素鈉氯化鈉溶液)插入頸總動(dòng)脈內(nèi)固定。呼吸波傳感器接入BL-410系統(tǒng)的通道1，生理壓力傳感器接入通道2，在計(jì)算機(jī)中記錄呼吸、血壓；電子溫度計(jì)由肛門插入約45cm測量體溫。待各項(xiàng)觀察指標(biāo)穩(wěn)定后，分別在給藥前測定兩次心電圖、呼吸、血壓和體溫，間隔時(shí)間約30分鐘，其二次平均值作為藥前對(duì)比值。然后按組分別插管灌胃蒸餾水、20%腎炎康浸膏、10%腎炎康浸膏、5%腎炎康浸膏5ml/kg，分別于給藥后30、60、90、120、180、240分鐘測定一次血壓、心電圖、呼吸、體溫等參數(shù)，數(shù)據(jù)用SPSS11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。2.2.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.2.3.1對(duì)血壓、呼吸和體溫的影響(1)對(duì)麻醉犬血壓的影響對(duì)照組給予蒸餾水前及給予蒸餾水后30、60、90、120、180、240分鐘收縮壓、舒張壓穩(wěn)定，前后比較均無顯著性差異(均PX).05)。各給藥組給藥前后亦血壓穩(wěn)定，與對(duì)照組及給藥前后比較均無顯著性差異(均P>0.05)。結(jié)果詳見表13、表14、表15。<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>表19腎炎康浸膏對(duì)麻醉犬P波(ms)的影響(X±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>(3)對(duì)/^"犬T'^^J腎M;'旻t^后M'j彭且T波時(shí)間有延^i勢，T波振^"增高6，，^^鎮(zhèn)前后及與對(duì)殿m(^i均無明^t異。結(jié)果詳M20、21。—表20腎炎康浸膏對(duì)麻醉犬T波(nw)的影響(X士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>表21腎炎康浸膏對(duì)麻醉犬T波(ms)的影響(X±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>(4)對(duì)/^f犬R》MIHj腎ii^是膏敲tf&R波^^^^30^i中、6Q^中、90^i中、180射t、240Wf與空白纟肚睹i有錄ft^異，但絲前后t嫩;tS^f生差異。結(jié)果詳表22腎炎康浸膏對(duì)麻醉犬R波的影響(X±SD)鄉(xiāng)lj<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>注與對(duì)照組比較，APO.05;給藥前后比較，*P<0.05。CN1017323sA眾s步20/4St0185u〔0186〕2.2.4離疼項(xiàng)沐鐮彌順進(jìn)敦環(huán)^:&LE^nf^乂許錄^激急，、1>掛函沐^浙*^忍&m。都湘諷^,項(xiàng)^敏彌順逸絲蓉nfnsp」s^^縛w激急。2.3小結(jié)腎炎康浸膏為中藥牛蒡子的有效提取部位，經(jīng)對(duì)小鼠精神神經(jīng)系統(tǒng)，家犬呼吸系統(tǒng)和循環(huán)系統(tǒng)的一般藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)果表明(1)腎炎康浸膏對(duì)小鼠一般行為無影響，對(duì)小鼠閾下催眠無明顯作用，對(duì)戊巴比妥鈉所致睡眠小鼠無協(xié)同作用。(2)腎炎康浸膏對(duì)麻醉犬血壓、呼吸、體溫?zé)o明顯影響，心電圖未見有意義的改變。結(jié)果提示，腎炎康浸膏對(duì)動(dòng)物精神神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)無明顯影響。3、急性毒性試驗(yàn)3.1.實(shí)驗(yàn)材料3.1.1.受試藥物上述實(shí)施例1的腎炎康浸膏，每g相當(dāng)于原生藥5.56g。用蒸餾水配制成能通過灌胃針頭，可供試驗(yàn)使用的濃度。3.1.2.動(dòng)物昆明種小鼠，雌雄各半，體重18-22g，由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，動(dòng)物使用許可證號(hào)川實(shí)動(dòng)管質(zhì)(99)第7號(hào)。檢疫后備用。3.2.實(shí)驗(yàn)方法3.2.1灌胃給藥急性毒性試驗(yàn)經(jīng)預(yù)試驗(yàn)測定出腎炎康浸膏小鼠灌胃給藥的最小全死量和最大全活量，在最小全死量和最大全活量劑量范圍內(nèi)設(shè)定5個(gè)劑量值，分別配制成25%、39.25%、61.25%、95.75%、150%的腎炎康浸膏藥液。取昆明種小鼠50只，隨機(jī)分為5個(gè)劑量組，按組分別灌胃25%、39.25%、61.25%、95.75%、150%腎炎康浸膏藥液20m1/kg。觀察動(dòng)物給藥后的行為活動(dòng)等，記錄各劑量組7天內(nèi)動(dòng)物死亡只數(shù)，根據(jù)動(dòng)物死亡只數(shù)與給藥劑量的相關(guān)性建立直線回歸方程求出LD50。3.2.2.腹腔注射給藥急性毒性試驗(yàn)經(jīng)預(yù)試驗(yàn)測定出腎炎康浸膏小鼠腹腔注射給藥的最小全死量和最大全活量，在最小全死量和最大全活量劑量范圍內(nèi)設(shè)定5個(gè)劑量值，分別配制成13.38%、16.82%、21.15%、26.60%、33.45%的腎炎康浸膏藥液。取昆明種小鼠50只，隨機(jī)分為5個(gè)劑量組，按組分別腹腔注射13.38%、16.82%、21.15%、26.60%、33.45%腎炎康浸膏藥液10ml/kg。觀察動(dòng)物給藥后的行為活動(dòng)等，記錄各劑量組7天內(nèi)動(dòng)物死亡只數(shù)，根據(jù)動(dòng)物死亡只數(shù)與給藥劑量的相關(guān)性建立直線回歸方程求出LD50。3.3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.3.1.灌胃給藥急性毒性試驗(yàn)灌胃給予腎炎康浸膏藥液后，較大劑量組動(dòng)物多出現(xiàn)少動(dòng)、神差，死亡多發(fā)生在給藥后24h內(nèi)。動(dòng)物死亡情況詳見表25。直線回歸方程:Y=-2.18+16.08X，r=0.98。LD50=22.31g/kg，95%可信區(qū)間為14.8729.75g/kg。表25腎炎康浸膏灌胃給藥對(duì)動(dòng)物死亡的影響組別動(dòng)物(只)劑量(g/kg)死亡數(shù)(只)11002107.85031012.25241019.1535103083.3.2.腹腔注射給藥急性毒性試驗(yàn)腹腔注射腎炎康浸膏藥液30min后，較高劑量組動(dòng)物即出現(xiàn)神差、少動(dòng)，死亡多發(fā)生在給藥后24h內(nèi)。動(dòng)物死亡情況詳見表26。直線回歸方程:Y=-3.887+3.809X，R=0.99。LD50=2.33g/kg，95%可信區(qū)間為1.563.llg/kg。表26腎炎康浸膏腹腔注射給藥對(duì)動(dòng)物死亡的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>3.4.結(jié)論昆明種小鼠腎炎康浸膏灌胃的LD50為22.31g/kg，為臨床人用量的582倍；腹腔注射的LD50為2.33g/kg。結(jié)果提示，人日服腎炎康膠囊2.3g/60kg安全范圍較大。4、長期毒性試驗(yàn)4.1.l試驗(yàn)材料4.1.1.1受試藥物上述實(shí)施例1的腎炎康浸膏，每克相當(dāng)于原生藥5.56g。臨用蒸餾水分別配制成38.3%、19.2%、3.83%的藥液(每ml含原生藥分別為2.13g、1.07g、0.213g)備用。4.1.1.2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠，雌雄各半，體重100士15g，6-8周齡，由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，動(dòng)物使用許可證號(hào)川實(shí)動(dòng)管質(zhì)(99)第8號(hào)。檢疫后備用。4.1.1.3.主要試劑ALT、TP、ALB、T-BIL、T-CHO、Bun、Crea測試試劑由上?？迫A東菱公司生產(chǎn)，其生產(chǎn)批號(hào)分別為010701、010710、010713、010704、010711、010801、010723。AST、ALP、GLU測試試劑由成都邁克公司生產(chǎn)，其生產(chǎn)批號(hào)分別為010925、010823、010925。4.1.1.4.主要儀器CC-180型電子血球自動(dòng)記數(shù)儀，日本產(chǎn)。MIRACLEALE919型全自動(dòng)血液生化分析儀，日本NITTEC公司生產(chǎn)。4.1.2.試驗(yàn)方法經(jīng)檢疫后，選用健康合格SD大鼠160只，隨機(jī)分成對(duì)照組(N=40)、高劑量組(N=40)、中劑量組(N=40)、低劑量組(N=40)。按組分別灌胃蒸餾水、38.3%、19.2%、3.83%腎炎康浸膏藥液10ml/kg.d—、連續(xù)給藥13周，逐日觀察記錄一般狀態(tài)，每周稱體重一次及測定飼料消耗量。末次給藥24h后，每組隨機(jī)取26只大鼠，股靜脈采血。日本CC-180型電子血球記數(shù)儀作紅細(xì)胞(RBC)、血紅蛋白(Hb)、血小板(PLT)、白細(xì)胞(WBC)等檢查，光鏡下作白細(xì)胞分類(N.L)計(jì)數(shù)檢查。日本MIRACLEALE919型全自動(dòng)血液生化分析儀作天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、血糖(Glu)、總膽紅素(T-BIL)、總膽固醇(T-CHO)、尿素氮(B皿)、肌酐(Crea)的測定。處死動(dòng)物，進(jìn)行系統(tǒng)解剖，剖取心、肝、脾、肺、腎、腦、甲狀腺、胸腺、腎上腺、睪丸、前列腺、子宮、卵巢等，稱取重量，計(jì)算臟器系數(shù)；并取心、肝、脾、肺、腎、腦、甲狀腺、胸腺、腎上腺、前列腺、睪丸、子宮、卵巢等組織各一塊，立即投入10%甲醛液內(nèi)固定，石臘包埋，切片，HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察。余下動(dòng)物停藥，繼續(xù)觀察2周，作一般狀態(tài)，血液學(xué)及血液生化學(xué)、系統(tǒng)尸解和病理學(xué)組織學(xué)檢查，指標(biāo)方法同前。試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。4.1.3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1.3.1.—般狀態(tài)觀察受試動(dòng)物用藥期間，生長發(fā)育正常，肌肉豐滿，四肢健壯，皮膚富有彈性，被毛清潔光澤，緊貼于身，一般行為和一般狀態(tài)正常，攝食正常，動(dòng)物飼料消耗量各組無明顯差異；體重逐漸增加，雌性組高劑量9、10、11周、中劑量第6、9、10周，低劑量組第4、5周體重明顯降低。雄性大鼠中劑量組第13周、低劑量組第5、9周體重亦明顯降低。與空白對(duì)照組比較，有顯著性差異。雌雄合并統(tǒng)計(jì)，中、低劑量組第4、5、6、9、10、11、12周體重降低，與空白組比較，有顯著性差異。但給藥組體重改變無規(guī)律性，亦與給藥劑量無明顯相關(guān)性。4.1.3.2血液學(xué)檢測結(jié)果，雌性組腎炎康浸膏各劑量組與空白組比較，高劑量組WSCR降低，低劑量組HGB升高，差異有顯著性；雄性組腎炎康浸膏各劑量組與空白組比較，高劑量組MCV、MCH均升高且有極顯著性差異。雌雄合并組腎炎康浸膏各劑量組與空白組比較，高劑量組W-LCC、HGB升高而W-SCR降低，低劑量組HGB、PLT升高，且差異有顯著或極顯著性。結(jié)果詳見表27、28、29。表27腎炎康浸膏對(duì)雌性大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響(X±SD)柳jipi~~"iijirbc55imcvug%(xio9/i)uio12,',(fl)(pg)1)13蒸lf水1(5.68±3.1(5.71±0.6136.85±7.50.43±0.064.1扭3.920.65±1,的44336"綱133.S3W.37±4.47.22±O.S142.4扭7.80.43±0.163.82±4.319.99±2.737420403i卜齊ij131,921s.61土7.s6.7s±1.1141,38±12.0,46±0.067.75±4.916.78=13.9■2959642低劑設(shè)130.38314.92±4.26.71±U145.77±8,20.44±0.065.78±4.716.0s5-1s.554*:幼166MCHCPLTW-SCRW-LCRW-SCW-LCCRDW-CV(g/1)__腦_(,"C(x109/1)(x腳l)_322,77±29.41(517.3扭178.650.74士0.(u1.0.26±0.04112,40±2,534.27土1.070.1扭0.0Q67312.31±26.062623.31±19L230.紹士0.Q65'0,25±02205.27±〗.760.15±q.,6310.77±29,023714,3^244.40.69±0.0s60.24±0.22012.75±5.1S>5J5±3.23Q,15士0,013345.23±78.62~~737.54±135.勢~0.74±0.058~0.26±o.05s~1'1.085±3.203,83±1,420.15-0.011注,與空白組比較7p<0.05。表28腎炎康浸膏對(duì)雄性大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響(X±SD)動(dòng)物;'-〗、刻ag/kgwbcrbcO1012/1)hgb(滿hct(亂)mcv(fl)mch(Pg)s;鐘蒸fill水16.M工7317,的扭0.9W.4壯13.53'0,47±0.,冊.27±2.67n，i.23133.83.16■7.51±0.69149.15±8,790.4,鵬64,58±3.95**20.00±2.19*'*屮:腦131,9216,59±2.837.91±0,69146,3:1±8.4§■0.4純03361.10±2.S31認(rèn)±1,91腳〗:130.38317,39±5,527.,65±0.57149.00±6.440,48±0,03562.22±3.5219,55士1.4925<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>注與空白組比較，"p<0.01。表29腎炎康浸膏對(duì)大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響(X±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>注*與空白組比較，*p<0.05，**p<0.01，微p<0.001。4.1.3.3血液生化學(xué)檢測結(jié)果顯示，雌性腎炎康浸膏各劑量組與空白組比較，高劑量組ALB降低、AST升高，中劑量組ALB、A/G降低、AST升高，低劑量組TBIL降低，且差異有顯著或極顯著性；雄性腎炎康浸膏各劑量組與空白組比較，高劑量組ALT、AST、AKP升高而TBIL降低，中劑量組ALT、AST升高而TBIL降低，低劑量組GLU、BUN、TBIL降低而ALT升高，且差異有顯著或極顯著性；雌雄合并腎炎康浸膏各劑量組與空白組比較，高劑量組ALT、AST升高而TBIL降低，中劑量組ALT、AST升高而TBIL降低，明顯，明顯升高，低劑量組GLU、ALT、AST升高而BUN、TBIL降低。且差異有顯著或極顯著性。具體結(jié)果見表30、31、32。表30腎炎康浸膏對(duì)雌性大鼠血生化的影響(X±SD)組別動(dòng)物只劑量GLUBUNCREATP(mmol(mmol/(umol/L)(g/L)/L)L)AJLB(g/L)ALTAST(Iu/L)(Iu/L)空白結(jié)13蒸餾力6.59±0J7.24±0.950.14±6,2:79.54±4.:35.51±2,1:52.08±11.4183.15±29.高劑經(jīng)133.836.14±0.67.32±1.247.65±6.K7"7.82士4.]33.55±2.4:62.08±10.1249.69±44.中劑結(jié)131.926,59±1.17.19±2.054.32±16.(79.38±5.:32.33±2.4i61.46±13.8239,54±43.低劑g130.3837.01±1.26.78±1.148.94±7.6'81.35±5.S34.97土2.3'65.23±15.8280.08±82.AKPTBILCHOGLOBA/G(Iu/L)(umol/L)(mmol/L)Cg/L)295.69±90.761.47±0.551.54±0,3244.03±4,080.82±0.099316.62±98.37U4±0.571.58±0.2744.26±4.700,78±0.14370.92±141.200.89±0.511.44±0.3847.05±5.460,69±0.10**326.38±86.310,84±0.53**1.71±0.3646.38±5.700.77±0.095注與對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01，微P<0.001。27<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>注*與空白組比較,pO.05,"pO.01,"*p<0.001。4.1.3.7.3.血液生化學(xué)檢測結(jié)果，雌f生腎^ft^膏各劑彭且與空白^tkfe高劑1MAKP升高，^^彭且TBIL升高而AKP斷^差異有錄決雄性腎M^膏S^彭且CREA斷I^AKP升高，^^彭且AKPf射l與空白fetMt有M性差異；肚-^^充計(jì)，腎A^旻膏斜'J影且與空白&fc傲敲'J彰且AKP剩^4絲'JtMGLU、AKP斷fi^JLt異有^^^fe^^JW^結(jié)^J^40、41、42。表40腎炎康浸膏停藥2周對(duì)雌性大鼠血液生化學(xué)指標(biāo)的影響(X±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>生與空白對(duì)照組比較嚇<0.05。表41腎炎康浸膏停藥2周對(duì),大鼠血液生化學(xué)指標(biāo)的影響(X土SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>注與對(duì)照組比較*<0.05。<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>4.2.1.1.受試藥物上述實(shí)施例1的腎炎康浸膏，每g相當(dāng)于原生藥5.56g。臨用時(shí)加適量熟淀粉制成等體積藥丸備用。4.2.1.2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Beagle犬，雌雄各半，體重6-7kg，5-6月齡，由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所犬養(yǎng)殖場提供，合格證號(hào)醫(yī)動(dòng)字24103123。檢疫后備用。4.2.1.3.主要試劑ALT、TP、ALB、T-BIL、T-CHO、Bun、Crea測試試劑由上?？迫A東菱公司生產(chǎn)，其生產(chǎn)批號(hào)分別為020710、020717、020717、020601。AST、ALP、GLU測試試劑由成都邁克公司生產(chǎn)，其生產(chǎn)批號(hào)分別為020527、010220、020702、020607、020515。T-CHO測試試劑由北京中生生物工程技術(shù)公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)為020416。4.2.1.4.主要儀器MEDIC0N4000型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀，德國產(chǎn)。MIRACLEALE919型全自動(dòng)血液生化分析儀，日本NITTEC公司生產(chǎn)。4.2.2試驗(yàn)方法經(jīng)檢疫后，選用健康合格Beagle犬24只，隨機(jī)分成對(duì)照組(N=6)、高劑量組(N二6)、中劑量組(N二6)、低劑量組(N=6)。右手持臨時(shí)新鮮制作的藥丸，左手瓣開犬下顎，將藥丸放入犬舌根部，左右手合攏上下顎，使其自然吞下，直到藥物全吞下為止。(投藥每天上午9-10時(shí)進(jìn)行，投藥后即喂食。)按組分別給予等體積熟淀粉、556%腎炎康浸膏1.87g/kg.d-、0.94g/kg.d_、0.47g/kg.chl，連續(xù)給藥15周，逐日觀察記錄一般狀態(tài)，每周稱體重一次。給藥前連續(xù)兩次、給藥后45天、90天測各犬心電圖，股靜脈采血采用德國MEDIC0N4000型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀作紅細(xì)胞(RBC)、血紅蛋白(Hb)、血小板(PLT)、白細(xì)胞(WBC)、LYM(淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù))、MID(中間細(xì)胞計(jì)數(shù))、GRAN(粒細(xì)胞計(jì)數(shù))、MID(中間細(xì)胞百分率)、GRAN(粒細(xì)胞百分率)、HCT(紅細(xì)胞壓積)、MCV(平均紅細(xì)胞壓積)、MCH(平均紅細(xì)胞血紅蛋白量)、MCHC(紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度)、RDW-CV(紅細(xì)胞分布寬度變異數(shù))、LCDW-SD(紅細(xì)胞分布寬度標(biāo)準(zhǔn)差)、MPV(平均血小板體積)、PCT(血小板壓積容量)、LCDW(血小板趨向電極噪聲端的控制限)、RCDW(紅細(xì)胞與血小板之間的分布控制區(qū)間)、PDW(血小板體積分布寬度)、RC(網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù))檢查，日本MIRACLEALE919型全自動(dòng)血液生化分析儀作天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、血糖(Glu)、總膽紅素(T-BIL)、總膽固醇(T-CHO)、尿素氮(Bun)、肌酐(Crea)的測定。第90天，末次采血后清醒犬取側(cè)臥彎腰姿式，髂骨上棘穿剌抽取骨髓，進(jìn)行骨髓涂片；瑞氏染色，顯微鏡(NIKON日本)下觀察各細(xì)胞形態(tài)，并進(jìn)行分類計(jì)數(shù)(粒細(xì)胞、紅細(xì)胞、單核細(xì)胞系統(tǒng)等)。計(jì)數(shù)有核細(xì)胞200個(gè)，巨核細(xì)胞計(jì)數(shù)全片的總和，血小板計(jì)數(shù)25個(gè)(成熟有血小板形成和成熟無血小板形成)。每組隨機(jī)取4只犬，處死動(dòng)物，進(jìn)行系統(tǒng)解剖，剖取心、肝、脾、肺、腎、腦、甲狀腺、胸腺、腎上腺、睪丸、前列腺、子宮、卵巢、垂體稱取重量，計(jì)算臟器系數(shù)；并取心、肝、脾、肺、腎、腦、胰腺、甲狀腺、胸腺、腎上腺、胃、腸、前列腺、睪丸、子宮、卵巢、垂體、咽喉、氣管、頜下腺、肝(膽囊)、腦(小腦)、垂體、眼球(視網(wǎng)膜)、視神經(jīng)、脊髓、淋巴結(jié)、胃、食道、十二指腸、回腸、結(jié)腸、膀胱、附睪等組織各一±央，立即投入10%甲醛液內(nèi)固定，石臘包埋，切片，HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察。余下動(dòng)物停藥，繼續(xù)觀察3周，作一般狀態(tài)，心電圖學(xué)、血液學(xué)及血液生化學(xué)、骨髓、尸解和病理學(xué)組織學(xué)檢查，指標(biāo)方法同前。試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。4.2.3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.2.3.1.—般狀態(tài)觀察受試動(dòng)物用藥期間，被毛清潔光澤，緊貼于身，攝食正常，體重增加。各犬可視粘膜、孔竅無異常分泌物，大小便無異常，僅高劑量組用藥中后期部分36動(dòng)物出現(xiàn)流涎。各組動(dòng)物體重逐漸增加，組間比較無顯著性差異。4.2.3.2血液學(xué)檢測結(jié)果，受試動(dòng)物高劑量組給藥45天HCV、MCHC、RDW-SD明顯降低，LCDW明顯升高；給藥90天后RBC、HGB、HCT、MCH、MCHC顯著降低，LCDW明顯升高；中劑量組給藥90天后WBC、GRAN、RBC、HGB、MCHC均明顯降低。低劑量組給藥90天后MCHC、LCDW亦明顯降低。與對(duì)照組比較，均有顯著性或極顯著性差異。停藥21天后給藥組各項(xiàng)指標(biāo)均恢復(fù)正常。結(jié)果詳見表47、48、49、50、51。4.2.3.3血液生化學(xué)檢測結(jié)果，受試動(dòng)物高劑量組給藥45天、90天ALB、ALP明顯升高，給藥90天后TP降低；中、小劑量組TC、ALB、ALP亦升高。給藥組與對(duì)照組比較，有顯著或極顯著性差異。停藥21天后給藥組各項(xiàng)指標(biāo)均恢復(fù)正常。結(jié)果詳見表52、53、54、55、56。4.2.3.4系統(tǒng)尸解體表檢查受試動(dòng)物外觀狀態(tài)正常，肌肉豐滿，皮膚粘膜未見出血、感染。胸腹壁皮下組織檢查胸腹壁皮下組織無出血、感染。腹腔檢查腹腔內(nèi)無積液、積血及炎性滲出物，各臟器位置正常，肝、脾、胃、胰、腎、膀胱形態(tài)、色澤、質(zhì)地?zé)o異常。胸腔檢查腹腔內(nèi)無積液、積血及炎性滲出物，各臟器位置正常，心、肺、心包、縱隔和胸膜的顏色及形態(tài)正常?？谇弧㈩i部及胸腔器官檢查舌粘膜元出血和潰瘍，咽部未見出血和炎性被覆物，食管內(nèi)無出血和泡沫樣或膽汁樣物質(zhì)。喉頭、聲門周圍粘膜未見出血及水腫。肺色白，表面無瘀血、出血，及泡沫樣滲出物，肺切面無內(nèi)容物自小支氣管內(nèi)擠出。心臟大小、外形、心外膜無異常。心臟剖檢，心內(nèi)膜未見異常。腹腔臟器檢查脾臟大小、厚薄和堅(jiān)硬度正常，包膜表面平滑無皺紋。胰腺大小、色澤正常。胃內(nèi)除殘留物外，其容量、性狀正常，胃粘膜未見出血和感染壞死灶。各腸段長度、厚薄無異常，腸腔內(nèi)容物為消化食物，腸粘膜無脫落、水腫、出血、感染和壞死。腸系膜淋巴結(jié)未見腫大和出血。除高劑量組一只動(dòng)物出現(xiàn)肝臟略大，色澤黃，表面粗糙外，其余動(dòng)物肝臟形態(tài)、色澤、大小正常，無出血、瘀血、結(jié)節(jié)和脂肪變。腎臟形態(tài)、色澤正常，腎皮質(zhì)和髓質(zhì)無出血。膀胱內(nèi)壁粘膜無出血。腎上腺、生殖器未見異常。4.2.3.5.臟器稱重和臟器系數(shù)剖檢，電子天平稱取心、肝、脾、肺、腎、腦、甲狀腺、胸腺、腎上腺、睪丸、前列腺、子宮、卵巢、垂體臟器濕重，計(jì)算臟器系數(shù)。結(jié)果，受試動(dòng)物給藥90天高、中劑量組肝臟臟器系數(shù)明顯升高，與空白對(duì)照組比較有顯著性差異，停藥21天后均恢復(fù)正常。結(jié)果詳見表85、86。其余各主要臟器濕重處于犬臟器正常值范圍。4.2.3.6.病理組織學(xué)檢查受試動(dòng)物高、中劑量組給藥90天均有部分動(dòng)物出現(xiàn)肝臟不同程度的病理改變，心、肝、脾、肺、腎、腦、甲狀腺、胸腺、腎上腺、胃、腸、睪丸、前列腺、子宮、卵巢、陰道等的病理組織學(xué)檢查無異常。停藥21天后，肝臟組織的病理損害基本恢復(fù)或明顯減輕，與空白對(duì)照組比較無顯著性差異。結(jié)果詳見表57、58。4.2.3.7.骨髓造血系統(tǒng)的檢查受試動(dòng)物給予腎炎康浸膏90天及停藥21天粒系、紅系等均處于正常值范圍，各組比較無顯著性差異。結(jié)果詳見表59、60。4.2.3.8心電圖檢查受試動(dòng)物給藥90天心電圖各指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)，高劑量組P波、心率，中、低劑量組心率與空白對(duì)照組比較有顯著性差異。受試動(dòng)物停藥21天心電圖各指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)，高劑量組R波、QRS波、P-R間期，中劑量組P波、R波與空白對(duì)照組比較有顯著性差異。結(jié)果詳見表61、62、63、64、65。4.2.4結(jié)論Beagle犬給予556%腎炎康浸膏1.87g/kg.d_l(相當(dāng)于臨床用量的50倍)、0.94g/kg.d-1(相當(dāng)于臨床用量的25倍)、0.47g/kg.d_l(相當(dāng)于臨床用量的12.5倍)，連續(xù)90天，逐日觀察記錄，受試動(dòng)物除高劑量組部分動(dòng)物出現(xiàn)流涎外，一般狀態(tài)正常，攝食正常，體重增加，未見明顯毒副改變。經(jīng)心電圖學(xué)、血液學(xué)、血液生化學(xué)多指標(biāo)檢測、骨髓涂片，系統(tǒng)尸解和主要臟器病理組織學(xué)檢查，除高劑量組肝臟酶學(xué)及組織病檢出現(xiàn)可逆性異常外，其余未見有意義的毒副反應(yīng)。4.3小結(jié)腎炎康浸膏為中藥牛蒡子的有效提取部位，經(jīng)長期毒性試驗(yàn)表明，大鼠灌胃3.83g/kg.d-l，連續(xù)13周，Beagle犬給予1.87g/kg.d_l連續(xù)90天，未見明顯毒性。結(jié)果提示，腎炎康浸膏在有效劑量有效療程內(nèi)應(yīng)用安全。<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table>權(quán)利要求一種腎炎康浸膏，其特征在于由下述方法制得取牛蒡子用水分2-5次煎煮，每次加3-12倍量水，提取時(shí)間1-3小時(shí)，濾過，濾液離心，收集離心液，離心液通過已處理好的大孔吸附樹脂D101，用水洗至流出液無色，再用乙醇洗脫至流出液無色，收集洗脫液，減壓，回收乙醇并濃縮至60℃時(shí)的清膏相對(duì)密度為1.05～1.25，噴霧干燥，得燥浸膏粉。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的浸膏，其特征在于每次加6-10倍水提取。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的浸膏，其特征在于用水分2次煎煮。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的浸膏，其特征在于每次加8倍量水提取。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的浸膏，其特征在于提取時(shí)間1.5小時(shí)。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的浸膏，過濾液濃縮至6(TC時(shí)的相對(duì)密度為1.101.15。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的浸膏，過濾液濃縮至6(TC時(shí)的相對(duì)密度為1.121.14。8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的浸膏，其特征在于過濾濃縮至6(TC時(shí)的相對(duì)密度為1.13。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的浸膏，其特征在于所述乙醇的重量百分濃度為60%95%。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的浸膏，其特征在于所述乙醇的重量百分濃度為濃度為80%。11.權(quán)利要求i-io之一的浸膏用于制備抗炎藥物的用途。12.根據(jù)權(quán)利要求ll的用途，其特征在于浸膏用于制備改善腎臟代謝功能藥物的用途。13.權(quán)利要求1-10之一的浸膏用于制備抗菌藥物的用途。14.根據(jù)權(quán)利要求13的用途，其中抗菌藥物是抗金葡球菌、表葡球菌、肺炎鏈球菌、大腸埃希菌、產(chǎn)氣腸桿菌、陰溝腸桿菌或銅綠假單胞菌藥物。15.權(quán)利要求l-10之一的浸膏用于制備利尿藥物的用途。16.權(quán)利要求l-10之一的浸膏用于制備解熱藥物的用途。17.—種腎炎康浸膏組合物，其含有權(quán)利要求1-10之一的浸膏和可藥用輔料。18.根據(jù)權(quán)利要求17的組合物，其可以制成膠囊劑、片劑、顆粒劑、丸劑、噴霧劑、注射劑、洗劑、栓劑、合劑、口服液、擦劑、貼劑、膜劑、紙型劑、混懸劑、酊劑、干糖漿劑、膏劑、糖漿劑、乳劑、散劑、緩釋、控釋制劑及靶向制劑。19.根據(jù)權(quán)利要求18的組合物，其中的膠囊劑特征在于取利要求1-10之一的浸膏，過篩，與可藥用輔料混勻，填充入膠囊，即得。全文摘要本發(fā)明涉及腎炎康浸膏及其制備方法和用途，還涉及含有該浸膏的藥物組合物。本發(fā)明用水對(duì)牛蒡子進(jìn)行了提取制得腎炎康浸膏并進(jìn)行了活性研究，本發(fā)明工藝得到的腎炎康浸膏在改善腎臟代謝、抗菌、抗炎、解熱、利尿等方面具有明顯的效果。文檔編號(hào)A61P13/12GK101732384SQ20101000103公開日2010年6月16日申請(qǐng)日期2010年1月19日優(yōu)先權(quán)日2010年1月19日發(fā)明者唐靖雯,張麗艷,李孟林,梁斌,潘媛,潘梅,謝宇申請(qǐng)人:貴州威門藥業(yè)股份有限公司