專利名稱：交叉反應(yīng)性和雙特異性抗-il-17a/f抗體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一般涉及與IL-17A和IL-17F交叉反應(yīng)的抗體，和雙特異性抗-IL-17A/F 抗體，以及它們的用途。
背景技術(shù)：
白介素-17(IL_17)是來自T細(xì)胞的促炎分子，其刺激上皮、內(nèi)皮和成纖維細(xì)胞來 產(chǎn)生其它的炎性細(xì)胞因子和趨化因子，包括IL-6、IL-8、G-CSF和MCP-I [參見，Yao, Z.等 人，J. Immunol.(免疫學(xué)雜志)，122 (12) :5483-5486(1995) ；Yao, Z.等人，Immunity (免 疫)，3(6) :811-821(1995) ；Fossiez, F 等人，J. Exp. Med.(實驗醫(yī)學(xué)雜志)，183 (6) 2593-2603(1996) ；Kennedy, J 等人，J. Interferon Cytokine Res.(干擾素細(xì)胞因子 研究雜志)，16(8) :611-7(1996) ；Cai, X. Y 等人，Immunol. Lett (免疫學(xué)通訊)，62 (1) 51-8(1998) Jovanovic, D. V 等人，J. Immunol.(免疫學(xué)雜志)，160 (7) :3513-21(1998)； Laan, M 等人，J. Immunol.(免疫學(xué)雜志)，162 (4) :2347-52 (1999) ；Linden, A 等人，Eur Respir J (歐洲呼吸雜志)，15 (5) :973-7(2000)；和 Aggarwal，S.和Gurney，A. L.，J Leukoc Biol.(白細(xì)胞生物學(xué)雜志)71(1) 1-8 (2002) ]0 IL-17也與其他細(xì)胞因子，包括TNF-α 和IL-I β協(xié)同作用來進(jìn)一步誘導(dǎo)趨化因子的表達(dá)(Chabaud，M等人，J. Immunol.(免疫 學(xué)雜志)161(1) :409-14 (1998))。白介素_17 (IL-17)對多種類型的細(xì)胞表現(xiàn)出多效的生 物學(xué)活性。IL-17也具有誘導(dǎo)ICAM-I表面表達(dá)、T細(xì)胞增殖和⑶34+人祖細(xì)胞的生長和向 中性粒細(xì)胞的分化的能力。IL-17還參與骨代謝，并且已經(jīng)表明在以存在激活的T細(xì)胞和 TNF-α產(chǎn)生為特征的病理狀態(tài)如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨植入體的松動中發(fā)揮重要作用(Van Bezooijen 等人，J. Bone Miner. Res.(骨和礦物質(zhì)研究雜志)，14 1513-1521 [1999])。 發(fā)現(xiàn)與來自正常個體或骨關(guān)節(jié)炎的患者相比，來自類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的滑液組織的激 活的T細(xì)胞分泌更高量的IL-17 (Chabaud等人，Arthritis Rheum.(關(guān)節(jié)炎和風(fēng)濕病)， 42 :963-970 [1999])。人們提出這種促炎細(xì)胞因子活躍地促進(jìn)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中的滑液 炎癥。除了其促炎作用，IL-17似乎通過另一種機(jī)制促進(jìn)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的病狀。例如， 已經(jīng)顯示IL-17誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化因子(ODF)mRNA在成骨細(xì)胞中的表達(dá)(Kotake等人， J. Clin. Invest.(臨床研究雜志)，103 :1345_1352[1999])。ODF刺激祖細(xì)胞分化成破骨 細(xì)胞(參與骨吸收的細(xì)胞)。由于IL-17在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的滑液中顯著升高，似乎 顯示IL-17誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞的形成在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的骨吸收中發(fā)揮重要作用。IL-17 也被認(rèn)為在某些其它自身免疫性病癥如多發(fā)性硬化(Matusevicius等人，Mult. Scler. (多發(fā)性硬化)，5 :101-104(1999) ；Kurasawa, K 等人，Arthritis Rheu(關(guān)節(jié)炎和風(fēng)濕 病)43(11) :2455-63(2000))和銀屑病(Teunissen，M. B 等人，J Invest Dermatol (皮 膚病學(xué)研究雜志)111(4) =645-9(1998) ；Albanesi，C 等人，J Invest Dermatol (皮膚病 學(xué)研究雜志)115(1) =81-7(2000)；和 Homey，B 等人，J. Immunol.(免疫學(xué)雜志)164(12 6621-32(2000))中發(fā)揮關(guān)鍵作用。還進(jìn)一步顯示通過細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)IL-17刺激人巨噬細(xì)胞中Ca2+內(nèi)流和[cAMP^ 的降低(Jovanovic 等人，J. Immunol.(免疫學(xué)雜志)，160 :3513[1998])。IL-17 處理的成纖維細(xì)胞誘導(dǎo)NF-κ B的激活[Yao等人，Immunity (免疫)，3 :811 (1995)，Jovanovic等人， 見上文]，而其處理的巨噬細(xì)胞激活NF-K B和絲裂原活化蛋白激酶(Shalom-Barek等人， J.Biol.Chem.(生物學(xué)和化學(xué)雜志)，273 :27467 [1998])。此外，IL-17還與參與骨和軟骨 生長的哺乳動物細(xì)胞因子-樣因子7具有序列相似性。與IL-17多肽具有序列相似性的其 它蛋白為人胚胎衍生白介素相關(guān)因子(EDIRF)和白介素-20。與IL-17廣泛的效應(yīng)一致，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)IL-17的細(xì)胞表面受體在許多組織和細(xì)胞類 型中廣泛表達(dá)(Yao等人，Cytokine(細(xì)胞因子)，2 :794[1997])。盡管人IL-17受體(IL-R) 的氨基酸序列(866個氨基酸)預(yù)測了帶有單跨膜結(jié)構(gòu)域和長的、525個氨基酸的胞內(nèi)結(jié)構(gòu) 域的蛋白質(zhì)，該受體序列是獨特的且與來自細(xì)胞因子/生長因子受體家族的任何一種受體 不相似。這一點并結(jié)合IL-17本身與其它已知蛋白缺乏相似性表明IL-17及其受體可能是 新的信號傳導(dǎo)蛋白和受體家族的一部分。已經(jīng)證明IL-17的活性通過結(jié)合至其獨特的細(xì)胞 表面受體(本文稱為人IL-17R)介導(dǎo)，其中以前的研究已經(jīng)顯示通過可溶形式的IL-17受 體多肽接觸T細(xì)胞抑制了 PHA、伴刀豆球蛋白A和抗-TCR單克隆抗體誘導(dǎo)的T細(xì)胞增殖和 IL-2產(chǎn)生(Yao等人，J. Immunol.(免疫學(xué)雜志)，155力483_5486 [1995])。因此，對鑒定并 表征新的與已知細(xì)胞因子受體(特別是IL-17受體)具有同源性的多肽十分感興趣?，F(xiàn)在認(rèn)為白介素-17是剛出現(xiàn)的細(xì)胞因子家族的原型成員。人和其它脊椎動物 基因組的大規(guī)模測序已經(jīng)揭示存在編碼與IL-17明確相關(guān)的蛋白的其它基因，因而定義 了一個新的細(xì)胞因子家族。在人和小鼠中存在至少六個IL-17家族的成員，包括IL-17B、 IL-17C、 IL-17D、 IL-17E 和 IL-17F 以及新的受體 IL-17RH1、 IL-17RH2、 IL-17RH3 和 IL-17RH4(參見2001年6月沘日公開的WO 01/46420)。已經(jīng)證明一種此類IL-17成員 (稱為 IL-17F)結(jié)合至人 IL-17 受體(IL-17R) (Yao 等人，Cytokine (細(xì)胞因子)，9 (11) 794-800(1997))。最初的表征顯示如IL-17—樣，數(shù)個這些新鑒定的分子具有調(diào)節(jié)免疫功 能的能力。已經(jīng)鑒定的數(shù)個這些因子的強(qiáng)力的炎性作用，以及正在顯現(xiàn)的與主要人類疾病 的關(guān)聯(lián)表明這些蛋白可能在炎癥過程中具有重要作用并且可能提供了治療性干預(yù)的機(jī)遇。編碼人IL-17F 的基因位于 IL-17 附近(Hymowitz，S. G 等人，Embo J. 20(19) 5332-41(2001))。IL-17和IL-17F共享44%的氨基酸同一性而IL-17家族的其它成員共 享更有限的15-27%的氨基酸同一性，表明IL-17和IL-17F在IL-17家族內(nèi)形成不同的亞 組(Starnes，T.等人，J Immunol (免疫學(xué)雜志).167 (8) :4137-40(2001) ；Aggarwal, S.和 Gurney, A. L. ,J. Leukoc Biol (白細(xì)胞生物學(xué)雜志)，71 (1) :1-8(2002)) IL-17F 似乎具有 與IL-17相似的生物學(xué)作用，且能夠促進(jìn)多種細(xì)胞產(chǎn)生IL-6、IL-8和G-CSF。與IL-17相 似，它能夠誘導(dǎo)軟骨基質(zhì)的釋放并抑制新軟骨基質(zhì)的合成(參見2002年11月觀日公開的 美國-2002-0177188-A1)。因此，如IL-17 —樣，IL-17F可能潛在地促進(jìn)炎性病癥的病狀。 最近，這些作者已經(jīng)觀察到通過白介素23 (IL-23)的作用IL-17和IL-17F兩者在T細(xì)胞中 均被誘導(dǎo)(Aggarwal，S 等人，J.Biol. Chem.(生物學(xué)和化學(xué)雜志)，278 (3) =1910-4 (2003)) IL-17和IL-17F共享相似的染色體定位和顯著的序列相似性的觀察，以及IL-17和IL-17F 似乎在應(yīng)答特異性刺激時在相同細(xì)胞群中被誘導(dǎo)的觀察，導(dǎo)致鑒定了新的人細(xì)胞因子，該 細(xì)胞因子由IL-17和IL-17F共價異二聚體(本文稱為IL-17A/F)構(gòu)成?，F(xiàn)在認(rèn)識到IL-17A和IL-17F是Thl7T細(xì)胞亞組分泌的主要促炎因子。它們靶向 幾乎體內(nèi)所有細(xì)胞類型并誘導(dǎo)炎癥和組織損傷。
人IL-17A/F是不同的新細(xì)胞因子，在蛋白結(jié)構(gòu)和基于細(xì)胞的活性測定兩者中均 可與人IL-17和IL-17F相區(qū)別。通過使用純化的重組人IL-17A/F作為標(biāo)準(zhǔn)，已經(jīng)開發(fā)了 人IL-17A/F-特異性ELISA。通過使用這種特異性ELISA，檢測了人IL-17A/F的誘導(dǎo)表達(dá)， 確認(rèn)了 IL-17A/F從培養(yǎng)的激活的人T細(xì)胞中天然產(chǎn)生。因而，IL-17A/F是不同的新細(xì)胞 因子，作為分離的激活的人T細(xì)胞的天然產(chǎn)物是可檢測的，已經(jīng)在蛋白結(jié)構(gòu)和基于細(xì)胞的 測定兩者中均表征了其重組形式，其與相關(guān)細(xì)胞因子不同并且可與相關(guān)細(xì)胞因子相區(qū)別。在2006年11月30日公開的美國申請公開號No. 20060270003和2007年7月12 日公開的20070160576中公開了 IL-17A/F。IL-17A/F已經(jīng)被描述為治療多種免疫介導(dǎo)的 疾病的靶點(Chang和Dong，Cell Res.(細(xì)胞研究)17(5) :435-40(2007))；已經(jīng)顯示小鼠 Thl7細(xì)胞產(chǎn)生的IL-17A/F蛋白誘導(dǎo)氣道中性粒細(xì)胞的募集，并因而在氣道中性粒細(xì)胞增 多癥中具有體內(nèi)功能(Liang等人，J Immunol (免疫學(xué)雜志)179 (11) :7791-9(2007))；已 經(jīng)報道人IL-17A/F異二聚化的細(xì)胞因子通過IL-17RA/IL-17RC受體復(fù)合物進(jìn)行信號傳導(dǎo) (Wright 等人，J Immunol (免疫學(xué)雜志)181(4) =2799-805 (2008)) 考慮到IL-17A和IL-17F兩者的促炎性質(zhì)，期望產(chǎn)生可高效阻斷IL-17A和IL-17F 兩者的交叉反應(yīng)性和雙特異性抗體。此類交叉反應(yīng)性和雙特異性抗體提供了治療炎性和免 疫相關(guān)疾病(包括自身免疫性疾病)和治療癌癥中新的治療機(jī)遇。發(fā)明概述本發(fā)明至少部分地基于產(chǎn)生和表征與IL-17A和IL-17F兩者交叉反應(yīng)的抗體。本 發(fā)明還涉及結(jié)合至IL-17A和IL-17F兩者的雙特異性抗體。一方面，本發(fā)明涉及包含結(jié)合至IL-17A和IL-17F并抑制IL-17A和IL-17F兩者 的生物學(xué)功能的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的抗體，或其功能片段，其中該生物學(xué)功能可以是，例如促 炎活性。在一個實施方案中，該抗體包含輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，該輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含CDRLl、 ⑶RL2和⑶RL3區(qū)，其中該⑶RL1、⑶RL2和⑶RL3區(qū)的至少一個選自由下述各項組成的組(a) CDRLl，其包含序列 DVSTAVA (SEQ ID NO 24)或 SISSYLA(SEQ ID NO :25)，(b)CDRL2，其包含序列 SASFLYS (SEQ ID NO 26)或 GASSRAS(SEQ ID NO :27)禾口(c)CDRL3，其包含序列 SYTTPPT(SEQ ID NO :28)或 RYSQPIT(SEQ ID NO :29)，或其親和力成熟變體，或所述抗體或所述親和力成熟變體的功能片段。在另一個實施方案中，所述⑶RL1、⑶RL2和⑶RL3區(qū)的每個選自由下述各項組成 的組(a) CDRLl，其包含序列 DVSTAVA (SEQ ID NO :24)或 SISSYLA(SEQ ID NO :25)，(b)CDRL2，其包含序列 SASFLYS (SEQ ID NO :26)或 GASSRAS(SEQ ID NO :27)禾口(c) CDRL3，其包含序列 SYTTPPT (SEQ ID NO 28) ^ RYSQPIT (SEQ ID NO :29)。在另一個實施方案中，(a) CDRLl 包含序列 DVSTAVA (SEQ ID NO :24)，(b) CDRL2 包含序列 SASFLYS (SEQ ID NO 26)，禾口(c) CDRL3 包含序列 SYTTPPT (SEQ ID NO :28)。在又一個實施方案中，(a) CDRLl 包含序列 SISSYLA (SEQ ID NO 25)，
(b)CDRL2 包含序列 GASSRAS (SEQ ID NO 27)，和(c) CDRL3 包含序列 RYSQPIT (SEQ ID NO 29)。在還一個實施方案中，在該親和力成熟變體中，⑶RL3包含序列SYTAKLT (SEQ ID NO 30)。在還有又一個實施方案中，在該親和力成熟變體中，(a) CDRLl 包含序列 DVSTAVA (SEQ ID NO 24)，禾口(b)CDRL2 包含序列 SASFLYS (SEQ ID NO :26，且 CDRL3 可包含序列 YYIYPAT(SEQ ID NO :31)，或其功能片段。在又一個實施方案中，在該親和力成熟變體中，(a) CDRLl 包含序列 DVSTAVA (SEQ ID NO :24)，禾口(b) CDRL2 包含序列 SASFLYS (SEQ ID NO 26)，和 CDRL3 可包含序列 HNDLPLT (SEQ ID NO 32)。在另外一個實施方案中，在該親和力成熟變體中，(a) CDRLl 包含序列 VISSSLA (SEQ ID NO 33)，禾口
(b) CDRL2 包含序列 GASFLYS (SEQ ID NO 34)。在另一個實施方案中，在該親和力成熟變體中，⑶RL3包含序列SYTPRST (SEQ ID NO :75)，或其功能片段。在又一個實施方案中，在該親和力成熟變體中，(a) CDRLl 包含序列 DVSTAVA (SEQ ID NO :24)；禾口(b)CDR2 包含序列 SASFLYS (SEQ IS NO :26)。在還一個實施方案中，在該親和力成熟變體中，⑶RL3包含序列QYYSTTTT(SEQ ID NO :76)，或其功能片段。在還有又一個實施方案中，在該親和力成熟變體中，(a) CDRLl 包含序列 DVSTAVA (SEQ ID NO :24)；禾口(b)CDR2 包含序列 SASFLYS (SEQ ID NOT :26)。在一個不同的實施方案中，在該親和力成熟變體中，CDRL3包含序列 QQSQNPQTT (SEQ ID NO :77)，或其功能片段。 在另外一個實施方案中，在該親和力成熟變體中，(a) CDRLl 包含序列 DVSTAVA (SEQ ID NO :24)；禾口(b) CDRL2 包含序列 SASFLYS (SEQ ID NO :26)。在另一個實施方案中，在該親和力成熟變體中，⑶RL3包含序列RFSQHIT (SEQ ID NO :78)，或其功能片段。在又一個實施方案中，在該親和力成熟變體中，(a) CDRLl 包含序列 RIKRYLA (SEQ ID NO 89)；禾口(b) CDRL2 包含序列 GASSRAS (SEQ ID NO 27)。在還一個實施方案中，在該親和力成熟變體中，⑶RL3包含序列RYSWHTT (SEQ ID NO :79)，或其功能片段。在還有又一個實施方案中，在該親和力成熟變體中，(a) CDRLl 包含序列 SISSYLA (SEQ ID NO 25)；禾口
(b)CDRL2 包含序列 GASSRAS (SEQ ID NO :27)。在一個不同的實施方案中，在該親和力成熟變體中，⑶RL3包含序列RYSLPIT(SEQ ID NO :80)，或其功能片段。在又一個實施方案中，在該親和力成熟變體中，(a) CDRLl 包含序列 SISSYLA (SEQ ID NO 25)；禾口(b) CDRL2 包含序列 GASSRAS (SEQ ID NO 27)。在又一些的實施方案中，該抗體包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域，該重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含 CDRHU CDRH2和CDRH3區(qū)，其中CDRH1、CDRH2和CDRH3區(qū)的至少一個選自由下述各項組成 的組(a) CDRHl，其包含選自由下述各項組成的組的序列GFTFTDYDIS (SEQ ID NO :35)、 GFSFIDYDIS(SEQ ID NO :36)、GFSFTSYMMS(SEQ ID NO :81)、GFSFPSYFIS(SEQ ID NO :82)；禾口 GFTFYDYDIS(SEQ ID NO :88)；(b) CDRH2，其包含選自由下述各項組成的組的序列SDGYTYYADSVKG (SEQ ID NO 37)、PDCYTYYADSVKG(SEQ ID NO :38)、PDAYTYPDCYTYYADSVKG (SEQ ID NO :39)、 PDSYTTYYADSVKG (SEQ ID NO :90)、YDGYTYYADSVKG (SEQ ID NO :41)、YEGYTYYADSVKG (SEQ ID NO :44)、ESGATDYADSVKG(SEQ ID NO :83)、VSGATVYADSVKG (SEQ ID NO :84)、 YDGYAYYADSVKG(SEQ ID NO :85)；和 LDGYSYYADSVKG(SEQ ID NO :86)；禾口(c) CDRH3，其包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO :40)和 EGYYYSTSIKYYPW(SEQ ID NO: 87)，或其功能片段。在還有一些的實施方案中，該抗體包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域，該重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含 CDRHU CDRH2和CDRH3區(qū)，其中CDRHl、CDRH2和CDRH3區(qū)的每個選自下述各項組成的組(a) CDRHl，其包含選自由下述各項組成的組的序列GFTFTDYDIS (SEQ ID NO :35)、 GFSFIDYDIS(SEQ ID NO :36)、GFSFTSYMMS(SEQ ID NO :81)和GFSFPSYFIS(SEQ ID NO :82)，(b) CDRH2，其包含選自由下述各項組成的組的序列SDGYTYYADSVKG (SEQ ID NO 37)、PDCYTYYADSVKG(SEQ ID NO :38)、PDAYTYPDCYTYYADSVKG (SEQ ID NO :39)、 PDSYTTYYADSVKG(SEQ ID NO :90)、YDGYTYYADSVKG(SEQ ID NO :41)、YEGYTYYADSVKG(SEQ ID NO 44),ESGATDYADSVKG(SEQ ID NO :83)和 VSGATVYADSVKG(SEQ ID NO :84)；禾口(c) CDRH3，其包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO :40)或 EGYYYSTSIKYYPW(SEQ ID NO: 87)，或其功能片段。在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及包含⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3區(qū)的抗體，其中(a) CDRLl 包含序列 DVSTAVA(SEQ ID NO :24)，(b) CDRL2 包含序列 SASFLYS(SEQ ID NO :26)，(c) CDRL3 包含序列 SYTTPPT (SEQ ID NO 28)，禾口(d) CDRHl 包含序列 GFTFTDYDIS(SEQ ID NO :35)，
(e) CDRH2 包含序列 SDGYTYYADSVKG (SEQ ID NO :37)，禾口(f) CDRH3 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO :40)，或其功能片段。
在又一個實施方案中，本發(fā)明涉及包含⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3區(qū)的抗體，其中(a) CDRLl 包含序列 SISSYLA (SEQ ID NO 25)，(b) CDRL2 包含序列 GASSRAS (SEQ ID NO 27)，(c) CDR3 包含序列 RYSQPIT (SEQ ID NO 29)，(d) CDRHl 包含序列 GFTFTDYDIS (SEQ ID NO 35)，(e) CDRH2 包含序列 SDGYTYYADSVKG (SEQ ID NO 37)，禾口(f) CDRH3 包含序列 YLYWSYV(SEQ ID NO :40)，或其功能片段。在又一個實施方案中，該抗體還包含⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3區(qū)，其中(d) CDRHl 包含序列 GFSFIDYDIS (SEQ ID NO 36)，(e) CDRH2 包含序列 PDCYTYYADSVKG (SEQ ID NO 38)，禾口(f)CDRH3 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO :40)。在還有又一個實施方案中，該抗體還包含⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3區(qū)，其中(d) CDRHl 包含序列 SFSGIDYDIS (SEQ ID NO 91)，(e) CDRH2 包含序列 YDGYTYYADSVKG (SEQ ID NO 41)，禾口(f)CDRH3 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO :40)。在另外一個實施方案中，該抗體還包含⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3區(qū)，其中(d) CDRHl 包含序歹Ij GFTFTDYDIS (SEQ ID NO :35)，(e) CDRH2 包含序列 SDGYTYYADSVKG (SEQ ID NO :37)，禾口(f)CDRH3 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO :40)。在另一個實施方案中，該抗體還包含⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3區(qū)，其中(d) CDRHl 包含序歹Ij GFSFIDYDIS (SEQ ID NO :36)，(e) CDRH2 包含序列 PDAYTYYADSVKG (SEQ ID NO 42)，禾口(f)CDRH3 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO :40)。在又一個實施方案中，該抗體還包含⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3區(qū)，其中(d) CDRHl 包含序歹Ij GFSFIDYDIS (SEQ ID NO :36)，(e) CDRH2 包含序列 PDSYTYYADSVKG (SEQ ID NO 43)，禾口(f) CDRH3 包含序歹Ij YLYffSYV (SEQ ID NO 40)。在還一個實施方案中，該抗體還包含⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3區(qū)，其中(d) CDRHl 包含序歹Ij SFSGIDYDIS (SEQ ID NO :91)，(e) CDRH2 包含序列 YEGYTYYADSVKG (SEQ ID NO 44)，禾口(f) CDRH3 包含序列 YLYffSYV (SEQ ID NO 40)。在另一個實施方案中，該抗體作為交叉反應(yīng)性抗體結(jié)合至IL-17A和IL-17F的基 本相同的表位，該抗體選自由YWM1. 47、YW278. 15、YW279. 1組成的組，或其親和力成熟變 體，或此類抗體或此類親和力成熟變體的功能片段。在又一個實施方案中，該親和力成熟變體選自由下述各項組成的組抗體 YW278. 15. 18、Yff 178. 15. 2、Yff 278. 15. 3、Yff 278. 15. 18C55A、YW278. 15. 18C55S 和 YW 278. 15. 2. D54E。在還一個實施方案中，該抗體包含以基本相同的結(jié)合親和力結(jié)合至IL-17A和IL-17F的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，或其功能片段。在還有又一個實施方案中，該抗體包含以至少大約10_1(1至10_"M的結(jié)合親和力結(jié) 合至IL-17A和IL-17F的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，或其功能片段。在另外一個實施方案中，本發(fā)明涉及包含結(jié)合至均作為單體和同型二聚體或異二 聚體的IL-17A和IL-17F的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的抗體，或其功能片段。在還一個實施方案中，本發(fā)明涉及結(jié)合人IL-17A/F和非人靈長類動物的IL-17A/ F的抗體，或其功能片段。非人靈長類動物可以是，例如，食蟹猴(CynomolguMCyno))或恒 河猴(Miesus monkey) 0在另一個實施方案中，該抗體結(jié)合至人IL-17A/F和可選地非人靈 長類動物IL-17A/F，但不結(jié)合嚙齒動物例如大鼠或小鼠IL-17A/F。在還有又一個實施方案中，該抗體能夠減少炎性或免疫相關(guān)疾病中的脫髓鞘。本發(fā)明的抗體可以是單克隆的，且可以是嵌合的、人源化的或人的。本發(fā)明的抗體片段非限制性地包括Fab、Fab'、F(ab'片段；雙價抗體 (diabodies)；線性抗體；單鏈抗體分子；和由抗體片段形成的多特異性抗體。在不同方面，本發(fā)明涉及雙特異性抗體，該抗體包含結(jié)合至IL-17A的第一抗原結(jié) 合位點和結(jié)合至IL-17F的第二抗原結(jié)合位點，其中(1)該第一抗原結(jié)合位點包含第一重鏈可變結(jié)構(gòu)域，該第一重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含 CDRHl、CDRH2和CDRH3區(qū)，其中該CDRHl、CDRH2和CDRH3區(qū)的至少一個選自由下述各項組 成的組(a) CDRHl，其包含序列 TSYEIS (SEQ ID NO 45)，(b)CDRH2，其包含序列 WVGSIYLWGG(SEQ ID NO :46)禾口(c)CDRH3，其包含序列 ARFGQRYA(SEQ ID NO :47)禾口(2)該第二抗原結(jié)合位點包含第二重鏈可變結(jié)構(gòu)域，該第二重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含 CDRHl、CDRH2和CDRH3區(qū)，其中該CDRHl、CDRH2和CDRH3區(qū)的至少一個選自由下述各項組 成的組 (a) CDRHl，其包含序列 TSPYIS (SEQ ID NO 48)，(b)CDRH2，其包含序列 WVASIFYYSG(SEQ ID NO :49)禾口(c)CDRH3，其包含序列 ARGGYGYNQWFYSIYQSY(SEQ ID NO :50)，或其親和力成熟變體，或該抗體或該親和力成熟變體的功能片段。在一個實施方案中，該雙特異性抗體包含⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3區(qū)，其中(1)在該第一抗原結(jié)合位點中，(a) CDRHl 包含序列 TSYEIS (SEQ ID NO 45)，(b)CDRH2 包含序列 WVGSIYLWGG(SEQ ID NO :46)禾口(c)CDRH3 包含序列 ARFGQRYA(SEQ ID NO :47)禾口(2)在該第二抗原結(jié)合位點中，(a) CDRHl 包含序列 TSPYIS (SEQ ID NO 48)，(b)CDRH2 包含序列 WVASIFYYSG(SEQ ID NO :49)禾口(c) CDRH3 包含序列 ARGGYGYNQWFYSIYQSY (SEQ ID NO 50)，或其親和力成熟變體，或該抗體或該親和力成熟變體的功能片段。在另一個實施方案中，該雙特異性抗體還包含輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，該輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含CDRL1、CDRL2和CDRL3區(qū)，其中該CDRL1、CDRL2和CDRL3區(qū)的至少一個選自由下述 各項組成的組(a) CDRLl，其包含序列 SISSYLA(SEQ ID NO :25)，(b)CDRL2，其包含序列 GASSRAS (SEQ ID NO 27)禾口(c)CDRL3，其包含序列 YYSSPLT (SEQ ID NO 21 的殘基 91-97)，或其親和力成熟變體，或該抗體或該親和力成熟變體的功能片段。在又一個實施方案中，在該雙特異性抗體或其親和力成熟變體，或該抗體或該親 和力成熟變體的功能片段的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域中，(a) CDRLl 包含序列 SISSYLA (SEQ ID NO 25)，(b) CDRL2 包含序列 GASSRAS (SEQ ID NO :27)禾口(c) CDRL3 包含序列 YYSSPLT (SEQ ID NO :21 的殘基 91-97)。在另一個實施方案中，該雙特異性抗體，或其功能片段，以基本相同的結(jié)合親和力 結(jié)合至 IL-17A 和 IL-17F。在又一個實施方案中，該雙特異性抗體，或其功能片段，以至少大約10_1(1至10_"M 的結(jié)合親和力結(jié)合至IL-17A和IL-17F。在另外一個實施方案中，該雙特異性抗體，或其功能片段，結(jié)合至均作為單體和同 型二聚體或異二聚體兩者的IL-17A和IL-17F。在還有另一個實施方案中，該雙特異性抗體，或其功能片段，結(jié)合人和非人靈長類 動物兩者的IL-17A/F，其中非人靈長類動物可以是，例如，食蟹猴(CynomolguMCyno))或 恒河猴(Miesus monkey) 0在另一個實施方案中，該抗體結(jié)合至人IL-17A/F和任選地非人 靈長類動物IL-17A/F但不結(jié)合嚙齒動物，例如大鼠或小鼠IL-17A/F。在不同實施方案中，該雙特異性抗體，或其功能片段，能夠減少炎性或免疫相關(guān)疾 病中的脫髓鞘。如前文一樣，該雙特異性抗體也可以是單克隆的、嵌合的、人源化的或人的，且該 抗體片段非限制性地包括Fab、Fab'、F(ab' )2和Fv片段；雙價抗體；線性抗體；單鏈抗體 分子；和該抗體片段形成的多特異性抗體。在不同方面，本發(fā)明涉及前文描述的交叉反應(yīng)性和雙特異性抗體，其以大約 10 1至大約1 10，或大約5 1至大約1 5，或大約1 1至大約1 5，或大約 1 1至大約1，或大約1 1至大約1 2的抗體與IL-17A的摩爾比抑制IL-17A的生物 學(xué)功能，其中IL-17A代表IL-17A同型二聚體。在又一方面，本發(fā)明涉及前文描述的交叉反應(yīng)性和雙特異性抗體，其以大約 10 1至大約1 10，或大約5 1至大約1 5，或大約1 1至大約1 5，或大約 1 1至大約1 3，或大約1 1至大約1 2的抗體與IL-17F的摩爾比抑制IL-17F的 生物學(xué)功能，其中IL-17F代表IL-17F同型二聚體。在還一方面，本發(fā)明涉及前文描述的交叉反應(yīng)性和雙特異性抗體，其以大約 10 1至大約1 10，或大約5 1至大約1 5，或大約1 1至大約1 5，或大約 1 1至大約1 3，或大約1 1至大約1 2的抗體與異二聚體的摩爾比抑制異二聚體 形式的IL-17A和IL-17F的的生物學(xué)功能。在另一方面，本發(fā)明涉及分離的核酸分子，其編碼如前文描述的交叉反應(yīng)性或雙特異性抗體或抗體片段的輕鏈。在又一方面，本發(fā)明涉及重組宿主細(xì)胞，其包含編碼如前文描述的交叉反應(yīng)性或 雙特異性抗體或抗體片段的輕鏈的核酸分子。該宿主細(xì)胞可以是真核的或原核的，包括，例 如，中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞和大腸桿菌(E.Coli)細(xì)胞。本發(fā)明還涉及藥物組合物，其包含與藥學(xué)上可接受的賦形劑混合的如前文描述的 交叉反應(yīng)性或雙特異性抗體或抗體片段。此外，本發(fā)明涉及治療炎性或免疫相關(guān)疾病的方法，包括向有需要的哺乳動物受 試者施用有效量的本發(fā)明的交叉反應(yīng)性或雙特異性抗體，或其功能片段。該哺乳動物受試 者優(yōu)選是人患者。炎性或免疫相關(guān)病癥可以，例如選自由下述各項組成的組系統(tǒng)性紅斑狼瘡，類風(fēng) 濕性關(guān)節(jié)炎，幼年型慢性關(guān)節(jié)炎，脊椎關(guān)節(jié)病，系統(tǒng)性硬化癥(硬皮病)，特發(fā)性炎性肌病 (皮肌炎、多肌炎)，斯耶格倫綜合征(Sjogren’ s syndrome)，系統(tǒng)性血管炎，結(jié)節(jié)病，自身 免疫性溶血性貧血(免疫性全血細(xì)胞減少癥、陣發(fā)性夜間血紅蛋白尿)，自身免疫性血小 板減少癥(特發(fā)性血小板減少性紫癜、免疫介導(dǎo)的血小板減少癥)，甲狀腺炎(格雷夫斯 病(Graye’ s disease)、橋本甲狀腺炎、幼年型淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎、萎縮性甲狀腺炎)，糖 尿病，免疫介導(dǎo)的腎病(腎小球腎炎、腎小管間質(zhì)性腎炎)，中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)的脫髓鞘 疾病諸如多發(fā)性硬化、特發(fā)性脫髓鞘性多神經(jīng)病或急性熱病性多神經(jīng)炎(GuiIlain-Barre syndrome)、和慢性炎性脫髓鞘多神經(jīng)病，肝膽疾病諸如傳染性肝炎(甲型、乙型、丙型、丁 型、戊型和其它非嗜肝病毒肝炎)、自身免疫性慢性活動性肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬變、肉芽 腫性肝炎、和硬化性膽管炎，炎性腸病(IBD)包括潰瘍性結(jié)腸炎、局限性回腸炎(Crohn' s disease)、麩質(zhì)敏感性腸病、和惠普爾氏病(Whipple' s disease)，自身免疫性或免疫介導(dǎo) 的皮膚疾病包括大皰性皮膚疾病、多形紅斑和接觸性皮炎、銀屑病，變應(yīng)性疾病諸如哮喘、 變應(yīng)性鼻炎、特應(yīng)性皮炎、食物過敏和蕁麻疹，肺的免疫學(xué)疾病諸如嗜酸細(xì)胞性肺炎、特發(fā) 性肺纖維化和過敏性肺炎，移植相關(guān)疾病包括移植物排斥和移植物抗宿主疾病，感染性疾 病包括病毒疾病如AIDS (HIV感染)、甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎和戊型肝炎、 皰疹等、細(xì)菌感染、真菌感染、原生動物感染和寄生蟲感染。在優(yōu)選實施方案中，炎性或免疫相關(guān)疾病選自由類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、炎性腸病 (IBD)和哮喘組成的組。在又一方面，本發(fā)明涉及制品，其包含(a)容器；(b)該容器上的標(biāo)簽；和(C)物質(zhì) 的組合物，其包含容納在該容器中的本發(fā)明的交叉反應(yīng)性或雙特異性抗體，其中所述容器 上的標(biāo)簽標(biāo)明該物質(zhì)的組合物可用于治療炎性或免疫相關(guān)疾病。本發(fā)明還涉及本文的抗體在制備治療炎性或免疫相關(guān)疾病的藥物中的用途。附圖簡述

圖1顯示天然序列的人IL-17A cDNA的核苷酸序列(SEQ ID NO :1)。圖2顯示由圖1中顯示的SEQ ID NO=I的編碼序列獲得的氨基酸序列(SEQ ID NO 2)。圖3顯示天然序列的人IL-17F cDNA的核苷酸序列(SEQ ID NO 3)。圖4顯示由圖3中顯示的SEQ ID NO 3的編碼序列獲得的氨基酸序列(SEQ ID NO 4)。
圖 5A 顯示 IL-17A/F 交叉反應(yīng)性抗體 YW 248. 65.YW240. 27.YW241. 47,Yff 271.25、 Yff 278. 15、YW 278. 27、YW 278. 57、YW 278. 60、YW 279. 1 和 YW 280. 3 的輕鏈序列(SEQ ID NOs 5-14)的比對。圖 5B 顯示 IL-17A/F 交叉反應(yīng)性抗體 YW 248. 65.YW240. 27.YW241. 47,Yff 271.25、 Yff 278. 15、Yff 278. 27、Yff 278. 57、Yff 278. 60、Yff 279. 1 和 YW 280. 3 的重鏈序列(SEQ I NOs 51-60)的比對。圖 5C 顯示 IL-17A/F 交叉反應(yīng)性抗體 YW 278. 15. 7,Yff 278. 15. 8.YW278. 15. 9,Yff 279. 1. 20、YW 279. 1. 21 和 YW 279. 1. 22 的輕鏈序列(SEQ ID Nos :63-68)的比對。圖 5D 顯示 IL-17A/F 交叉反應(yīng)性抗體 YW 278. 15. 7,Yff 278. 15. 8.YW278. 15. 9,Yff 279. 1. 20、YW 279. 1. 21 和 Yff 279. 1. 22 的重鏈序列(SEQ ID Nos :69-74)的比對。圖6顯示IL-17A/F交叉反應(yīng)性抗體YW278. 15 (SEQ ID NO 9)及其親和力成熟變 體，YW278. 15. 18 (SEQ ID NO 15) ,YW278. 15. 2 (SEQ ID NO 16)禾口 YW278. 15. 3 (SEQ ID NO 17)的輕鏈序列的比對。⑶RL1、⑶RL2和⑶RL3序列加框標(biāo)示。圖7顯示IL-17A/F交叉反應(yīng)性抗體YW278. 15(SEQ ID NO :92)及其親和力成熟 變體，YW278. 15. 18 (SEQ ID NO 93)、YW278. 15. 2 (SEQ ID NO 94)、YW278. 15. 2. D54E (SEQ ID NO 95) , YW278. 15. 3 (SEQ ID NO :92)、YW278. 15. 18C55A (SEQ ID NO 18)禾口 YW278. 15. 18C55S(SEQ ID NO :19)的重鏈序列的比對。CDRL1、CDRL2 和 CDRL3 序列加框標(biāo) 示。注:YW278. 15. 18C55A 和 YW278. 15. 18C55S 具有與 YW278. 15. 18 相同的輕鏈。圖8A和8B顯示通過三種親和力成熟的IL-17A/F交叉反應(yīng)性抗體進(jìn)行的BIAcore 免疫測定的結(jié)果。A.對重組人IL-17A (rhIL-17A)、重組人IL-17F(rhIL-17F)、食蟹猴 IL-17F和人IL-17A/F在溶液中的結(jié)合親和力(Kd(M))顯示于最后一欄。B.對重組人 IL-17A(rhIL-17A)、重組人 IL-17F(rhIL_17F)、食蟹猴 IL-17F、食蟹猴 IL_17A(圖 8B)和人 IL-17A/F在溶液中的結(jié)合親和力(Kd(M))顯示于最后一欄。圖9顯示通過兩種進(jìn)一步親和力成熟的IL-17A/F交叉反應(yīng)性抗體與 YW278. 15. 18對比進(jìn)行的BIAcore免疫測定的結(jié)果。對重組人IL-17A(rhIL_17A)、重組人 IL-17F(rhIL-17F)、食蟹猴IL-17F和人IL-17A/F在溶液中的結(jié)合親和力(Kd(M))顯示于
最后一欄。圖10顯示通過三種親和力成熟的IL-17A/F交叉反應(yīng)性抗體進(jìn)行的BIAcore免疫 測定的結(jié)果。對恒河猴IL-17A的結(jié)合親和力顯示于最后一欄。圖11顯示IL-17A特異性抗體YW264. 21 (SEQ ID NO 20)和IL-17F特異性抗體 YW265. OKSEQ ID NO 21)的輕鏈可變區(qū)序列的比對。圖12顯示IL-17A特異性抗體YW264. 21 (SEQ ID NO 22)和IL-17F特異性抗體 YW265. OKSEQ ID NO 23)的重鏈可變區(qū)序列的比對。圖13A和1 顯示對數(shù)種IL-17A/F交叉反應(yīng)性抗體的IC50和IC90數(shù)據(jù)，以及抑 制靶標(biāo)IL-17A/F多肽的活性所需的抗體摩爾比。圖14顯示IL-17A/F雙特異性抗體與抗-IL-17A抗體1和抗-IL-17F抗體 Y擬65. 01相比較的IL-17A和IL-17F結(jié)合親和力數(shù)據(jù)。圖15顯示IL-17A/F雙特異性抗體(包括抗體Y擬64. 03 (SEQ ID NO 61))的輕鏈 可變區(qū)序歹Ij (SEQ ID NOS 61和20-21)的另一種比對。
圖16顯示IL-17A/F雙特異性抗體(包括03 (SEQ ID NO :62))的重鏈可變 區(qū)序列(SEQ ID NOS 62和22-23)的另一種比對。圖17顯示結(jié)合至IL-17F 二聚體的Fab。圖18顯示IL-17F 二聚體上對于Fab的表位。發(fā)明詳述I.定義除非另有定義，本文使用的所有專門術(shù)語、符號和其它科學(xué)術(shù)語意圖具有本發(fā)明 所屬領(lǐng)域技術(shù)人員普遍理解的含義。在一些情況下，為了清楚和/或易于引用，本文定義了 具有補(bǔ)片理解含義的術(shù)語，并且本文包含此類定義沒有必要解釋為其代表了與本領(lǐng)域通常 理解的實質(zhì)上的差異。本文中描述或提到的技術(shù)和程序一般得到了本領(lǐng)域技術(shù)人員的充分 理解，而且利用常規(guī)方法得以普遍采用，諸如例如下列文獻(xiàn)中記載的廣泛應(yīng)用的分子克隆 的方法=Sambrook 等人，Molecular Cloning :A Laboratory Manual (分子克隆實驗室指 南)第二版(1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y.。 如果合適，涉及使用市售的試劑盒和試劑的程序一般根據(jù)制造商規(guī)定的方案和/或參數(shù)進(jìn) 行，除非另有說明?！疤烊恍蛄蠭L-17A/F多肽”包括與衍生自自然界的相應(yīng)IL-17A/F多肽具有相同氨 基酸序列的多肽。此類天然序列IL-17A/F多肽可從自然界分離，或者可通過重組和/或合 成手段生成。術(shù)語“天然序列IL-17A/F多肽”具體涵蓋天然存在的截短或分泌形式的特定 IL-17A/F多肽(例如胞外結(jié)構(gòu)域序列)、該多肽的天然存在變體形式(例如選擇性剪接形 式)和天然存在等位變體。在本發(fā)明的多種實施方案中，本文中公開的天然序列IL-17A/F 多肽是包含在附圖中顯示的全長氨基酸序列的成熟或全長天然序列多肽。在該圖中，起始 和終止密碼子以粗體并且下劃線顯示。"IL-17A/F多肽變體”指如上文或下文中所定義的有活性的IL-17A/F多肽，其與 本文公開的全長天然序列IL-17A/F多肽序列、本文公開的缺少信號肽的IL-17A/F多肽序 列、或本文公開的全長IL-17A/F多肽序列的任何其它片段具有至少約80%氨基酸序列同 一性。此類IL-17A/F多肽變體包括，例如，其中全長天然氨基酸序列的N-或C-末端添加 或刪除一個或多個氨基酸殘基的IL-17A/F多肽。通常，IL-17A/F多肽變體與本文公開的 全長天然序列IL-17A/F多肽序列，本文公開的缺少信號肽的IL-17A/F多肽序列，或本文 公開的全長IL-17A/F多肽序列的任何其它具體定義的片段將具有至少大約80%的氨基 酸序列同一性、備選地至少大約81%的氨基酸序列同一性、備選地至少大約82%的氨基酸 序列同一性、備選地至少大約83%的氨基酸序列同一性、備選地至少大約84%的氨基酸序 列同一性、備選地至少大約85%的氨基酸序列同一性、備選地至少大約86%的氨基酸序列 同一性、備選地至少大約87%的氨基酸序列同一性、備選地至少大約88%的氨基酸序列同 一性、備選地至少大約89%的氨基酸序列同一性、備選地至少大約90%的氨基酸序列同一 性、備選地至少大約91%的氨基酸序列同一性、備選地至少大約92%的氨基酸序列同一 性、備選地至少大約93%的氨基酸序列同一性、備選地至少大約94%的氨基酸序列同一 性、備選地至少大約95%的氨基酸序列同一性、備選地至少大約96%的氨基酸序列同一 性、備選地至少大約97%的氨基酸序列同一性、備選地至少大約98%的氨基酸序列同一性 和備選地至少大約99%的氨基酸序列同一性。通常，IL-17A/F變體多肽為至少大約10個氨基酸的長度，備選地至少大約20個氨基酸的長度，備選地至少大約30個氨基酸的長度， 備選地至少大約40個氨基酸的長度，備選地至少大約50個氨基酸的長度，備選地至少大約 60個氨基酸的長度，備選地至少大約70個氨基酸的長度，備選地至少大約80個氨基酸的長 度，備選地至少大約90個氨基酸的長度，備選地至少大約100個氨基酸的長度，備選地至少 大約150個氨基酸的長度，備選地至少大約200個氨基酸的長度，備選地至少大約300個氨 基酸的長度，或更長。相同定義適用于變體IL-17A/F多肽的更多變體。關(guān)于本文鑒定的IL-17A/F多肽序列的“百分比(％ )氨基酸序列同一性”，定義 為將候選序列與具體IL-17A/F多肽序列進(jìn)行比對(并在必要時導(dǎo)入空位)以獲取最大百 分比序列同一性，且不將任何保守取代視為序列同一性的部分之后，候選序列中的氨基酸 殘基與具體IL-17A/F多肽序列中的氨基酸殘基相同的百分?jǐn)?shù)。可使用本領(lǐng)域各種方法 進(jìn)行序列比對以便測定氨基酸序列同一性百分比，例如，使用公眾可得到的計算機(jī)軟件如 BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟件。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以決定測量比對 的適宜參數(shù)，包括對所比較的序列全長獲得最大比對所需的任何算法。然而，為此目的，氨 基酸序列同一性％值使用序列比較計算機(jī)程序ALIGN-2產(chǎn)生。ALIGN-2序列比對計算機(jī) 程序的作者是Genentech，Inc.，該源代碼已經(jīng)隨用戶文檔提交至美國版權(quán)局(Washington D. C.，20559)，其美國版權(quán)注冊登記號為TXU510087。公眾可通過Genentech，Inc. (South San Francisco, Calif.)得到ALIGN-2程序，或者從該源代碼進(jìn)行編譯。ALIGN-2程序應(yīng)當(dāng) 為在UNIX操作系統(tǒng)，優(yōu)選在數(shù)字UNIXV4. OD上使用而進(jìn)行編譯。ALIGN-2程序設(shè)定了所有 序列比對參數(shù)并且不變。在ALIGN-2應(yīng)用于氨基酸序列比較的情況中，給定氨基酸序列A相對于(to)、與 (with)、或針對(against)給定氨基酸序列B的氨基酸序列同一性％ (或者這樣說給定氨 基酸序列A具有或含有相對于、與或針對給定氨基酸序列B的某一％氨基酸序列同一性) 如下計算X/Y比值乘以100，其中X是用序列比對程序ALIGN-2在該程序的A和B比對中 評分為相同匹配的氨基酸殘基數(shù)，且其中Y是B中的氨基酸殘基總數(shù)?？梢岳斫猓?dāng)氨基酸 序列A與氨基酸序列B的長度不相等時，A相對于B的氨基酸序列同一性％將不等于B相 對于A的氨基酸序列同一性％。除非另外具體說明，在本文用的所有氨基酸序列同一性％的值都是用ALIGN-2計 算機(jī)程序如前段所描述的那樣得到的。然而，氨基酸序列同一性的％值也可以如下面將描 述的那樣用WU-BLAST-2計算機(jī)程序獲得(Altschul等人，Methods in Enzymology (酶學(xué) 方法)266 =460-480 (1996))。大部分WU-BLAST-2搜索參數(shù)設(shè)為默認(rèn)值。那些沒有設(shè)為默 認(rèn)值的參數(shù)，如可調(diào)參數(shù)，可以用下面的值來設(shè)置重疊跨度(overlap span) = 1，重疊分 數(shù)(overlap fraction) = 0. 125，字閾值(word threshold) (T) = 11,評分矩陣(scoring matrix) = BL0SUM62。使用WU-BLAST-2時，氨基酸序列同一性％的值是這樣得出的用由 WU-BLAST-2測定的，目的多肽的氨基酸序列(其具有衍生自天然多肽的序列)，和目的比較 氨基酸序列(即，與目的多肽比較的序列，該序列可以是IL-17A/F變體多肽)之間完全匹 配的氨基酸殘基數(shù)目(a)，除以目的多肽氨基酸殘基總數(shù)(b)。例如，在“包含與氨基酸序 列B有至少80%氨基酸序列同一性的氨基酸序列A的多肽”的描述中，氨基酸序列A是目 的“比較蛋白質(zhì)”的比較氨基酸序列，氨基酸序列B是目的多肽的氨基酸序列。氨基酸序列同一性百分比也可以用序列比對程序NCBI-BLAST2 (Altschul等人，Nucleic Acids Res.(核酸研究)25 :3389-3402(1997))來測定。NCBI-BLAST2 序列比對程 序可以從http://www. ncbi. nlm. nih. gov下載，或者從National Institute of Health (國 立衛(wèi)生研究所)，Bethesda, MD.得到。NCBI-BLAST2用數(shù)個搜索參數(shù)，其中所有這些搜索 參數(shù)都設(shè)為默認(rèn)值，包括例如未覆蓋(unmask)=是(yes)，鏈(strain)=全部(all)，預(yù) 計出現(xiàn)次數(shù)(expected occurrences) = 10，最低復(fù)雜度長度(minimum low complexity length) = 15/5，多次通過 e 值(multi-pass e-value) = 0· 01,多次通過的常數(shù)(constant for multi-pass) = 25，最終缺口 比對的遺漏(dropoff for final gapped alignment)= 25和評分矩陣=BL0SUM62。用NCBI-BLAST2進(jìn)行氨基酸序列比對時，給定氨基酸序列A相對于、與或針對給定 氨基酸序列B的氨基酸序列同一性％ (或者這樣說給定氨基酸序列A具有或含有相對于、 與或針對給定氨基酸序列B的某一％氨基酸序列同一性)如下計算m比值乘以100，其 中X是用序列比對程序NCBI-BLAST2在該程序的A和B比對中評分為相同匹配的氨基酸殘 基數(shù)，且其中Y是B中的氨基酸殘基總數(shù)?？梢岳斫?，當(dāng)氨基酸序列A與氨基酸序列B的 長度不相等時，A相對于B的氨基酸序列同一性％將不等于B相對于A的氨基酸序列同一 性％。"IL-17A/F變體多核苷酸”或“ IL-17A/F變體核酸序列”指如下文定義的編碼有活 性的IL-17A/F多肽的核酸分子，并且該核酸分子與編碼本文公開的全長天然序列IL-17A/ F多肽序列、本文公開的缺少信號肽的全長天然序列IL-17A/F多肽序列、或本文公開的全 長IL-17A/F多肽序列的任何其它片段的核苷酸序列具有至少約80%的核酸序列同一性。 通常，IL-17A/F變體多核苷酸與編碼本文公開的全長天然序列IL-17A/F多肽序列、本文公 開的缺少信號肽的全長天然序列IL-17A/F多肽序列、或本文公開的全長IL-17A/F多肽序 列的任何其它片段的核苷酸序列將具有至少大約80%的核酸序列同一性、備選地至少大約 81%的核酸序列同一性、備選地至少大約82%的核酸序列同一性、備選地至少大約83%的 核酸序列同一性、備選地至少大約84%的核酸序列同一性、備選地至少大約85%的核酸序 列同一性、備選地至少大約86%的核酸序列同一性、備選地至少大約87%的核酸序列同一 性、備選地至少大約88%的核酸序列同一性、備選地至少大約89%的核酸序列同一性、備 選地至少大約90%的核酸序列同一性、備選地至少大約91%的核酸序列同一性、備選地至 少大約92%的核酸序列同一性、備選地至少大約93%的核酸序列同一性、備選地至少大約 94%的核酸序列同一性、備選地至少大約95%的核酸序列同一性、備選地至少大約96%的 核酸序列同一性、備選地至少大約97%的核酸序列同一性、備選地至少大約98%的核酸序 列同一性和備選地至少大約99%的核酸序列同一性。變體不包括天然核苷酸序列。通常，IL-17A/F變體多核苷酸為至少大約30個核苷酸的長度，備選地至少大約60 個核苷酸的長度，備選地至少大約90個核苷酸的長度，備選地至少大約120個核苷酸的長 度，備選地至少大約150個核苷酸的長度，備選地至少大約180個核苷酸的長度，備選地至 少大約210個核苷酸的長度，備選地至少大約240個核苷酸的長度，備選地至少大約270個 核苷酸的長度，備選地至少大約300個核苷酸的長度，備選地至少大約450個核苷酸的長 度，備選地至少大約600個核苷酸的長度，備選地至少大約900個核苷酸的長度，或更長。關(guān)于本文鑒定的IL-17A/F編碼核酸序列的“百分比(％ )核酸序列同一性”，定義 為將候選序列與目的IL-17A/F核酸序列進(jìn)行比對(并在必要時導(dǎo)入空位)以獲取最大百分比的序列同一性之后，候選序列中的核苷酸與該目的IL-17A/F核酸序列中的核苷酸相 同的百分?jǐn)?shù)?？墒褂帽绢I(lǐng)域各種方法進(jìn)行序列比對以便測定核酸序列同一性百分比，例如， 使用公眾可得到的計算機(jī)軟件如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign (DNASTAR)軟件。然而， 為此目的，核酸序列同一性％值使用序列比較計算機(jī)程序ALIGN-2產(chǎn)生，其中ALIGN-2程序 的完整源代碼已經(jīng)隨用戶資料提交至美國版權(quán)局(Washington D. C.，20559)，其美國版權(quán) 注冊登記號為 TXU510087。公眾可通過 Genentech，Inc. (South San Francisco, Calif.) 得到ALIGN-2程序，或者從該源代碼進(jìn)行編譯。ALIGN-2程序應(yīng)當(dāng)為在UNIX操作系統(tǒng)，優(yōu)選 在數(shù)字UNIX V4. OD上使用而進(jìn)行編譯。ALIGN-2程序設(shè)定了所有序列比對參數(shù)并且不變。在ALIGN-2應(yīng)用于核酸序列比較的情況中，給定核酸序列C相對于、與、或針對給 定核酸序列D的核酸序列同一性％ (或者這樣說給定核酸序列C具有或含有相對于、與或 針對給定核酸序列D的某一％核酸序列同一性)如下計算W/Z比值乘以100，其中W是用 序列比對程序ALIGN-2在該程序的C和D比對中評分為相同匹配的核苷酸數(shù)，且其中Z是 D中的核苷酸總數(shù)?？梢岳斫猓?dāng)核酸序列C與核酸序列D的長度不相等時，C相對于D的 核酸序列同一性％將不等于D相對于C的核酸序列同一性％。除非另外具體說明，在本文用的所有核酸序列同一性％的值都是用ALIGN-2計 算機(jī)程序如前段所描述的那樣得到的。然而，核酸序列同一性的％值也可以如下面將描 述的那樣用WU-BLAST-2計算機(jī)程序獲得(Altschul等人，Methods in Enzymology (酶學(xué) 方法)266 =460-480 (1996))。大部分WU-BLAST-2搜索參數(shù)設(shè)為默認(rèn)值。那些沒有設(shè)為默 認(rèn)值的參數(shù)，即可調(diào)參數(shù)，可以用下面的值來設(shè)置重疊跨度(overlap span) = 1，重疊分 數(shù)(overlap fraction) = 0. 125，字閾值(word threshold) (T) = 11,評分矩陣(scoring matrix) = BL0SUM62。使用WU-BLAST-2時，核酸序列同一性％的值是這樣得出的用由 WU-BLAST-2測定的，編碼IL-17A/F多肽的目的核酸分子(其具有衍生自編碼天然序列 IL-17A/F多肽的核酸的序列)的核酸序列，和目的比較核酸序列(S卩，與編碼IL-17A/F多 肽的目的核酸分子比較的序列，該序列可以是變體IL-17A/F多核苷酸)之間完全匹配的核 苷酸數(shù)目(a)，除以編碼IL-17A/F多肽的目的核酸分子的核苷酸總數(shù)(b)。例如，在“一種 分離的核酸分子，其包含與核酸序列B有至少80%核酸序列同一性的核酸序列A”的描述 中，核酸序列A是目的比較核酸分子，核酸序列B是編碼IL-17A/F多肽的目的核酸分子的 核酸序列。核酸序列同一性百分比也可以用序列比對程序NCBI-BLAST2 (Altschul等人， Nucleic Acids Res.(核酸研究)25 :3389-3402(1997))來測定。NCBI-BLAST2 序列比對程 序可以從http://www. ncbi. nim. nih. gov下載，或者從National Institute of Health (國 立衛(wèi)生研究所)，Bethesda，Md.得到。NCBI-BLAST2用數(shù)個搜索參數(shù)，其中所有這些搜索 參數(shù)都設(shè)為默認(rèn)值，包括例如未覆蓋(unmask)=是(yes)，鏈(strain)=全部(all)，預(yù) 計出現(xiàn)次數(shù)(expected occurrences) = 10，最低復(fù)雜度長度(minimum low complexity length) = 15/5，多次通過 e 值(multi-pass e-value) = 0· 01，多次通過的常數(shù)(constant for multi-pass) = 25，最終缺口 比對的遺漏(dropoff for final gapped alignment)= 25和評分矩陣=BL0SUM62。用NCBI-BLAST2進(jìn)行核酸序列比較時，給定核酸序列C相對于、與或針對給定核酸 序列D的核酸序列同一性％ (或者這樣說給定核酸序列C具有或含有相對于、與或針對給
23定核酸序列D的某一％核酸序列同一性)如下計算W/Z比值乘以100，其中W是用序列比 對程序NCBI-BLAST2在該程序的C和D比對中評分為相同匹配的核苷酸數(shù)，且其中Z是D 中的核苷酸總數(shù)?？梢岳斫猓?dāng)核酸序列C與核酸序列D的長度不相等時，C相對于D的核 酸序列同一性％將不等于D相對于C的核酸序列同一性％。在其它實施方案中，IL-17A/F變體多核苷酸是編碼有活性的IL-17A/F多肽且能 夠與編碼本文中所公開的全長IL-17A/F多肽的核苷酸序列雜交(優(yōu)選在嚴(yán)格雜交和洗滌 條件下雜交)的核酸分子。IL-17A/F變體多肽可以是由IL-17A/F變體多核苷酸編碼的那 些。在用于描述本文中所公開的各種多肽時，“分離的”指已經(jīng)鑒定且與其天然環(huán)境的 一種成分分開和/或從其回收的多肽。其天然環(huán)境的污染性成分指通常會干擾該多肽的診 斷或治療用途的物質(zhì)，且可包括酶、激素、和其它蛋白質(zhì)性質(zhì)或非蛋白質(zhì)性質(zhì)的溶質(zhì)。在優(yōu) 選的實施方案中，將該多肽純化至(1)足以通過使用轉(zhuǎn)杯式測序儀獲得至少15個殘基的 N-末端或內(nèi)部氨基酸序列的程度，或( 通過使用考馬斯藍(lán)(或優(yōu)選銀染)在非還原性或 還原性條件下的SDS-PAGE達(dá)到同質(zhì)化。由于IL-17A/F多肽天然環(huán)境的至少一種成分不會 存在，因此分離的多肽包括重組細(xì)胞內(nèi)的原位多肽。然而，分離的多肽通常通過至少一個純 化步驟來制備。編碼“分離的”IL-17A/F多肽的核酸或編碼其它多肽的核酸指已經(jīng)鑒定，且與編碼 該多肽的核酸的天然來源中通常與之關(guān)聯(lián)的至少一種污染性核酸分子分開的核酸分子。編 碼分離的多肽的核酸分子不同于其在自然界中被發(fā)現(xiàn)時的形式或情況。編碼分離的多肽的 核酸分子與存在于天然細(xì)胞中時的編碼特定多肽的核酸分子有區(qū)別。然而，編碼分離的多 肽的核酸分子包括在通常表達(dá)該多肽的細(xì)胞中包含的編碼多肽的核酸分子，在該細(xì)胞中， 例如，該核酸分子在與天然細(xì)胞中不同的染色體位置中。術(shù)語“控制序列”指在特定宿主生物體中表達(dá)可操作連接的編碼序列所必需的DNA 序列。例如，適于原核生物的控制序列包括啟動子、任選的操縱基因序列、和核糖體結(jié)合位 點。已知真核細(xì)胞能利用啟動子、多腺苷酸化信號、和增強(qiáng)子。若核酸與另一核酸序列處于功能性關(guān)系中，則該核酸是“可操作連接”的。例如， 若前序列或分泌前導(dǎo)序列的DNA表達(dá)成參與多肽分泌的前蛋白，則它與該多肽的DNA可操 作連接；若啟動子或增強(qiáng)子影響編碼序列的轉(zhuǎn)錄，則它與該序列可操作連接；或者，若核糖 體結(jié)合位點的位置促進(jìn)翻譯，則它與編碼序列可操作連接。通常，“可操作連接"指相連的 DNA序列是相鄰的，而且在分泌前導(dǎo)序列的情況中指相鄰且處于閱讀框中。然而，增強(qiáng)子不 必相鄰。連接可通過在適宜的限制性位點處的連接反應(yīng)來實現(xiàn)。如果沒有此類位點，那么 可依照常規(guī)實踐使用合成的寡核苷酸銜接頭或接頭。雜交反應(yīng)的“嚴(yán)格性”可以容易地由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員確定，而且通常憑經(jīng)驗根 據(jù)探針長度、洗滌溫度、和鹽濃度來計算。通常，較長的探針要求較高的溫度以正確復(fù)性， 而較短的探針需要較低的溫度。雜交通常依賴于當(dāng)互補(bǔ)鏈存在于低于其解鏈溫度的環(huán)境 中時變性DNA重新復(fù)性的能力。探針和可雜交序列之間所期望的同源性程度越高，可使用 的相對溫度也越高。因此可以認(rèn)為，較高相對溫度將趨向于使反應(yīng)條件更為嚴(yán)格，而較低 溫度也就較不嚴(yán)格。關(guān)于雜交反應(yīng)嚴(yán)格性的其它細(xì)節(jié)和解釋，參見Ausubel等人，Current Protocols in Molecular Biology (現(xiàn)代分子生物學(xué)實驗方案)，Wiley IntersciencePublishers, (1995)。本文中所定義的“嚴(yán)格條件”或“高嚴(yán)格性條件”可如下確定(1)采用低離子強(qiáng) 度和高溫進(jìn)行洗滌，例如0. 015M氯化鈉/0. 0015M檸檬酸鈉/0. 1 %十二烷基硫酸鈉，50°C ； (2)在雜交過程中采用變性劑，諸如甲酰胺，例如50% (ν/ν)甲酰胺及0.1%牛血清清蛋白 /0. 1% Ficoll/0. 聚乙烯吡咯烷酮/50mM磷酸鈉緩沖液pH 6. 5，含750mM氯化鈉、75mM 檸檬酸鈉，42°C;或(3)采用50%甲酰胺、5XSSC(0. 75M NaCl, 0. 075M檸檬酸鈉)、50mM磷酸 鈉(pH 6. 8)、0. 焦磷酸鈉、5X Denhardt氏溶液、超聲波處理的鮭魚精DNA(50 μ g/ml)、 0. 1% SDS、和10%硫酸葡聚糖(在42°C中)，在42°C下洗滌，在0. 2XSSC(氯化鈉/檸檬酸 鈉)和50%甲酰胺中在55°C下洗滌，接著在含EDTA的0. IXSSC中在55°C下進(jìn)行高嚴(yán)格性 洗滌?！爸械葒?yán)格條件〃可以如 Sambrook 等人，Molecular Cloning :A Laboratory Manual (分子克隆實驗室指南)，New York Co Id Spring Harbor Press，1989所述來確定， 包括使用比上文所述較不嚴(yán)格的洗滌溶液和雜交條件(例如溫度、離子強(qiáng)度和％ SDQ。中 等嚴(yán)格條件的一個例子是于37°C在含20%甲酰胺、5XSSC(150mM NaCl, 15mM檸檬酸三鈉)、 50mM磷酸鈉(pH 7.6)、5X Denhardt氏溶液、10%硫酸葡聚糖、和20mg/ml變性剪切的鮭魚 精DNA的溶液中溫育過夜，接著在IXSSC中于約37-50°C洗滌濾膜。技術(shù)人員將認(rèn)識到如何 根據(jù)需要來調(diào)整溫度、離子強(qiáng)度等以適應(yīng)諸如探針長度等因素。術(shù)語“帶表位標(biāo)簽的”在用于本文時指包含與“標(biāo)簽多肽”融合的IL-17A/F多肽 的嵌合多肽。標(biāo)簽多肽具有足夠的殘基以提供針對其可制備抗體的表位，但又足夠短使得 其不干擾與其融合的多肽的活性。標(biāo)簽多肽優(yōu)選還是相當(dāng)獨特的，使得該抗體基本上不與 其它表位發(fā)生交叉反應(yīng)性。合適的標(biāo)簽多肽通常具有至少6個氨基酸殘基且通常在約8個 到約50個氨基酸殘基之間(優(yōu)選在約10個到約20個氨基酸殘基之間)。本文所用的術(shù)語“免疫粘附素”指將異源蛋白質(zhì)(“粘附素”)的結(jié)合特異性與免 疫球蛋白恒定結(jié)構(gòu)域的效應(yīng)器功能聯(lián)合起來的抗體樣分子。在結(jié)構(gòu)上，免疫粘附素包括具 有期望結(jié)合特異性的氨基酸序列和免疫球蛋白恒定域序列的融合物，所述期望結(jié)合特異性 不同于抗體的抗原識別和結(jié)合位點(即是“異源”)。免疫粘附素分子的粘附素部分通常是 至少包含受體或配體的結(jié)合位點的連續(xù)氨基酸序列。免疫粘附素中的免疫球蛋白恒定結(jié)構(gòu) 域序列可從任何免疫球蛋白獲得，諸如IgG-I、IgG-2、IgG-3或IgG_4亞型、IgA(包括IgA-I 和 IgA-2)、IgE、IgD 或 IgM。術(shù)語“拮抗劑”以最廣義使用，包括部分或完全阻斷、抑制、或中和本文中所公開的 天然IL-17A/F多肽生物學(xué)活性的任何分子。以相似的方式，術(shù)語“激動劑”以最廣義使用， 包括模擬本文中所公開的天然IL-17A/F多肽生物學(xué)活性的任何分子。合適的激動劑或拮 抗劑分子明確包括激動性或拮抗性抗體或抗體片段、天然IL-17A/F多肽的片段或氨基酸 序列變體、肽、反義寡核苷酸、有機(jī)小分子等。用于鑒定IL-17A/F多肽的激動劑或拮抗劑的 方法可包括使IL-17A/F多肽接觸候選激動劑或拮抗劑分子并測量通常與IL-17A/F多肽有 關(guān)的一種或多種生物學(xué)活性的可檢測的變化?！疤幚?或“治療”，treatment) ”指治療性處理及預(yù)防性或防護(hù)性措施，其中目標(biāo) 是預(yù)防或減緩(減輕)目標(biāo)病理狀態(tài)或病癥的進(jìn)展。需要治療的那些受試者包括已經(jīng)患有 病癥的那些以及易于于患病的那些或要預(yù)防病癥的那些。
“長期”施用指與短期模式相反，以連續(xù)模式施用一種或多種藥劑，從而將初始治 療效果(活性)維持較長一段時間?！伴g歇”施用指不是無間斷連續(xù)進(jìn)行的治療，而是本質(zhì) 上周期性的。對于治療目的而言，“哺乳動物”指歸入哺乳類的任何動物，包括人、非人的高等 靈長類動物、家畜和耕畜，及動物園、運動或?qū)櫸飫游?，諸如犬、貓、牛、馬、綿羊、豬、山羊、兔 等。哺乳動物優(yōu)選指人?！奥?lián)合”一種或多種其它治療劑的給藥包括同時(共同)和以任意次序的連續(xù)給藥。本文所用的“載體”包括藥學(xué)可接受的載體、賦形劑或穩(wěn)定劑，其在所采用的劑量 和濃度對暴露于其的細(xì)胞或哺乳動物是無毒的。通常，生理學(xué)可接受的載體是PH緩沖水 溶液。生理學(xué)可接受載體的例子包括緩沖劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其它有機(jī)酸；抗氧化 劑，包括抗壞血酸；低分子量(少于約10個殘基)多肽；蛋白質(zhì)，諸如血清清蛋白、明膠或免 疫球蛋白；親水聚合物，諸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，諸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、 精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如 edta ；糖醇，諸如甘露醇或山梨醇；成鹽反荷離子，諸如鈉；和/或非離子表面活性劑，諸如 ttoen 、聚乙二醇(peg)和 Pluronicstm0術(shù)語“抗體”以最廣義使用，明確覆蓋如單個抗-IL-17A/F或抗-IL-17A或 抗-IL-17F單克隆抗體(包括激動性、拮抗性和中和性抗體)，具有多表位特異性的相應(yīng)的 抗體組合物，多克隆抗體，單鏈抗體，和抗體片段(見下文)，只要它們能展現(xiàn)出所期望的生 物學(xué)或免疫學(xué)活性。術(shù)語“免疫球蛋白”(Ig)在本文中與抗體可互換使用?！胺蛛x的抗體”指已經(jīng)鑒定且與其天然環(huán)境的一種成分分開和/或從其天然環(huán)境 的一種成分回收的抗體。其天然環(huán)境的污染性成分指會干擾該抗體的診斷或治療用途的物 質(zhì)，可包括酶、激素、和其它蛋白質(zhì)性質(zhì)或非蛋白質(zhì)性質(zhì)的溶質(zhì)。在優(yōu)選的實施方案中，將抗 體純化至(1)通過Lowry方法測定，超過95重量％，最優(yōu)選超過99重量％的抗體，(2)足以 通過使用轉(zhuǎn)杯式測序儀獲得至少15個殘基的N-末端或內(nèi)部氨基酸序列的程度，或(3)使 用考馬斯藍(lán)(或優(yōu)選銀染)在還原性或非還原性條件下的sds-page，達(dá)到同質(zhì)化。由于抗 體天然環(huán)境的至少一種成分不會存在，因此分離的抗體包括重組細(xì)胞內(nèi)原位的抗體。然而， 分離的抗體通常通過至少一個純化步驟來制備。基本的4鏈抗體單元是由兩條相同的輕鏈(L)和兩條相同的重鏈(H)構(gòu)成的異 四聚體糖蛋白(IgM抗體由5個基本的異四聚體單元及稱作J鏈的附加多肽組成，因此包 含10個抗原結(jié)合位點；而分泌型IgA抗體可聚合形成包含2-5個基本的4鏈單元及J鏈 的多價裝配物)。在IgG的情況中，4鏈單元通常約150，000道爾頓。每條輕鏈通過一個 共價二硫鍵與重鏈相連，而兩條重鏈通過一個或多個二硫鍵彼此相連，二硫鍵的數(shù)目取決 于重鏈的同種型。每條重鏈和輕鏈還具有規(guī)則間隔的鏈內(nèi)二硫鍵。每條重鏈在n-末端具 有一個可變結(jié)構(gòu)域(Vh)，接著是三個恒定結(jié)構(gòu)域(Ch)(對于α和γ鏈的每一個)和四個 Ch結(jié)構(gòu)域(對于μ和ε同種型)。每條輕鏈在n-末端具有一個可變結(jié)構(gòu)域(\)，接著是 其另一端處的一個恒定結(jié)構(gòu)域(CJ。\與Vh并排在一起，而Q與重鏈的第一恒定結(jié)構(gòu)域 (Cm)并排在一起。特定的氨基酸殘基被認(rèn)為在輕鏈和重鏈可變結(jié)構(gòu)域之間形成界面。成 對的Vh和\ 一起形成一個抗原結(jié)合位點。關(guān)于不同類別抗體的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，參見如Basicand Clinical Immunology (基礎(chǔ)和臨床酶學(xué))，第八版,Daniel P. Stites,Abba I. Terr 和 Tristram G. Parslow(編輯)，Appleton & Lange,Norwalk, Conn. , 1994,第 71 頁禾口第 6 章。來自任何脊椎動物物種的輕鏈，根據(jù)其恒定結(jié)構(gòu)域氨基酸序列，可歸入兩種稱作 κ和λ的截然不同類型中的一種。根據(jù)其重鏈(C. sub. H)恒定結(jié)構(gòu)域氨基酸序列，免疫球 蛋白可歸入不同的類或同種型。有五類免疫球蛋白IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，分別具有稱 作α、δ、ε、Y和μ的重鏈。根據(jù)Ch序列和功能的相對較小差異，、和α類可進(jìn)一步 分為亞類，例如人表達(dá)下列亞類=IgGU IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2。術(shù)語“可變的”指可變結(jié)構(gòu)域中的某些區(qū)段在抗體中序列廣泛差異的情況。V結(jié) 構(gòu)域介導(dǎo)抗原結(jié)合并限定特定抗體對其特定抗原的特異性。然而，變異性并非跨越于可 變結(jié)構(gòu)域的110個氨基酸跨度而均勻分布。事實上，V區(qū)由15-30個氨基酸的稱作構(gòu)架 區(qū)(FR)的相對不變異的區(qū)段及將構(gòu)架區(qū)分開的每個長度為9-12個氨基酸的稱作“高變 區(qū)”的高度可變的較短區(qū)域構(gòu)成。天然重鏈和輕鏈的可變結(jié)構(gòu)域各自包含四個FR，它們大 多采取折疊構(gòu)象，通過形成環(huán)狀連接且在有些情況中形成折疊結(jié)構(gòu)的一部分的三 個高變區(qū)連接。每條鏈中的高變區(qū)通過FR非常接近的保持在一起，并與來自另一條鏈的 高變區(qū)一起促成抗體的抗原結(jié)合位點的形成(參見Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest (免疫學(xué)感興趣的蛋白質(zhì)的序列)，第五版.Public Health Service (公共衛(wèi)生署)，National Institutes of Health (國立衛(wèi)生研究所)，Bethesda， Md. (1991))。恒定結(jié)構(gòu)域不直接參與抗體與抗原的結(jié)合，但展現(xiàn)出多種效應(yīng)器功能，如在抗 體依賴性細(xì)胞毒性(ADCC)中抗體的參與。術(shù)語“高變區(qū)"在用于本文時指抗體中負(fù)責(zé)抗原結(jié)合的氨基酸殘基。高變區(qū)通 常包含來自“互補(bǔ)決定區(qū)”或“⑶R”的氨基酸殘基(例如\中大約為殘基M_34(L1)、 50-56 (L2)和 89-97 (L3)附近，而 Vh 中大約為 1-35 (Hl)、50-65 (H2)和 95-102 (H3)附近； Kabat 等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest (免疫學(xué)感興趣的蛋白 質(zhì)的序列)，第五版.Public Health Service (公共衛(wèi)生署)，National Institutes of Health(國立衛(wèi)生研究所)，Bethesda，Md. (1991))和/或那些來自“高變環(huán)”的殘基(例如 Vl 中為殘基 26-32 (Li)、50-52(L2)和 91-96 (L3)，而 Vh 中為殘基 26-32 (HI)、53_55(H2)和 96-101 (H3)附近；Chothia 和 Lesk J. Mol. Biol.(分子生物學(xué)雜志)196 :901-917 (1987))。術(shù)語“單克隆抗體”在用于本文時指從一群基本上同質(zhì)的抗體中獲得的抗體，即除 了可能少量存在的天然存在的突變之外，構(gòu)成群體的各個抗體相同。單克隆抗體是高度特 異性的，其針對單一抗原位點。另外，與包括針對不同決定簇(表位)的不同抗體的多克隆 抗體制品相反，每種單克隆抗體針對抗原上的單一決定簇。在它們的特異性外，單克隆抗體 的優(yōu)越性體現(xiàn)在它們可合成而不被其它抗體污染。修飾語“單克隆”不能解釋為要求通過任 何特定方法來生成抗體。例如，可用于本發(fā)明的單克隆抗體可通過雜交瘤方法(由Kohler 等人，Nature (自然)，256 =495(1975)第一次描述)制備，或可通過重組DNA法在細(xì)菌、真核 細(xì)胞動物或植物細(xì)胞(參見如，美國專利No. 4，816，567)中制備。“單克隆抗體”也可以使 用例如在 Clackson 等人，Nature (自然)，352 :624-628 (1991)和 Marks 等人，J. Mol. Biol. (分子生物學(xué)雜志)，222 =581-597 (1991)中描述的技術(shù)從噬菌體抗體文庫中分離。本文的單克隆抗體包括“嵌合”抗體，其中一部分重鏈和/或輕鏈與衍生自特定物 種或?qū)儆谔囟贵w類別或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，而鏈的剩余部分與衍生自另一物種或?qū)儆诹硪豢贵w類別或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，還可以是此類抗體 的片段，只要它們展現(xiàn)出期望的生物學(xué)活性(參見，美國專利No. 4，816，567 ；和Morrison 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA (美國科學(xué)院院刊),81 :6851-6855 (1984))。本文的目的嵌 合抗體包括“靈長類動物化”的抗體，其衍生自非人靈長類動物(例如舊大陸猴(Old World Monkey)、猿等)的可變結(jié)構(gòu)域抗原結(jié)合序列，和人恒定區(qū)序列?！巴暾笨贵w是包含抗原結(jié)合位點和C. sub. L以及至少重鏈恒定結(jié)構(gòu)域CH1，CH2和 CH3的抗體。該恒定結(jié)構(gòu)域可以是天然序列恒定結(jié)構(gòu)域(例如人天然序列恒定結(jié)構(gòu)域)或 其氨基酸序列變體。優(yōu)選地，該完整抗體具有一種或多種效應(yīng)器功能。“抗體片段”包含完整抗體的一部分，優(yōu)選完整抗體的抗原結(jié)合區(qū)或可變 區(qū)?？贵w片段的例子包括Fab、Fab'、F(ab' )2和Fv片段；雙價抗體；線性抗體(參 見美國專利No. 5，641，870，實施例2 ；Zapata等，Protein Eng.(蛋白質(zhì)工程)8(10) 1057-1062[1995])；單鏈抗體分子；及由抗體片段形成的多特異性抗體。在優(yōu)選實施方案 中，該片段是“有功能的”，即定性地保留了相應(yīng)完整抗體結(jié)合至靶標(biāo)IL-17A和IL-17F多肽 的能力，并且如果完整抗體也抑制IL-17A/F的生物學(xué)活性或功能，也定性地同樣保留此類 抑制性質(zhì)。定性地保留的意思是活性在類型上得到維持，但結(jié)合親和力和/或活性的程度 可能有差別。用木瓜蛋白酶消化抗體產(chǎn)生稱作“Fab”片段的兩個相同的抗原結(jié)合片段，和一個 殘余“Fe”片段，其名稱反映了它易于結(jié)晶的能力。Fab片段由完整輕鏈及重鏈可變結(jié)構(gòu)域 (Vh)和，一個重鏈的第一恒定結(jié)構(gòu)域(Chi)組成。每個Fab片段對于抗原結(jié)合是單價的，即 它具有一個抗原結(jié)合位點。胃蛋白酶處理抗體產(chǎn)生一個較大F(ab’)2片段，它粗略相當(dāng)于 兩個通過二硫鍵相連的Fab片段，具有二價抗原結(jié)合活性且仍能夠交聯(lián)抗原。Fab’片段因 在Chi結(jié)構(gòu)域的羧基末端增加了額外的少數(shù)殘基(包括來自抗體鉸鏈區(qū)的一個或多個半胱 氨酸)而與Fab片段有所不同。Fab’_SH是本文中對其中恒定結(jié)構(gòu)域半胱氨酸殘基攜帶一 個游離硫醇基的Fab，的稱謂。F(ab，)2抗體片段最初是作為成對Fab，片段生成的，在Fab， 片段之間具有鉸鏈半胱氨酸。抗體片段的其它化學(xué)偶聯(lián)也是已知的。Fc片段包含通過二硫鍵保持在一起的兩條重鏈的羧基末端部分?？贵w的效應(yīng)器功 能是由Fc區(qū)中的序列決定的，該區(qū)還是由在某些類型細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)的Fc受體(FcR)所識別 的部分?！癋v”是包含完整抗原識別和結(jié)合位點的最小抗體片段。此片段由緊密、非共價締 合的一個重鏈可變區(qū)結(jié)構(gòu)域和一個輕鏈可變區(qū)結(jié)構(gòu)域的二聚體組成。從這兩個結(jié)構(gòu)域的折 疊中突出了六個高變環(huán)(重鏈和輕鏈各3個環(huán))，這些高變環(huán)貢獻(xiàn)出用于抗原結(jié)合的氨基酸 殘基并賦予抗體以抗原結(jié)合特異性。然而，即使是單個可變結(jié)構(gòu)域(或只包含對抗原特異 的三個CDR的半個Fv)也具有識別和結(jié)合抗原的能力，然而親和力低于完整結(jié)合位點?！皢捂淔v”也可縮寫為“sFv”或“scFv”，是包含連接成單個多肽鏈的V. sub. H和 V. sub. L抗體結(jié)構(gòu)域的抗體片段。優(yōu)選的是，sFv多肽還包含在V. sub. H和V. sub. L結(jié)構(gòu)域 之間的多肽接頭，使得sFv形成用于抗原結(jié)合的期望結(jié)構(gòu)。關(guān)于sFv的綜述參見Pluckthim T The Pharmacology of Monoclonal Antibodies ( 3 ^ δ # ), vol. 113, Rosenburg 禾口 Moore 編輯，Springer-Verlag, New York, pp.269-315(1994) ；Borrebaeck 1995，見下文。
術(shù)語“雙價抗體(diabodies)”是指如下制備的小抗體片段，通過使用短接頭(大 約5-10個殘基)在Vh和\結(jié)構(gòu)域之間構(gòu)建sFv片段(見前段)從而獲得該V結(jié)構(gòu)域的鏈 間而非鏈內(nèi)配對而產(chǎn)生二價片段，即具有兩種抗原結(jié)合位點的片段。雙特異性雙價抗體是 兩種“交叉”的sFv片段的異二聚體，其中該兩種抗體的Vh和\結(jié)構(gòu)域存在于不同多肽鏈 上。雙價抗體在例如 EP 404, 097 ；WO 93/11161 ；和 Hollinger 等人，Proc. Natl. Acad. ki. (美國科學(xué)院院刊)USA，90 =6444-6448(1993)中有更充分的描述。非人(例如嚙齒動物)抗體的“人源化”形式指最低限度包含衍生自非人抗體的 序列的嵌合抗體。在極大程度上，人源化抗體指這樣的人免疫球蛋白(受體抗體)，其中 來自該受體的高變區(qū)的殘基用具有期望抗體特異性、親和力和能力的來自非人物種(供體 抗體)諸如小鼠、大鼠、兔或非人靈長類動物的高變區(qū)的殘基替換。在有些情況中，將人免 疫球蛋白的構(gòu)架區(qū)(FR)殘基用相應(yīng)的非人殘基替換。此外，人源化抗體可包含在受體抗 體或供體抗體中沒有找到的殘基。進(jìn)行這些修飾是為了進(jìn)一步改進(jìn)抗體的性能。一般而 言，人源化抗體將包含至少一個、通常兩個可變結(jié)構(gòu)域的基本上所有可變結(jié)構(gòu)域，在所述可 變結(jié)構(gòu)域中所有或基本上所有高變環(huán)對應(yīng)于非人免疫球蛋白的高變環(huán)，且所有或基本上 所有FR是人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗體任選還將包含至少部分免疫球蛋白恒定 區(qū)(Fe)，通常是人免疫球蛋白的恒定區(qū)。更多細(xì)節(jié)參見Jones等人，Nature (自然)321 522-525(1986) ；Riechmann 等人，Nature (自然)332 :323-329(1988)；和 Presta, Curr. Op. Struct. Biol.(結(jié)構(gòu)生物學(xué)新觀點)2 :593-596(1992)?！敖徊娣磻?yīng)性抗體”是識別超過一種抗原上的相同或相似表位的抗體。因而，本發(fā) 明的交叉反應(yīng)性抗體識別IL-17A和IL-17F兩者上存在的相同或相似表位。在一個具體實 施方案中，交叉反應(yīng)性抗體使用相同或基本相同的互補(bǔ)位結(jié)合至IL-17A和IL-17F兩者。優(yōu) 選地，本文的交叉反應(yīng)性抗體也阻斷IL-17A和IL-17F兩者的功能(活性)。術(shù)語“互補(bǔ)位(paratope) ”用于本文時是指結(jié)合至靶標(biāo)抗原的抗體的部分。“物種依賴性抗體”例如哺乳動物抗-IL-17A/F抗體是這樣的抗體，其對于來自第 一哺乳動物物種的抗原比其對于來自第二哺乳動物物種的該抗原的同源物具有更強(qiáng)的結(jié) 合親和力。正常地，該物種依賴性抗體“特異性地”結(jié)合至人抗原(即具有不超過大約Ix 10_7M，優(yōu)選不超過大約ΙχΙΟΛ 且最優(yōu)選不超過大約Ix KTi3M的結(jié)合親和力(Kd)值)，但對 來自第二非人哺乳動物物種的該抗原的同源物具有的親和力比其對該人抗原的結(jié)合親和 力弱至少大約50倍，或至少大約500倍，或至少大約1000倍。物種依賴性抗原可以是上文 定義的多種抗體類型的任何一種，但優(yōu)選地是人源化的或人抗體。“結(jié)合”目的抗原的抗體是以足以使該抗體用作靶向表達(dá)該抗原的細(xì)胞或組織的 診斷和/或治療劑的親和性結(jié)合抗原且不顯著與其它蛋白交叉反應(yīng)的抗體。在此類實施方 案中，該抗體與“非靶標(biāo)”蛋白質(zhì)的結(jié)合程度小于該抗體與其特定靶標(biāo)蛋白結(jié)合的約10%， 這可通過熒光激活細(xì)胞分選(FACQ分析或放射免疫沉淀(RIA)確定。關(guān)于抗體與靶標(biāo)分 子的結(jié)合，術(shù)語“特異性結(jié)合”或“特異性結(jié)合至”或“特異于”特定多肽或特定多肽靶標(biāo)上 的表位指可測量出不同于非特異性相互作用的結(jié)合。特異性結(jié)合可通過例如測定分子的 結(jié)合并與對照分子的結(jié)合比較來確定，所述對照分子通常是結(jié)構(gòu)相似但沒有結(jié)合活性的分 子。例如，特異性結(jié)合可通過與對照分子的競爭來測定，所述對照分子與靶標(biāo)相似，例如過 量的未標(biāo)記靶標(biāo)。在這種情況中，若經(jīng)標(biāo)記靶標(biāo)與探針的結(jié)合受到過量未標(biāo)記靶標(biāo)的競爭性抑制，則指示特異性結(jié)合。用于本文時，術(shù)語“特異性結(jié)合”或“特異性結(jié)合至”或“特異 于”特定多肽或特定多肽靶標(biāo)上的表位可通過下述分子顯示，例如，對該靶標(biāo)具有的Kd為至 少大約10_4M，備選地至少大約10_5M、備選地至少大約10_6M，備選地至少大約10_7M，備選地 至少大約10_8M，備選地至少大約10_9M，備選地至少大約10_1(IM，備選地至少大約10_"M，備選 地至少大約IO-12M,或更大的分子。在一個實施方案中，該術(shù)語“特異性結(jié)合”指如下結(jié)合， 其中分子結(jié)合特定多肽或特定多肽上的表位而基本上不結(jié)合任何其它多肽或多肽表位。在 優(yōu)選的實施方案中，特異性結(jié)合親和力為至少大約10_1(IM?？贵w“效應(yīng)器功能”指那些可歸于抗體Fc區(qū)(天然序列Fc區(qū)或氨基酸序列變體 Fc區(qū))的生物學(xué)活性，且其隨抗體同種型而變化?？贵w效應(yīng)器功能的例子包括Clq結(jié)合 和補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性；Fc受體結(jié)合；抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)；吞噬作用； 細(xì)胞表面受體(例如B細(xì)胞受體)的下調(diào)；和B細(xì)胞活化?！翱贵w依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性”或“ADCC”指如下細(xì)胞毒性形式，其中結(jié)合在 某些細(xì)胞毒性細(xì)胞(例如天然殺傷(NK)細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)上存在的Fc受 體(FcR)上的分泌型Ig使這些細(xì)胞毒性效應(yīng)細(xì)胞特異性結(jié)合至攜帶抗原的靶細(xì)胞，隨后 用細(xì)胞毒素殺死該靶細(xì)胞。所述抗體“武裝”細(xì)胞毒性細(xì)胞，而且絕對是這類殺傷所必需 的。介導(dǎo)ADCC的主要細(xì)胞(NK細(xì)胞)只表達(dá)Fc γ RIII，而單核細(xì)胞表達(dá)Fc YRI、Fc YRII 禾口 Fc γ RIII。Ravetch 和 Kinet，Annu. Rev. Immunol.(免疫學(xué)年度評論)9 :457-92 (1991) 的464頁表3總結(jié)了造血細(xì)胞上的FcR表達(dá)。為了評估目的分子的ADCC活性，可進(jìn)行體 外ADCC測定法，諸如美國專利No. 5，500, 362或5，821，337中所記載的。可用于此類測定 法的效應(yīng)細(xì)胞包括外周血單核細(xì)胞(PBMC)和天然殺傷(NK)細(xì)胞。備選地或額外地，可在 體內(nèi)評估目的分子的ADCC活性，例如在動物模型中，諸如Clynes等Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. Α.(美國科學(xué)院院刊)95 :652-656(1998)所披露的動物模型。"Fe受體”或“FcR”描述與抗體Fc區(qū)結(jié)合的受體。優(yōu)選的FcR是天然序列的人 FcR0此外，優(yōu)選的FcR是與IgG抗體結(jié)合的FcR( γ受體)，而且其包括Fc γ RI，F(xiàn)c γ RII 和Fc γ RIII亞類的受體，包括這些受體的等位變體和選擇性剪接形式。Fc γ RII受體包括 Fc y RIIA (“活化受體”)和Fc y RIIB (“抑制受體”)，它們具有相似的氨基酸序列，區(qū)別主要 在于其胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域?；罨荏wFc y RIIA在其胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域中包含免疫受體酪氨酸活化基序 (ITAM)。抑制受體Fc γ RIIB在其胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域中包含免疫受體酪氨酸抑制基序(ITIM)(參見 綜述 Μ. in Daeron, Annu. Rev. Immunol.(免疫學(xué)年度評論)15 :203-234 (1997)) FcR 的綜 述參見 Ravetch 和 Kinet，Annu. Rev. Immunol.(免疫學(xué)年度評論)9 :457-492(1991) ；Capel 等人，Immunomethods (免疫方法)4 :25-34 (1994)；和 de Haas 等人，J. Lab. Clin. Med.(實 驗室臨床醫(yī)學(xué)雜志)126 =330-41 (1995)。術(shù)語“FcR”在本文中涵蓋其它FcR，包括未來將會 鑒定的FcR。該術(shù)語還包括新生兒受體(Fcfoi)，它負(fù)責(zé)將母體的IgG轉(zhuǎn)移給胎兒(Guyer等 人，J. Immunol.(免疫學(xué)雜志)117 :587(1976)和 Kim 等人，J. Immunol.(免疫學(xué)雜志)24 249(1994))?！叭诵?yīng)細(xì)胞"指表達(dá)一種或多種FcR并執(zhí)行效應(yīng)器功能的白細(xì)胞。優(yōu)選的是，該 細(xì)胞至少表達(dá)Fc y RIII并執(zhí)行ADCC效應(yīng)器功能。介導(dǎo)ADCC的人白細(xì)胞的例子包括外周 血單核細(xì)胞(PBMC)、天然殺傷(NK)細(xì)胞、單核細(xì)胞、細(xì)胞毒性T細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞；其中 優(yōu)選PBMC和NK細(xì)胞。效應(yīng)細(xì)胞可以從天然來源，例如從血液分離。
“補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性”或“CDC”指存在補(bǔ)體時靶細(xì)胞的溶解作用。經(jīng)典補(bǔ)體途 徑的激活是由補(bǔ)體系統(tǒng)第一組分(Clq)結(jié)合至與其關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合的(適宜亞類的)抗體 起始的。為了評估補(bǔ)體激活，可進(jìn)行⑶C測定法，例如feizzano-Santoro等人，Immunol. Methods (免疫學(xué)方法)202 :163(1996)所記載的。詞語“標(biāo)記物”在用于本文時指可檢測的化合物或組合物，其與抗體直接或間接綴 合從而產(chǎn)生“經(jīng)標(biāo)記的”抗體。標(biāo)記物可以是自身就可檢測的(例如放射性同位素標(biāo)記物 或熒光標(biāo)記物)，或者在酶標(biāo)記物的情況中，可催化底物化合物或組合物的可檢測的化學(xué)改變?！肮滔唷敝副景l(fā)明的抗體可附著其上的非水性基質(zhì)。本文中所涵蓋的固相的例子包 括那些部分或完全由玻璃(例如可控孔徑玻璃)、多糖(例如瓊脂糖)、聚丙烯酰胺、聚苯乙 烯、聚乙烯醇和硅酮制成的固相。在某些實施方案中，根據(jù)語境，固相可包括測定板的孔；在 其它實施方案中，它指純化柱(例如親和色譜柱)。此術(shù)語還包括離散顆粒的不連續(xù)固相， 諸如美國專利No. 4，275，149中所述那些?！爸|(zhì)體”指由各種類型的脂質(zhì)、磷脂和/或表面活性劑構(gòu)成的小囊泡，其可用于對 哺乳動物遞送藥物(如IL-17A/F多肽或其抗體)。與生物膜的脂質(zhì)排列相似，脂質(zhì)體的成 分通常排列成雙層形式。為了本文目的當(dāng)述及IL-17A/F多肽時“有活性的”或“活性”或“功能”是指保留 天然或天然存在的IL-17A/F多肽的生物學(xué)和/或免疫學(xué)活性的IL-17A/F多肽的一種或多 種形式，其中“生物學(xué)”活性指除誘導(dǎo)針對天然或天然存在的IL-17A/F多肽所具有的抗原 性表位的抗體生成外，由天然或天然存在的IL-17A/F多肽造成的生物學(xué)功能(或是抑制性 的或是刺激性的)，而“免疫學(xué)”活性指誘導(dǎo)針對天然或天然存在的IL-17A/F多肽所具有的 抗原性表位的抗體生成的能力。一種優(yōu)選的生物學(xué)活性包括誘導(dǎo)激活NF- κ B且刺激促炎 趨化因子IL-8和IL-6的產(chǎn)生。另一種優(yōu)選的生物學(xué)活性包括刺激外周血單核細(xì)胞或⑶4+ 細(xì)胞。另一種優(yōu)選的生物學(xué)活性包括刺激T淋巴細(xì)胞增殖。另一種優(yōu)選的生物學(xué)活性包括， 例如，從THPl細(xì)胞釋放TNF-α。另一種活性包括增強(qiáng)關(guān)節(jié)軟骨中的基質(zhì)合成。備選地，另 一種活性包括促進(jìn)關(guān)節(jié)軟骨基質(zhì)降解以及抑制基質(zhì)合成。另一種優(yōu)選的生物學(xué)活性包括調(diào) 節(jié)炎性腸病的中度至嚴(yán)重階段期間或卒中期間白介素-17信號傳導(dǎo)途徑的水平。關(guān)于抗-IL-17A/F (或抗-IL-17A或抗-IL-17F)抗體，術(shù)語“有活性的”或“活性” 或“功能”及其語法變體，用于指抑制(阻斷性或拮抗性抗體)或模擬(激動性抗體)至少 一種前述活性的能力。被稱為“有功能的”抗體和抗體片段的特征是具有此類性質(zhì)。“免疫學(xué)”活性僅指誘導(dǎo)抗體產(chǎn)生的能力，該抗體是針對天然或天然存在的 IL-17A/F多肽所具有的抗原表位的抗體。退行性軟骨病描述了許多疾病，其特征主要是破壞軟骨基質(zhì)。其他的病理包括一 氧化氮產(chǎn)生和蛋白多糖降解的升高。包涵在該定義內(nèi)的示例性病癥包括，例如，關(guān)節(jié)炎(例 如骨關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，銀屑病關(guān)節(jié)炎)。術(shù)語“免疫相關(guān)疾病”指由哺乳動物免疫系統(tǒng)成分引起、介導(dǎo)、或以其它方式促成 哺乳動物發(fā)病的疾病。還包括免疫應(yīng)答的刺激或干預(yù)對疾病發(fā)展具有改善作用的疾病。該 術(shù)語包括免疫介導(dǎo)的炎性疾病、非免疫介導(dǎo)的炎性疾病、感染性疾病、免疫缺陷疾病、瘤形 成等。
術(shù)語“T細(xì)胞介導(dǎo)的疾病”指其中T細(xì)胞直接或間接介導(dǎo)或以其它方式促成哺乳動 物發(fā)病的疾病。T細(xì)胞介導(dǎo)的疾病可能與細(xì)胞介導(dǎo)的效應(yīng)、淋巴因子介導(dǎo)的效應(yīng)等有關(guān)，和 甚至與B細(xì)胞有關(guān)的效應(yīng)，如果B細(xì)胞被刺激的話，例如被由T細(xì)胞分泌的淋巴因子刺激。可依照本發(fā)明治療的免疫相關(guān)和炎性疾病的例子，其中有些是免疫或T細(xì)胞介導(dǎo) 的，包括系統(tǒng)性紅斑狼瘡，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，幼年型慢性關(guān)節(jié)炎，脊椎關(guān)節(jié)病，系統(tǒng)性硬化癥 (硬皮病)，特發(fā)性炎性肌病(皮肌炎、多肌炎)，斯耶格倫綜合征(Sjogren' s syndrome), 系統(tǒng)性血管炎，結(jié)節(jié)病，自身免疫性溶血性貧血(免疫性全血細(xì)胞減少癥、陣發(fā)性夜間血紅 蛋白尿)，自身免疫性血小板減少癥(特發(fā)性血小板減少性紫癜、免疫介導(dǎo)的血小板減少 癥)，甲狀腺炎(格雷夫斯病(Graye’ s disease)、橋本甲狀腺炎、幼年型淋巴細(xì)胞性甲狀 腺炎、萎縮性甲狀腺炎)，糖尿病，免疫介導(dǎo)的腎病(腎小球腎炎、腎小管間質(zhì)性腎炎)，中 樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)的脫髓鞘疾病諸如多發(fā)性硬化、特發(fā)性脫髓鞘性多神經(jīng)病或急性熱病性 多神經(jīng)炎(Guillain-Barre syndrome)、和慢性炎性脫髓鞘多神經(jīng)病，肝膽疾病諸如傳染 性肝炎(甲型、乙型、丙型、丁型、戊型和其它非嗜肝病毒肝炎)、自身免疫性慢性活動性肝 炎、原發(fā)性膽汁性肝硬變、肉芽腫性肝炎、和硬化性膽管炎，炎性腸病(IBD)包括潰瘍性結(jié) 腸炎、局限性回腸炎(Crohn' s disease)、麩質(zhì)敏感性腸病、和惠普爾氏病(Whipple' s disease)，自身免疫性或免疫介導(dǎo)的皮膚疾病包括大皰性皮膚疾病、多形紅斑和接觸性皮 炎、銀屑病，變應(yīng)性疾病諸如哮喘、變應(yīng)性鼻炎、特應(yīng)性皮炎、食物過敏和蕁麻疫，肺的免疫 學(xué)疾病諸如嗜酸細(xì)胞性肺炎、特發(fā)性肺纖維化和過敏性肺炎，移植相關(guān)疾病包括移植物排 斥和移植物抗宿主疾病，感染性疾病包括病毒疾病如AIDS (HIV感染)、甲型肝炎、乙型肝 炎、丙型肝炎、丁型肝炎和戊型肝炎、皰疹等、細(xì)菌感染、真菌感染、原生動物感染和寄生蟲 感染。術(shù)語“有效量”是IL-17A/F多肽和/或激動劑/拮抗劑導(dǎo)致獲得具體說明的目的 濃度或量。IL-17A/F多肽或其激動劑或拮抗劑的“有效量”可憑經(jīng)驗來確定。另外，“治療 有效量”是IL-17A/F多肽和/或激動劑/拮抗劑有效獲得說明的治療效果的濃度或量。此 量也可憑經(jīng)驗來確定。II.詳細(xì)描述本發(fā)明提供制備與IL-17A/F交叉反應(yīng)的抗體和特異性地結(jié)合至IL-17A和IL-17F 的雙特異性抗體。IL-17A和IL-17F是Thl7T細(xì)胞亞群分泌的主要促炎性細(xì)胞因子。它們 靶向幾乎體內(nèi)所有細(xì)胞類型并誘導(dǎo)組織炎癥和組織損傷。由于這些細(xì)胞因子參與炎癥，并 且特別是免疫相關(guān)疾病，如自身免疫性疾病，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)和炎性腸病(IBD)， 期望產(chǎn)生能夠阻斷IL-17A和IL-17F兩者的抗體。本發(fā)明提供此類抗體。更具體地，本發(fā) 明提供與IL-17A和IL-17F交叉反應(yīng)的抗體以及具有對IL-17A和IL-17F兩者的結(jié)合特異 性的雙特異性抗體。重組產(chǎn)生抗體的一般方法本文的抗體和其它重組蛋白質(zhì)可通過重組DNA技術(shù)的熟知的技術(shù)產(chǎn)生。因此，除 了本文具體鑒定的抗體，技術(shù)人員能夠(例如通過下文描述的技術(shù))產(chǎn)生針對目的抗原的 抗體。根據(jù)本發(fā)明產(chǎn)生的抗體針對兩種目的抗原，IL-17A和IL-17F。本發(fā)明的IL-17A/ F交叉反應(yīng)性和雙特異性抗體已經(jīng)通過噬菌體展示技術(shù)產(chǎn)生，但是也可使用其它已知用于制備雙特異性抗體和具有結(jié)合至兩種不同抗原的抗原結(jié)合區(qū)的抗體的技術(shù)。交叉反應(yīng)件抗體根據(jù)一個實施方案，使具有對IL-17A之一的特異性的抗體發(fā)生多樣化，從而在保 留對IL-17A的特異性的同時其產(chǎn)生對IL-17F的特異性。備選地，使具有對IL-17F的抗體 發(fā)生多樣化，從而在保留對IL-17F的特異性的同時其產(chǎn)生對IL-17A的特異性?？傮w而言， 這種方法包括步驟(1)使抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(\)的氨基酸序列多樣化，其中在多樣化之 前，抗體包含能夠結(jié)合至第一 IL-17蛋白(IL-17A或IL-17F)上的表位的\和重鏈可變結(jié) 構(gòu)域(Vh)，和(2)選擇這樣的多樣化抗體，該抗體能夠結(jié)合至第一 IL-17蛋白(IL-17A或 IL-17F)上的表位和第二 IL-17蛋白(IL-17F或IL-17A)上的表位。這種方法的詳細(xì)描述 在2008年3月20日公開的公開號為No. 20080069820的共同待決申請中提供，其公開的全 文通過引用明確合并于本文。在實施例1中示例性說明了產(chǎn)生IL-17A/F交叉反應(yīng)性抗體 的具體產(chǎn)生和選擇方法。雙特異件抗體根據(jù)另一個實施方案，對兩種IL-17多肽(IL-17A和IL-17F)具有特異性的抗體 從注射以IL-17A和IL-17F的非人哺乳動物(如小鼠或大鼠)中分離。用于制備雙特異性抗體的方法是本領(lǐng)域中已知的。全長雙特異性抗體的傳統(tǒng)制 備基于兩種免疫球蛋白重鏈-輕鏈對的共表達(dá)，其中兩種鏈具有不同的特異性(Millstein 等人，Nature (自然)，305 :537-539 (1983))。由于免疫球蛋白重鏈和輕鏈的隨機(jī)分配， 這些雜交瘤(四源雜交瘤)生成了潛在有10種不同抗體分子的混合物，其中只有一種具 有正確的雙特異性結(jié)構(gòu)。通常通過親和色譜步驟進(jìn)行的對正確分子的純化，相當(dāng)麻煩，且 產(chǎn)物產(chǎn)量低。WO 93/08829及Traunecker等人，EMBO J.(歐洲分子生物學(xué)學(xué)會志)，10 3655-3659(1991)中公開了類似的流程。根據(jù)WO 96/27011中描述的另一種方法，可改造一對抗體分子之間的界面，從而 使從重組細(xì)胞培養(yǎng)物中回收的異二聚體的百分比最大化。優(yōu)選的界面包含至少一部分抗體 恒定結(jié)構(gòu)域的CH3結(jié)構(gòu)域。在該方法中，將第一抗體分子界面的一個或多個小氨基酸側(cè)鏈用 較大側(cè)鏈(例如酪氨酸或色氨酸)替換。通過用較小氨基酸側(cè)鏈(例如丙氨酸或蘇氨酸) 替換大氨基酸側(cè)鏈，從而在第二抗體分子的界面上產(chǎn)生與一個或多個大側(cè)鏈相同或相似大 小的補(bǔ)償性“空腔”。這提供了提高異二聚體，而不是其它不想要的終產(chǎn)物如同型二聚體的 產(chǎn)量的機(jī)制。雙特異性抗體包括交聯(lián)或“異源綴合”抗體。例如，異源綴合物中的一種抗體可與 親合素偶聯(lián)，另一種抗體與生物素偶聯(lián)。例如，此類抗體被建議用于使免疫系統(tǒng)細(xì)胞靶向不 想要的細(xì)胞(美國專利No. 4，676，980)，及用于治療HIV感染(W0 91/00360, WO 92/200373 和EP 03089)?？墒褂萌魏芜m宜的交聯(lián)方法制備異源綴合抗體。合適的交聯(lián)劑是本領(lǐng)域公 知的，并且連同許多交聯(lián)技術(shù)一起公開于美國專利No. 4，676，980中。關(guān)于制備雙特異性抗體的綜述，參見例如Holliger，P.和Winter，G.，Curr. Opin. Biotechnol.(生物技術(shù)新觀點)4，446-449 (199 ；Carter, P.等人，J. Hematotherapy (血 液療法)4,463-470(199 ；和 Pluckthun，A.和 Pack，P.，Immunotechnology (免疫技術(shù))3， 83-105 (1997)。雙特異性和/或二價性已經(jīng)通過如下方法獲得，通過柔性接頭、亮氨酸拉鏈 基序、異二聚化融合兩個scFv分子，并通過scFv分子的締合從而形成二價單特異性雙價抗體和相關(guān)結(jié)構(gòu)。因此，例如，為了產(chǎn)生雙特異性抗體，人們可從兩個單特異性抗體(例如， 抗-IL-17A和抗-IL-17F抗體)開始。然后，可分離抗體的兩臂并共價重新結(jié)合以形成雙 特異性抗體。此類雙特異性抗體可包含共有的Fc部分和來自于每個親本分子的Fab部分。 因此，一個Fab部分對受體亞基之一是特異性的，且另一個對不同受體亞基是特異性的。當(dāng) 然，起始物質(zhì)不必是完整的二價抗體。例如，它們可以是片段例如Fab片段，或進(jìn)一步包含 一個或多個重鏈CH2和/或CH3結(jié)構(gòu)域的Fab片段(例如F (ab = ) 2片段)。也可使用化學(xué)鍵來制備雙特異性抗體。Brerman等人，kience (科學(xué))2 81(198 描述了一種方法，其通過蛋白水解切割完整抗體以生成F(ab' )2片段。將這些 片段在存在二硫醇絡(luò)合劑亞砷酸鈉的情況下還原，以穩(wěn)定鄰近的二硫醇并防止分子間二 硫鍵的形成。然后將產(chǎn)生的Fab’片段轉(zhuǎn)變?yōu)榱虼趸郊姿狨?TNB)衍生物。然后將 Fab' -TNB衍生物之一通過巰基乙胺的還原重新恢復(fù)成Fab'-硫醇，并與等摩爾量的另 一種Fab’ -TNB衍生物混合，以形成雙特異性抗體。在又一個實施方案中，直接從大腸桿菌 中回收的Fab' -SH片段可在體外被化學(xué)偶聯(lián)以形成雙特異性抗體。Smlaby等人，J.Exp. Med.(實驗醫(yī)學(xué)雜志)175 :217-225 (1992)。雙特異性抗體包括交聯(lián)或“異源綴合”的抗體。例如，異源綴合物中的一種抗體可 與親合素偶聯(lián)，另一種抗體與生物素偶聯(lián)。可使用任何適宜的交聯(lián)方法制備異源綴合抗體。 合適的交聯(lián)劑是本領(lǐng)域公知的，并且連同許多交聯(lián)技術(shù)一起公開于美國專利No. 4，676，980 中。還已使用亮氨酸拉鏈來生成雙特異性抗體。Kostelny等人，J. Immunol.(免疫學(xué) 雜志)148(5) :1547-1553(1992)。將來自Fos和Jun蛋白的亮氨酸拉鏈肽通過基因融合與 兩種不同抗體的Fab'-部分連接?？贵w同型二聚體在鉸鏈區(qū)還原而形成單體，然后重新 氧化而形成抗體異二聚體。這種方法也可用于生成抗體同型二聚體。由Hollinger等人， Proc. Natl. Acad. Sci. USA (美國科學(xué)院院刊)90 :6444-6448 (1993)描述的“雙價抗體”技 術(shù)提供了制備雙特異性抗體片段的替代機(jī)制。該片段包含通過接頭連接至輕鏈可變結(jié)構(gòu)域 (Vl)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(Vh)，所述接頭太短使得同一條鏈上的兩個結(jié)構(gòu)域之間不能配對。 因此，迫使一個片段上的Vh和\結(jié)構(gòu)域與另一個片段上的互補(bǔ)的\和Vh結(jié)構(gòu)域配對，由此 形成兩個抗原結(jié)合位點。還報道了通過使用單鏈Fv (sFv) 二聚體制備雙特異性抗體片段的 另一種策略。參見Gruber等人，J. Immunol.(免疫學(xué)雜志)152 :5368 (1994)。備選地，雙特 異性抗體可以是如Zapata等人ftOtein Eng (蛋白質(zhì)工程)· 8 (10) :1057-1062(1995)所述 產(chǎn)生的“線性”抗體。多種常規(guī)方法中的任何一種可用于化學(xué)偶聯(lián)(交聯(lián))兩條多肽鏈(例如抗體結(jié)構(gòu) 部分)。共價結(jié)合可通過直接縮合現(xiàn)有側(cè)鏈(例如在兩個半胱氨酸殘基之間形成二硫鍵)或 通過并入外部橋接分子而獲得。許多二價或多價試劑在偶聯(lián)多肽中是有用的。關(guān)于可用于 化學(xué)交聯(lián)抗體的一些方法的描述，參見例如Cao等人(1988)Bioconjugate Chemistry (生 物綴合化學(xué))9,635-644 ；Shalaby 等人(1992) J. Exp. Med.(實驗醫(yī)學(xué)雜志)175，217-225 ； Glennie 等人(1987) J. Immunol.(免疫學(xué)雜志)139，2367-2375 Jung 等人(1991) Eur. J. Immunol.(歐洲免疫學(xué)雜志)21，M31-2435 ；VanDijk 等人(1989) Int. J. Cancer (國際 癌癥雜志)44,738-743 ;Pierce ImmunoTechnology Catalog & Handbook (皮爾斯免疫技術(shù)目錄和手冊)(1991)E8-E39 ；Karpovsky 等人(1984) J. Exp. Med.(實驗醫(yī)學(xué)雜志)160， 1686 ；Liu 等人(1985)Proc. Natl. Acad. Sci. USA (美國科學(xué)院院干U )82,8648 ；Kranz 等人 (1981)，PNAS 78,5807 ；Perez 等人(1986)，J. Exp. Med.(實驗醫(yī)學(xué)雜志)163，166-178 ； Brennan (1986) Biotech (生物技術(shù)).4，4 ；和美國專利 Nos. 4，676，980，6，010，902 和 5，959，083。此外，重組技術(shù)可用于產(chǎn)生單鏈雙特異性抗體，例如，如下描述Whitlow等人 (1991) ,Methods :A Companion to Methods in Enzymology (方法酶學(xué)方法指南)，Vol. 2， 第 97 頁；Bird 等人(1988)，Science (科學(xué))242，423-426 ；美國專利 No. 4，946，778 ；Pack 等人(1993)，Bio/Technology(生物 / 技術(shù))11，1271-77 ；和 Sandhu(1992)，Crit. Rev. Biotech. 12，437。特別地，產(chǎn)生雙特異性單鏈抗體的方法在例如美國專利No. 5，892，020 ； Gruber 等人(1994) · J. Immunol.(免疫學(xué)雜志)152，5368-74 ；Mallender 等人(1994) · Biochemistry (生物化學(xué))33,10100-10108 ；Winter 等人(1991). Nature (自然)349, 293-299 ；Schmidt 等人(1996). International Journal of Cancer (國際癌癥雜志)65， 538-546 ；和 Thirion 等人(1996). Eur. J. of Cancer Prevention (歐洲癌癥預(yù)防雜志)5， 507-511中描述。制備雙特異性抗體的具體方法在本文實施例2中描述。重組牛產(chǎn)抗體為了重組生產(chǎn)抗體，可以分離編碼它的核酸，并將其插入可復(fù)制載體，用于進(jìn)一步 克隆(DNA擴(kuò)增)或表達(dá)。在另一個實施方案中，該抗體可通過同源重組產(chǎn)生，例如如美國 專利No. 5，204，244中所描述，其通過引用具體并入本文。可使用常規(guī)流程容易地分離編 碼單克隆抗體的DNA并測序(如，通過使用能夠與編碼抗體重鏈和輕鏈的基因特異性結(jié)合 的寡核苷酸探針)。可利用許多載體。載體成分一般包括但不限于下述各項中的一種或多 種信號序列，復(fù)制起點，一種或多種標(biāo)記基因，增強(qiáng)子元件，啟動子和轉(zhuǎn)錄終止序列，例如， 如1996年7月9日授權(quán)的美國專利No. 5，534，615中所描述，并且其通過引用具體并入本 文。用于克隆或表達(dá)編碼抗體鏈的DNA的適當(dāng)宿主細(xì)胞包括哺乳動物宿主細(xì)胞。對 哺乳動物宿主細(xì)胞已經(jīng)有很大興趣，并且脊椎動物細(xì)胞在培養(yǎng)(組織培養(yǎng))中的繁殖已經(jīng) 成為常規(guī)流程。有用哺乳動物宿主細(xì)胞系的實例有SV40轉(zhuǎn)化的猴腎CVl系(C0S-7，ATCC CRL 1651)、人胚腎系093細(xì)胞或用于在懸浮培養(yǎng)中生長而亞克隆的293細(xì)胞，Graham等 人，J. GenVirol. 36 :59(1977))、幼倉鼠腎細(xì)胞(BHK，ATCC CCL 10)、中國倉鼠卵巢細(xì)胞 /-DHFR(CH0, Urlaub 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA (美國科學(xué)院院刊)77 :4216 (1980))、 小鼠 Sertoli 細(xì)胞(TM4, Mather, Biol. Reprod. 23 :243-251 (1980))、猴腎細(xì)胞(CVl, ATCC CCL 70)、非洲綠猴腎細(xì)胞(VER0-76, ATCC CRL-1587)、人宮頸癌細(xì)胞 OffiLA，ATCC CCL 2)、 犬腎細(xì)胞(MDCK, ATCC CCL 34)、水牛鼠(buffalo rat)肝細(xì)胞(BRL 3A, ATCCCRL 1442)、 人肺細(xì)胞(Wl38,ATCC CCL 75)、人肝細(xì)胞(Hep G2，HB 8065)、小鼠乳房腫瘤(MMT 060562， ATCC CCL 51)、TRI 細(xì)胞(Mather 等人，AnnalsN. Y. Acad. Sci.(紐約科學(xué)院年報)383 44-68 (1982))、MRC 5 細(xì)胞、FS4 細(xì)胞、和人肝細(xì)胞瘤(hepatoma)系(Hep G2)。使用用于生成抗體的表達(dá)或克隆載體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，并在為了誘導(dǎo)啟動子、選擇 轉(zhuǎn)化子或擴(kuò)增編碼期望序列的基因而適當(dāng)改動的常規(guī)營養(yǎng)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。
哺乳動物宿主細(xì)胞可在多種培養(yǎng)基中培養(yǎng)?？缮藤彽呐囵B(yǎng)基諸如Ham氏 FlO(Sigma)、最小必需培養(yǎng)基(MEM, Sigma)、RPMI-1640 (Sigma)、和達(dá)爾伯克氏改良伊格 爾氏培養(yǎng)基(Dulbecco' s Modified Eagle' s Medium，DMEM，Sigma)適于培養(yǎng)宿主細(xì) 胞。另外，可使用下列文獻(xiàn)中記載的任何培養(yǎng)基作為宿主細(xì)胞的培養(yǎng)基Ham等人，Meth. Enz. 58 :44(1979)，Barnes 等人，Anal. Biochem.(生物化學(xué)年報)102 :255(1980)，美國 專利 Nos. 4，767，704 ；4，657，866 ；4，927，762 ；4，560，655 ；或 5，122，469 ；WO 90/03430 ； W087/00195 ；或美國再頒專利30，985。任何這些培養(yǎng)基可根據(jù)需要補(bǔ)充激素和/或其它生 長因子(諸如胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白或表皮生長因子)、鹽(諸如氯化鈉、鈣、鎂和磷酸鹽)、緩沖 液(諸如HEPES)、核苷酸(諸如腺苷和胸苷)、抗生素(諸如GENTAMYCIN )、痕量元素(定 義為通常以微摩爾范圍的終濃度存在的無機(jī)化合物)、和葡萄糖或等效能源。還可以適宜濃 度含有本領(lǐng)域技術(shù)人員知道的任何其它必需補(bǔ)充物。培養(yǎng)條件諸如溫度、pH等是為表達(dá)而 選擇的宿主細(xì)胞先前所用的，這對于普通技術(shù)人員是顯而易見的?？墒褂美缌u磷灰石色譜、凝膠電泳、透析和親和色譜來純化從細(xì)胞制備的抗體 組合物，親和色譜是一種優(yōu)選的純化技術(shù)。蛋白A作為親和配體的適合性取決于抗體中存 在的任何免疫球蛋白Fc結(jié)構(gòu)域的種類和同種型。蛋白A可用于純化基于人Yl、人γ 2、或 人Y 4重鏈的抗體(Lindmark等人，J. Immunol. Meth.(免疫學(xué)方法雜志)62 1-13 (1983)) 蛋白G推薦用于所有小鼠同種型和人γ 3((Guss等人，EMBO J.(歐洲分子生物學(xué)學(xué)會志)5 15671575(1986))。親和配體所附著的基質(zhì)最通常是瓊脂糖，但是可使用其它基質(zhì)。機(jī)械 穩(wěn)定的基質(zhì)諸如可控孔徑玻璃或聚(苯乙烯二乙烯基)苯能獲得比瓊脂糖更快的流速和 更短的加工時間。若抗體包含CH3結(jié)構(gòu)域，則可使用Bakerbond ABXn^Mg (J. T. Baker, Wiillipsburgj. J.)進(jìn)行純化。根據(jù)待回收的抗體，也可使用其它蛋白質(zhì)純化技術(shù)諸如離 子交換柱上的分級、乙醇沉淀、反相HPLC、硅石上的色譜、肝素SEPHAR0SE 上的色譜、陰離 子或陽離子交換樹脂(諸如聚天冬氨酸柱)上的色譜、色譜聚焦、SDS-PAGE、疏水相互作用 色譜和硫酸銨沉淀。在任何初步純化步驟之后，可將含有目的抗體和污染物的混合物進(jìn)行額外的純化 步驟以獲得期望水平的純度。人源化抗體具有一個或多個從非人來源引入的氨基酸殘基。這些非人氨基酸殘基 常常稱作“輸入”殘基，它們通常取自“輸入”可變結(jié)構(gòu)域。人源化可基本上依照Winter及其 同事的方法(Jones 等人，Nature (自然)，321 :522-525(1986) ；Riechmann 等人，Nature (自 然)，332 :323-327 (1988) ；Verhoeyen 等人，Science (科學(xué))，239 1534-1536 (1988))，通過 用嚙齒動物CDRs或CDR序列替代人抗體的相應(yīng)序列來進(jìn)行。因此，此類“人源化”抗體是 嵌合抗體(美國專利No. 4，816，567)，其中基本少于整個人可變結(jié)構(gòu)域被來自非人物種的 相應(yīng)序列替代。在實踐中，人源化抗體通常是如下的人抗體，其中一些CDR殘基和可能的一 些FR殘基被來自嚙齒動物抗體中類似位點的殘基替代。用于制備人源化抗體的人可變結(jié)構(gòu)域(包括輕鏈和重鏈)的選擇，對于降低抗原 性非常重要。根據(jù)所謂的“最佳適合(best-fit)"方法，用嚙齒動物抗體的可變結(jié)構(gòu)域序 列對已知人可變結(jié)構(gòu)域序列的整個文庫進(jìn)行篩選。然后，與嚙齒動物最接近的人序列被用 作人源化抗體的人FR(Sims等人，J. Immunol.(免疫學(xué)雜志)，151 2296 (1993)) 0另一種 方法使用由特定輕鏈或重鏈亞類的所有人抗體的共有序列衍生的特定構(gòu)架。同一構(gòu)架可用于數(shù)種不同的人源化抗體(Carter等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA (美國科學(xué)院院刊)，89 4285 (1992) ；Presta 等人，J. Immnol.，151 2623 (1993))。更為重要的是，抗體在人源化后保持對抗原的高親和力以及其它有利的生物學(xué)特 性。為了實現(xiàn)這一目的，依照一種優(yōu)選的方法，通過使用親本和人源化序列的三維模型分析 親本序列和各種概念性人源化產(chǎn)物的方法來制備人源化抗體。三維免疫球蛋白模型通常是 可獲得的，且為本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所熟悉。還可獲得計算機(jī)程序，其能圖解和顯示所選候 選免疫球蛋白序列的可能三維構(gòu)象結(jié)構(gòu)。檢查這些顯示圖像能夠分析殘基在候選免疫球蛋 白序列行使功能中的可能作用，即分析影響候選免疫球蛋白結(jié)合其抗原的能力的殘基。這 樣，可從受體和輸入序列中選出FR殘基并進(jìn)行組合，從而獲得所需抗體特征，如對一種或 多種靶抗原的增加的親和力。通常，CDR殘基直接且最實質(zhì)地參與對抗原結(jié)合的影響。備選地，現(xiàn)在有可能生成轉(zhuǎn)基因動物(例如小鼠)，其在缺乏內(nèi)源免疫球蛋白生成 的情況下能夠由免疫而生成完全的人抗體譜(repertoire)。例如，已經(jīng)描述了嵌合和種系 突變小鼠中抗體重鏈連接區(qū)(Jh)基因的純合缺失，其能導(dǎo)致內(nèi)源抗體生成的完全抑制。將 人種系免疫球蛋白基因陣列轉(zhuǎn)移到此類種系突變小鼠中將導(dǎo)致在抗原激發(fā)后生成人抗體。 參見如，Jakobovits 等人，Proc. Natl. Acad. ki. USA(美國科學(xué)院院刊)，90 :2551(1993)； Jakobovits 等人，Nature (自然)，362 :255-258 (1993) ；Bruggermann 等人，Year in Immuno.，7 :33(1993)；和 Duchosal 等人 Nature (自然)355 :258 (1992)。人抗體也可衍生 自噬菌體展示文庫(Hoogenboom等人，J. Mol. Biol.(分子生物學(xué)雜志)，227 :381 (1991)； Marks 等人，J. Mol. Biol.(分子生物學(xué)雜志)，222 :581-597 (1991) ；Vaughan 等人 Nature Biotech(自然生物技術(shù))14 :309(1996)) ο治療用途本發(fā)明的抗體在治療與IL-17A和/或IL-17F的產(chǎn)生有關(guān)的炎性和免疫相關(guān)疾病 中是有用的。如之前所討論的，考慮到IL-17A和IL-17F兩者的促炎性質(zhì)，能夠高效阻斷 IL-17A和IL-17F兩者的交叉反應(yīng)性和雙特異性抗體提供了炎性和免疫相關(guān)疾病(包括自 身免疫性疾病)的治療中的新的治療機(jī)遇。本發(fā)明的交叉反應(yīng)性和雙特異性抗體靶向的示例性炎性和免疫相關(guān)疾病可以是 但不是必需是免疫或T細(xì)胞介導(dǎo)的，包括系統(tǒng)性紅斑狼瘡，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，幼年型慢性關(guān) 節(jié)炎，脊椎關(guān)節(jié)病，系統(tǒng)性硬化癥(硬皮病)，特發(fā)性炎性肌病(皮肌炎、多肌炎)，斯耶格倫 綜合征(Sjogren's syndrome)，系統(tǒng)性血管炎，結(jié)節(jié)病，自身免疫性溶血性貧血(免疫性全 血細(xì)胞減少癥、陣發(fā)性夜間血紅蛋白尿)，自身免疫性血小板減少癥(特發(fā)性血小板減少性 紫癜、免疫介導(dǎo)的血小板減少癥)，甲狀腺炎(格雷夫斯病(Graye’ s disease)、橋本甲狀 腺炎、幼年型淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎、萎縮性甲狀腺炎)，糖尿病，免疫介導(dǎo)的腎病(腎小球腎 炎、腎小管間質(zhì)性腎炎)，中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)的脫髓鞘疾病諸如多發(fā)性硬化、特發(fā)性脫髓 鞘性多神經(jīng)病或急性熱病性多神經(jīng)炎(Guillain-Barre syndrome)、和慢性炎性脫髓鞘多 神經(jīng)病，肝膽疾病諸如傳染性肝炎(甲型、乙型、丙型、丁型、戊型和其它非嗜肝病毒肝炎)、 自身免疫性慢性活動性肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬變、肉芽腫性肝炎、和硬化性膽管炎，炎性 腸病(IBD)包括潰瘍性結(jié)腸炎、局限性回腸炎(Crohn' s disease)、麩質(zhì)敏感性腸病、和惠 普爾氏病(Whipple' s disease)，自身免疫性或免疫介導(dǎo)的皮膚疾病包括大皰性皮膚疾 病、多形紅斑和接觸性皮炎、銀屑病，變應(yīng)性疾病諸如哮喘、變應(yīng)性鼻炎、特應(yīng)性皮炎、食物
37過敏和蕁麻疹，肺的免疫學(xué)疾病諸如嗜酸細(xì)胞性肺炎、特發(fā)性肺纖維化和過敏性肺炎，移植 相關(guān)疾病包括移植物排斥和移植物抗宿主疾病，感染性疾病包括病毒疾病如AIDS (HIV感 染)、甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎和戊型肝炎、皰疹等、細(xì)菌感染、真菌感染、原 生動物感染和寄生蟲感染。在具體實施方案中，抗體用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、炎性腸病(IBD)包括潰 瘍性結(jié)腸炎和局限性回腸炎、哮喘或其它變應(yīng)性或自身免疫性疾病。劑量和制劑可以與優(yōu)良醫(yī)學(xué)實踐一致的方式配制、劑量給藥和施用本發(fā)明的抗體或抗體片段 組合物。在此內(nèi)容中考慮的因素包括所治療的具體病癥、所治療的具體哺乳動物、患者個體 的臨床狀況、病癥的起因、遞送藥劑的部位、施藥的方法、施藥的日程安排、和醫(yī)學(xué)從業(yè)人員 知道的其它因素。確定待施用的抗體或抗體片段的“治療有效量”需要考慮以上因素，這是 預(yù)防、緩解或治療靶標(biāo)疾病(諸如上文列舉的疾病和病癥中的任何一種)所需的最小量?？?體或抗體片段不是必需而是任選地與目前用于預(yù)防或治療靶標(biāo)疾病的一種或多種藥劑一 起配制。此類其它藥劑的有效量取決于制劑中存在的本發(fā)明抗體或抗體片段的量、病癥或 治療的類型、和上文討論的其它因素。這些通常以與上文所用相同劑量和施用途徑使用，或 是迄今所用劑量的大約1_99%。一般而言，對靶標(biāo)疾病的治療涉及減輕與該靶標(biāo)疾病相關(guān)的一種或多種癥狀或醫(yī) 學(xué)問題，例如，如果靶標(biāo)疾病是炎性疾病或病癥，該治療可減少和/或減輕與炎癥相關(guān)的一 種或多種癥狀。在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的情況中，癥狀包括(非限制性地)肌肉和關(guān)節(jié)疼痛、強(qiáng)直、 腫脹、關(guān)節(jié)痛或壓痛，其中一種或多種可通過施用本發(fā)明的抗體減輕。此外，本發(fā)明的交 叉反應(yīng)性和雙特異性抗-IL-17A/F抗體可預(yù)防、減輕或延緩靶標(biāo)疾病的體征(physical manufestations)。例如，如果靶標(biāo)疾病是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，治療可預(yù)防、減輕、減少或延緩 結(jié)構(gòu)損傷(如該疾病特征性的骨質(zhì)侵蝕和關(guān)節(jié)損傷)的發(fā)展。對于這種適應(yīng)癥，本發(fā)明的 交叉反應(yīng)性和雙特異性抗體可與臨床實踐中使用的其它治療形式(如單獨或與甲氨蝶呤 聯(lián)合施用Rituxan (利妥昔單抗，rituximab))聯(lián)用以治療患有中度-至-重度的活動性 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的患者。其它可與本發(fā)明的抗體聯(lián)合的治療選擇非限制性地包括非 甾體抗炎藥(NSAIDs)、皮質(zhì)激素、TNF拮抗劑療法如依那西普(etanerc印t)、英夫利昔單抗 (infliximab)、或阿達(dá)木單抗(adalimumab)。如果靶標(biāo)疾病是炎性腸病(IBD)，包括潰瘍性結(jié)腸炎和局限性回腸炎，治療可預(yù) 防、減輕、減少或延緩炎癥的發(fā)展，和/或一種或多種伴隨癥狀包括腹痛、腹瀉或便秘、疲倦 和發(fā)熱。通過本發(fā)明的交叉反應(yīng)性和雙特異性抗體的治療可聯(lián)合處理IBD的傳統(tǒng)治療包括 氨基水楊酸鹽、皮質(zhì)激素、抗生素和其它生物或治療選擇如TNF拮抗劑療法如依那西普、英 夫利昔單抗、或阿達(dá)木單抗。治療制劑可通過將具有期望純度的活性成分與任選的生理學(xué)上可接受的載體、賦 形劑或穩(wěn)定劑(Remington ‘ s Pharmaceutical Sciences (第 20 版)，編輯 A. Gennaro， 2000，Lippincott, Williams & ffilkins, Philadelphia, Pa.)使用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方 法混合而制備?？山邮艿妮d體包括鹽水或緩沖劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其它有機(jī)酸；抗 氧化劑，包括抗壞血酸；低分子量(少于約10個殘基)多肽；蛋白質(zhì)，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，諸如甘氨酸、谷氨酰胺、天 冬酰胺、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合 劑，諸如EDTA ；糖醇，諸如甘露醇、或山梨醇；成鹽反荷離子，諸如鈉；和/或非離子表面活 性劑，諸如 TTOEN 、PLURONICS 或 PEG。任選地，但優(yōu)選地，制劑含有藥學(xué)上可接受的鹽，優(yōu)選為氯化鈉，且優(yōu)選大約為生 理濃度。任選地，本發(fā)明的制劑可包含藥學(xué)上可接受的防腐劑。在一些實施方案中，防腐劑 濃度范圍在0. 1至2.0%，典型地以ν/ν計。適當(dāng)?shù)姆栏瘎┌ㄋ帉W(xué)領(lǐng)域中已知的那些。優(yōu) 選的防腐劑是苯甲醇、酚、間甲酚、對羥基苯甲酸甲酯和對羥基苯甲酸丙酯。任選地，本發(fā)明 的制劑可包含濃度為0. 005至0. 02%的藥學(xué)上可接受的表面活性劑。本文中的制劑還可含有超過一種所治療的具體適應(yīng)癥所必需的活性化合物，優(yōu)選 具有互補(bǔ)活性且彼此沒有不利影響的那些。合適的是，此類分子以對于預(yù)定目的有效的量 組合而存在?；钚猿煞诌€可包載于例如通過凝聚技術(shù)或通過界面聚合制備的微膠囊中(例如 分別是羥甲基纖維素或明膠微膠囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊)、在膠狀藥物遞送系統(tǒng) 中(例如脂質(zhì)體、白蛋白微球體、微乳劑、納米顆粒和納米膠囊)、或在粗滴乳狀液中。此類 技術(shù)披露于例如Remington' s Pharmaceutical Sciences，見上文。可制備持續(xù)釋放制劑。持續(xù)釋放制劑的合適例子包括含有抗體的固體疏水性聚合 物的半透性基質(zhì)，該基質(zhì)是成形制品的形式，例如薄膜或微膠囊。持續(xù)釋放基質(zhì)的例子包括 聚酯、水凝膠(例如聚(2-羥乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯(美國專利 No. 3，773，919、L-谷氨酸與L-谷氨酸、乙酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、可 降解的乳酸-乙醇酸共聚物諸如LUPRON DEPOT (由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林 構(gòu)成的可注射微球體)及聚-D-(-)-3-羥基丁酸。雖然諸如乙烯-乙酸乙烯酯和乳酸-乙 醇酸等聚合物能夠釋放分子達(dá)100天以上，但是某些水凝膠釋放蛋白質(zhì)的時間較短。當(dāng)封 裝的抗體在體內(nèi)長時間維持時，它們可能由于暴露于37°C的潮濕環(huán)境而變性或聚集，導(dǎo)致 生物學(xué)活性損失和可能的免疫原性改變。可以根據(jù)相關(guān)機(jī)制來設(shè)計合理的穩(wěn)定化策略。例 如，如果發(fā)現(xiàn)聚集機(jī)制是經(jīng)由硫-二硫化物互換的分子間S-S鍵形成，那么可通過修飾巰基 殘基、由酸性溶液凍干、控制濕度、采用適宜添加劑和開發(fā)特定聚合物基質(zhì)組合物來實現(xiàn)穩(wěn) 定。本文描述的抗體和抗體片段依照已知的方法施用給人類受試者，諸如，作為推注 或通過一段時間的連續(xù)輸注的靜脈內(nèi)施用，通過肌肉內(nèi)的、腹膜內(nèi)的、腦脊內(nèi)的、皮下的、關(guān) 節(jié)內(nèi)的、滑膜內(nèi)的、鞘內(nèi)的、經(jīng)口的、局部的、或吸入途徑。如果本文的抗體的拮抗作用與廣 泛的副作用或毒性相關(guān)，局部施用可以是特別期望的。離體(ex vivo)策略也可在治療性 應(yīng)用中使用。離體策略涉及通過編碼抗體或抗體片段的多核苷酸轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導(dǎo)從受試者獲得 的細(xì)胞。該轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞然后回輸至受試者。該細(xì)胞可以是許多類型，包括但不限于 造血細(xì)胞(例如骨髓細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、樹突細(xì)胞、T細(xì)胞或B細(xì)胞)、成纖維細(xì)胞、 上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞或肌細(xì)胞。制品和試劑盒本發(fā)明另一個實施方案是制品，其含有在本發(fā)明的抗體所靶向的疾病或病癥的治 療中有用的材料。該制品包括容器和在容器上或與容器一起的標(biāo)簽或包裝說明書(packageinsert) 0適合的容器包括，例如，瓶子、玻璃小瓶、注射器等。所述容器可以由各種材料諸 如玻璃或塑料制成。容器裝有對于所述病癥的治療有效的組合物，并且可以具有無菌的取 用口(例如，所述容器可以是具有可被皮下注射針刺穿的塞子的靜脈溶液袋或玻璃小瓶)。 組合物中至少一種活性試劑是本發(fā)明的交叉反應(yīng)性或雙特異性抗體或抗體片段。標(biāo)簽或包 裝說明書標(biāo)明該組合物是用于治療特定的病癥。標(biāo)簽和包裝說明書還包括向患者施用該抗 體組合物的說明書。也考慮了包含本文描述的聯(lián)合療法的制品和試劑盒。包裝說明書是指常規(guī)地在治療產(chǎn)品的商業(yè)化包裝中包含的說明書，其含有關(guān)于適 應(yīng)癥、用法、劑量、施用、禁忌癥和/或關(guān)于使用此類治療產(chǎn)品的警告的信息。在一個實施方 案中，包裝說明書標(biāo)明該組合物是用于治療炎性或免疫相關(guān)病癥，諸如例如上文所列舉的 病癥中的任何一種，包括多種形式的關(guān)節(jié)炎，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸病(IBD)，其它自 身免疫性疾病，或變應(yīng)性病癥，如哮喘。另外，制品可以進(jìn)一步包括第二容器，其中裝有制藥學(xué)可接受的緩沖液，例如抑菌 性注射用水(BWFI)、磷酸鹽緩沖鹽水、林格氏溶液和右旋糖溶液。它可以進(jìn)一步包括從商業(yè) 和用戶立場出發(fā)的其它可取的材料，包括其它的緩沖液、稀釋劑、濾器、針和注射器。認(rèn)為前文的書面描述足以使本領(lǐng)域技術(shù)人員實施本發(fā)明。提供下述實施例僅為了 說明用途，且無意以任何方式限制本發(fā)明的范圍。事實上，根據(jù)前文描述，對本文顯示和描 述的發(fā)明以外的多種修改對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是明顯的并落入所附權(quán)利要求的范圍。除非另有說明，實施例中提及的商業(yè)上可獲得的試劑根據(jù)廠家的說明書使用。在 以下實施例中及在整個說明書中以ATCC登記號鑒定的那些細(xì)胞的來源是美國典型培養(yǎng)物 保藏中心(American Type Culture Collection，Manassas，VA)。除非另有說明，本發(fā)明 使用重組DNA技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)程序，如上文描述的和下述教科書中的那些=Sambrook等人，見 上文；Ausubel 等人，Current Protocols in Molecular Biology (現(xiàn)代分子生物學(xué)實驗方 案)(Green Publishing Associates and Wiley Interscience, N. Y. , 1989) ；Innis 等人， PCR Protocols :A Guide to Methods and Applications(PCR實驗方案方法和應(yīng)用指南) (Academic Press, Inc. :N. Y. , 1990) ；Harlow 等人,Antibodies :A Laboratory Manual (抗 體實驗室指南)(Cold Spring Harbor Press :Cold Spring Harbor, 1988) ；Gait, OliRonucleotide Synthesis (寡核苷酸合成)(IRL Press :0xford, 1984) ；Freshney, Animal Cell Culture (動物細(xì)胞培養(yǎng))，1987 ；Coligan 等人，Current Protocols in ImmunoloRY (現(xiàn)代酶學(xué)實驗方案)，1991。
實施例提供以下實施例僅是為了說明的目的，絕非意圖限制本發(fā)明的范圍。在本說明書中引用的所有專利和參考文獻(xiàn)全文通過弓I用并入本文。實施例1抗-IL-17A/F交叉反應(yīng)性抗體材料和方法文庫分選和篩選以鑒定抗-IL-17A/F抗體人IL_17A(R&D Systems, cat#317-IL_050/CF)禾口 IL_17F(R&D Systems, cat#1335-IL-025/CF)用作文庫分選的抗原。對于常規(guī)分選，噬菌體文庫針對單獨的IL-17A或IL-17F分選四輪。對于備選的分選，噬菌體文庫針對IL-17A和IL-17F可互換地 在相互間隔的輪次中分選。Nunc 96孔Maxisorp免疫板在4°C用靶標(biāo)抗原(10 μ g/ml)包 被過夜，并通過噬菌體封閉緩沖液PBST(磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)和(w/v)牛血清白蛋白 (BSA)和0. 05% (v/v) tween-20)在室溫封閉1小時?？贵w噬菌體文庫VH(參見如Lee等 人，J. Immunol. Meth.(免疫學(xué)方法雜志)284 119-132，2004)和 VH/VL (參見 Liang 等人， JMB. 366 =815-829,2007)單獨添加至抗原板并在室溫下孵育過夜。下一天抗原包被的板用 PBT (含有0. 05% Tween-20的PBS)洗滌十次，結(jié)合的噬菌體通過50mM HCl和500mM NaCl 洗脫30分鐘并通過等體積的IM Tris堿(pH7. 5)中和?；厥盏氖删w在大腸桿菌(E. coli) XL-I Blue細(xì)胞中擴(kuò)增。在隨后的選擇輪次中，抗體噬菌體與抗原包被的板的孵育降至2-3 小時，板洗滌的嚴(yán)格性逐漸升高。4輪淘洗之后，觀察到顯著的富集。從VH和VH/VL每個文庫分選中挑選96個克隆 以確定它們是否特異性結(jié)合至人IL-17A和IL-17F兩者。這些克隆的可變區(qū)通過PCR測序 以鑒定獨特序列克隆。噬菌體抗體的親和力使用樣點競爭ELISA (spot competition ELISA)評級。使用 競爭性噬菌體結(jié)合ELISA (competitive phage-binding ELISA)進(jìn)一步確定噬菌體抗體的 IC50值。選擇具有最高IC50的結(jié)合人IL-17A和IL-17F兩者的獨特噬菌體抗體并重新格 式化(reformatted)成全長IgG用于在體外細(xì)胞測定中評價。通過將單個克隆的\和Vh區(qū)分別克隆至LPG3和LPG4載體，在哺乳動物CHO細(xì)胞 中瞬時表達(dá)，并通過蛋白A柱純化將感興趣的克隆重新格式化成IgG。確定交叉反應(yīng)性抗體的IC50/90在第一天將人新生兒包皮成纖維細(xì)胞(Invitrogen)以2x104細(xì)胞/150 μ 1培養(yǎng) 基/孔接種于96-孔板。在第二天培養(yǎng)基替換為含有細(xì)胞因子/抗體的培養(yǎng)基(150 μ 1)。 重組人IL-17A以5ng/ml使用。重組人IL-17F以50ng/ml使用。重組人IL-17A/F異二聚 體自行(in-house)純化并以25ng/ml使用。M小時后收獲上清并進(jìn)行G-CSF ELISA以測 量G-CSF的誘導(dǎo)。數(shù)據(jù)在PRISM中作圖并且使用同樣的軟件計算IC50/90值。用于衍牛自11庫的克降的親禾口力改?。〉臉?gòu)津彳本噬菌粒pW0703 (衍生自噬菌粒pV03501b (Lee等人，J. Mol. Biol (分子生物學(xué)雜 志)340，1073-1093 (2004))，在所有⑶R-L3位點含有終止密碼子(TAA)并在M13噬菌體表 面上展示單價Fab)用作文庫模板，用于從Vh文庫移植感興趣克隆的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(Vh) 以用于親和力成熟。硬性隨機(jī)化策略和軟性隨機(jī)化策略兩者均用于親和力成熟。對于硬 性隨機(jī)化，具有三個輕鏈CDR的選定位點的一個輕鏈文庫使用設(shè)計用于模擬天然人抗體的 氨基酸進(jìn)行隨機(jī)化，設(shè)計的DNA簡并性在Lee等人(J. Mol. Biol (分子生物學(xué)雜志)340， 1073-1093(2004))中描述。對于軟性隨機(jī)化，位點為CDR-L3的91-94和96，CDR-Hl的 28-31和34-35，CDR-H2的50，52和53-58，CDR-H3的95-99和100A處的殘基被革巴向；選定 兩種不同的CDR環(huán)的組合L3/H1/H2和L3/H3進(jìn)行隨機(jī)化。為獲得軟性隨機(jī)化的條件(其 在選定的位點引入大約50%的突變率)，通過支持野生型核苷酸的堿基的70-10-10-10混 合物合成突變 DNA (GalIop 等人，Journal of Medicinal Chemistry (醫(yī)學(xué)化學(xué)雜志)37 1233-1251(1994))。產(chǎn)生親和力改善的噬菌體分選策略
對于親和力改善選擇，對噬菌體文庫進(jìn)行第一輪板分選，然后進(jìn)行四或五輪溶液 分選。該文庫分別獨自地針對人IL-17A和IL-17F進(jìn)行分選。對于第一輪板分選，該文庫 用在1 % BSA和0. 05% Tween 20中大約30. D. /ml的噬菌體輸入針對靶標(biāo)包被板(NUNC Maxisorp plate)在室溫下分選2小時。第一輪分選之后，進(jìn)行溶液分選以增加選擇的嚴(yán)格 性。對于溶液分選，由第一輪板分選繁殖的10. D. /ml的噬菌體與IOOnM生物素化的靶標(biāo)蛋 白(濃度基于親本克隆噬菌體的IC50值)在含有Superblock (Pierce Biotechnology) 和0. 05% Tween20的100 μ 1緩沖液中室溫下一起孵育30分鐘。混合物進(jìn)一步通過 Superblock稀釋10Χ，施用100 μ 1/孔至neutravidin-包被的孔中(5 μ g/ml)在室溫下溫 和振蕩15分鐘以便生物素化的靶標(biāo)結(jié)合噬菌體。該孔通過PBS-0. 05% Tween 20洗滌十 次。為確定背景結(jié)合，含有具有未生物素化的靶標(biāo)的噬菌體的對照孔在neutravidin-包被 的板上捕獲。結(jié)合的噬菌體通過0. IN HCl洗脫20分鐘，通過1/10體積的IM Tris pHll 中和、滴定并繁殖以用于下一輪。此后，通過增加的選擇嚴(yán)格性一起進(jìn)行另外五輪的溶液分 選。其中第一輪是結(jié)合-速率(on-rate)選擇，其通過將生物素化靶標(biāo)蛋白的濃度從IOnM 降低至InM進(jìn)行，其中第二輪是解離-速率(off-rate)選擇，其通過添加過量的非生物素 化靶標(biāo)蛋白(多100倍)以將較弱的結(jié)合物競爭下來，均在室溫下進(jìn)行。另外，降低噬菌體 的輸入(0. 1 0. 50. D/ml)以降低背景噬菌體的結(jié)合。高通量親和力篩詵ELISA (單樣點競爭)從第五或第六輪篩選中挑選菌落。菌落在37°C于含50 μ g/ml羧芐青霉素和1E10/ ml K07的150 μ 1/孔的2ΥΤ培養(yǎng)基在96-孔板(Falcon)中生長過夜。從相同的板中，挑 選XL-I感染的親本噬菌體的菌落作為對照。96-孔Nunc Maxisorp板通過100 μ 1/孔的人 IL-17A和IL-HFOyg/ml)各自于PBS在4°C下包被過夜或在室溫下包被2小時。該板通 過65 μ 1的1 % BSA封閉30分鐘并通過40 μ 1的1 % Tween 20封閉另外30分鐘。噬菌體上清在100 μ 1總體積中在含有或不含有IOnM靶標(biāo)蛋白的ELISA(酶聯(lián)免 疫吸附測定)緩沖液(含0. 5%BSA，0.05%Tween20的PBS)中以1 10稀釋，在室溫下于F 板(NUNC)中孵育至少1小時。75μ 1的含有或不含有靶標(biāo)蛋白的混合物并排轉(zhuǎn)移至靶標(biāo)蛋 白包被的板上。該板溫和振蕩15分鐘以允許將未結(jié)合的噬菌體捕獲至靶標(biāo)蛋白包被的板 上。該板通過PBS-0.05%Tween 20洗滌至少五次。結(jié)合通過將辣根過氧化物酶(HRP)-綴 合的抗-M13抗體加入至ELISA緩沖液(1 5000)中并于室溫孵育30分鐘進(jìn)行定量。該 板通過PBS-0. 05% Tween 20洗滌至少五次。此后，將100 μ 1/孔的1 1比率的3，3'， 5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)過氧化物酶底物和過氧化物酶溶液B(H2O2) (Kirkegaard-Perry Laboratories (Gaithersburg, MD))加入至孔中并在室溫下孵育5分鐘。通過添加100 μ 1 IM磷酸(H3PO4)至每孔并允許在室溫下孵育5分鐘終止反應(yīng)。使用標(biāo)準(zhǔn)ELISA板讀數(shù)器在 450nm確定每孔中黃色的OD (吸光度)。通過下述方程計算OD的降低(％ )。OD450nm降低(％ )=[(含競爭物的孔的OD45tlJ/(無競爭物的孔的0D45QJ]*100與親本噬菌體的孔的OD45tlnm降低(％ ) (100% )相比，挑選對人和鼠靶標(biāo)兩者具有 低于50%的OD45tlnm降低(％)的克隆進(jìn)行序列分析。對噬菌體制備物選擇獨特克隆以通過 與親本克隆的比較來確定對于人IL-17A和IL-17F兩者的結(jié)合親和力(噬菌體IC50)。然 后將親和力最改善的克隆重新格式化成人IgGl用于產(chǎn)生抗體和進(jìn)一步的BIAcore結(jié)合動 力學(xué)分析以及其它體外或體內(nèi)測定。
表征抗IL-17A/F 抗體(Biacore)抗IL_17A/FIgG的結(jié)合親和力通過表面等離子共振(Surface Plasmon Resonance, SRP))使用BIAcoreTM-3000儀器測量?？笽L-17A/F人IgG通過包被于CM5生物傳 感器芯片上的小鼠抗人Fc抗體(GE Healthcare, cat#BR-1008-39)捕獲以獲得大約200應(yīng) 答單位(response units，RU)。對于動力學(xué)測量，人 IL-17A (R&D Systems, cat#317-IL-050/ CF)，IL-17F(R&D, cat#1335-IL_025/CF)，IL-17A/F(GNE)，恒河猴 IL-17F(GNE)，食蟹猴 IL-17A(PUR17200)的兩倍連續(xù)稀釋液(0. 98nM至125nM)在25°C以30 μ 1/min的流速注入 PBT緩沖液(含0. 05% Tween 20的PBS)中。使用簡單一對一 Langmuir結(jié)合模型(BIAcore 評價軟件 3. 2 版(BIAcore Evaluation Softwareversion 3.2))計算結(jié)合速率(k。n)和解 離速率(k。ff)。平衡解離常數(shù)(Kd)以比率k。ff/k。n計算。MM如前面所討論的，IL-17A和IL-17F是Thl7T細(xì)胞亞群分泌的主要促炎性細(xì)胞因 子。它們靶向幾乎體內(nèi)的所有細(xì)胞類型并誘導(dǎo)組織炎癥和組織損傷。本實施例中描述的工 作的目的是產(chǎn)生可高效并具有交叉物種反應(yīng)性地阻斷IL-17A和F兩者的交叉反應(yīng)性抗體。交叉反應(yīng)性抗-IL-17A/F克隆的輕鏈可變區(qū)序列顯示于圖5A(SEQ ID NOs :5-14) 中，包括⑶RL1、⑶RL2和⑶RL3序列。交叉反應(yīng)性抗-IL-17A/F克隆的重鏈可變區(qū)序列顯 示于圖5B(SEQ ID NOs :51-60)中。在交叉反應(yīng)性克隆中鑒定的YWM1. 47、YW278. 15和 YW279. 1對同型二聚體和異二聚體兩種形式的IL-17A和IL-17F兩者均顯示特別強(qiáng)的結(jié)合。 值得注意的是交叉反應(yīng)性抗體YW278. 15和279. 1顯示幾乎對IL-17A和F相等的阻斷。這 些之中，選定交叉反應(yīng)性抗體YW278. 15進(jìn)行親和力成熟。進(jìn)一步的交叉反應(yīng)性抗-17A/F抗體的輕鏈可變區(qū)序列，包括YW278. 15和YW279. 1 的親和力成熟變體，顯示于圖5C(SEQ ID Nos :63-68)中。進(jìn)一步交叉反應(yīng)性抗-A/F抗體的重鏈可變區(qū)序列，包括YW278. 15和YW279. 1的 親和力成熟變體顯示于圖5D(SEQ ID Nos :69-74)中。圖6顯示IL-17A/F交叉反應(yīng)性抗體YW278. 15 (SEQ ID NO 9)及其親和力成熟變 體，YW278. 15. 18 (SEQ ID NO 15) ,YW278. 15. 2 (SEQ ID NO 16)禾口 YW278. 15. 3 (SEQ ID NO 17)的輕鏈序列的比對。⑶RL1、⑶RL2和⑶RL3序列加框標(biāo)示。圖7顯示IL-17A/F交叉反應(yīng)性抗體YW278. 15(SEQ ID N0:92)及其親和力成 熟變體，YW278. 15. 18 (SEQ ID NO 93) ,278. 15. 2 (SEQ ID NO 94)、YW278. 15. 2. D54E (SEQ ID NO 95) , YW278. 15. 3 (SEQ ID NO :92)、YW278. 15. 18C55A (SEQ ID NO 18)禾口 YW278. 15. 18C55S(SEQ ID NO :19)的重鏈序列的比對。CDRL1、CDRL2 和 CDRL3 序列加框標(biāo) 示。YW278. 15. 18C55A和YW278. 15. 18C55S具有與YW278. 15. 18相同的輕鏈，且在抗體重鏈 中引入C55A和C55S突變以有助于制備。圖8A顯示通過三種親和力成熟的IL-17A/F交叉反應(yīng)性抗體，YW278. 15.2、 YW278. 15. 18和YW278. 15. 3進(jìn)行的BIAcore 免疫測定的結(jié)果。對重組人 IL-17A (rhIL-17A)、重組人 IL-17F (rhIL-17F)、食蟹猴 IL-17F 和人 IL-17A/F 在溶液中的結(jié) 合親和力(Kd(M))顯示于最后一欄。圖8B顯示通過親和力成熟的IL-17A/F交叉反應(yīng)性抗體，YW278. 15. 2. D54E ； YW278. 15. 3 ；YW278. 15. 9 ；YW279. 1. 20 ；YW279. 1. 21 ；YW279. 1. 22 進(jìn)行的 BIAcore 免疫測
43定的結(jié)果。對重組人IL-17A(rhIL-17A)、重組人IL-17F (rhIL_17F)、食蟹猴IL-17A，食蟹猴 IL-17F和人IL-17A/F在溶液中的結(jié)合親和力(Kd(M))顯示于最后一欄。圖9顯示通過兩種進(jìn)一步親和力成熟的IL-17A/F交叉反應(yīng)性抗體，YW278. 15. 18. C55A和YW278. 15. 18. C55S,與YW278. 15. 18對比的BIAcore 免疫測定的結(jié)果。對重組人 IL-17A (rhIL-17A)、重組人 IL-17F (rhIL-17F)、食蟹猴 IL-17F 和人 IL-17A/F 在溶液中的結(jié) 合親和力(Kd(M))顯示于最后一欄。圖10顯示通過三種親和力成熟的IL-17A/F交叉反應(yīng)性抗體進(jìn)行的BIAcore 免 疫測定的結(jié)果，使用恒河猴IL-17A作為靶標(biāo)。對恒河猴IL-17A的結(jié)合親和力顯示于最后一欄。圖13A和1 顯示對一組交叉反應(yīng)性抗體通過重復(fù)測定確定的IC50和IC90數(shù)據(jù)。 也顯示了抗體對靶標(biāo)細(xì)胞因子的摩爾比。結(jié)果顯示通過對IL-17A和IL-17F兩者的CDR隨機(jī)化，YW278. 15和279. 1的親和 力得以改善。在測試的交叉反應(yīng)性抗體中，YW278. 15. 2和YW278. 15. 18顯示在親和力和細(xì) 胞阻斷活性方面最佳的改善。YW278. 15. 2和YW278. 15. 18兩者對IL-17A和IL-17F均具有 相似的活性。實施例2抗-IL-17A/F雙特異件抗體材料和方法f庫分詵和 帝詵以鑒定杭-IL-17A/F杭體人IL_17A(R&D Systems, cat#317-IL_050/CF)禾口 IL-17F (R&DSystems， cat#1335-IL-025/CF)用作文庫分選的抗原。對于常規(guī)分選，噬菌體文庫針對單獨的 IL-17A或IL-17F分選四輪。對于備選的分選，噬菌體文庫針對IL-17A和IL-17F可互換地 在相互間隔的輪次中分選。Nunc 96孔Maxisorp免疫板在4°C用靶標(biāo)抗原(10 μ g/ml)包 被過夜，并通過噬菌體封閉緩沖液PBST(磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)和(w/v)牛血清白蛋白 (BSA)和0. 05% (v/v) tween-20)在室溫封閉1小時。抗體噬菌體文庫VH(參見如Lee等 人，J. Immunol. Meth.(免疫學(xué)方法雜志)284 119-132，2004)和 VH/VL (參見 Liang 等人， JMB. 366 =815-829,2007)單獨添加至抗原板并在室溫下孵育過夜。下一天抗原包被的板用 PBT (含有0. 05% Tween-20的PBS)洗滌十次，結(jié)合的噬菌體通過50mM HCl和500mM NaCl 洗脫30分鐘并通過等體積的IM Tris堿(pH7. 5)中和?；厥盏氖删w在大腸桿菌(E. coli) XL-I Blue細(xì)胞中擴(kuò)增。在隨后的選擇輪次中，抗體噬菌體與抗原包被的板的孵育降至2-3 小時，板洗滌的嚴(yán)格性逐漸升高。4輪淘洗之后，觀察到顯著的富集。從VH和VH/VL每個文庫分選中挑選96個克隆 以確定它們是否特異性結(jié)合至人IL-17A和IL-17F兩者。這些克隆的可變區(qū)通過PCR測序 以鑒定獨特序列克隆。噬菌體抗體的親和力使用樣點競爭ELISA評級。噬菌體上清在100 μ 1總體積中在 含有或不含有50ηΜ靶標(biāo)蛋白的ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)緩沖液(含0. 5% BSA，0. 05% Tween20的PBS)中以1 5稀釋，在室溫下于F板(NUNC)中孵育至少1小時。75 μ 1的 含有或不含有靶標(biāo)蛋白的混合物并排轉(zhuǎn)移至靶標(biāo)蛋白包被的板(lug/ml IL-17A或IL-17F 包被過夜)上。該板溫和振蕩15分鐘以允許將未結(jié)合的噬菌體捕獲至靶標(biāo)蛋白包被的板上。該板通過PBS-0. 05% Tween 20洗滌10次。結(jié)合通過將辣根過氧化物酶(HRP)-綴 合的抗-M13抗體加入至ELISA緩沖液(1 5000)中并于室溫孵育30分鐘進(jìn)行定量。該 板通過PBS-0. 05 % Tween 20洗滌10次。此后，將100 μ 1/孔的1 1比率的3，3'，5， 5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)過氧化物酶底物和過氧化物酶溶液B(H2O2) (Kirkegaard-Perry Laboratories (Gaithersburg, MD))加入至孔中并在室溫下孵育5分鐘。通過添加100 μ 1 0. IM磷酸(H3PO4)至每孔并允許在室溫下孵育5分鐘終止反應(yīng)。使用標(biāo)準(zhǔn)ELISA板讀數(shù)器 在450nm確定每孔中黃色的0D(吸光度)。通過下述方程計算OD的降低(％ )。OD450nm降低(％ )=[(含競爭物的孔的OD45tlJ/(無競爭物的孔的0D45QJ]*100與親本噬菌體的孔的OD45tlnm降低(％ ) (100% )相比，挑選對IL-17A或IL-17F之 一的靶標(biāo)具有低于60%的OD45tlnm降低(％ )的克隆并如下將其重新格式化成全長人IG 將 單個克隆的八和Vh區(qū)分別克隆至LPG3和LPG4載體、在哺乳動物CHO細(xì)胞中瞬時表達(dá)、并通 過蛋白A柱純化。雙特異性抗體(該抗體一個臂對IL-17A特異且另一個對IL-17F特異) 使用 knob-and-hole 技術(shù)(參見Merchant 等人，Nature Biotechnology (自然生物技術(shù))， 16 :677-681，1998 和 Atwell S.等人，J Mol Biol (分子生物學(xué)雜志)270 (1) :2635(1997)) 構(gòu)建。然后將這些單-和雙特異性抗體用于在體外細(xì)胞測定評價和用于BIAcore結(jié)合動力 學(xué)分析。表征抗IL-17A/F 抗體(Biacore)抗IL_17A/FIgG的結(jié)合親和力通過表面等離子共振(Surface Plasmon Resonance, SRP))使用BIAcoreTM-3000儀器測量?？笽L-17A/F人IgG通過包被于CM5生物傳 感器芯片上的小鼠抗人Fc抗體(GE Healthcare, cat#BR-1008-39)捕獲以獲得大約200應(yīng) 答單位(response units，RU)。對于動力學(xué)測量，人 IL-17A (R&D Systems, cat#317-IL-050/ CF)或 IL-17F(R&D，cat#1335-IL_025/CF)的兩倍連續(xù)稀釋液(0. 245nM 至 500nM)在 25°C 以30 μ 1/min的流速注入PBT緩沖液(含0. 05% Tween 20的PBS)中。使用簡單一對一 Langmuir (BIAcore Wij^i^ 3. 2 片反(BIAcore Evaluation Software version 3.2))計算結(jié)合速率(k。n)和解離速率(k。ff)。平衡解離常數(shù)(Kd)以比率k。ff/k。n計算。MM圖11顯示IL-17A特異性抗體YW264. 21 (SEQ ID NO 20)和IL-17F特異性抗體 YW265. OKSEQ ID NO 21)的輕鏈可變區(qū)序列的比對。圖12顯示IL-17A特異性抗體YW264. 21 (SEQ ID NO 22)和IL-17F特異性抗體 YW265. OKSEQ ID NO 23)的重鏈可變區(qū)序列的比對。圖14顯示IL-17A和IL-17F對IL-17A/F雙特異性抗體與抗-IL-17A抗體 YW264. 21和抗-IL-17F抗體01相比較的結(jié)合親和力數(shù)據(jù)。圖 15 顯示 IL-17A特異性抗體 Y擬64. 21 (SEQ ID NO 20)和 YW264. 03 (SEQ ID NO
61)和IL-17F特異性抗體01(SEQID NO :21)的輕鏈可變區(qū)序列的比對。圖 16 顯示 IL-17A特異性抗體 Y擬64. 21 (SEQ ID NO 22)和 YW264. 03 (SEQ ID NO
62)和IL-17F特異性抗體01(SEQID NO :23)的重鏈可變區(qū)序列的比對。實施例3IL-17F_Fab復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)材料和方法
蛋白表達(dá)IL-17F 如 Hymowitz SG，等人，EMBO J.(歐洲分子生物學(xué)學(xué)會志)，2001，20 5332-5341的描述進(jìn)行表達(dá)和純化。簡言之，編碼IL-17F的DNA亞克隆至pETMb (Novagen) 位點中以引入N-末端His-標(biāo)簽和凝血酶切割位點。在另一個PCR步驟后，編碼區(qū)亞克隆 至桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體 pAcGP67B(PharMingen)中，其然后與 BaculoGold DNA(PharMingen) 共轉(zhuǎn)染至Sf9細(xì)胞中，分離重組病毒并在Sf9細(xì)胞中擴(kuò)增。對于蛋白產(chǎn)生，通過擴(kuò)增的桿狀 病毒感染Hi5細(xì)胞。通過離心收獲培養(yǎng)基并調(diào)節(jié)pH至7. O。過濾培養(yǎng)基并上樣至Ni-NTA 柱上。含有IL-17F的級分通過咪唑洗脫、混合并透析至PBS(pH 6.5)中，與凝血酶一起在 4°C過夜。然后濃縮蛋白樣品并在尺寸排阻柱(size exclusion column)上通過純化除去 凝血酶和His-標(biāo)簽。Yff 278. 15. 18. C55S的Fab片段(此后稱為“fab”)在大腸桿菌中表達(dá)，使 用ftOtein G-kpharose純化，并通過0.58%的乙酸洗脫。然后使用SP HiTrap柱(GE Healthcare)通過20mM MES pH 5. 5和NaCl梯度純化含有Fab的級分。終緩沖液是25mM Tris,IOOmM NaCl，ρΗ7· 5。復(fù)合物純化純化的fab與過量的純化的重組IL17F混合。復(fù)合物通過尺寸排阻柱純化。含有 復(fù)合物的級分混合并濃縮至25mg/mL。結(jié)晶IL-17F-fab復(fù)合物使用懸滴汽相擴(kuò)散結(jié)晶。懸滴通過在19°C下混合2ul的蛋白 和2ul的well溶液(40% MPD, 5% PEG 8000和0. IM甲次砷酸鈉pH6. 5)而形成。孵育5 天后結(jié)晶生長，洗滌并在液氮中直接在母液中冰凍。晶體學(xué)數(shù)據(jù)和精修(refinement)晶體學(xué)數(shù)據(jù)在位于 Stanford Synchtron Radiation Laboratory (斯坦 |畐 Synchtron放射實驗室)以光束線(beamline) 11-1收集。數(shù)據(jù)集使用HKL包(HKL， Charlottesville, VA)中的程序進(jìn)行處理。結(jié)構(gòu)如下解析使用作為檢索模型的人源化 的4D5 Fab的變體(PDB代碼1FVE)使用程序PHASER(CCP4)通過分子置換，隨后通過 REFMAC5(CCP4)精修。最終模型具有優(yōu)異的幾何形狀，其中99. 6%的所有殘基處于拉氏圖 (Ramachandran plot)的最佳或額外允許區(qū)，并且僅0. 6% (6個殘基)在一般允許或不允 許區(qū)。表1 X線數(shù)據(jù)匯集和精修統(tǒng)計表
權(quán)利要求
1.一種包含結(jié)合至IL-17A和IL-17F并抑制IL-17A和IL-17F兩者的生物學(xué)功能的抗 原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的抗體，或其功能片段。
2.權(quán)利要求1的抗體，其中所述生物學(xué)功能是促炎活性。
3.權(quán)利要求1的抗體，其包含輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含⑶RLl、⑶RL2 和⑶RL3區(qū)，其中所述⑶RL1、⑶RL2和⑶RL3區(qū)的至少一個選自由下述各項組成的組(a)CDRLl，其包含序列 DVSTAVA (SEQ ID NO 24)或 SISSYLA(SEQ ID NO :25)，(b)CDRL2，其包含序列SASFLYS (SEQ ID NO 26)或 GASSRAS(SEQ ID NO :27)，和(c)CDRL3，其包含序列 SYTTPPT (SEQ ID NO 28) ^ RYSQPIT (SEQ ID NO 29), 或其親和力成熟變體，或所述抗體或所述親和力成熟變體的功能片段。
4.權(quán)利要求3的抗體，其中所述⑶RL1、⑶RL2和⑶RL3區(qū)的每個選自由下述各項組成 的組(a)CDRLl，其包含序列 DVSTAVA (SEQ ID NO :24)或 SISSYLA(SEQ ID NO :25)，(b)CDRL2，其包含序列SASFLYS (SEQ ID NO :26)或 GASSRAS(SEQ ID NO :27)，和(c)CDRL3，其包含序列 SYTTPPT (SEQ ID NO :28) ^ RYSQPIT (SEQ ID NO :29)， 或其親和力成熟變體，或所述抗體或所述親和力成熟變體的功能片段。
5.權(quán)利要求4的抗體，其中(a)CDRLl 包含序歹Ij DVSTAVA (SEQ ID NO :24)，(b)CDRL2 包含序列 SASFLYS (SEQ ID NO J6)，和(c)CDRL3 包含序列 SYTTPPT (SEQ ID NO :28)，或其親和力成熟變體，或所述抗體或所述親和力成熟變體的功能片段。
6.權(quán)利要求4的抗體，其中(a)CDRLl 包含序歹Ij SISSYLA(SEQ ID NO 25)，(b)CDRL2 包含序歹Ij GASSRAS (SEQ ID NO :27)，禾口(c)CDRL3 包含序列 RYSQPIT (SEQ ID NO 29),或其親和力成熟變體，或所述抗體或所述親和力成熟變體的功能片段。
7.權(quán)利要求5的抗體，其中在所述親和力成熟變體中，⑶RL3包含序列SYTAKLT(SEQ ID NO :30)，或其功能片段。
8.權(quán)利要求7的抗體，其中在所述親和力成熟變體中，(a)CDRLl 包含序歹Ij DVSTAVA (SEQ ID NO :24)，禾口(b)CDRL2 包含序列 SASFLYS (SEQ ID NO :26)， 或其功能片段。
9.權(quán)利要求5的抗體，其中在所述親和力成熟變體中，⑶RL3包含序列YYIYPAT(SEQ ID NO :31)，或其功能片段。
10.權(quán)利要求9的抗體，其中在所述親和力成熟變體中，(a)CDRLl 包含序歹Ij DVSTAVA (SEQ ID NO :24)，禾口(b)CDRL2 包含序列 SASFLYS (SEQ ID NO :26)， 或其功能片段。
11.權(quán)利要求5的抗體，其中在所述親和力成熟變體中，⑶RL3包含序列HNDLPLT(SEQ ID NO :32)，或其功能片段。
12.權(quán)利要求11的抗體，其中在所述親和力成熟變體中，(a)CDRLl 包含序歹Ij VISSSLA(SEQ ID NO :33)，禾口(b)CDRL2 包含序列 GASFLYS (SEQ ID NO 34)。
13.權(quán)利要求5的抗體，其中在所述親和力成熟變體中，⑶RL3包含序列SYTPRST(SEQ ID NO :75)，或其功能片段。
14.權(quán)利要求13的抗體，其中在所述親和力成熟變體中，(a)CDRLl 包含序列 DVSTAVA (SEQ ID NO 24)；禾口(b)CDR2 包含序列 SASFLYS (SEQ IS NO 26)。
15.權(quán)利要求5的抗體，其中在所述親和力成熟變體中，⑶RL3包含序列YYSTTTT(SEQ ID NO 76的殘基2-8)，或其功能片段。
16.權(quán)利要求15的抗體，其中在所述親和力成熟變體中，(a)CDRLl 包含序列 DVSTAVA (SEQ ID NO 24)；禾口(b)CDR2 包含序列 SASFLYS (SEQ ID NOT 26)。
17.權(quán)利要求15的抗體，其中在所述親和力成熟變體中，⑶RL3包含序列SQNPQTT(SEQ ID NO ,11的殘基3-9)，或其功能片段。
18.權(quán)利要求17的抗體，其中在所述親和力成熟變體中，(a)CDRLl 包含序歹Ij DVSTAVA (SEQ ID NO 24)；禾口(b)CDRL2 包含序列 SASFLYS (SEQ ID NO 26)。
19.權(quán)利要求6的抗體，其中在所述親和力成熟變體中，⑶RL3包含序列RFSQHIT(SEQ ID NO :78)，或其功能片段。
20.權(quán)利要求19的抗體，其中在所述親和力成熟變體中，(a)CDRLl 包含序列 RIKRYLA (SEQ ID NO 89)；禾口(b)CDRL2包含序列 GASSRAS (SEQ ID NO :27)。
21.權(quán)利要求6的抗體，其中在所述親和力成熟變體中，⑶RL3包含序列RYSWHTT(SEQ ID NO :79)，或其功能片段。
22.權(quán)利要求21的抗體，其中在所述親和力成熟變體中，(a)CDRLl 包含序列 SISSYLA (SEQ ID NO 25)；禾口(b)CDRL2 包含序歹Ij GASSRAS (SEQ ID NO 27)。
23.權(quán)利要求6的抗體，其中在所述親和力成熟變體中，⑶RL3包含序列RYSLPIT(SEQ ID NO :80)，或其功能片段。
24.權(quán)利要求23的抗體，其中在所述親和力成熟變體中，(a)CDRLl 包含序列 SISSYLA (SEQ ID NO 25)；禾口(b)CDRL2包含序列 GASSRAS (SEQ ID NO :27)。
25.權(quán)利要求3至24中任意一項的抗體，還包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域 包含CDRHl、CDRH2和CDRH3區(qū)，其中所述CDRHl、CDRH2和CDRH3區(qū)的至少一個選自由下述 各項組成的組(a)CDRHl，其包含選自由下述各項組成的組的序列GFTFTDYDIS(SEQ ID NO :35)、 GFSFIDYDIS(SEQ ID NO :36)、GFSFTSYMMS(SEQ ID NO :81)、GFSFPSYFIS(SEQ ID NO 82)；禾口 GFTFYDYDIS(SEQ ID NO 88)；(b)CDRH2，其包含選自由下述各項組成的組的序列SDGYTYYADSVKG (SEQ ID NO :37)、 PDCYTYYADSVKG (SEQ ID NO 38), PDSYTTYYADSVKG (SEQ ID NO :90)、YDGYTYYADSVKG (SEQ ID NO :41)、YEGYTYYADSVKG(SEQ ID NO :44)、ESGATDYADSVKG(SEQ ID NO :83)、 VSGATVYADSVKG (SEQ ID NO :84) ；YDGYAYYADSVKG (SEQ ID NO :8 和 LDGYSYYADSVKG (SEQ ID NO 86)；和(c)CDRH3，其包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO :40) ^ EGYYYSTSIKYYPff (SEQ ID NO :87)， 或其功能片段。
26.權(quán)利要求3至M中任意一項的抗體，還包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域 包含CDRHl、CDRH2和CDRH3區(qū)，其中所述CDRHl、CDRH2和CDRH3區(qū)的每個選自由下述各項 組成的組(a)CDRHl，其包含選自由下述各項組成的組的序列GFTFTDYDIS(SEQID NO :35)和 GFSFIDYDIS(SEQ ID NO :36)、GFSFTSYMMS(SEQ ID NO :81)和 GFSFPSYFIS(SEQ ID NO :82)；(b)⑶RH2，其包含選自由下述各項組成的組的序列SDGYTYYADSVKG(SEQ ID N0 37)、PDCYTYYADSVKG (SEQ ID NO :38)、PDAYTYPDCYTYYADSVKG (SEQ ID NO :39)、 PDSYTTYYADSVKG(SEQ ID NO :90)、YDGYTYYADSVKG(SEQ ID NO :41)、YEGYTYYADSVKG(SEQ ID NO :44)、ESGATDYADSVKG(SEQ ID NO :83)和 VSGATVYADSVKG(SEQ ID NO :84)；禾口(c)CDRH3，其包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO :40)和 EGYYYSTSIKYYPW(SEQ ID NO :87)，或其功能片段。
27.權(quán)利要求3的抗體，還包含⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3區(qū)，其中(a)CDRLl 包含序歹Ij DVSTAVA (SEQ ID NO 24)，(b)CDRL2 包含序列 SASFLYS (SEQ ID NO 26)，(c)CDRL3 包含序列 SYTTPPT (SEQ ID NO 丨8)，和(d)CDRHl 包含序歹Ij GFTFTDYDIS(SEQ ID NO :35)，(e)CDRH2包含序列 SDGYTYYADSVKG (SEQ ID NO :37)，和(f)CDRH3 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO :40)，或其功能片段。
28.權(quán)利要求3的抗體，其還包含⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3區(qū)，其中(a)CDRLl 包含序歹Ij SISSYLA(SEQ ID NO 25)，(b)CDRL2 包含序歹Ij GASSRAS (SEQ ID NO 27)，(c)CDRL3 包含序列 RYSQPIT (SEQ ID NO 29),(d)CDRHl 包含序歹Ij GFTFTDYDIS(SEQ ID NO :35)，(e)CDRH2包含序列 SDGYTYYADSVKG (SEQ ID NO :37)，和(f)CDRH3 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO :40)，或其功能片段。
29.權(quán)利要求7或權(quán)利要求8的抗體，還包含⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3區(qū)，其中(d)CDRHl 包含序列 GFSFIDYDIS(SEQ ID NO :36)，(e)CDRH2包含序列 PDCYTYYADSVKG (SEQ ID NO :38)，和(f)CDRH3 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO :40)，或其功能片段。
30.權(quán)利要求9或權(quán)利要求10的抗體，還包含⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3區(qū)，其中(d)CDRHl 包含序歹Ij SFSGIDYDIS(SEQ ID NO 91)，(e)CDRH2包含序列 YDGYTYYADSVKG (SEQ ID NO :41)，和(f)CDRH3 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO 40)， 或其功能片段。
31.權(quán)利要求11或權(quán)利要求12的抗體，還包含⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3區(qū)，其中(d)CDRHl 包含序歹Ij GFTFTDYDIS(SEQ ID NO 35)，(e)CDRH2包含序列 SDGYTYYADSVKG(SEQ ID NO :37)，和(f)CDRH3 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO 40)， 或其功能片段。
32.權(quán)利要求7或權(quán)利要求8的抗體，還包含⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3區(qū)，其中(d)CDRHl 包含序列 GFSFIDYDIS(SEQ ID NO 36)，(e)CDRH2包含序列 PDAYTYYADSVKG (SEQ ID NO :42)，和(f)CDRH3 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO 40)， 或其功能片段。
33.權(quán)利要求7或權(quán)利要求8的抗體，還包含⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3區(qū)，其中(d)CDRHl 包含序列 GFSFIDYDIS(SEQ ID NO 36)，(e)CDRH2包含序列 PDSYTYYADSVKG (SEQ ID NO :43)，和(f)CDRH3 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO 40)， 或其功能片段。
34.權(quán)利要求9或權(quán)利要求10的抗體，還包含⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3區(qū)，其中(d)CDRHl 包含序歹Ij SFSGIDYDIS(SEQ ID NO 91)，(e)CDRH2包含序列 YEGYTYYADSVKG (SEQ ID NO :44)，和(f)CDRH3 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO 40)， 或其功能片段。
35.權(quán)利要求1的抗體，其中所述抗體作為交叉反應(yīng)性抗體結(jié)合至IL-17A和IL-17F的 基本相同的表位，所述抗體選自由YW241. 47、YW278. 15、YW279. 1組成的組，或其親和力成 熟變體，或所述抗體或所述親和力成熟變體的功能片段。
36.權(quán)利要求34的抗體，其中所述親和力成熟變體選自由抗體YW278.15. 18、Yff 178. 15. 2,Yff 278. 15. 3,Yff 278. 15. 18C55A.YW 278. 15. 18C55S 和 Yff 278. 15. 2. D54E 組成 的組。
37.權(quán)利要求1的抗體，其包含以基本相同的結(jié)合親和力結(jié)合至IL-17A和IL-17F的抗 原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，或其功能片段。
38.權(quán)利要求1的抗體，其包含以至少大約10,至10_"M的結(jié)合親和力結(jié)合至IL-17A 和IL-17F的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，或其功能片段。
39.權(quán)利要求1的抗體，其包含結(jié)合至均作為單體和同型二聚體或異二聚體的IL-17A 和IL-17F的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，或其功能片段。
40.權(quán)利要求1的抗體，其結(jié)合人和嚙齒動物兩者的IL-17A/F，或其功能片段。
41.權(quán)利要求1的抗體，其能夠減少炎性或免疫相關(guān)疾病中的脫髓鞘。
42.權(quán)利要求1至41中任意一項的抗體，所述抗體是單克隆的。
43.權(quán)利要求42的抗體，其是嵌合的、人源化的或人的，或其片段。
44.權(quán)利要求43的抗體，其中所述片段選自由下述各項組成的組Fab、Fab'、 F(ab' )2和Fv片段；雙價抗體；線性抗體；單鏈抗體分子；和由抗體片段形成的多特異性 抗體。
45.一種雙特異性抗體，所述抗體包含結(jié)合至IL-17A的第一抗原結(jié)合位點和結(jié)合至 IL-17F的第二抗原結(jié)合位點，其中(1)所述第一抗原結(jié)合位點包含第一重鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述第一重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含 CDRHU CDRH2和CDRH3區(qū)，其中所述CDRHU CDRH2和CDRH3區(qū)的至少一個選自由下述各項 組成的組(a)CDRHl，包含序列 TSYEIS (SEQ ID NO 45)，(b)CDRH2，包含序列WVGSIYLWGG(SEQ ID NO :46)，和(c)CDRH3，包含序列ARFGQRYA(SEQ ID NO :47)，和(2)所述第二抗原結(jié)合位點包含第二重鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述第二重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含 CDRHU CDRH2和CDRH3區(qū)，其中所述CDRHU CDRH2和CDRH3區(qū)的至少一個選自由下述各項 組成的組(a)CDRHl，包含序列 TSPYIS (SEQ ID NO 48)，(b)CDRH2，包含序列WVASIFYYSG(SEQ ID NO :49)，和(c)CDRH3，包含序列ARGGYGYNQWFYSIYQSY(SEQ ID NO :50)，或其親和力成熟變體，或所述抗體或所述親和力成熟變體的功能片段。
46.權(quán)利要求45的雙特異性抗體，其包含⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3區(qū)，其中(1)在所述第一抗原結(jié)合位點中，(a)CDRHl 包含序歹Ij TSYEIS (SEQ ID NO 45)，(b)CDRH2 包含序列 WVGSIYLWGG(SEQ ID NO :46)，和(c)CDRH3包含序列 ARFGQRYA(SEQ ID NO :47)，和(2)在所述第二抗原結(jié)合位點中，(a)CDRHl 包含序歹Ij TSPYIS (SEQ ID NO 48)，(b)CDRH2 包含序列 WVASIFYYSG(SEQ ID NO :49)，和(c)CDRH3包含序列 ARGGYGYNQWFYSIYQSY(SEQ ID NO :50)，或其親和力成熟變體，或所述抗體或所述親和力成熟變體的功能片段。
47.權(quán)利要求45或權(quán)利要求46的雙特異性抗體，其還包含輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈 可變結(jié)構(gòu)域包含CDRLl、CDRL2和CDRL3區(qū)，其中所述CDRLl、CDRL2和CDRL3區(qū)的至少一個 選自由下述各項組成的組(a)CDRLl，包含序列 SISSYLA (SEQ ID NO 25),(b)CDRL2，包含序列GASSRAS (SEQ ID NO :27)，和(c)CDRL3，包含序列 YYSSPLT (SEQ ID NO 21 的殘基 91-97)，或其親和力成熟變體，或所述抗體或所述親和力成熟變體的功能片段。
48.權(quán)利要求47的雙特異性抗體，其中在所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域中，(a) CDRLl 包含序歹Ij SISSYLA (SEQ ID NO :25)，(b)CDRL2 包含序歹Ij GASSRAS (SEQ ID NO :27)，禾口(c)CDRL3 包含序列 YYSSPLT (SEQ ID NO 21 的殘基 91-97)，或其親和力成熟變體，或所述抗體或所述親和力成熟變體的功能片段。
49.權(quán)利要求45或46的抗體，其以基本相同的結(jié)合親和力結(jié)合至IL-17A和IL-17F， 或其功能片段。
50.權(quán)利要求45或46的抗體，其以至少大約10,至IiT11M的結(jié)合親和力結(jié)合至IL-17A 和IL-17F，或其功能片段。
51.權(quán)利要求45和46的抗體，其結(jié)合至均作為單體和同型二聚體或異二聚體的 IL-17A和IL-17F，或其功能片段。
52.權(quán)利要求45或權(quán)利要求46的抗體，其結(jié)合人和嚙齒動物兩者的IL-17A/F，或其功 能片段。
53.權(quán)利要求45或權(quán)利要求46的抗體，其能夠減少炎性或免疫相關(guān)疾病中的脫髓鞘。
54.權(quán)利要求45或權(quán)利要求46的抗體，其是單克隆的。
55.權(quán)利要求54的抗體，其是嵌合的、人源化的或人的，或其片段。
56.權(quán)利要求55的抗體，其中所述片段選自由下述各項組成的組Fab、Fab'、F(ab')2 和Fv片段；雙價抗體；線性抗體；單鏈抗體分子；和由抗體片段形成的多特異性抗體。
57.根據(jù)權(quán)利要求1至56中任意一項的交叉反應(yīng)性或雙特異性抗體，其以大約10 1 至大約1 10的抗體與IL-17A的摩爾比抑制IL-17A的生物學(xué)功能。
58.權(quán)利要求57的交叉反應(yīng)性或雙特異性抗體，其以大約1 1至大約1 5的抗體 與IL-17A的摩爾比抑制IL-17A的生物學(xué)功能。
59.權(quán)利要求58的交叉反應(yīng)性或雙特異性抗體，其以大約1 1至大約1 3的抗體 與IL-17A的摩爾比抑制IL-17A的生物學(xué)功能。
60.權(quán)利要求59的交叉反應(yīng)性或雙特異性抗體，其以大約1 1至大約1 2的抗體 與IL-17A的摩爾比抑制IL-17A的生物學(xué)功能。
61.根據(jù)權(quán)利要求1至56中任意一項的交叉反應(yīng)性或雙特異性抗體，其以大約10 1 至大約1 10的抗體與IL-17F的摩爾比抑制IL-17F的生物學(xué)功能。
62.權(quán)利要求61的交叉反應(yīng)性或雙特異性抗體，其以大約1 1至大約1 5的抗體 與IL-17F的摩爾比抑制IL-17F的生物學(xué)功能。
63.權(quán)利要求62的交叉反應(yīng)性或雙特異性抗體，其以大約1 1至大約1 3的抗體 與IL-17F的摩爾比抑制IL-17F的生物學(xué)功能。
64.權(quán)利要求63的交叉反應(yīng)性或雙特異性抗體，其以大約1 1至大約1 2的抗體 與IL-17F的摩爾比抑制IL-17F的生物學(xué)功能。
65.根據(jù)權(quán)利要求1至56中任意一項的交叉反應(yīng)性或雙特異性抗體，其以大約10 1 至大約1 10的抗體與異二聚體的摩爾比抑制異二聚體形式的IL-17A和IL-17F的生物 學(xué)功能。
66.權(quán)利要求65的交叉反應(yīng)性或雙特異性抗體，其以大約1 1至大約1 5的抗體 與異二聚體形式的摩爾比抑制異二聚體形式的IL-17A和IL-17F的生物學(xué)功能。
67.權(quán)利要求66的交叉反應(yīng)性或雙特異性抗體，其以大約1 1至大約1 3的抗體 與異二聚體的摩爾比抑制異二聚體形式的IL-17A和IL-17F的生物學(xué)功能。
68.權(quán)利要求67的交叉反應(yīng)性或雙特異性抗體，其以大約1 1至大約1 2的抗體 與異二聚體的摩爾比抑制異二聚體形式的IL-17A和IL-17F的生物學(xué)功能。
69.一種分離的核酸分子，其編碼根據(jù)權(quán)利要求1至68中任意一項的抗體的重鏈，或其 片段。
70.一種分離的核酸分子，其編碼根據(jù)權(quán)利要求1至68中任意一項的抗體的輕鏈，或其 片段。
71.一種包含權(quán)利要求69的核酸的重組宿主細(xì)胞。
72.一種包含權(quán)利要求70的核酸的重組宿主細(xì)胞。
73.一種包含權(quán)利要求69和權(quán)利要求70的核酸的重組宿主細(xì)胞。
74.權(quán)利要求71至73中任意一項的重組宿主細(xì)胞，其是真核宿主細(xì)胞。
75.權(quán)利要求74的重組宿主細(xì)胞，其中所述真核宿主細(xì)胞是中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞。
76.權(quán)利要求71至73中任意一項的重組宿主細(xì)胞，其是原核宿主細(xì)胞。
77.權(quán)利要求76的重組宿主細(xì)胞，其中所述原核宿主細(xì)胞是大腸桿菌(E.Coli)細(xì)胞。
78.—種藥物組合物，其包含與藥學(xué)上可接受的賦形劑混合的根據(jù)權(quán)利要求1至68中 任意一項的抗體或抗體片段。
79.一種治療炎性或免疫相關(guān)疾病的方法，包括向有需要的哺乳動物患者施用有效量 的根據(jù)權(quán)利要求1至68中任意一項的交叉反應(yīng)性或雙特異性抗體，或其功能片段。
80.權(quán)利要求79的方法，其中所述炎性或免疫相關(guān)疾病選自由下述各項組成的組 系統(tǒng)性紅斑狼瘡，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，幼年型慢性關(guān)節(jié)炎，脊椎關(guān)節(jié)病，系統(tǒng)性硬化癥(硬皮 病)，特發(fā)性炎性肌病(皮肌炎、多肌炎)，斯耶格倫綜合征，系統(tǒng)性血管炎，結(jié)節(jié)病，自身免 疫性溶血性貧血(免疫性全血細(xì)胞減少癥、陣發(fā)性夜間血紅蛋白尿)，自身免疫性血小板減 少癥(特發(fā)性血小板減少性紫癜、免疫介導(dǎo)的血小板減少癥)，甲狀腺炎(格雷夫斯病、橋本 甲狀腺炎、幼年型淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎、萎縮性甲狀腺炎)，糖尿病，免疫介導(dǎo)的腎病(腎小 球腎炎、腎小管間質(zhì)性腎炎)，中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)的脫髓鞘疾病諸如多發(fā)性硬化、特發(fā)性 脫髓鞘性多神經(jīng)病或急性熱病性多神經(jīng)炎、和慢性炎性脫髓鞘多神經(jīng)病，肝膽疾病諸如傳 染性肝炎(甲型、乙型、丙型、丁型、戊型和其它非嗜肝病毒肝炎)、自身免疫性慢性活動性 肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬變、肉芽腫性肝炎、和硬化性膽管炎，炎性腸病(IBD)包括潰瘍性 結(jié)腸炎、局限性回腸炎、麩質(zhì)敏感性腸病、和惠普爾氏病，自身免疫性或免疫介導(dǎo)的皮膚疾 病包括大皰性皮膚疾病、多形紅斑和接觸性皮炎、銀屑病，變應(yīng)性疾病諸如哮喘、變應(yīng)性鼻 炎、特應(yīng)性皮炎、食物過敏和蕁麻疹，肺的免疫學(xué)疾病諸如嗜酸細(xì)胞性肺炎、特發(fā)性肺纖維 化和過敏性肺炎，移植相關(guān)疾病包括移植物排斥和移植物抗宿主疾病，感染性疾病包括病 毒疾病如AIDS (HIV感染)、甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎和戊型肝炎、皰疹等、 細(xì)菌感染、真菌感染、原生動物感染和寄生蟲感染。
81.權(quán)利要求80的方法，其中所述炎性或免疫相關(guān)疾病選自由類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、 炎性腸病(IBD)和哮喘組成的組。
82.—種制品，其包含(a)容器；(b)所述容器上的標(biāo)簽；和(c)物質(zhì)的組合物，該物質(zhì) 的組合物包含用所述容器容納的根據(jù)權(quán)利要求1至68中任意一項的抗體，其中所述容器上 的所述標(biāo)簽標(biāo)明所述物質(zhì)的組合物可用于治療炎性或免疫相關(guān)疾病。
83.根據(jù)權(quán)利要求1至68中任意一項的抗體在制備用于治療炎性或免疫相關(guān)疾病的藥物中的用途。
84. 一種用于治療炎性或免疫相關(guān)疾病的藥物組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1至68中 任意一項的抗體。
全文摘要
本發(fā)明一般涉及可與IL-17A和IL-17F交叉反應(yīng)的抗體，和雙特異性抗-IL-17A/F以及它們的用途。
文檔編號A61K39/395GK102137872SQ200980133845
公開日2011年7月27日 申請日期2009年8月28日 優(yōu)先權(quán)日2008年8月29日
發(fā)明者吳巖, 斯科特·斯塔維奇, 歐陽文俊, 胡巖(海倫), 陳詠梅 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司